Caracterización Microscópica y Macroscópica de

Bacterias de Cavidad Bucal y Orofaringe

Agustina Salas Ortega

INTRODUCCIÓN

No existe en el cuerpo humano región que presente mayor cantidad y variedad de

microorganismos que la cavidad oral, en donde por las características fisicoquímicas presentes es
posible considerar la existencia de un micro ecosistema.

La cavidad oral puede albergar las siguientes variedades de microorganismos: bacterias,

hongos, levaduras, protozoarios y virus.

La microbiología juega un papel fundamental en Odontología porque, en las dos principales

alteraciones de la cavidad oral, como son caries y enfermedad parodontal, participan las bacterias, de
las cuales, la mayoría forman parte de la microflora residente, esto hace necesario estudiar los diferentes
tipos de microorganismos que existen en la cavidad bucal y la forma en que participan en dichas
alteraciones.

La metodología empleada en microbiología establece la necesidad de obtener muestras

representativas de los microorganismos y hacerlos crecer en medios de laboratorio que permitan el
estudio de sus características tanto morfológicas como metabólicas y establecer la patogenicidad de los
mismos.

Las bacterias son el grupo más importante y juegan un papel fundamental en el desarrollo de
las enfermedades ya mencionadas, por lo tanto, serán el objeto de estudio de las pruebas de laboratorio
que se apliquen en esta práctica. Son células procariotas que tienen, Núcleo, Membrana celular, Pared
celular, y algunas bacterias pueden tener.: Cápsula, Esporas, Flajelos y Pili (fimbrias).

La taxonomía de las bacterias es muy compleja y de cambios frecuentes, a medida que

aumentan los conocimientos sobre sus propiedades fisiológicas y genéticas. A pesar de ello, las
bacterias se subdividen según sus propiedades de tinción, con la técnica de Gram y según su
morfología.

Las bacterias se subdividen según su reacción con la tinción de Gram, en gram

negativas y Gram. positivas, ambas tienen pared celular, la diferencia se le atribuye a la
estructura y composición de la pared celular, es más compleja en las gram negativas, que
en las Gram. positivas.

El estudio de las bacterias fuera de la cavidad oral se lleva a cabo en los laboratorios por el
cultivo de los microorganismos en medios sintéticos sólidos, líquidos ó semisólidos.

Los medios de cultivo en general son sustratos que aportan los requerimientos nutritivos para
la multiplicación bacteriana. Los microorganismos obtienen del medio de cultivo las fuentes de carbono,
nitrógeno, fósforo, potasio, sodio, magnesio y otros elementos necesarios para su crecimiento.
Algunos microorganismos requieren de factores de crecimiento específicos que se deben
agregar al medio de cultivo. Las condiciones óptimas de cada especie bacteriana varían y dependen de
factores como el pH, temperatura, oxígeno, humedad, etc.

Para el sembrado y aislamiento de bacterias existen una gran variedad de medios de cultivo,
que deben ser utilizados según el tipo de muestra y la finalidad del cultivo. Los medios se clasifican de
acuerdo a los componentes y la finalidad de su uso, como ejemplo de los más usuales tenemos los:
 MEDIOS ENRIQUECIDOS: Son medios que utilizan algún producto biológico para su
enriquecimiento (sangre, líquido de ascitis, líquido cefalorraquídeo) y se utilizan para el aislamiento inicial
y conservación de bacterias con requerimientos nutritivos complejos, ejemplos de estos medios son:
agar-sangre, agar-chocolate y B.H.I. (infusión de cerebro corazón)
MEDIOS SELECTIVOS: Estos medios se caracterizan por evitar o promover el crecimiento de
algún tipo específico de microorganismo, por ejemplo: el medio de S110 contiene un alto contenido de
cloruro de sodio con lo cual se evita el desarrollo de cualquier otra bacteria y permite el aislamiento
selectivo del género Staphylococcus sp., el medio de Rogosa tiene un pH ácido que evita el desarrollo
de otras bacterias y promueve el desarrollo de microorganismos acidúricos, en especial los
Lactobacillus sp.

