Pruebas Bioquimicas Primarias

& *tsiir MANUAL DE PROCEDIMIENTOS
SECCIóN MICROBIOLOGIA
Código:
Edición: O3
Fecha Inicio
UNIDAD DE vigencia:
SERVICIO SALUD AYSEN LABORATORIO CLÍNICO 09l L212fJ20
HOSPITAL REGIONAL Páginas: I - 44
COYHAIQUE DEPEN DIENTE: SUBDEPARTAMENTO DE
APOYO Vigencia: 5 años
PROCEDIMIENTOS
TÉcNIcAs
MICROBIOLOGÍA
Marcelo Lazcano Paulina Arriagada

Carlos Mansilla Sandra Gálvez
Encargado de Calidad
Laboratorio Clínico
Jefe Subdepto Apoyo
oL/t2l2o2o 07/L2|2O2O
Procedimientos Técnicas Microbiología Página 1

SERVICIO SALUD AYSEN
HOSPITAL REGIONAL COYITAIQUE
1. INDICE:
TITULO NO DE
PAGINAS
2. INTRODUCCION 3
3. OBJETIVO 3
4. RESPONSABLES 3
5. ALCANCE 3
6. EXCEPCIONES 3
7. TERMINOLOGIA 3
8. DESCRIPCION DE ACTIVIDADES 4
8.1 PROCEDIMIENTOS TECNICOS TINCION DE GRAM 4
8.2 PRUEBAS BIOQUIMICAS PRIMARIAS 5
8.3 ANTIBIOGRAMA CEPAS FASTIDIOSAS 5
8.4 ANTIBIOGRAMA CEPAS NO FASTIDIOSAS 6
8.5 PROCEDIMIENTO DE SIEMBRA 7
8.6 SIEMBRA EN PLACA B
8.7 SIEMBRA EN TUBO 9
B.B PREPARACION DE MATERIAL ESTERIL 10
8.9 ELABORACION DE MEDIOS DE CULTIVO 10
8.10 PROCEDIMIENTOS DE CULTIVOS 12
8.11 UROCULTIVO 13
B. 12 COPROCULTIVO PRIMARIO 74
B.l3VIBRIO COLERA 15
8.14 EXPECTORACION 16
B. 1 5 H EMOCULTIVO AUTOMATIZADO t7
8.16 CULTIVO AUTOMATIZADO DE LIQUIDO 18
8.17 SECRECION FARINGEA 19
B.lBSECRECION HERIDAS PROFUNDAS Y ABSCESO 20
8.19 HERIDAS SUPERFICIALES Y PIEL 27
8.20 SECRECION NASAL 22
8.21 SECRECION URETRAL 23
8.22 LIOUIDO CEFALORRAOUIDEO 24
8.23 CATETER ENDOVENOSO 26
8.24 VIGILANCIA DE ENTEROCOCOS RESISTENTES A VANCOMICINA 28
8.25 PROCEDIMIENTO DE ASPIRADO TRAQUEAL CUANTITATIVO 30
8.26 PROCEDIMIENTO DE IDENTIFICACCION Y SUSCEPTIBILIDAD 33
AUTOMATIZADO
8.27 PROCEDIMIENTO TECNICA CLOSTRIDIUM DIFFICILE: 35
B.28 PROCEDIMIENTO PARA VIRUS RESPIRATORIOS 36
8.29 PROCEDIMIENTO PARA MYCOPLASMA PNEUMONIAE: 37
B,3O FILM ARRAY 3B
8.31 TEST RAPIDO DE DETECCCION CUALITATIVA DE STREPTOCOCCUS 42
PNEUMONIAE EN MUESTRA bT ORII\R
9. EVALUACION 43
10. INDICADORES 43
11. ANEXOS 44
Proced¡mientos Técnicas Microbiología Página 2

HOSPTTAL REGTONAL COYHATQUE
z. TNTRoDUCCTóN:
La actividad que desarrolla el laboratorio de microbiología está orientada

esencialmente al diagnóstico microbiológico de las enfermedades infecciosas.
Una parte importante de esa actividad consiste en el aislamiento, la
identificación y la determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos de los
microorganismos causales de estas enfermedades. Este documento pretende
describir los procedimientos de la etapa analítica de la sección de microbiología
en lo que respecta al procesamiento de las muestras que son relevantes para
que la actividad del laboratorio de microbiología se desarrolle de manera eficaz
y eficiente.
3. OBJETIVO:
. Estandarizar procesos referentes a manipulación, procesamiento y análisis
de las técnicas implementadas en la sección microbiología.
4. RESPONSABLES:
RESPONSABLE FUNCION
Jefe de Laboratorio Clínico . Velar por el cumplimiento del manual de
procedi m ientos técn icos.
Profesional encargado de . Capacitar y difundir los procedimientos
sección Microbiología relacionados con técnicas de
microbiológicas entre profesiona les.
. Medición del indicador.
Funcionarios Laboratorio o Conocer, aplicar y cumplir con la
Clínico Normativa.
5. ALCANCE:
o Los procedimientos descritos en el presente manual serán aplicados a las
técnicas de microbiología.
6. EXCEPCIONES: N/A
7. TERMINOLOGÍA
LCR: Líquido Cefalorraquídeo
Proced imientos Técn icas M icrobiología Página 3

HOSPITAL REGIONAL COYHAIQUE
8. DESCRIPCION DE ACTIVIDADES
8.1, :
Mater¡ales: Portaobjetos, cubreobjetos, t¡nciones.

Muestra: Muestras de secreciones, heridas superficiales, heridas profundas,
LCR, líquidos de todo tipo, etc.
Med¡o de transporte: Extendido en poftaobjeto
Desarrollo: Hacer una tinclón cada vez que se haga un cultivo, la misma
muestra a cultivar se extiende en un portaobjeto.
Sobre la lámina con el extendido de la muestra realizar los siguientes pasos:
PROCEDIMTENTO TECNICO TINCION DE GRAM
FIJAR EL FROTIS
CUBRIR CON CRISTAL VIOLETA DURANTE 1 I\¡INUTO
LAVAR CON AGUA CORRIENTE DE FORMA SUAVE
,1
AGREGAR LUGOL Y ESPERAR IVIINUTO
DECOLORAR CON ALCOHOL DURANTE 1O SEGUNDOS
TEÑIR CON SAFRANINA DURANTE 15 SEGUNDOS
DEJAR SECAR A TEIVIPERATURA AMBIENTE
Procedimientos Técn¡cas 14icrobiología Página 4

8.2. Pruebasbioquímicas primarias:

Se realizan las siguientes pruebas bioquímicas durante la identificación de
microorganismos:
SOSPECHA DE : PRUEBAS BIOOUIMICAS
BACILOS GRAM NEGATIVOS TSI

(ENTEROBACTERIAS y NO LIA
FERMENTADORES) MIO
CITRATO
UREA
STREPTOCOCCUS Y.H EMOLITICO

CALDO COLUMBIA NaCl 6,5 o/o
TELURITO AGAR BILIS ESCULINA
STREPTOCOCCUS HEMOLITICO
TEST DE CAMP BACITRACINA
STAPHYLOCOCCUS
CALDO MANITA-COAGU I-ASA NOVOBTOCTNA ( PARA LOS
UROCULTIVOS
STREPTOCOCCUS o. HEMOLITICO IN
LEVADURAS MEDIO SABOUREAD + GENTAMICINA +

cloRANFENTCOL (MYCOLTN E)
ENTEROCOCCUS
SORBITOL PYR
RAFINOSA AGAR BILI ESCULINA
ARABINOSA NaCl 6,5olo
8.3. ,
Materiales: Placas de agar Müller Hinton con sangre cordero, tórulas estériles,
estufa de cultivo, sensidiscos (Los ant¡b¡ót¡coL a utilizar son aquelos
recomendados por la cLsr y son actuatizadas anualmente.)
Muestra: Muestras de LCR, Hemocultivos, Líquidos de cavidades estériles.
Medio de transporte: No aplica
Procedimientos Técnicas M icrobiología Página 5

Desarrollo: Cepas Fast¡d iosas: Sfreptococcu s p neu m o n iae.

