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Nanomedicina: apliacin de la nanotecnologa en la salud

Laura M. Lechuga
grupo de nanoBIosensores y aplICaCIones BIoanaltICas Centro de Investigacin en Nanociencia y Nanotecnologa (CIN2) Consejo Superior de Investigaciones Cientficas

Resumen
La nanomedicina, aplicacin de la nanotecnologa en las ciencias de la salud, es la rama de la nanotecnologa que se perfila como la de mayor proyeccin en un futuro prximo debido a sus importantes aplicaciones, especialmente diagnsticas y teraputicas. La deteccin temprana de enfermedades, su tratamiento precoz personalizado y un preciso seguimiento posterior de su evolucin sern posibles en los prximos aos gracias a la aplicacin de las herramientas nanotecnolgicas que se estn desarrollando actualmente. Los importantes avances en este campo podran dar lugar a sistemas de diagnosis y tratamientos teraputicos de mayor eficacia que los existentes, lo que redundara en una mayor calidad de vida para el hombre. Una autntica revolucin se vislumbra en el horizonte del cuidado de la salud y la tecnologa mdica.

Introduccin: qu es la nanomedicina?
Desde hace unos aos la nanotecnologa se est perfilando como un rea emergente en
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ciencia y tecnologa que nos est conduciendo a una nueva revolucin industrial. La nanotecnologa se define como el desarrollo de ciencia y tecnologa a niveles atmicos y moleculares, en la escala de aproximadamente 1-100 nm, para obtener una comprensin fundamental de fenmenos y materiales en dicha escala nanomtrica y para crear y usar estructuras, dispositivos y sistemas que tengan nuevas propiedades y funciones debido a su tamao. Nanomtro (del latn nanus, enano) significa la milmillonsima parte de 1 metro. Lo ms interesante de la nanotecnologa no es la posibilidad de trabajar con materiales de reducidas dimensiones, sino el cambio a menudo radical que sufren las propiedades fsicas y qumicas de la materia cuando se trabaja a esta escala: la conductividad elctrica, el color, la resistencia o la elasticidad, entre otras propiedades, se comportan de manera diferente a como lo hace el material volumtrico (fig. 1). Por ello, la nanotecnologa tiene gran aplicacin en diferentes campos, entre los que destacan los materiales, la electrnica, la medicina y la energa. Se han alcanzado ya avances significativos en la fabricacin de materiales de mayor dureza y resistencia, ordenadores ms veloces y con mayor capacidad de procesamiento gracias a los microprocesadores con componentes nanotecno-

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Baln de ftbol 220.000.000 nm

Hormiga 10.000.000 nm

Cabello humano 80.000 nm

Glbulos rojos 7.000 nm

Microchip ordenador 70 nm

Nanoprisma de oro lado 50 nm

Virus polio 10 nm

Molcula de ADN anchura 2 nm

Nanotubos de carbn anchura 1,4 nm

Molcula de C60 0,7 nm

tomo de hidrgeno 0,1 nm

Figura 1. Las medidas de la nanotecnologa.

lgicos, diagnsticos mdicos ms eficaces o la obtencin de energa a bajo coste y respetuosa con el medio ambiente. Ya existen multitud de productos nanotecnolgicos en el mercado, como cosmticos ms eficaces y protectores, raquetas de tenis ms flexibles y resistentes, gafas que no se rayan, ropa que no se arruga ni se mancha, por citar algunos ejemplos. La irrupcin de la nanotecnologa en las ciencias de la salud ha dado lugar a una nueva disciplina denominada nanomedicina, cuyo objetivo principal es el desarrollo de herramientas para diagnosticar, prevenir y tratar enfermedades cuando estn todava en estados poco avanzados o en el inicio de su desarrollo. La nanomedicina estudia interacciones a la nanoescala y para