MEDIOS DIFERENCIALES: En estos medios se observan cambios que sirven para diferenciar
un tipo de bacteria de otro similar, por ejemplo, el medio de manitol salado contiene un colorante (rojo
de fenol) que cambia a amarillo cuando el Staphylococcus aureus (patógeno) degrada el manitol del
medio y esto no lo puede realizar el Staphylococcus albus.(saprófito)

Para la conservación de cepas puras, se pueden utilizar los medios simples, estos contienen
los requerimientos mínimos necesarios para mantener viables a los microorganismos, sin embargo
algunas especies requieren de medios especiales con altos contenidos de nutrientes que les permitan
conservarse, por ejemplo el Mycobacterium tuberculosis; en otros casos los medios contienen
indicadores de la actividad metabólica de los microorganismos como el medio de Snyder que al cambiar
de verde oscuro a amarillo limón en un tiempo determinado, establece la actividad cariogénica del
paciente.

Los medios de cultivo pueden ser líquidos, sólidos ó semi-sólidos en el caso de líquidos se usan
tubos de ensayo con tapón de rosca, tapón de hule ó tapones de algodón, por lo cual su transporte se
debe hacer en gradillas ó botes que impidan que se inviertan los tubos, los medio sólidos en términos
generales se transportan en cajas de Petri las cuales siempre deben estar con la tapa hacia abajo y el
medio de cultivo en la parte superior, con esto se evita abrir la caja en forma accidental y permite que la
condensación que ocurre al incubar la caja mantenga al medio durante más tiempo húmedo.

OBJETIVOS:

1.- Realizar técnicas bacteriológicas para el estudio de microorganismos de cavidad bucal y de

la orofaringe.
2.- Aislar bacterias de cavidad bucal y orofaringe
3.- Identificar las bacterias aisladas por su morfología macroscópica y microscópica.
4.- Realizar pruebas de antibiograma a Staphylococcus sp. Aislados

MEDIDAS GENERALES DE SEGURIDAD PARA LA TOMA Y MANEJO DE LOS PRODUCTOS

BIOLÓGICOS Y MICROORGANISMOS EN EL LABORATORIO

El Operador Corre Riesgos De Contaminación:

a) En la toma de productos a través de:

- vía respiratoria
- vía bucal
- heridas
- infecciones ó picaduras de la piel
b) En el manejo de productos
c) Durante el procesamiento de las técnicas de siembra
d) En el manejo de cultivos con microorganismos altamente infecciosos

Precauciones que se deben observar

 a) Evitar tomar alimentos y/o fumar dentro del laboratorio
b) Uso obligatorio de la bata
c) Uso de cubrebocas y guantes desechables durante el manejo de cultivos
d) Evitar corrientes de aire durante el manejo de muestras y productos biológicos.
e) Evitar el chisporroteo de las asas de siembra por el flameo directo.
f) Limpiar las mesas de trabajo con soluciones antisépticas antes y después de su uso.
g) Esterilizar todo el material contaminado
h) Incineración del material desechable como son: hisopos contaminados, abatelenguas,
gasas, etc. Antes de tirarlos a la basura
i) Los cultivos que se desechan, deben ser esterilizados en autoclave, antes de ser lavados
j) En caso de derrame de productos biológicos contaminados cubrir con fenol al 5% la zona
contaminada por lo menos durante 1Hr.