Preoaración de la muestra:
> Tomar colonias de la cepa en estudio con una Tórula estéril y realizar una
suspensión inmed¡ata de ella en un suero fisiológico estéril.
) Una vez estandarizada la muestra, con tórula estéril, tomar este caldo, y
botar el exceso contra las paredes del tubo para sembrar en placas agar
Muller Hinton sangre, según corresponda.
! Dejar las placas secar por 5 m¡nutos tapadas.
! Dejar tapado a temperatura ambiente por 5-10 minutos.
) Llevar las placas a la estufa de cult¡vo a 35-370 pot L8-24 horas como
mínimo, en atmósfera normal o CO2*, según corresponda a la bacteria en
estud¡o. *En atmosfera de CO2: neumococo.
> Para los Streptococcus pneumon¡ae el antibiograma se reallza en agar Mueller

Hinton con sangre cordero. Se incuba a 35-370 C.
8.4. Antibioorama ceoas no fastidiosas:
Materiales: Placas de agar Mueller Hinton, tórulas estériles, pinza de metal,

d¡spensadores de antibióticos, según corresponda y sensidiscos (Los
antibióticos a ut¡lizar son aquellos recomendados por la CLSI y son
actual¡zadas anualmente.)
Muestra: cepas de:

/ Enterobacterias
/ Staphylococcus
/ Enterococcus
r'Bacilos Gram negativos no fermentadores (BNF)
Med¡o de transporte: No tiene
Desarrollo:
> Real¡zar una emulsión con varias colonias de cepas en estudio, en un tubo de
suero f¡siológico, conseguir Mcfarland 0,5.
) sembrar con tórula estéril en placa de agar Mueller Hinton, en tres

direcciones.
! Dejar secar Y en reposo 5 m¡nutos.
> Colocar los sensidiscos con una pinza ester¡lizada en el mechero o con
dispensador.
) Dejar a temperatura ambiente 5-10 m¡nutos, (las placas tapadas)'
Procedimientos Técnicas Microbiología Pág¡na 6

de Staphylococcus deben leerse a las 24 horas (para búsqueda de cepas

metici I i no- resistentes).
clindamicina deben estar juntas a una distancia de 22mm. (test D)
8.5, Procedimiento de siembra:
Materiales:
. Mesón limpio y desinfectado con hipoclorito de sodio al 0,5o/o
. Guantes desechables
o Lentes de seguridad o antifaz
o Delantal de protección manga larga (pechera)
o Mascarilla si hay peligro de aerosoles
o Mechero
o Asa calibrada de 0.001 mL
. Tórulas estériles secas
. Caja de material cortopunzante
¡ Contenedor de polipropileno con agua clorada al 0,5 o/o pdrd Desechos de
material sucio
. Portaobjetos
. Cubreobjetos
. Placas Petri, caldos, tubos con medios de cultivo
. Lápiz marcador permanente
Procedimiento:
de gente.
esterilizar al rojo en el mechero (en la llama azul) y enfriar en la tapa de la

placa o en un borde del agar. Lo mismo se hace con las pipetas pasteur.

verificando los datos del paciente

(nombre, edad, sexo, etc.).
dar aviso de inmediato a los

profesionales del servicio.
pacíente.
estufa a 35oC
con asa de Nicrón. Los urocultivos se siembran con asa calibrada.
8.6. Siembras en placas:
estrías, con el fin de obtener colonias aisladas.
distribuirla en forma de zig-zag, de extremo a extremo, cubriendo

aproximadamente la mitad del agar.
tocando las estrías anteriores solamente una o dos veces, a fin de tomar unos
pocos microorganismos. Cubrir la mitad del espacio no estriado del agar.
apenas sólo unas estrías. Cerrar la placa y dejar invertida.
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Procedimientos Técnicas Microbiología Página B

8.7. Siembra en tubos:
la muestra e inocular el tubo realizando un movimiento en zig-zag en la

superficie.
Una vez sembrada la muestra tapar e incubar.
H
T
frc*mdroI
después de haber sembrado en la superficie.
Si es en tubos con agar sólido de superficie plana: La muestra se siembra

con un asa estéril enterrándola unos centímetros en el agar del tubo. Tapar
e incubar.
Si es en tubos de caldo: La muestra se transfiere al caldo, se homogeniza

con éste y se tapa.
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agar y luego en forma recta inocular hacia el interior.
Procedim¡entos Técn icas M icrobiología Página 9

P*¡aci&t
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l¡zac*¡tacliótt # {"rrit rt e.dls §€frü}rsárl§.o lotrr.l-

&üfi, Ír§fs de ¡sfantt*rrtr*
8.8. Preparación de material estéril:
Materiales: Material de vidrio (matraces, pipetas Pasteur, vasos precipitados,

etc), cinta indicadora de esterilización para autoclave, papel para esterilización.
Desarrollo:
envuelve cada uno (tubos, placas, matraces, vasos, etc) en papel para
esterilización.
7 días.
8.9. eLnaoRAcróu oe Meoros oe culrlvo.

Materiales: Diferentes agares, placas de 10cm, placas de 5cm, tubos estériles
para pruebas bioquímicas, matraces de 500 mL, matraces de 1000 mL, balanza,
espátula.
Muestra: No aplica
Medio de transoolte: No aplica
Desarrollo: Los medios que se preparan en Microbiología son:

Medios de cultivo:
. Agar SS
. Agar XLD
o Agar TCBS
. Caldo tioglicolato
. Caldo Columbia.
. Caldo BHI

HOSPTTAL REGIONAL COYHAIQUE
. Medio Trichomonas.
. Caldo Streptococos.
. Mueller Hinton tubos.
. Placas pequeñas telurito y Muller hinton
. Caldo Selenito F
Medios oara baterías bioouímicas:

. Agar Citrato Simonds
. AgAT TSI
. AgAr LIA
. Agar MIO
. Sabouraud dextrosa (flujos vaginales y hongos)
. Agar Bilis Esculina
. Agar base urea
. NaCL 8olo
. King A
. King B
. Cetrimida
. Mueller Hinton tubo
. Suero fisiológico 0,9o/o
. Medio movilidad
. Medio FLN
. Caldo CMC caldo Manita coagulasa
. Buffer IFI
Procedimiento:
mechero.
La persona encargada del procedimiento debe usar mascarilla, gafas

protectoras, pechera plástica, guantes. Además, debe trabajar con las
puertas cerradas y sin circulación de gente.
Para pesar el agar: Poner un matraz limpio sobre la balanza analítica y llevar
la balanza a cero.
Pesar la cantidad de agar necesaria de acuerdo al volumen que se desea

preparar.
Agregarlo al matraz con una espátula. Si sobra agar en la espátula no

devolverlo al frasco original, se debe desechar para evitar contaminaciones.
La cantidad a pesar se obtiene porque en cada frasco viene indicada la

cantidad a pesar para obtener una cantidad determinada de medio (por
ejemplo, dirá: para 100 mL de agar disuelva 59 de polvo). Luego se realiza
un cálculo simple de proporciones para obtener la variable que se necesita,
es decir la cantidad a pesar.
Una vez hecho el cálculo, si se usan siempre los mismos pesajes, es

recomendable mantenerlos registrados para no hacerlos de nuevo, a menos
que se cambie la marca de agar.
Proced¡mientos Técn icas Microbiología Página 11

) Agregar agua destilada y disolver el polvo moviendo c¡rcularmente el matraz.
) Poner el matraz en la autoclave a 1210 C por 15 minutos.
> Una vez esterilizado el agar distribuirlo en las placas.
) Cuando ya se ha vaciado el agar en las placas, se dejan en el mesón de la

sala de medios en reposo, hasta que el agar solldifique.
F Las placas pueden guardarse en refr¡gerac¡ón (Bo + 20 C) hasta su utilización.