ello utiliza dispositivos, sistemas y tecnologas que incluyen nanoestructuras capaces de interactuar a escala molecular y que se interconectan a nivel micro para interaccionar en el nivel celular. Uno de los grandes retos en este proceso reside en el desarrollo de nanoterapias, dirigidas especficamente a los tejidos y rganos enfermos, evitando daar a las clulas sanas circundantes y, por tanto, evitando los temidos efectos secundarios de los tratamientos actuales. En los orgenes de la nanotecnologa se lleg a predecir la fabricacin de nanorobots, que se inyectaran directamente y atacaran selectivamente los tejidos daados, incluso protegiendo de ataques externos y reparando posibles desperfectos. A pesar de que esto sigue siendo
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ciencia ficcin, s se puede afirmar que se ha avanzado notablemente en el diseo de nanoestructuras que incorporan distintas funcionalidades y pueden desempear un papel muy similar. El progresivo aumento que se observa de graves dolencias como el cncer, las enfermedades cardiovasculares, la diabetes, o las enfermedades neurodegenerativas (Alzheimer y Parkinson), para las que no existen tratamientos definitivos, hacen necesarios nuevos mtodos diagnsticos y teraputicos ms rpidos, eficaces y especficos que los actuales y que adems reduzcan al mximo los costes implicados. La nanomedicina promete resolver algunos de estos grandes retos mediante la capacidad de detectar de forma precoz la presencia de enfermedades (como el cncer) o la capacidad de regenerar los rganos y tejidos que estn daados dentro del organismo proporcionado un diagnstico precoz, una terapia adecuada y un seguimiento posterior efectivo de la evolucin del paciente. En un futuro prximo se podr incluso disponer de tratamientos individualizados a distancia en el propio hogar o lugar de trabajo del paciente. La nanomedicina agrupa tres reas principales: el nanodiagnstico, la liberacin controlada de frmacos (nanoterapia) y la medicina regenerativa. El nanodiagnstico consiste en el desarrollo de sistemas de anlisis y de imagen para detectar una enfermedad o un mal funcionamiento celular en los estadios ms tempranos posibles tanto in vivo como in vitro. La nanoterapia pretende dirigir nanosistemas activos que contengan elementos de reconocimiento para actuar o transportar y liberar medicamentos exclusivamente en las clulas o zonas afectadas, a fin de conseguir un tratamiento ms efectivo, minimizando los efectos secundarios. La medicina regenerativa tiene como objetivo reparar o reemplazar tejidos y rganos daados aplicando herramientas nanotecnolgicas. Dado que es imposible abarcar con profundidad todas las tecnologas que pueden surgir de conceptos basados en nanomateriales y nanodispostivos, se han seleccionado para este

captulo algunos ejemplos clave de avances conseguidos en las tres lneas principales de la nanomedicina, haciendo especial hincapi en el rea del nanodiagnstico.

Nanodiagnstico
El objetivo del nanodiagnstico es la identificacin de enfermedades en sus estadios iniciales en el nivel celular o molecular e, idealmente, al nivel de una sola clula, mediante la utilizacin de nanodispositivos y sistemas de contraste. Una identificacin temprana permitira una rpida capacidad de respuesta y la inmediata aplicacin del tratamiento adecuado, ofreciendo as mayores posibilidades de curacin. Los nanosistemas de diagnstico se pueden utilizar in vitro o in vivo. El diagnstico in vivo normalmente requiere que los dispositivos puedan penetrar en el cuerpo humano para identificar y (idealmente) cuantificar la presencia de un determinado patgeno o de clulas cancergenas, por ejemplo. Esto conlleva una serie de problemas asociados con la biocompatibilidad del material del dispositivo, pero adems requiere de un sofisticado diseo para asegurar su eficacia y minimizar los posibles efectos secundarios. Por su parte, el diagnstico in vitro ofrece una mayor flexibilidad de diseo, ya que se puede aplicar a muestras muy reducidas de fluidos corporales o de tejidos, a partir de los cuales se puede llevar a cabo una deteccin especfica (de patgenos o defectos genticos, p. ej.) en tiempos muy cortos, con gran precisin y sensibilidad. Debido a estas diferencias fundamentales, se prev que la deteccin in vitro usando nanodispositivos llegue al mercado de una forma mucho ms rpida y se pueda consolidar ms fcilmente que los mtodos in vivo. Dentro del nanodiagnstico, dos son las principales reas de trabajo: los nanosistemas de imagen y los nanobiosensores, dispositivos capaces de detectar en tiempo real y con una alta sensibilidad y selectividad agentes qumicos

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y biolgicos. Los principales sistemas de nanodiagnstico dentro de estas dos grandes reas se recogen en la tabla 1.

Nanosistemas de imagen
Estos sistemas se basan en el uso de nanopartculas, generalmente, semiconductoras, metlicas o magnticas, como agentes de contraste para marcaje in vivo. Estos nuevos sistemas permiten aumentar la sensibilidad y dan mayor contraste en las tcnicas de imagen. Uno de los primeros sistemas de nanopartculas que se han propuesto para marcaje celular e identificacin de zonas daadas o tumores son las nanopartculas de semiconductores, tambin conocidas como puntos cunticos (quantum dots). Cuando el tamao de estos semiconductores se reduce a unos pocos nanmetros (tpicamente entre 1 y 10 nm), se produce una modificacin de su estructura electrnica, de tal manera que se pierde la caracterstica estructura de bandas y surgen niveles electrnicos discretos. Esta nueva estructura electrnica les