RECURSOS:

Material por equipo 1ª. Sesión

Físicos:
5 Hisopos estériles
1 gradilla
1 Tubo estéril para obtención de
saliva
1 Caja de Petri vacía estéril
2 Pipetas estériles de 1 ml
1 Mechero Bunsen
1 Lámpara de exploración
1 Paquete de gasa
5 Portaobjetos
1 Asa
1 Microscopio
1 Papel seda
1 Puente de tinción
2 Abatelenguas estériles

Recursos Químicos
3 Cajas de Petri con agar-sangre
1 Caja de Petri con manitol salado
1 Tubo con Rugosa
1 Tubo con 9.9 ml de solución salina
estéril
1 Tubo con 9 ml de solución salina
estéril
1 Pizeta con agua destilada
1 Tren de Gram (cristal violeta, lugol,
alcohol acetona, safranina)
1 Frasco con aceite de inmersión
 Recursos por grupo
1 tripié
1 mechero
1 recipiente ó baño María
1 gradilla

Recursos Biológicos:
Muestras de:
Saliva
P.D.B.
Surco Gingival
Exudado Faríngeo
Metodología para el estudio bacteriológico
de muestras de cavidad bucal

Para el desarrollo de esta práctica la cual consiste en el estudio de los microorganismos de la cavidad oral,
mediante técnicas de laboratorio, se deben seguir en orden riguroso los siguientes pasos:

1.- Obtención de una muestra biológica representativa del sitio en estudio (leer Obtención de
Muestras).
2.- Descarga o sembrado en el medio de cultivo adecuado.
3.- Realización de un frotis directo.
4.- Incineración directa del hisopo o asa con la que tomo la muestra.
5.- Aislamiento por estría cruzada (ver procedimiento)
6.- Fijar el frotis por calor en la flama del mechero.
7.- Realizar la tinción de Gram.
8.- Hacer la observación microscópica de los frotis realizados (ver procedimiento de enfoque del
microscopio.

En cada uno de los pasos antes mencionados se deben aplicar cuidados y técnicas específicas,
que es importante conocer todas y cada una de ellas antes de iniciar cualquier procedimiento, para evitar
el manejo inadecuado de los materiales y productos biológicos, así como el riesgo de contaminarse
innecesariamente.

1.- OBTENCIÓN DE MUESTRAS BIOLÓGICAS

La forma y cuidado en la obtención de las muestras biológicas es fundamental, de esto

dependerá que los resultados sean confiables y representativos del estudio que se este realizando,
se debe seleccionar el sitio que presente las mejores características de la lesión o del sitio en
estudio. De cavidad oral es posible aislar microorganismos de todas las estructuras presentes, sin
embargo los tipos de muestras que se emplearan para esta práctica y la técnica para obtenerse
son:

EXUDADO FARINGEO.- La toma de la muestra se realiza con un hisopo y un abate leguas

estériles, se debe de pedir al paciente que abra lo más grande que pueda la boca, saque la lengua y
que trate de pronunciar la letra “A”, en ese momento con el abate leguas bien tomado (ver figura)
deprima la lengua y deje expuesta la orofaringe, con el hisopo se raspa ligeramente las amígdalas,
girándolo al mismo tiempo, una vez realizada la toma, se hace la descarga de la muestra en el medio
de cultivo correspondiente. Para exudado faringeo se usan dos cajas de Petri una con gelosa
sangre y otra con manitol salado, en ambas cajas se hace la descarga con el mismo hisopo, al terminar
y con el hisopo se realiza el frotis directo. (Ver técnica)

SURCO GINGIVAL. - Con el asa, previamente esterilizada en el fuego y enfriada, se recorre

suavemente el surco gingival, tratando de introducir la punta sin lastimar al paciente, es recomendable
tomar la muestra de un individuo que presente inflamación gingival; una vez obtenida la muestra se
realiza la descarga en la caja de Petri correspondiente, y el frotis directo.(la caja de esta muestra se
recomienda incubar en anaerobiosis)

PLACA DENTO BACTERIANA. - Esta muestra también se toma con el asa previamente
esterilizada y enfriada, se debe raspar la cara distal de los últimos molares, tratando de remover la
acumulación de placa dental, se realiza la descarga en la caja de Petri y el frotis directo.

SALIVA. - Para la estimulación de la saliva el paciente debe de masticar un trozo de parafina

durante 3 min., la saliva se debe recolectar en un tubo de ensaye estéril, se deben de obtener como
mínimo 2 mililitros de saliva.