Se debe cuidar de que las placas no queden al revés, ni inclinadas.
> Las preparac¡ones de medios se realizan de acuerdo al stock disponible y los

reg¡stros de estas preparaciones deben quedar consignados en una ficha o
libro de registro para preparación de medios.
) Los caldos y agares en tubos deben distribuirse en 3cc por c/u tapar con
algodón hidrófobo, autoclavar y los que son tendidos dejar una aureola de
1.5cms de inclinaclón en su superficie.
8. 1O. Procedimientos cultivos:
Desarrollo:
Muestras sólo con Urocultivo:
) Realizar el Procedlm¡ento general de siembra.
) Chequear el nombre de la muestra con la orden de trabajo.
} Identificar las placas de 1/z Agar sangre y Agar Mc Conkey o (Combi Plate).
) Esterilizar el asa calibrada en la llama azul del mechero y enfriarla en el borde

de la tapa de la placa.
F Introducir el asa calibrada en la muestra.
) Sembrar la placa y taparla de inmed¡ato.
) Incubar las placas en estufa de cult¡vo a 35o C por 24 horas.
) Después de la incubación realizar la identificación correspondiente en las

placas en las que hubo desarrollo.
F (media placa de agar sangre y media placa agar Mc Conkey en una sola placa
desechable)

SERVIEÍOEAIÜDTYSEN
HOSPITAL REGTONAL COYHAIQUE
Realizar baterías bioquímicas a las cepas que sean bacilos Gram (-) :
posteriormente batería de Enterococcos.
coagulasa.
prueba de Novobiocina (St. saprophyticus).
8.11. Urocultivo:
ASA CALIBRADA (1 pL)
AGAR SANGRE + AGAR

MAC CONKEY O AGAR
COMBI PLATE

8.12. Coprocult¡vo pr¡mar¡o:
DEPOSICION
AGAR MAC CONKEY

AGAR XLD
CALDO SELENITO
AGAR SS
AGAR TCBS
350 C, 24 HRS
COLONIAS SOSPECHOSAS
SALMONELI,A SP YERSINIA SP,
SHIGELLA SP
E,COLI SORBITOL
fSI, LIA, MIO, CITRATO,UREA
SEROLOGIA PARA SHIGELLA

SALMONELLA
350 C, 24 HRS Leer en tablas AD-HOC

INFORI\¡AR
ENVIAR ISP
Procedimientos Técn cas Microbiologia Página 14

I
8.13. VIBRIO COLERA:

=
MEDIO DE TRANSPORTE (CARY BLAIR)
INCUBACION 45
HORAS A 35O C
360 C 24 HRS
BATERIA
TSt --'l
LrA f- onoruosrrco
MIO ) PRESUNTIVO

HOSP¡TAL REGIONAL COYHAIQUE
8,14. Exoectoración:
AGAR SANGRE CORDERO 5%
AGAR CHOCOLATE
AGAR MAC CONKEY
35o C,24 H
35o C,24 H
* EN ATMOSFERA 5olo CO2
Procedimientos Técnicas M¡crobiología Pág¡na 16

I
8. -
15. Hemocultivo automatizado:
=
ALARMA EQUIPO
SEMBRAR EN:
AGAR SANGRE DE
CORDERO 5%
AGAR CHOCOLATE -
AGAR MC CONKEY
SI TIENE MENOS DE 5
DIAS SE REINGRESA
AL EOUIPO

8.16, Cultivo automatizado de líouidos:
LIQUIDO ARTICULAR, PLEURAL Y

ASCtTtCO
FRASCO DE
HEMOCULTICO + 1 TUBO
ESTERIL PARA GRA¡'
SEMBRAR EN:
AGAR SANGRE DE
CORDERO 5%
AGAR CHOCOLATE '

AGAR MAC CONKEY
35o C, 24 HRS
REINCUBAR
35O C HASTA
72 HRS
NEGATIVO
INFORIVIAR
Procedimientos Técnicas Microbiología Paqrna Ió

I-
a.L7. Secreción farínqea:
AGAR SANGRE DE CORDERO 5%
AGAR CHOCOLATE
NEGATIVO O FLORA HABITUAL
35o C hasta 72
ANTIBIOGRAMA
NEGATIVO O FLORA HABITUAL
Procedi mientos Técnicas M icrobiología Página 19

8.18. Secreción de heridas profundas v absceso:
AGAR SANGRE DE CORDERO 5olo
AGAR CHOCOLATE"
AGAR MAC CONKEY
xEN ATMOSFERA 5olo CO2
Procedimientos Técn¡cas I\4icrob¡ología Página 20

-
8.19. Heridas suoerficiales v piel:
SECRECION DE HERIDAS SUPEFICIALES Y PIEL

AGAR MAC CONKEY
35o C, 24 HRS
RETNCUBAR 35O
HASTA 72 HRS
NEGATIVO
INFORMAR
INFORMAR
Procedimientos Técn icas M icrobiología Página 21

8.20. Secreción nasal:
AGAR CHOCOLATE.
35o C, 24 HRS
REINCUBAR
HASTA 72 H
NEGATIVO O FLORA
HABITUAL
INFORMAR

HOSPTTAL REGTONAL COYHAIQUE
8.21. Secreción uretral:
SIEMBRA DIRECTA EN THAYER MARTIN

AGAR THAYER MARTIN
(secúru DIAGNoslco)
35o C, 24 HRS
REINCUBAR 360
PRUEBAS BIOQUIMICAS GRAM
HASTA 72 HRS COLONIAS OXIDASA, BATERIA
NEISSERIAS -AGAR
CHOCOLATE
NEGATIVO

A.22. Líq u ido cefa lorraq uídeo :
Materiales: placas agar chocolate, placas agar sangre cordero, caldo

tioglicolato, tinción de Gram.
Muestra:
obtienen 3 tubos, dejando el 20 para cultivos, ya que así se reduce la

probabilidad de recuperar contaminantes de la piel. El primero se usa para
estudio citoquímico y el tercero para PCR en tiempos real (ISP)
estéril. Lo mínimo de volumen es 1 mL.
Medio de transporte:
Este cultivo debe ser enviado inmediatamente al Laboratorio.