Tabla 1. Resumen de los sistemas de nanodiagnstico ms desarrollados

Principales sistemas de nanodiagnstico Dispositivos de nanodiagnstico Nanobiosensores Biochips genmicos y protemicos Lab-on-a-chip Diagnstico por imagen Resonancia magntica muclear Espectroscopia y fluorescencia Microscopios de campo prximo (AFM, STM) Microscopia y tomografa electrnica Marcadores y agentes de contraste Puntos cunticos Nanopartculas magnticas Nanopartculas metlicas

confiere una respuesta ptica (fluorescencia, en particular) que vara con el tamao. Por lo tanto, se pueden fabricar puntos cunticos del mismo material que emiten luz en diferentes longitudes de onda (con distintos colores) dependiendo de su tamao, por lo que son extremadamente tiles como marcadores biolgicos (fig. 2). De entre la gran variedad de materiales que se han estudiado, los semiconductores ms utilizados son los de CdSe y CdTe, ya que se pueden producir en grandes cantidades mediante procesos qumicos, con un excelente control del tamao, lo que permite obtener bandas de emisin estrechas e intensas en una amplia variedad de colores y con un tiempo de vida muy prolongado. Todas estas caractersticas, a las que se puede aadir que la excitacin de puntos cunticos de distintos tamaos se puede realizar con una nica lmpara (permitiendo as realizar marcajes mltiples de forma simultnea), han promovido su desarrollo como competencia a los marcadores moleculares habituales. Existen ya mltiples demostraciones de la utilidad de los puntos cunticos para la localizacin de pequeos tumores, lo cual significa que se podra proceder a su extirpacin inmediata. En la figura 2 se muestran algunos ejemplos. Sin embargo, el diseo de los puntos cunticos (al igual que otros sistemas de nanopartculas) es bastante ms complicado. No es suficiente con obtener un material de alta luminiscencia y estabilidad, la nanopartcula tambin debe llegar a su destino de forma selectiva e, idealmente, debe eliminarse del organismo una vez realizada su funcin para evitar efectos secundarios. Uno de los problemas a resolver es la captacin de las nanopartculas por los macrfagos antes de alcanzar la zona afectada. Para ello es necesario recubrir las nanopartculas con materiales que acten como una capa de invisibilidad, p. ej., con polmeros como el polietilenglicol. Una vez resuelto este problema, es preciso indicarles cmo localizar el tumor, y para ello hay que recubrir su superficie con biomolculas (biorreceptores, como anticuerpos monoclonales) con

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afinidad selectiva hacia un compuesto especfico de la zona a reconocer (p. ej., la clula cancerosa). As, hay ciertas protenas o molculas que se encuentran en mayor proporcin en la membrana de las clulas cancerosas (como los receptores de cido flico o la hormona luteinizante) y son caractersticas de cada tipo de cncer. Cuando los puntos cunticos en funcin con el biorreceptor especfico se acercan a una muestra que contiene dicha protena, se produce una reaccin de reconocimiento biomolecular (fig. 2), de forma que se acumularn all, permitiendo la deteccin mediante iluminacin con luz ultravioleta y observacin de la emisin de fluorescencia caracterstica del punto cuntico empleado. La eliminacin de las nanopartculas a travs del hgado o los riones parece ser bastante eficiente para los tamaos de los puntos cunticos, pero pueden existir problemas ligados a procesos de agregacin, que es necesario resolver en algunos casos.

Hasta ahora, los experimentos in vivo con puntos cunticos se han realizado con animales, pero se prev que una vez superados los controles de las agencias de salud, se puedan realizar estos ensayos en seres humanos. Otra posibilidad para los agentes de contraste es emplear nanopartculas metlicas, ya que su frecuencia de resonancia (el color) es muy sensible a su tamao y a su forma, lo cual permite disearlas para que absorban o dispersen luz en la regin espectral que interese. Por ejemplo, se pueden fabricar nanopartculas de oro que sean muy eficientes absorbiendo o reflejando luz en el infrarrojo cercano (700-900 nm), donde los tejidos son ms transparentes, de forma que es posible disear mtodos de marcaje celular, en una forma similar a lo que se ha descrito para los puntos cunticos. Uno de los mtodos utilizados se denomina tomografa de coherencia ptica (optical coherence tomography, OCT), y permite obtener mapas tridimensionales de los

Figura 2. A) Disoluciones de puntos cunticos de distintos tamaos, con color de fluorescencia caracterstico para cada tamao. B) Esquema de funcionamiento de un punto cuntico. C) Imgenes de experimentos en los que se han inyectado puntos cunticos y cmo se acumulan en clulas u rganos daados..
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tejidos y detectar las zonas en las que se han acumulado las nanopartculas. Otra posibilidad es utilizar nanopartculas magnticas (tpicamente xidos de hierro como la magnetita) para aumentar el contraste en medidas de resonancia magntica. Estas nanopartculas podran sustituir a los marcadores actuales de metales pesados, reduciendo su toxicidad. Adems, el carcter magntico de estos materiales podra facilitar su transporte a travs del organismo mediante la utilizacin de un campo magntico externo (como un imn).