2.-TÉCNICA DE DESCARGA EN MEDIOS DE CULTIVO SÓLIDOS

(EN CAJAS DE PETRI)

Según la muestra obtenida se hará primero la descarga los siguientes medios de cultivo:

a) Exudado faríngeo Agar-sangre y S110 (manitol salado)

b) Surco gingival Agar-sangre
c) Placa dentobacteriana Agar-sangre
d) Saliva Medio de Rogosa

Los medios de cultivo ya inoculados deben ser sometidos a un proceso de Incubación el cual
se lleva a cabo en una estufa bacteriológica que de acuerdo al tipo de microorganismos de que se trate
debe de tener tiempos y temperaturas específicas.

La mayoría de las bacterias crecen a 37oC en 24 ó 48 Hrs., mientras que los hongos crecen a
28oC y tardan hasta 28 días.

En el caso de bacterias presentes en la caries como los Lactobacillus sp., cuando se siembran
en el medio de Rogosa se recomienda incubarlos durante 48 Hrs. A 37oc y durante otras 48 Hrs. A
temperatura ambiente.

Precauciones para realizar el sembrado

Para realizar el sembrado requiere trabajar en una zona de esterilidad, la cual será
proporcionada por la flama de un mechero Bunsen, con esto se evita la contaminación del medio de
cultivo con microorganismos del medio ambiente
Para evitar la contaminación con microorganismos del operador este no debe hablar ó
estornudar cuando el medio de cultivo este abierto, de preferencia utilizar cubrebocas y guantes
desechables

Previo al sembrado se deberá etiquetar los medios de cultivo con los siguientes datos:
• tipo de muestra sembrada
• nombre del paciente
• fecha en que se realizó el sembrado
• grupo y equipo
(en el caso de un laboratorio clínico se anota el nombre ó clave del operador)
 PROCEDIMIENTO PARA LA DESCARGA EN CAJAS DE PETRI CON MEDIOS SÓLIDOS

En las cajas de Petri que ya contienen el medio de cultivo solidificado se debe aplicar un primer
inoculo de microorganismos que recibe el nombre de descarga, a la zona así impregnada se le
denomina como zona de descarga, a partir de este sitio, con la técnica de aislamiento específica y el
asa bacteriológica se distribuirán hacia el resto de la caja.

TÉCNICA DE DESCARGA

1) Coloque sobre la mesa la caja de Petri con la tapa

hacia abajo cerca del mechero bunsen. (el medio de cultivo debe
quedar hacia la parte superior)
2) Con una sola mano abra la caja de Petri y manténgala
cerca de la flama del mechero (a no más de 10cm)

3) En una zona de la periferia que usted elija, con el

hisopo ó con el asa según sea el caso, realice una zona de
descarga no abarcando más de una sexta parte de la
superficie total, (ver esquema). Para que la descarga resulte
óptima debe de pasarse el hisopo ó el asa repetidas veces
sobre la misma zona, la inoculación de la muestra debe
realizarse con el mayor cuidado posible a fin de no romper la
superficie del agar.

TÉCNICA DE AISLAMIENTO POR ESTRIA CRUZADA DE LAS MUESTRAS EN MEDIOS SÓLIDOS

(REALIZAR ESTA TÉCNICA DEBE REALIZAR ANTES EL FROTIS DIRECTO)

Una vez que se han efectuado las descargas de las muestras en las cajas de Petri y ha realizado
el frotis, proceda a extender sobre el resto de la superficie los microorganismos, con esta acción se
pretende aislar los diferentes tipos de microorganismos que pudieran existir en las muestras; para
efectuar una caracterización de las colonias que originan cada bacteria. Existen diferentes técnicas de
aislamiento, la que se utilizará en esta sesión, consiste en los siguientes pasos:

a) Esterilice el asa sobre la flama del mechero hasta que este al rojo vivo.