NOTA: Antes y durante el procesamiento la muestra se debe mantener a
temperatura ambiente.
Desarrollo: Centrifugar la muestra a 1500rpm/10 min. antes de sembrar.

pRocEprMrENTo pE cuLTrvo pE LÍqurpo

CEFALORRAQUIDEO
CENTRIFUGAR
SEDIMENTO
TINCION DE
GRAM
PRESENCIA DE LEUCOCITOS Y/O SIEMBRA EN:

BACTERIAS
. CALDO TIOGLICOLATO
o AGARSANGRE CORDERO
INFORME
INMEDIATO o AGARCHOCOLATE, ATM 5%
co2
GUARDAR 3ER
TUBO (rSP)
INCUBARA 35O, 18 - 24 HORAS
a INFORMES: NEGATIVO A LAS 72 HORAS.

a INFORME POSITIVO: EL LABORATORIO ENTREGARA UN PREINFORME
Y EL INFORME FINAL 48- 72 HORAS DE HABER SIDO INFORMADO COMO
POSITIVO.
Procedimientos Técn¡cas M icrobiología Página 25

8. 23. ga!étcI-c-Ed.oveÍr.gsg:
Al nivel de la punta de catéter es donde se produce la colonización bacter¡ana,
que con posterioridad podría dar origen a una bacteriemia continua que puede
llevar a la generación de varios focos ¡nfecciosos, s¡ no se ret¡ra el catéter con
prontitud. De allí que la punta del catéter tiene gran impoftanc¡a tanto en la
patogen¡a como en el diagnóstico de la sepsis por catéter.
Materiales: placas agar sangre 5olo, pinzas flameadas en la llama del mechero.
Muestra:3 cm de la punta del catéter.
Ilg-EspgÉg: Placa Petri o tubo de boca ancha estéril. Transporte en un plazo no

mayor a 2 horas al Laboratorio. No se deben procesar puntas de catéter
que vengan en caldo de cultivo.
Indicaciones:
Pac¡entes con catéter venoso central que presente fiebre > 38o C sin foco
infeccioso aparente que la explique.
Signos de infección a nivel de la herida cutánea donde se insefta el catéter.
DESARROLLO:
Técnica sem¡cuant¡tat¡va de Mak¡:
> Colocar la punta del catéter sobre la superficie de una placa de agar sangre
de cordero 5olo, de 10 cm de diámetro.
F Con una pinza flameada en mechero, hacer rodar la punta del catéter hacia
delante y hacia atrás, a lo menos 4 veces.
> Incubar la placa por 24 horas a 35o.
> Observar el desarrollo de colonias en la superficie de la placa y aplicar las

pruebas bioquímicas según corresponda.
Interoretación de los resultados:

! Si en la placa se desarrollan menos de 15 colonias (< 15 UFC): se interpreta
como una contaminación del catéter al momento de retirarlo.
) Si en la placa se desarrolla un número lgual o superior a 15 colon¡as ( > 15

UFC): se interpreta presuntivamente como una "infección" del catéter, la cual
puede ser la causa de la fiebre del enfermo.
Procedim¡entos Técnicas Microbiología Página 26

Cultivo de catéter endovenoso
PUNTA DEL CATETER 3 CM
SEMBRAR EN AGAR SANGRE 5 %

(RODAR 4 VECES)
INCUBAR 24 HRS A 35O C
NEGATIVO < 15 UFC POSITIVO > I5 UFC
Proced¡m¡entos Técnicas M icrobiología Página 27

8.24. V¡o¡lancia de Enterococcus resistentes a Vancomicina

Se debe mantener la vigllancia, tanto a n¡vel de laborator¡o como epidemiológica
de cepas de Enterococcus resistentes a vancomicina. Esto se hace necesario
debido a la aparición de cepas de Enterococcus de alta y mediana resistencia a
los antimicrobianos y a su aislamiento en endocarditis infecc¡osa, bacteriemias
e infecciones ¡ntrahosp¡ta la rias, asociados a procedimientos como instalación de
catéteres vasculares, urinar¡os y neuroquirúrgicos.
E!e-r!a!Cg: Placas agar VRE (Gelose Chrom : ID -VRE),
Muestra: Hisopado rectal de pacientes críticos (UTI, UCI)

Transporte: Tórula rectal en medio de transporte Cary Blair.
Desarrollo:
> En un tubo de Caldo Columbia colocar disco de vancomicina e introducir la
tórula con la muestra y agitar vigorosamente.
> Luego elim¡nar la tórula y cultivar en la estufa a 35a C por 24 horas.
) A las 24 horas sembrar con asa en placa con agar VRE, cultivar por 24 horas,
si no hubo desarrollo esperar 24 horas más para informar.
> En caso de desarrollo se procede a la identificación de especie de

Enterococcus.
Realizar el estudio de susceptlbilidad mediante el método de difusión en agar

y epsilometria en el caso de la Vancomicina.
En caso de aislamiento de una cepa resistente o medianamente resistente a

Vancomicina, enviar al ISP para su estudio, solo en el caso de muestras
clínicas, no en muestras de vigilancia.
Procedimientos Técnicas Microb¡ología Página 28

-
Vigilancia de Enterococcus resistentes a Vancomicina
HISOPADO RECTAL
CALDO COLUMBIA + DISCO DE VANCOMICINA
24 HORAS A 35aC
AGAR CHROM AGAR PARA ENTEROCOS RESISTENTE A
VANCOMOCINA.
24 HORAS A 35AC
IDENTIFICACION POR COLOR + PYR
ANTIBIOGRAMA EN DIFUSION M, HINTON
REALIZAR
CEPAS DE SUSCEPTIBILIDAD INTERMEDIA Y RESISTENCIA A

VANCOMICINA
INFORMAR AL SERVICIO Y A IAAS
ENVIAR CEPAS RESISTENTES DE

MUESTMS CLINICAS A ISP CONFIRMAR
- Realizar Vancomicina por Epsilometria (E test )

8.25. Procedimiento de aspirado traqueal cuantitativo IATC):
Mac Conkey).
de Chocolate.
Sabourea ud. y / Cromocandida
Informe
Cultivo aerobio: identificación de cada bacteria con recuento en UFC/mL y
sensibilidad en 48 a 72 horas.
Cultivo h : hasta 14 días (solo si se solicita
Recuentos 3 706 UFC/mL se asocian a neumonía y permiten respaldar el uso

de antibióticos ajustando el esquema ún los m nismos aislados.
Recuentos < 103 menor babilidad de neumonía.
nacriteriodel9rupotratantelasuspensiónde
antibióticos.

PROCEDIMIENTO DE ASPIRADO TRAQUEAL CUANTITATIVO (ATC):
INTRODUCIR PERLAS DE VIDIO A

LA MUESTM PARA HOMOGENIZAR
AGITAR EN VOLTEX
SEMBRAR ENAS+ACHO+MC
INFORMAR RECUENTO
IDENTIFICACION Y
SENSIBILIDAD
MICROBIANA
INFORMAR

8.26. Procedim¡ento de identificación v susceptibiladad automatizado.
Antes de comenzar a trabajar con el s¡stema automatizado de V¡tek se debe

controlar el densicheck para la realización de MacFarland con los controles que
vienen incluidos.
a) GRAM POSITIVO
Desarrollo bacteriano en placa primaria
En tubo Khan esteril colocar 3ml de

suero fi siológico 0,45oA
Realizar MacFa¡land Tubo 1 0.5-0.62
IDENTIFICACION SUSCEPTIBILIDAD
Colocar tubo de Khan con 3 ml de suero

Colocar en
g rad ¡lla y agregar
fisiológico a|0.45% en la siguiente posición
tarjeta GP580 de la gradilla Tubo 2
SUSCEPTIBILIDAD
Dispensar desde el tubo 1 con pipeta de

280 ul gram positivo al tubo 2
Agregar tarjeta A5T680
INGRESAR GMDILLA EN LA PUERTA NA1 PARA INICIAR LLENADO

AL FINALIZAR LLENADO COLOCAR EN LA PUERTA NA2
ASOCIAR TAR]ETAS EN EL PC MIENTMS NO SE CUENTE CON SISTEMA INFORMATICO.

b) GRAM NEGATIVO
TINCION I)IJ GRAM
En tubo Khan esteril colocar 3ml

de suero fisiológico 0.45%
Realizar MacFarland Tubo 1 0.5 - 0.62 SUSCEPTIBILIDAD

IDENTIFICACION SUSCEPTIBILIDAD GN
Colocar tubo de Khan con 3 ml de suero fisiológico al

0.4504 en la siguiente posición de la gradilla Tubo 2

145 ul gram negativo al tubo 2
Agregar tarjeta AST250 urocultivo

Agregar tarjeta AST249 otro tipo de
muestra
INGRESAR GRADILLA EN LA PUERTA NA1 LLENADOPARA INICIAR

AL FINALIZAR LLENADO COLOCAR EN NA2 LA PUERTA
ASOCIAR TARJETAS EN EL PC MIENTRAS NO SE CUENTE CON SISTEMA INFORMATICO.