Nanobiosensores
Dentro del nanodiagnstico, los principales dispositivos de anlisis que se estn desarrollando son los nanobiosensores, dispositivos capaces de detectar en tiempo real, sin necesidad de

marcadores fluorescentes o radioactivos y con una alta sensibilidad y selectividad, todo tipo de sustancias qumicas y biolgicas. Un biosensor es un dispositivo integrado por un receptor biolgico (enzimas, ADN, anticuerpos, etc.) preparado para detectar especficamente una sustancia y un transductor o sensor, capaz de medir la reaccin de reconocimiento biomolecular y traducirla en una seal cuantificable (fig. 3). Los dos constituyentes del biosensor estn integrados conjuntamente y es precisamente esta ntima unin la que le confiere a los dispositivos biosensores sus especiales caractersticas de sensibilidad y selectividad. Otra de las caractersticas fundamentales que hace atractivos a los biosensores es la posibilidad de realizar el anlisis de la sustancia a determinar en tiempo real y de forma directa (sin necesidad de marcador) a diferencia de cualquier an-

A Muestras

analtico

Receptor Biolgico Transductor

Proceso datos

Seal

Figura 3. A) Esquema del funcionamiento de un biosensor. B) Fabricacin de nanobiosensores con tecnologa microelectrnica. El biosensor est formado por un transductor similar a los circuitos integrados de silicio y una capa bioreceptora para el anlisis especfico.
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S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O S(CH2)6-N=CH(CH2)3-CH O = = = = = = = = = = = = = = = = = = = =

Superficie del nanosensor

lisis biolgico o clnico que siempre requiere un marcador (ya sea fluorescente o radioactivo). Todo ello confiere a los biosensores la posibilidad de realizar no slo un anlisis cualitativo (s/no) y cuantitativo, sino tambin la posibilidad de evaluar la cintica de la interaccin (constante de afinidad, asociacin, disociacin, etc.) y, por tanto, elucidar los mecanismos fundamentales de dicha interaccin. Las tcnicas de anlisis de laboratorio ms habituales, ya sea de sustancias qumicas o biolgicas, suelen ser laboriosas, consumen mucho tiempo y en la mayora de la ocasiones requieren personal especializado para su empleo. Frente a ellas, los biosensores ofrecen la posibilidad de hacer medidas directas, continuas, de forma rpida y con alta sensibilidad. El trmino nanobiosensor designa a los biosensores cuyas propiedades vienen moduladas por la escala nanotecnolgica con la que estn fabricados. Los nanobiosensores pueden mostrar una sensibilidad mucho mayor que la de los dispositivos convencionales y adems ofrecen las ventajas del pequeo tamao y la portabilidad, lo que posibilita su utilizacin en cualquier lugar, como el hogar o la consulta del mdico. Con estos nanodispositivos la cantidad de muestra para hacer el anlisis es relativamente baja (de micro a nanolitros), lo que significa que los mtodos de extraccin de muestras de pacientes pueden ser menos invasivos y menos traumticos. Adems podran ser fcilmente introducidos en el interior del cuerpo humano, proporcionando datos mucho ms fiables del estado de salud real de un paciente. Dentro de los desarrollos de nanobiosensores son de destacar los nanobiosensores fotnicos, nanoplasmnicos, basados en nanoestructuras (nanopartculas, nanotubos de carbono, nanoalambres, etc.) y los biosensores nanomecnicos.

Biosensores nanofotnicos
Los biosensores nanofotnicos han demostrado un nivel de sensibilidad extremo para la deteccin directa de protenas y ADN. En estos sensores (tambin llamados de onda evanescen-

te) se hace uso de la forma particular en que se transmite la luz en el interior de los circuitos pticos; esta transmisin tiene lugar a lo largo de la gua ptica mediante mltiples reflexiones internas. A cada reflexin, una componente de la luz, denominada onda evanescente, se propaga en el medio que envuelve a la gua. La longitud de penetracin de la onda evanescente es de unos cientos de nanmetros y ofrece una oportunidad nica e ideal para medir cualquier interaccin biomolecular que tenga lugar en su interior. Con estos sensores es posible evaluar concentraciones de protenas en el nivel picomolar o variaciones de una nica base en el ADN en tan slo unos minutos, necesitando volmenes de muestra del orden de microlitros y, en ocasiones, las muestras a analizar (orina, suero) no necesitan un pretratamiento previo. Los nanosensores fotnicos tambin permiten la medida en el interior de una nica clula de su estado metablico. Para este fin existen nanosensores que consisten en una fibra ptica muy afilada (su extremo final tiene slo 30-50 nm) lo que le permite penetrar a travs de la membrana celular sin causar ningn dao y sin alterar el funcionamiento normal de la clula. La fibra ptica se biofuncionaliza con receptores especficos antes de su introduccin. Una vez dentro, la nanosonda puede detectar especies qumicas y sealizar procesos moleculares en localizaciones especficas del interior de la clula. La deteccin se realiza a travs de la interaccin del campo evanescente de la luz que circula por la fibra ptica con la interaccin biomolecular, debida al biorreceptor especfico anclado en la superficie del extremo final de la fibra. Con esta tcnica se abre la posibilidad de identificar cambios patolgicos dentro de una clula individual e incrementar el conocimiento sobre las funciones celulares in vivo, como la divisin celular, la apoptosis, el funcionamiento de las nanomquinas biolgicas, etc.