- Enfríe el asa clavándola en el agar de la caja

en la cual se va a realizar el aislamiento. El
lugar donde deberá enfriar el asa siempre
será el mismo y estará a la izquierda de la
zona de descarga, sin llegar a tocarla. (ver
esquema)
- Una vez enfriada el asa, debe hacer un
estriado (en zigzag) perpendicular a la zona
de enfriamiento y que avance de la periferia
hacia el centro de la caja, abarcando un
tercio de la superficie y sin romper el agar.
El estriado se debe hacer en forma continua
y rápida, pero con cuidado.

d) Al terminar el paso anterior debe

esterilizar nuevamente el asa y enfriar en la forma
ya descrita, para el segundo estriado gire la caja
hacia la izquierda 90o, de tal forma que este
segundo estriado quede perpendicular al
primero, repita el avance del asa en zig-zag de la
periferia al centro y que ocupe un tercio de la
superficie, con los mismos cuidados del estriado
anterior.

e) Nuevamente esterilice el asa y

enfríela, gire la caja 90o y realice un tercer
estriado, perpendicular al segundo, pero en esta
ocasión mas abierto, con objeto de que las
colonias que se desarrollen estén bien separadas
unas de otras.

Técnica de sembrado por estrías cruzadas

Los pasos antes descritos se deben aplicar a todas las muestras que se depositen en cajas de
Petri. Al terminar de sembrar todas las cajas de agar sangre, únalas con una cinta de masking tape y
entréguelas para incubar a 37º C. de 24 a 48 horas
Las cajas debidamente marcadas se entregarán al laboratorista para que sean incubadas en la
estufa bacteriológica, al término del tiempo de incubación se retiran y se refrigeran para ser utilizadas
en la segunda sesión.
 3.- FROTIS DIRECTO

Después de realizada la descarga en el medio de cultivo indicado, proceda a realizar un frotis

directo, según sea el tipo de instrumento que utilizo para tomar la muestra.

FROTIS DIRECTO PARA MUESTRAS TOMADAS CON HISOPO

a) Sobre un portaobjetos previamente lavado, seco

y etiquetado en un extremo, frote en el centro el
hisopo.

b) Esterilice el asa ó incinere el hisopo.

c) Deje secar el frotis a temperatura del ambiente y

ya seco fije sobre la flama del mechero

4.- FROTIS DIRECTO PARA MUESTRAS OBTENIDAS CON ASA

- En un portaobjetos limpio y etiquetado en un

extremo, coloque una pequeña gota de
solución salina estéril, es recomendable utilizar
el anillo del asa para tomar la solución.

- Con la misma asa que tomo la muestra,

extienda la gota de solución con movimientos
circulares, en el centro del portaobjetos.
c) Esterilice el asa.

d) Espere a que seque la solución salina a

temperatura del medio ambiente y fije con el calor
de la flama del mechero. (se debe pasar sobre la
flama dos ó tres veces, sin que se caliente
demasiado.)

5.- SIEMBRA DE SALIVA EN EL MEDIO DE ROGOSA SIN DILUCION DE LA MUESTRA

Para el sembrado de la muestra de saliva en el medio de Rogosa debe seguir los siguientes
pasos:

a) Licue el medio de Rogosa en baño maría

Etiquete una caja de Petri vacía y estéril con los

datos ya señalados.

c) Tome 1 ml. De la saliva recolectada con una

pipeta estéril de 1 ó 5 ml., agregar al tubo de
ensaye que contiene 9ml. De solución salina y
agitar suavemente.

d) De la mezcla anterior tome, con otra pipeta

estéril, 0.1ml. y agréguelo al tubo que contiene 9.9
ml. De solución salina y agite suavemente.
e) De la última dilución tome 1 ml., con otra pipeta
estéril y agréguelo al tubo que contiene el medio de
Rogosa, previamente licuado y a una temperatura
no mayor a los 43oC, agite el tubo suavemente.

f) Vacié el contenido del tubo con medio y saliva en

la caja de Petri vacía

g) Tomando el mechero por su base, flamee la

superficie del medio de Rogosa; esto tiene dos
finalidades, una eliminar los microorganismos
contaminantes (hongos) de la superficie del medio
y eliminar las burbujas. Etiquete la caja de Petri y
no la mueva hasta que gelifique.