Desarrollo levadura en placa primaria
TINCION DE GRAM
En tubo Khan esteril colocar 3ml

de suero fisiológico 0,45o/o
Realizar MacFarland Tubo 1
1.8 -2.2
IDENTIFICACION SUSCEPTIBILIDAD
Colocar rubo de Khan con 3 ml de suero

Colocar en gradilla y
fisiológico al0.45oA en la siguiente
agregar tarjeta YST
posición de la gradilla Tubo 2

280 ul gram positivo al tubo 2
Agregar tarj eta ASTYSOS
INGRESAR GRADILLA EN LA PUERTA NAl PARA INICIAR LLENADO

AL FINALIZAR LLENADO COLOCAR EN LA PUERTA NA2
ASOCIAR TARJETAS EN EL PC MIENTRAS NO SE CUENTE CON SISTEMA INFORMATICO.

-
8.27 . P r ocedtmiento técnica C LOST RI D I U M D I F FIC I L E :
Materiales:
Procedimiento detección de técnica Inmunocromatográfica oara

TOXINA A, TOXINA B Y TOXINA A/B
MEZCLAR BTEN Y DEJAR REPOSAR

TUBO 2
100 ML DEL TUBO 1 (pipeta del kit)

5 GOTAS conjugado 1
5 GOTAS conjugado 2
COLOCAR 2OO ML EN EL
POCILLO DEL DISPOSITIVO
DE AMLISIS
ESPERAR 20 MINUTOS Y LEER
INFORMAR A:
. SERVICIO PROCEDENCIA ENVIAR MUESTRA A ISP

- JEFE LABORATORIO PARA CONFIRMACION
- IAAS ( sólo en brotes)
- EPID.AUTORIDAD SANITARIA
- EPID. IAAS HRC

8.28. Procedimiento oara virus respiratorios:
CENTRIFUGAR A 1500 am POR l0

MINUTOS A 4'C
FIJAR CON ACETONA
TEñrR EL FRors 1 (ScREENTNG)
INCUBAR 15 MNUTOS A 37'C
LAVAR 2 VECES CON PBS POR 3

MINUTOS A T AMBIENTE
SECAR A T" AMBIENTE
LEER EN [¡ICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA
IDENTIFICAR DEL AGENTE VIRAL REPITIENDO LOS PASOSDE

TINCION HASTE LECTUM EN LAS LAMINAS 2 A LA 4
É.
TIPIFICACION DE INFLUENZA A
E ó B AL ISP. ENVIANDO ANF EN
É.
o
IL
I\4EDIO TRANSPORTE VIRAL
z
DISTRIBUCION INFORME DE RESULTADOS
SERVICIO DEMANDANTE
JEFE LABOMTORIO
IAAS
EPIDEMIOLOGIA AUTORIDAD SANITARIA

ry
8.29. P¡ ocedimiento oa¡a M v co p! a s m a o n e u m o n ia e :
REALIZAR EL ENZI¡/lOINMUNOENSAYO EN
TARJETA DE REACCION
AGREGAR 2 GOTAS DE SUERO

EN PUERTOS INFERIORES
AGREGAR 2 GOTAS DE SUERO

EN PUERTOS INFERIORES
AGREGAR 3 GOTAS DE WASH

BUFFER EN PUERTOS SUPERIORES
INCUBAR 5 MINUTOS
POSITIVO NEGATIVO
DISTRIBUCION INFORME DE RESULTADOS
SERVICIO DEMANDANTE
JEFE LABOMTORIO
IAAS
EP¡DEMIOLOGIA AUTOR¡DAD SANITARIA (SI, MARco AcUÑA)

SERV
HOSPTTAL REGTONAL COYHATQUE
8.3O. FILM ARRAY:
Las muestras de hisopado nasofaríngeo para panel respiratorio serán procesadas

en Gabinete de Bioseguridad tipo lI B2-4b1.
rápida dnl FilmAnay* §espiratory Panel

APe.* nvitar fa coriian r'ñtcróñ f ün§ psnl§rra de profescióñ.
Pso t: Pruparaclón del c¡rtucho

a ,nsefie ei üÉrludrc en ls psuctl LoádlfiS Siatiefi (E3ládl6ñ de *ár§a di *snutils)-
A Co{§qüe el SarflÉ}e t*jec§on vi§¡ {Vi¿l dé inyéeciú§ de ñu€§trs} Érr el dÉpü6rtü de tolor tr\ tl
3 CdsE{¡É et ["{'{drst
*¿ui.
Paso 2: Hldratación del cartucho

3Oesenrosquelatapaclel t:,.'..' ';n ''': "''"I. .dejela
tep8 en ls Potj*¡ Loadrn §l¿tio* liii:::i:;''::1 ''t* i:irít:l:i ilr i:.iir'1ili::-:i.\ ¡, e ifi§arte ** Flsl e* §l
:. .,Y "i. 1.1ri tl il, r'; '... : t . .r .
3 Empqie |ecra ¿¡s¡6 con frcüe hagtÉ tomper el sello.

ü §§pea€ ha§rá qüá lt §:i'.'':'il:,. .¡ :rf i ' . .. .j:: ; 'liiiii:1" r::r: *e intr'{}dutea err el irster¡ql'
sd csrtucfio
P*ao t: Pruperaclón de la m*r*la d6 mustüa

O :lnmpore d §ffiAb Bulhr §8rnpón para rm#rsl d Se,n$e lÍ*ettt§n
Vial {Vblde lnye¡cién de ñxresfB}.
.lñvierta la amsdh dd San¡b tuGr {Tantpón pstE n!l#rá¡
de m§r]eñgue tá F}ntt rñke ha& aniba. /\
p¡fih dera 8#{c6trá- f/
llfoc¡l ñfo toque /a t1
7r'
, AffEb ñffnemeflh b leflqoeia de Sáetics ro4? fellet e efl e¡ lstaal dÉ h
ampdla hasta que e mnpa el se§o. .t;ú' "F
gufrÉr
. Cdl la prila mfando heia áhqio" di§P€ñed
{Tarryüñ ptrá mue#) en el §ár¡}p{e }il;e*ti§n V}al qvi$ d* l*ye*c**n
§§rpb
*O
de sxreEtral afreca¡do lemtaméñle pero wt i.erza y. a cfltlñndón,
nrdrrs s ápretsr- Ev&e gerrerar Úemas¡dñ hÍbu,§§.
rill
*-i&l
ü [rü§z6rÉD la Trán*kr HpeltÉ {Ffpetr de traneHencia}, e{$d$§ tá l!}ue*irá \ ?
\,
eb fr
h*tÉ ¡6 Efirér5 lirrea.
i¡ Aña& lÉ rf}uesh 6l Sámde lrgecriüÉ Uiá, {Viál d* iry€eiúfi de tftresra}-
A Ciene bbn lá tap€ def Satñple lnlÉc{i§n $i§l (Yiat ÚÉ lnveccó* de mué§trái-
A hrezeté ,a rilueslfE iNnyirüe*do $}sverne{lte el §aft#s inie*lisr1 \fist ivial de
iflyeccifu d€ rB$estr8i 3 r€Des.
ü Vuehá t perler ¿l Ssmp{e lniie*tlán vtát {\'isl de }nyecüi*n de {11uÉ§$á} én $
*Ép,)§ltrl l* colllr f ü?É de t¿ Por.¡eh Lsadr.lg Státioñ {Eclatién d* ¿áqa de ráüurñ*§}.
A ¡Ovartenci¡i g, Ssñpr§ Surfüf ffbtrrpón pár§ ntüe§l¡"€J os p*tlgroso si 3s ingiúrú,