Biosensores nanoplasmnicos
El biosensor de Resonancia de Plasmn Superficial (SPR) est basado en la variacin de

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reflectividad de una capa metlica en contacto con un medio biolgico. El biosensor SPR ha sido ampliamente desarrollado, cientos de publicaciones aparecen cada ao en la literatura especializada y numerosas compaas lo comercializan en diferentes versiones. Este sensor permite detectar de forma directa concentraciones en el rango nanomolar de forma directa y sin necesidad de marcadores fluorescentes. En este sensor se deposita una capa metlica delgada (generalmente una capa de oro de 50 nm de espesor) sobre un material dielctrico (p. ej., un cristal). Excitando la interfase del metal y el dielctrico en condiciones de reflexin interna total, se obtiene una resonancia plasmnica para un cierto ngulo de incidencia de la luz, resonancia que se manifiesta en una absorcin de la luz y, por tanto, un mnimo agudo en la intensidad de la luz reflejada. La caracterstica ms interesante de este efecto es que el ngulo de resonancia al que se genera la onda plasmnica (de carcter evanescente) es muy sensible a cualquier variacin que tenga lugar en la superficie metlica, como puede ser una inmunorreacin o cualquier otro tipo de interaccin biomolecular. La interaccin se detecta entonces como una variacin del ngulo de resonancia. En la figura 4 se muestra el esquema de un sensor de SPR y su mecanismo de funcionamiento. Como alternativa, se estn desarrollando actualmente biosensores basados en el fenmeno de resonancia de plasmn en nanopartculas. En el caso de stas, y debido a su pequeo tamao, la oscilacin de los electrones est muy localizada en ciertas zonas de las nanopartculas (v. mapas de intensidad en la fig. 4), por lo que el fenmeno se denomina resonancia de plasmn superficial localizada (LSPR). Tal como se indica en la figura 4, la adsorcin de (bio)molculas sobre las nanopartculas provoca cambios de color, que se pueden emplear para la deteccin. A pesar de que los lmites de deteccin podran ser similares que los obtenidos con los biosensores SPR, el sistema experimental es mucho

ms sencillo en LSPR, ya que se mide transmisin en lugar de reflexin y adems se puede facilitar la miniaturizacin. En ambos casos, los dispositivos permiten portabilidad y requieren una cantidad de muestra relativamente baja (de micro a nanolitros) para hacer el anlisis y ya se ha demostrado su utilidad en la deteccin de protenas en el nivel nanomolar en muestras de pacientes (orina, suero) sin necesidad de pretratarlas o de mutaciones puntuales en las cadenas de ADN sin necesidad de marcadores fluorescentes. Existen otros mtodos de deteccin que hacen uso del fenmeno de LSPR de una forma diferente. Por ejemplo, se han desarrollado detectores de ADN basados en los cambios de color que se producen debido a la agregacin de nanopartculas de oro marcadas con cadenas de ADN complementarias a la que se intenta reconocer.

Biosensores nanomecnicos
Otro tipo de nanobiosensor con grandes perspectivas en nanodiagnstico son los biosensores nanomecnicos, que emplean como sistema de transduccin la deflexin nanomtrica de una micropalanca o el desplazamiento de su frecuencia de resonancia al interaccionar con el sistema biolgico. El cambio en la posicin y movimiento de la micropalanca inducido por el reconocimiento molecular ocurre a escala de unos pocos nanmetros, y de aqu deriva el nombre de biosensores nanomecnicos. La figura 5 muestra las imgenes de algunos de estos sensores. Las micropalancas tienen un rea sensora muy pequea (del orden de 1.000 m2), lo que permite el anlisis de cantidades de sustancia inferiores al femtomol. Adems se fabrican con tecnologa microelectrnica estndar, lo que proporciona produccin en masa a bajo coste y permite la fabricacin de miles de micropalancas en un mismo proceso, que podran ser empleadas para la deteccin simultnea de miles de analitos de la misma muestra.

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Desarrollos como los nanosensores fotnicos o los nanomecnicos, fabricados a miles gracias a la tecnologa microelectrnica, abren un camino para la fabricacin de nanobiochips genmicos y protemicos, que a diferencia de los actuales biochips, llevan incorporado un sistema de transduccin de la interaccin (no se necesitaran marcadores fluorescentes), con los que sera posible conseguir en muy poco tiempo una inmensa cantidad de informacin gentica y protemica que permitir elaborar vacunas, identificar mutaciones indicativas de enferme-

dades, identificar nuevos frmacos, identificar patgenos, etc. de forma mucho ms rpida que utilizando las tecnologas convencionales.