Por separado al resto de las cajas, reúna las cajas con medio de Rogosa, para que sean
incubadas 48 horas a 37C y 48 horas a temperatura ambiente.

6.- SIEMBRA EN MEDIOS DE CULTIVO LÍQUIDOS:

1) Etiquete el tubo
2) Abra el tubo cerca de la flama del mechero y flamee la boca del tubo.
3) Introduzca el asa ó el hisopo en el medio y agitar
4) Flamee la boca del tubo y cerrar.
5) Esterilice el asa ó incinere el hisopo.
7.- TÉCNICA DE TINCIÓN

A los frotis bacterianos se les aplica una técnica de tinción con objeto de poder observar a los
microorganismos ya que aun utilizando el microscopio no es posible observarlos si no están teñidos.

La técnica de tinción es muy importante ya que mediante el empleo de ésta se logra identificar
la forma y agrupación de los microorganismos, estos de acuerdo con su naturaleza físico-química se
tiñen con determinados colorantes y lo que permite hacer una identificación parcial.

En los laboratorios de bacteriología se emplean diferentes técnicas de tinción siendo la mas

utilizada la técnica de Gram. Este método fue desarrollado en forma empírica por el bacteriólogo danés
Christian Gram en 1884. El fundamento de esta técnica, esta basado en la estructura de la pared celular
de las bacterias.
Los microorganismos Gram positivos retienen el colorante inicial, violeta, mientras que los
organismos Gram negativos al ser decolorados por el alcohol-acetona, presentan la coloración de
contraste, roja, por ser el último colorante aplicado y no por que sea fijado por el microorganismo.

En primer lugar las células son fijadas al porta objetos mediante calor y teñidas con un colorante
básico (cristal violeta) el cual es captado en forma similar por todas las bacterias. A continuación los
porta objetos son tratados con una mezcla de I2 K I (yodo y yoduro de potasio), para fijar el colorante
(mordente), después son lavados los porta objetos con una solución de alcohol-acetona (decolorante) y
finalmente se aplica una coloración de contraste con un colorante de distinto color (safranina-rojo).
 TÉCNICA DE TINCION DE GRAM

1.- Aplicar Cristal Violeta 1 min. 2.- Lavar con Agua

3.- Aplicar Lugol 1 min. 4.- Decantar el Lugol

5.- Decolorar con Alcohol Acetona 6.- Lavar con Agua

7.- Aplicar Safranina 1 min. 8.- Lavar con Agua

9.- Sacudir exceso de agua 10.- Dejar secar al medio ambiente

Los frotis teñidos se observan al microscopio, con la finalidad de poder observar la agrupación
bacteriana y diferenciar si son Gram negativos o Gram positivos

SEGUNDA SESIÓN

RECURSOS

Material por equipo 2ª. Sesión

Cajas de Petri con las siembras de la sesión

anterior
1 gradilla
10 portaobjetos
1 tren de tinción de Gram (cristal violeta,
lugol, alcohol-acetona y safranina)
1frasco con aceite de inmersión
1 puente de tinción
1 microscopio
papel seda
2 asas bacteriológicas
1 tubo con medio de microinoculación
1 pizeta con agua destilada
1 mechero bunsen

1.- CARACTERIZACION MACROSCÓPICA

Una vez que obtenido el crecimiento de bacterias en colonias aisladas, es necesaria la

caracterización de estas colonias, ya que cada microorganismo produce un determinado tipo de colonia,
siendo estas características diferentes si se utilizan medios de cultivo distintos, pero serán iguales
utilizando siempre el mismo medio de cultivo.

CARACTERÍSTICAS MACROSCOPICAS
MORFOLOGÍA COLONIAL
Tamaño: Diámetro de la colonia expresada en mm, en el caso de colonias muy pequeñas
se les denomina simplemente como puntiformes.

Color: La variedad de colores es muy amplia y deben ser descritos en colores de

conocimiento común (rosa, blanco, amarillo, etc.). No necesariamente todas las
colonias son coloridas esto depende de la capacidad de producir o no pigmento.