pu*ob prodücrr d§ño§ ócúrarÉ§ §r€v§§ § Jrrita§ió¡t eütdats.
Paso 4: Carga de la meecla d€ mueská

ll üe*c*rosquell §ür§sle tnl*ctiü,ü \§i§l iuiül d* tnya*ctén d* rilué§lYalde tfl &pa"
Jl E§p§rÉ de 3-§ §eg$ñdcls y, a CmtÍlruarión. qüile éÍ SefflpIe !*j**ija* Vlsi i1,'lnl d* illygrcr$n
S* nu¡e*km!. déjsrlds b §pa en l* Poucl¡ LosdiñS §ta$sn {ñ trolún Üe cargl de cafiudrtos}
n ln§erE e| §emÉ¡* !fijectl6n \¡,*l {Vi6} de i*yeeeiér't Ue nnue§tr'áJ€ü! el p&ertú *e ff*ú€ssá de}
córt$cho.
f, Err!§Lge h#ü ába¡§ coñ ñ,e{xa h§t6 rü*Ser Él üdlo'
f eEfurc*sxta ql,rcla Meeela de r*§§tstr& §§ h$$t}!§e eñ €f irteflsr d*l tsrl§§il§'
Fa¡s 5: Prusba delcartuchq

r §igs las ifsstr!rcülofÉ3 que §e ffirÉ§ráfi e$ d ofdefl6ffi p€fá inrctár u*a prueba
Proced¡mientos Técn icas M icrobiología Página 38

del Gastraintestinatr PaneX

Para evitur la conlaminacián y una pantalla &Fr?feceión.
Paao f : Fr*pare la bolaa f

lr§erte la bslsa eñ [a Poüsh Loadir¡g Statffr (Estaciün de §argá de bolsasi, §§¡\
-
: ffi*;i-;;;i'*-""';:i:.J',..;#:::-."*,d*Fá§¡'l;ds
Paso 2: Hldratp la bolea
qffi p
- üesenrosque la tapa de! '
. :: i ivr¿il de rnyección {te hÉfalac¡ón)
rJeje lá tEpa en la tr*ucji1 Loarl¡ng §1álion lEstacióñ de carsa d€ tloS§asl. e iñserle -h§Ofh
R
;',,ffj,:H:ffi::.""l,::'fifi',:¡jxf,uo,*.0*.n,=,,o.**
bsiss.
{Soluttéfi ds hidrat¿cióni se rntr*duzcé en ei rñleriilr de la
&a
\§!ñf
Paao 3: Prepare la mezcla do mueetra

Agregue el Sampje Bu$er (TamÉn de mueslrai efl e¡ Sample lñj€ct{oñ VHI
-
{V¡al de in}¡ecciün de mueslra}:
,*m;im§sai$*áur*.rrampú,desruestralde manersquebpür,*a
,htt.'^Je tog¿je Je punfa de, frasco-

ffi- Ñ
"tx:sffi;§[*o*dep*sr*oconresoueene*akrd &rrras§*]ras* :-
. Con la
Wñta mirsr¡do feía abaF, intsdl!&a el Sxrgfe Buñer {Tarpóí de n}.esfa} ,1)
¿A*
h-
, ffiffilffiry {2/W =-
]s
*
:ffi[:j"##-ffiffi;,x,j**^-*fB'
-
tlti{i¡ande h Trsssfer Pipstte {PipÉta de trársferan$ie}, éxtraigá }á
Cierre bien la tapa del $ample lnlecl¡on Viat (Vnl de tnyec$n de m{.estrai.
muesf* hasta ,* ál
_.**\- w
-
- Me¿tte la mumha inürti,erdo suayefilenle el Sarnple lnte{áron Vul {Mal de t{t }r
m#m',§,ffiffir.:$,1{i[?ffi tr rffi' fJ s,*fu] =N>
/ldv*rtar¡ci¡r El Samplo 3utrer ffanpón d* rnue*trra] e¡ dsii*o *i ¡o ing*e*e,

p$§dq §rscsr sfrvsr d¡ñss en loa {oe y,§ irritació*r de la picl,
Paao {: Gargue fa rnszcla dG muaslra

Oesenrosque ei §*npte lflJectrófi Yral {Vial de ¡nyecc¡ón de muestráJ de tatátpa.
- Pare por 3-5 segundos y, a continuacún. qurte el §ample ln¡ecirsn Vt¿l (V¡ál de
- ilryscsiún de mi-§stra), d*lando fa tapa en ia Pouch Load¡ñ§ .Staiiofl (Eslscidn de
ffirsa de bo,sasi.
* lnserte ef §sniÉt* ;nlscti*n L¿ta¡ {Vt¿l de inyección de mueska) en el ruaÉs de
in*Bslr§ de 1¡ *{}i§a-
* Ernpule hacra abaio con fuerza hasta ro{nper d sdlo.
Espere hssta que la Mezcia de muestfa §* ¡ntrodrirca en *l inter(}l Cü la halsa-
-
Pa*o §: An¡llce b boka
-* §qa hi*fucciores qüe ss nE Bsfan e*el ordenads para iniciaruna prt.§ba.
Ssnará un clic cr¡ando la bolsa eslé coredamente inserhda en sr¡ sitio.
A,nÉt- S] ls §n¿sa no sf lhscda coo fasitidat. fs-egqrGqf .#p.S{e*1§ üapa e6fá ¡or.É Leá
rápida del FilmArrfiye B[ooü tulturc ldsntification knel

A ¿ss ptr¡*¡¿s r6árl:§dr§ ,r?éd¡snfe FrilrrÁrray deüarda fiev¡r¡e ¡
czbo sn ta§8 ñafias postür${rrss ¡ rrflc ,Gctufia pos¡ffa
prEc6dn rtc do ün ifiSft/,fl'ÉrrtB dG ,rorrloculiyo co¡n vigilancla cantinuada.
A parp err¡far ra eE rüamr{rer¡-én, ql¡7&a jqgnp¡e{t{EnfEg y uns panfafs da prcfsccfóa.
Paso l: Prsparác¡ún det cártucho

il lrserle el carlucl¡c en h Posch l-o{ding §tal}on iEstación de carga det cartuei"ro).
3 C@ue el §am$e ln¡ection VIsl |\/iat de irryeccidál d€ muÉ§{rÉ)efl el rccistñ roio.
I Cohqus el i 1.,'i',i',:!r en el
Fr¡o 2: Hiüratac¡ón dsl cártucho

O Oesenrwquelatapadel i',,*rdtrrtfllrJr:rc:.r 1.;,: ;.,,}l C+ 'vi-{cr,;',.J,rf,dr.t.t,ji-:.;,deielabpa
en la Pql{f¡ Loading $htis{r {Estseiún Se €196 def 6rirsl10} e iilsgrte el?Él en d !u*":i **
:J Empuje hacia abatio cü.! ü¡erza §a*ta rünper el se*lo.