Sistemas laboratorio-en-unchip
La integracin en sistemas lab-on-a-chip ser otra de las reas fundamentales de trabajo, que permitir la descentralizacin de las medidas. El trmino lab-on-a-chip (o laboratorio en un chip) describe el desarrollo de platafor-

A LASER Photodetectora array I I priam II II

Au layer Flow of anlytea B 1.200 1 Scattering Intensity 800 2

400

450

500 550 Wavelength (nm)

600

Figura 4. A) Funcionamiento de un biosensor SPR. La interaccin biomolecular que tiene lugar sobre el oro se detecta mediante el desplazamiento de la curva plasmnica. B) Fotografas de microscopia electrnica de nanopartculas de oro (esferas y cilindros) y la localizacin de la resonancia plasmnica. La resonancia vara cuando se colocan los analitos en la superficie.

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mas integradas y miniaturizadas donde tienen lugar complejas reacciones qumicas y bioqumicas. Estas plataformas se estn constituyendo como una tecnologa revolucionaria en el sector clnico. Las micro y las nanotecnologas han proporcionado las herramientas necesarias para llevar a cabo esta innovacin en el diagnstico molecular, al permitir la fabricacin e integracin de micro/nanobiosensores, microcanales, microactuadores, etc. en un mismo chip. El empleo de estos dispositivos aporta las ventajas de rapidez en el anlisis, reducido volmenes de muestra, alto grado de automatizacin y su carcter porttil y desechable. Un simple microsistema con nanosensores incorporados podra ofrecer un diagnstico completo a partir de una gota de sangre mediante la identificacin (de otra manera imperceptible) de cambios moleculares; esto implica que los anlisis podran hacerse a domicilio. Cuando se empiecen a reemplazar los caros y lentos anlisis de laboratorio por estos anlisis de microchips ms baratos, rpidos y cmodos, el impacto en organizaciones sanitarias y sus pacientes ser muy importante. Pero, a pesar de estos incipientes desarrollos, todava queda mucho camino por recorrer y para al futuro, sera deseable contar con nanodisposi-

tivos que cumplieran la mayora de los siguientes requisitos: robusto, barato, posibilidad de multianalito, deteccin a niveles de pico/femtomolar o incluso en el nivel de una sola molcula, rpidos y directos, porttiles, de fcil manejo por parte de personal no especializado, de multiuso o suficientemente barato para ser de un nico uso. El trabajo futuro se encamina tanto al desarrollo de nuevas estrategias de inmovilizacin y de proteccin, para permitir nanobiosensores completamente reversibles y regenerables y que puedan funcionar in situ en muestras complejas (como es la sangre) y que sean biocompatibles para ser implantados in vivo. La inclusin de los nanodispositivos en el interior del cuerpo preservando su funcionalidad ser un logro paradigmtico en nanodiagnstico. Los nanobiosensores implantados podran funcionar como centinelas dentro del cuerpo humano y emitir una seal de alarma ante la aparicin de las primeras clulas enfermas. Ya se han obtenido pequeos avances (a nivel micro), como pldoras con cmaras de imagen que pueden tragarse, sensores que pueden realizar medidas in vivo durante operaciones, etc. Est ser sin duda una de las grandes reas de trabajo de la nanomedicina en los aos venideros. La figura 6 recoge una visin del empleo futuro de los dispositivos nanobiosensores.

Figura 5. Biosensores nanomecnicos empleados en nanodiagnstico.Las micropalancas se doblan unos nanmetros cuando tiene lugar una reaccin de reconocimiento molecular en su superficie. El nanobiosensor de matrices de micropalancas puede emplearse como biochip de ADN o protemico segn la biofuncionalizacins.

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Liberacin controlada de frmacos

La nanomedicina se ha propuesto como una posible solucin para el desarrollo de nuevos sistemas de liberacin controlada de frmacos. La idea consiste en utilizar nanoestructuras que transporten el frmaco hasta la zona daada y, solamente cuando han reconocido esa zona, lo liberen como respuesta a un cierto estmulo. Para ello es necesaria la previa encapsulacin o desactivacin de los frmacos para que no acten durante su trnsito por el cuerpo hasta llegar al lugar afectado, de forma que mantengan

intactas sus propiedades fsico-qumicas y que se minimicen posibles efectos secundarios en otras zonas del cuerpo. Una vez que el frmaco ha llegado a su destino, debe liberarse a una velocidad apropiada para que sea efectivo, lo cual se puede hacer mediante una variacin de ciertas condiciones (pH o temperatura, p. ej.) en la zona daada, o mediante un control preciso de la velocidad de degradacin del material encapsulante, permitiendo que la liberacin del frmaco sea controlada. Para la administracin de frmacos se ha propuesto una gran variedad de nanoestructuras, como nanopartculas, nanocpsulas, dendrme-

Nanobiosensores en urgencias

Tecnologas Nanofotnica Nanotubos, nanopartculas Nanomecnica, NEMS

Beneficios Datos en tiempo real e in-situ Imagen a nivel celular Herramientas quirrgicas de precisin guiadas por sensores

Nanobiosensores en la consulta

Tecnologas Biochips Nanoarrays de alta densidad

Beneficios Anlisis completo en minutos Diagnsticos rpidos y precisos Tratamientos especficos y personalizados