Forma: Pueden ser colonias de diversas formas; ovaladas estrelladas, digitiformes,

redondas, etc.

Elevación: Esta es la altura de la colonia sobre el medio de cultivo ejem. Convexa alta, plana,
en meseta, etc.

Comportamiento a luz Brillante o mate.

reflejada:
 Comportamiento a la Opaca ó translúcida
luz transmitida

Superficie: Lisa, rugosa .ó mucoide.

Bordes: La periferia de las colonias puede ser continua ó discontinua.

Hemólisis: La periferia de las colonias en medios con sangre puede presentar diferentes
grados de destrucción de los Eritrocitos:
Hemólisis alfa: parcial, verdosa
Hemólisis beta: total
Hemólisis gamma: sin cambio

Morfología de las

Estas características, de las diferentes colonias de bacterias cultivadas en las cajas de petri de la sesión
anterior podrán ser diferenciadas, siguiendo los siguientes pasos:

1) Realice la caracterización macroscópica de las colonias aisladas en las cajas de Petri con
cultivo de la sesión anterior.

2) Realice un frotis de las colonias diferentes y aisladas de cada una de las cajas de cultivo,
mediante la siguiente técnica:

a) Sobre un portaobjetos limpio coloque con el asa estéril una gota de solución salina isotónica.
b) Esterilice el asa.
c) Abra la caja que contiene la colonia de interés cerca de la flama del mechero y enfríe el asa
en la zona de enfriamiento.
 d) Tome una muestra de la colonia.
e) Combine la muestra con la gota de solución salina y extienda lo más posible.
f) Deje secar y después fije el frotis a la flama del mechero.

NOTA: Si las colonias son puntiformes debe tomar toda la colonia, si son mayores a 1 mm. Solo tóquelas
para evitar arrastrar masas de bacterias.
3) Hacer la observación al microscopio de cada una de las preparaciones considerando:

a).- La forma de las bacterias

b).- El resultado obtenido de la tinción de Gram
c).- La agrupación de las bacterias

4) Para el cultivo de la saliva:

a).- Realizar la identificación de las colonias de los lactobacilos en base a las siguientes
características:
- Colonias de color blanco cremoso
- circulares
- con forma de balón de americano, platillo volador ó bolillo

b).- Contar el número de colonias que reúnan las características anteriores y multiplicar por la
dilución de la saliva (1000), el resultado será el número de lactobacilos por ml. De saliva.
c).- Determinar la actividad de caries en base a la tabla que se presenta mas adelante.
d).- Realizar frotis de las colonias seleccionadas
e).- Teñir y observar al microscopio
f).- Tomar una colonia que reúna las características de los lactobacilos, con el asa y sembrar en
el medio líquido de: micro inoculación, con la técnica descrita en la sesión anterior.
g).- Etiquetar el tubo e incubar

Morfología bacteriana y tipos de agrupaciones

Vibrio Espirilo Espiroqueta

Registre los diferentes tipos de colonias encontradas en las cajas de petri

Colonias tamaño color forma elevación luz superficie bordes hemólisis

reflejada
1
2
3
4
 5
6

Por el número de colonia registre las características microscópicas.

colonia Gram forma agrupación

1
2
3
4
5

BIBLIOGRAFÍA
1.- Urmeneta, B.Alonso et al . Manual Práctico de Microbiología. Ed. Masson, S. A. Universidad de
Navarra. España. 1994
2.- Ernest Jawetz., Microbiología Medica., Ed. Manual Moderno., México 1987.
3.- Bradshaw Jack., Microbiología de Laboratorio., Ed. El Manual Moderno., México 1976.
4.- Davis Bernard D., Tratado de Microbiología., Ed. Salvat., España 1978.
5.- Burnett George., Microbiología oral y enfermedad infecciosa., Ed. Panamericana., México 1984.
6.- Murray Patrick R, Microbiología Médica Ed. Harcourt Brace, Segunda edición. España.