Ü Espere hasta que b lr,, , -:
- rt ' ,, .
l::,i'3i.. :. Se introduzc€ en el mterior
del cartr.,cho.

Prca 3: Prep*r*ciún dc la ma¡*la de mu*Etra

ü
dÉ \L#aq
trrrorpore §, §am$e Bcftr ffamp$tt para muestra] al Satrple lnleat{oñ
llral (Vral de inyeüüi*n de r'*u€§lra).
. tnr¡iryla la arsolla dÉI §anf,c Euñer (Ternpón párá rfiilestra]
€lEr}afiera $E la punta mire fffiá arib€.
!-
,*ot : i\rc fo$¡* e p{§{a dü la anp6rla"
@
. Apr¡€üs ürmemente h terg$eta de $ást¡oo qon relle\re er el lát§ral de Ia
arn@ia ha*
gL€ §e rqnpa el selb- f"-->* .€
. C§l §a punta rnirandn frrcia abajr, d*spe*se el §arnde Bufter gsrflp$'t
pra rucstsalen el §affIple fnjectian V¡al {v¡al de inyecciÓn úe r0ue§lra}
ryeiar?do lentamEnte pero *on fuerza y. € §ontifisac¡óñ, \ÁJ€lva a apretar.
Edte gienern demaiadas fi,urbuias.
lJ Llse rxra jeirqa para e<kaer O,I ml de muesba del trá§co de hernoürlf¡!¡o.
:l ,§fhda la lrluesfa *l §smpte lnie*li*m Víal {Vial d§ ,inyeffii*fi de m{¡§strñ}"
x3
\ i
&
,J Ciene !*en h t4a dd §trn$e lniec*ion Mal {Viat de inyeeiún de rni.testra} i
ü f,teEcts h nf,¡e*ra lffi¡rlierÉo suB\€rente el Sa¡*$e lnlecliún Vld (Viai de ?-

lr¡yecci*n de nlr¡.'§trai 3 Yee§,
ü Vuehraá porEr d §annpte tnlection Vial {Vta¡ de i$}ecciÓrt de müe§lra'¡ en el
poci§s rqo de ta Poush Loading $tetlon {Est;aciún de ca.ga {hl ffirtu$o}.
luqf¡: CaÍsuüe en e/ lbrbl" un §uia 6e lrabaio alten ativo.

Á **nnm*¡a.' §I §eatp& ffampó* para rlr{rss&t, *s pt*igro*o rl
Grrlfar
se fngferx, pneda ü?úuctr d*ñas ocrrarBf gnn¡sc e fnfEclÓn curún#,
Peao 4: Cárgñ (le Ie rü¡sacta do muestr8

.l DesenrosquE el Sampie lnlecuon V¡al f\*a§ de iliye,:c,cln {l€ mtuestra} de la táp€
if Espere de 3 a 5 segürldss y. a continuasión" q¡,,itÉ e| §*§:§te tft!e{1]*r} V{ál t\r'¡at de ifly{}ü{i*fl d*
*ujei+tr¿). dsacdo ü tapa de tÉ Fq'r}cfi t-ead&m§ .§tst¡4§} {Estsi}üón da cársá de{ cártücho).
U Irgirt* et-S*i"rpte §niertren $¡ál {\f,ial de .r'ry*c,r$ó$ de sr*éslra} ¿n et p,^Jertó de rnilestra d¡*l ñsrtuüh§
§ ÉmFr:§ hxia abai* con fu*rza ha§ta r§mper el sella"
ü Espers §aste que [§ §n.§e{*§ S§:ü}uestrÉ §e inird}§uzt§ §n el i¡1t§ra€r de¡ §ar§lcho^
PBso §,: Pruoba dsl cartücho

ff Sisa las instfljcc¡ones q{re s€ rnuastran en e| ordenador pará in¡ciar un8 p'rueba"
ü Sonará $n elic cuando el eártLlshü esié óorrectamente in§ertado sn §¡J §ilio-
,liofü"- §, *I sar*rc.hs r¡* ss ln§erüB ,ren faci*dad,
F¡,E eviferf¡ conternjr¡ción, ytt"-?"ice $.,1"€"ff.r.*feguer?.f."€""* y una pantalla de protecüiór-
Paso {: Prcparaclónpsffih
dslcartucho
* d cam*clm e* t€
lnoe¡ie Ls#¡nq §l$hñ {E§tac¡}ñ ds tsrgs de *arttudlÉ§}"
* Coloque el §áffiplÉ lnjee{i*ñ Vial {Vtal de inyecciÓñ dÉ ir¡uñ§trá} ef! e}
pftslll,* rúlt¡.
* ü§lilqte el -iiL:,i¡t,+;i :-,,r1'r.:i!ílr; :;'."ti tViei de i§lye{leiéfl de h;drál§¿t&nl *$ el
Faeo §: Hldratac§ón dal corlucho

* Desesrosqr¡§ is lat!ü del ii'/¿,¡titli¿rri :iri.iúl¡+,lr ,ili:t {Vid d* i&?effi*§n de fiidra§t$tt}'
deie Ir táp¡ er! lá P§lth l-essins §iáiion {Estácis{1 de Ésrqá c}* §ártutfiás} e !ñ§ert§
el uial €n d Fi-t{?li|, I* it *i$:i¡ttrf i! tJ$r ,...r]'iLili.;l !J"
É§ttr¡6* fBde übstry Éft1 ñl§te t!á§Xff roffiB 8l seh y ery*re tuSa ry.É l§ h'rrái::tn:rl
- §r-.*tr¡i", {§Qh}§dn de nid¡d§tllft} §t i¡Íroeh¿* en el inter*]f dd *artilÉh§.
Proced i mientos Técn icas M icrobiología Página 40

SERVIEIOSTIT'DTYSEN
Fa*o 3: Prcpamclón da la msrcla de rnuesüra il

-,ffi,ffiW"W*-,gf::;'_"*i¿sarnp*rnie'ct!ünviár
. l$viÉrtá la *rnpoüa dd §arxpb B{rtf,ér (TÉmpóñ páró rñúeÉtrÉ} de máñerá L7 #" +>
fÑ.
U x
'ffi
erpo$Ja. 1?*
'"
Jlfoüi;- iro láE¿rÉ rÉ prlot€ de le
demáÉladás furtu¡as
*- ff';ffifütÜi#Ii,p.*
Hffiffi§IffilffitJlffir.fif.f(prpe*r aé transferenc¡a¡, extratsá E
línea.
dé ligur& cetaÍonaquídeo {LCR) hásta ta 3ágündá i?,1;extrarsáEmuestra
{^-@
muestra
ffi,§l;,_ffi 'r;tFl
f á|
)t x¡
=ffi
- Afi#§ [a rnuesira al §ampte tnie*tl*n Viát {y¡d de.íny*ecióIl.dernuestra}.
- §.ffJ.,ffiHJ::',rf*tm,#1rfi:i?ffiffi';üTi***ffi
. f-U
d> ]tfu.
-
tümrnn+h: oo ¡cuerdo cdr s¡b, §I scrr6. Bullbr {Tarnper pM mü¡*t¡El il -{§ffiif
.Y
psllgn§3{¡ sl ss lngi*rr; $*tsds prod$dr <hños oeuárnre gr§t sú ylo lfil&i&r c¡¡üm¡. '
Fa*s *: Garga de l¡ nrezcla da muastra