Nanobiosensores en casa

Tecnologas Wireless Dispositivos porttiles con batera Displays de alta resolucin

Beneficios Auto pruebas diagnsticas simples Transmisin automtica de datos a historial clnico

Figura 6. Futuro de la utilizacin de nanobiosensores como sistemas de nanodiagnstico. Adaptado de General Electric.
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Nanopartculas

Dendrmeros

Nanocpsulas polimricas

Liposomas

Figura 7. Diferentes tipos de nanosistemas que pueden emplearse en la dosificacin de frmacos.

ros, liposomas, micelas, nanotubos, conjugados polimricos, microgeles, etc. (fig. 7). La nanotecnologa permite que la liberacin del frmaco sea mnimamente invasiva, ya que estos nanosistemas pueden atravesar poros y membranas celulares. Otra gran ventaja es que la efectividad del medicamento se ve incrementada mediante el control preciso de la dosis requerida y del tamao, la morfologa y las propiedades superficiales del compuesto. En la actualidad ya se encuentran disponibles en el mercado numerosos frmacos desarrollados basados en principios de la nanotecnologa;

algunos de ellos se recogen en la tabla 2, as como la fase de desarrollo en la que se encuentran actualmente.

Terapia basada en nanopartculas

Adems de elementos de reconocimiento y diagnstico, las nanopartculas pueden utilizarse tambin como agentes teraputicos. Una vez que las nanopartculas se unen a tejidos

Tabla 2. Ejemplos de frmacos nanoestructurados

Nano estructura Liposoma Albuminoso Micela polimrica Conjugado polmero/frmaco Liposoma dirigido Nanopartcula de polmero Partcula inorgnica o metlica Dendrmero

Fase de desarrollo Aprobado por la FDA Aprobado por la FDA Ensayos clnicos Ensayos clnicos Ensayos clnicos Ensayos clnicos Ensayos clnicos (oro) y preclnicos Ensayos preclnicos

Ejemplos DaunoXone, Docil Abraxane Genesol-FM, SP1049C, NK911, NCQ12, NC105, NC-6004 XYQTAX, Pegamotrecan, APS346, etc. MCC-465,MBP-426, SGT-53 FCE28069 (PK2), CALAA-01 Nanotubos de carbono, partculas de slice, nanopartculas de oro Poliamidoamina (PAMAM)

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daados o a clulas cancerosas, se puede inducir su calentamiento mediante aplicacin de un campo magntico de baja intensidad (para nanopartculas magnticas) o por irradiacin con luz infrarroja (para nanopartculas metlicas). A pesar de que los mecanismos son diferentes, en ambos casos el calentamiento provoca la destruccin de las clulas tumorales por hipertermia, sin afectar a las clulas o tejidos sanos que las rodean. La utilizacin de esta tecnologa para el tratamiento del cncer evitara los graves problemas de efectos secundarios de los actuales tratamientos de quimioterapia o radioterapia. Estos experimentos ya han demostrado su utilidad en pacientes humanos. Una de las principales nanoterapias es la desarrollada por la empresa alemana MagForce Nanotechnologies AG, que ha recibido recientemente (julio de 2010) la aprobacin de la Agencia Europa. El sistema de nanoterapia de MagForce se basa en el uso de nanopartculas de xido de hierro recubiertas de aminosilano. La aplicacin concreta, recientemente aprobada para su uso en la clnica para tratamiento de tumores cerebrales, consiste en inyectar estas nanopartculas magnticas en la zona del tumor y posteriormente aplicar un campo magntico alternante de alta frecuencia, que produce un calentamiento local de la zona tumoral debido la vibracin de las nanopartculas y, por consiguiente, la destruccin de las clulas cancerosas. La terapia podra aplicarse a diferentes tipos de tumores slidos. La aprobacin de este nuevo mtodo teraputico abre las puertas a los mtodos teraputicos basados en la nanotecnologa.

Nanomedicina regenerativa
La nanomedicina regenerativa se ocupa de la reparacin o sustitucin de tejidos y rganos enfermos o daados mediante la aplicacin de mtodos procedentes de la terapia gnica, la terapia celular, la dosificacin de sustancias biorregenerativas y la ingeniera de tejidos, estimu-