* üesexrosqire s¡ §ar}]ple t§je,:tr*,l V*al {Vial dé iñIeffii§* *r mrre$trit) *é lá t4r,
* Ésper€ de 3 s 5 §egifrdos y. á üüñlinuéóidn" quile el Sarrple lnJectrüil r,4*l {Yral de
lnyeccdfi de *xrsst¡*i. $§iürdo ls tspa en tñ p&}r§x Lofld'ng §t6t¡on (Estación de
carga de cá¡t$chffi).
* hserte el §s,ff.$fe §*ieslisn ?i&l {Viál {re inyecci$ñ de muffks}e$ el p1"¡erlo de
mu*strd d€r (értiri:h*.
Empule hecia aba,ü con fuerza haÉüa ruff¡per el sello y espefe ha§ta que la nruzLla
- {ie ü}rjs§rtrü §e iÍ|fi}dü¿ta eñ ei ¡rterbr dÉl earlucl'¡o,
Paso 5: Anállsis del c¡rtucho

Slga las instrucciones que se mLleslaan en el ordenador para tfliclar una
- ptueha
Proced¡m¡entos Técnicas Microbiolog ía Página 41

sERVICÍOSÁII¡DTYSEN
8.31. Test rápido de detección cualitativa de STREPTOCOCCUS

PñIEUMOñIIAE en muestra de orina
Tomar una muestra de

orina del paciente
Utilizar tubo de ensayo
Añadir 3 gotas de orina del

paciente
tubo de ensayo
I
Añadir una gota de reactivo
al tubo de ensayo
Homogenizar la muestra
Añadir 3 gotas a partir del

tubo en la ventana circular
marcada con la letra S
I
Leer el resultado a los 15
minutos
Procedim¡entos Técnicas M icrobiología Página 42

9. EVALUACTóN:
RESPONSABLE: TM Microbiología.
M ETODOLOGIA:
Tipo de Indicador: Resultado
Método muestreo: Se obtendrá por medio de los registros estandarizados
definidos para hemocultivos.
PERIODICIDAD:
o de la evaluación: Trimestral.
10. INDICADORES:
Nombre del Indicador de pre informes de hemocultivos positivos provenientes de

o/o
UCI adultos con tiempo de respuesta < 2 horas desde que se

detecta muestra positiva con crecimiento bacteriano
Justificación Este indicador evalúa el cumplimiento de los procedimientos

de técnicas microbiológicas y tiempos de respuesta. Este
procedimiento contribuye a optimizar el diagnóstico y
t4ratamiento de pacientes críticos.
Dimensión Calidad
Fórmula No de pre informes de hemocultivos

positivos con tiempos de respuesta S a 2 horas X 100
No total de hemocultivos positivos a
crecimiento bacteriano en la estufa
Población Hemocultivos
Tipo Resultado
Fuente de datos Registros laboratorio clinico
Umbral de >9Oo/o
cumplimiento
Periodicidad Trimestral
Responsable TM laboratorio microbiología / Responsable calidad
laboratorio clínico
Procedimientos Técnicas Microbiología página +:

SERVIEIOSALI'D AYSEN
11. ANEXOS:
ANEXO 1
FORMATO INFORME DE RESULTADO
§ü6n!.!*dftlú
icfitrbB
LÁ§S§ATüfi,|S (Ll f'll{S
lffi§FlTAt *t$l§f'lAh (*YllA iQU;
Prühfls
Rt,T
ftcñrds ilüÉ" Edsl: §€*s: lt. F6drién
ProcrdÉrcL tngrG3§ P*üclin
lhoú. §#tostü Éach¡ hformo
Hnü$O{:OGh
PAI'EBA RE§UTIAOO
i*ry
l&nflsrsúB&¡üilffi 1..h. O¡nanePtewA
ihnE,crdli$o - t&rl*dos ¡hrüo OH8arro$o # §lñ0ñyl§co{{r§ §rsl¡§
§: §ensl§h t: lslsm8di§ B: tss¡§erlti
BQ-Eroesto Ara¡s Mkada T.M. Coo*aza Becetra Femández

Ide de Laborato,rio *ofesional validado¡
F*)ffi 1 d€ 1

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& *tsiir MANUAL DE PROCEDIMIENTOS

Marcelo Lazcano Paulina Arriagada

Procedimientos Técnicas Microbiología Página 1

Proced¡mientos Técnicas Microbiología Página 2

La actividad que desarrolla el laboratorio de microbiología está orientada

Proced imientos Técn icas M icrobiología Página 3

Mater¡ales: Portaobjetos, cubreobjetos, t¡nciones.

Med¡o de transporte: Extendido en poftaobjeto

Sobre la lámina con el extendido de la muestra realizar los siguientes pasos:

PROCEDIMTENTO TECNICO TINCION DE GRAM

CUBRIR CON CRISTAL VIOLETA DURANTE 1 I\¡INUTO

LAVAR CON AGUA CORRIENTE DE FORMA SUAVE

LAVAR CON AGUA CORRIENTE DE FORMA SUAVE

DECOLORAR CON ALCOHOL DURANTE 1O SEGUNDOS

LAVAR CON AGUA CORRIENTE DE FORMA SUAVE

TEÑIR CON SAFRANINA DURANTE 15 SEGUNDOS

LAVAR CON AGUA CORRIENTE DE FORMA SUAVE

DEJAR SECAR A TEIVIPERATURA AMBIENTE

Procedimientos Técn¡cas 14icrobiología Página 4

8.2. Pruebasbioquímicas primarias:

SOSPECHA DE : PRUEBAS BIOOUIMICAS

BACILOS GRAM NEGATIVOS TSI

STREPTOCOCCUS Y.H EMOLITICO

LEVADURAS MEDIO SABOUREAD + GENTAMICINA +

Procedimientos Técnicas M icrobiología Página 5

Desarrollo: Cepas Fast¡d iosas: Sfreptococcu s p neu m o n iae.

! Dejar las placas secar por 5 m¡nutos tapadas.

! Dejar tapado a temperatura ambiente por 5-10 minutos.

> Para los Streptococcus pneumon¡ae el antibiograma se reallza en agar Mueller

8.4. Antibioorama ceoas no fastidiosas:

Materiales: Placas de agar Mueller Hinton, tórulas estériles, pinza de metal,

Muestra: cepas de:

) sembrar con tórula estéril en placa de agar Mueller Hinton, en tres

! Dejar secar Y en reposo 5 m¡nutos.

) Dejar a temperatura ambiente 5-10 m¡nutos, (las placas tapadas)'

Procedimientos Técnicas Microbiología Pág¡na 6

de Staphylococcus deben leerse a las 24 horas (para búsqueda de cepas

clindamicina deben estar juntas a una distancia de 22mm. (test D)

8.5, Procedimiento de siembra:

esterilizar al rojo en el mechero (en la llama azul) y enfriar en la tapa de la

Proced¡mientos Técnicas Microbiología Página 7

verificando los datos del paciente

dar aviso de inmediato a los

con asa de Nicrón. Los urocultivos se siembran con asa calibrada.

8.6. Siembras en placas:

estrías, con el fin de obtener colonias aisladas.

distribuirla en forma de zig-zag, de extremo a extremo, cubriendo

apenas sólo unas estrías. Cerrar la placa y dejar invertida.

Procedimientos Técnicas Microbiología Página B

8.7. Siembra en tubos:

la muestra e inocular el tubo realizando un movimiento en zig-zag en la

Una vez sembrada la muestra tapar e incubar.

después de haber sembrado en la superficie.

Si es en tubos con agar sólido de superficie plana: La muestra se siembra

Si es en tubos de caldo: La muestra se transfiere al caldo, se homogeniza

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agar y luego en forma recta inocular hacia el interior.

Procedim¡entos Técn icas M icrobiología Página 9

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