lando los propios mecanismos reparadores del cuerpo humano. Las principales aportaciones de la nanotecnologa a la medicina regenerativa estn relacionadas con la produccin de nuevos materiales y sistemas de soporte, la utilizacin de clulas madre embrionarias y adultas y la produccin de molculas bioactivas que sirvan como seales de diferenciacin celular. En la ingeniera de tejidos, la nanotecnologa puede jugar un papel predominante, al facilitar nuevos materiales y tcnicas que permiten una integracin de los tejidos de forma ms eficiente por la posibilidad de generar microambientes ms propicios para la regeneracin tisular. La principal dificultad radica en encontrar materiales adecuados que permitan la fabricacin de estructuras que mantengan activo el rgano afectado mientras se regenera la zona daada. Entre los materiales que se estn utilizando cabe destacar los nanotubos de carbono, las nanopartculas como hidroxiapatita o zirconia, las nanofibras de polmeros biodegradables, los nanocomposites, etc. Uno de los mayores logros es el desarrollo de biomateriales con capacidad de imitar a la matriz extracelular, constituyendo un autntico soporte, idntico al que aparece de forma natural en las clulas, sobre el que pueden crecer las clulas progenitoras para posteriormente implantarlo en el paciente y as reparar o sustituir el rgano daado. Tambin se pueden utilizar superficies nanoestructuradas que pueden actuar como incubadoras de lneas celulares, favoreciendo el proceso de diferenciacin celular. Un ejemplo se muestra en la figura 8, donde una superficie nanoestructurada con nanotubos de carbono ha permitido el crecimiento y proliferacin de redes neuronales; tambin puede observarse una estructura tridimensional con huecos ordenados, fabricada mediante replicacin inversa de un cristal opalino, en cuyo interior se han crecido hepatocitos. Esta estructura podra proporcionar la rigidez necesaria para mantener el hgado mientras se desarrolla el crecimiento de

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las clulas encargadas de regenerarlo. Otra posibilidad es el diseo de biomateriales inteligentes que incorporen en su seno molculas de sealizacin que, una vez insertadas en el paciente, sean liberadas de forma gradual y activen la regeneracin tisular in vivo. Gracias a la nanomedicina, las clulas madre pluripotenciales y los factores de sealizacin sern componentes esenciales de implantes inteligentes y multifuncionales que podrn reaccionar en funcin del microambiente que le rodee y facilitar entonces la regeneracin del tejido daado de forma especfica y en el mismo lugar. Es de prever tambin que se puedan desarrollar nanoestructuras artificiales que puedan detectar y reparar daos en el organismo, de la

misma forma que las nanoestructuras naturales lo hacen (p. ej., los linfocitos de la sangre). As, se ha propuesto de forma terica la fabricacin de unas nanoestructuras para sustituir la hemoglobina, denominadas respirocitos. Los respirocitos son clulas rojas nanofabricadas con una enorme capacidad para transportar oxgeno y que puede permitir pasar varias horas bajo el agua sin respirar. Segn los clculos de su creador, con una inyeccin de respirocitos podramos vivir con el corazn parado durante 4 horas o bucear durante 2,5 horas. Otros interesantes desarrollos incluyen motores biomoleculares, interruptores moleculares o nanoagujas que penetren en el ncleo de clulas vivas con un alto grado de precisin para realizar ciruga celular.

Figura 8. A) Red bidimensional nanoestructurada con nanotubos de carbono y utilizada como soporte para la proliferacin de redes neuronales. B) Imgenes de microscopia electrnica del crecimiento de osteoblastos. C) Crecimiento de vasos sanguneos artificiales. D) Crecimiento de clulas de fibroblasto sobre un sustrato nanoestructurado.

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Conclusiones
El enorme avance de la nanotecnologa durante las ltimas dcadas ha permitido grandes desarrollos en muchos campos, incluidas las ciencias de la salud. Los conceptos de la nanotecnologa se estn aplicando en mtodos de diagnstico ms sensibles, sistemas de terapia y de administracin controlada de frmacos, as como en herramientas que permiten la regeneracin de tejidos y rganos daados. Los sistemas y mtodos descritos en este captulo son solamente ejemplos seleccionados de la ingente actividad que se est desarrollando en miles de laboratorios de todo el mundo para mejorar las condiciones de salud y la calidad de vida de toda la sociedad. En el futuro, estos sistemas se integrarn en microchips implantables que permitirn la administracin programada de frmacos con un tratamiento personalizado y que, al mismo tiempo, podrn medir los parmetros vitales del paciente y trasmitir esta informacin directamente a una estacin central de datos, para tener controlado al paciente mientras ste hace su vida normal.Ya existen chips subcutneos para medir de forma continua parmetros cruciales como el pulso o la temperatura, nanopartculas que pueden reconocer, detectar y atacar selectivamente clulas cancerosas, as como nanosensores que permiten detectar en fluidos biolgicos cantidades extremadamente bajas de molculas que revelan la existencia de cncer u otras enfermedades. Se estn fabricando actualmente dispositivos laboratorio-en-un-chip y se ha pasado a la etapa de ensayo clnico para nanopartculas que realizan una liberacin controlada de frmacos. Sin embargo, los largos procesos de aprobacin en los sectores mdicos y farmacuticos pueden significar que los beneficios para la salud slo podrn apreciarse a largo plazo. Aunque todava es necesario llevar a cabo una gran cantidad de investigacin y desarrollo,

no cabe duda de que la nanotecnologa seguir sorprendindonos con avances que redundarn en una mejora de la calidad de vida de nuestra envejecida sociedad y que ayudar a resolver los problemas causados por las principales enfermedades (cncer, desrdenes neurodegenerativos y enfermedades cardiovasculares).

Referencias
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