HISTOLOGIA

HISTO: tejido LOGIA: conocimiento

🡺 Estudia la organización estructural de los organismos mediante el uso de

microscopios.

CIENCIAS QUE SE RELACIONAN

✔ Anatomía microscópica.

✔ Embriología.

✔ Fisiología.

✔ Química.

✔ Biología celular.

NIVELES DE ORGANIZACIÓN

1. Átomos.
2. Moléculas.
3. Macromoléculas.
4. Estructuras subcelulares.
5. Células.
6. Tejidos.
7. Órganos.
8. Aparatos/sistemas.
9. Sistemas.

¿CÓMO SE ESTUDIA?

🡺 Participación histológica o tratamiento previo de células y tejidos.

🡺 Microscopio.

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¿QÚE ES UNA TÉCNICA HISTOLÓGICA?

🡺 Serie de pasos que permiten preparar el tejido para luego ser examinado en el

microscopio. El tejido se prepara de acuerdo al microscopio que se vaya a usar.

🡺 OBJETIVO: preservar la estructura y organización de las células y tejidos.

PASOS
1. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA: se remueve una porción delgada y pequeña de
tejido con una aguja de biopsia. La muestra no debe tener mayor de 3 – 4 mm de
espesor y se obtiene de material humano, el cual puede provenir de 3 fuentes:
- Necropsias: piezas que se obtienen de un cadáver fresco que no tenga ninguna lesión.
- Biopsias: trozos que se obtienen de un sujeto con vida y se estudian en un
microscopio para obtener un diagnóstico histopatológico.
- Piezas operadas: tejidos extraídos de intervenciones quirúrgicas, generalmente de
tumores u órganos inflamados.

2. FIJACIÓN: preserva las características morfológicas y moleculares del tejido lo más

parecido a las que poseía en estado vivo.
- Fijador más común: formol o formalina.
- Solución acuosa de un gas: aldehida formica.

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- En 24 – 48 horas cambia de color a blanco grisáceo.

✔ SECCIÓN MICRÓTOMO:

- Cuya palatina se enfría por debajo de los 0°.

- Los cortes son coloreados.
- Diagnóstico durante un acto quirúrgico.

3. INCLUSIÓN EN PARAFINA: mezcla de hidrocarburos saturados, los cuales se

obtienen a partir de la destilación de petróleo.

✔ PARAFINA: blanca, untuosa, sólida y no se disuelve en agua.

✔ XILOL O BENZOL:

- Se disuelve en alcohol.
- Aclara o transparenta el tejido.
- Facilita que la parafina se penetre en el tejido.

4. CORTE:

✔ MICROTOMO: Mikro (pequeño) tomo (parte, división).

- Es un instrumento de corte que permite obtener rebanadas muy finas de material

(tejido), conocidas como secciones. El corte va a tener un espesor de 8um (micro
centímetros).
- Luego se ponen estas secciones en un portaobjeto y se les coloca encima una capa
albumina o una gelatina.

5. TINCIÓN (Bálsamo de Canadá):

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 ✔ MONTAJE: después de teñir el tejido hay que deshidratarlo nuevamente, para esto,

debe pasar por una serie de alcoholes en grado ascendente. Posteriormente hay que
pasarlo por Xilol, de modo de hacerlo miscible con el medio montaje y se le coloca un
cubreobjetos, tratando de no dejar burbujas.

COLORACIONES UTILIZADAS EN MICROSCOPIA OPTICA

Es la propiedad que tienen los tejidos para fijar e incorporar sustancias coloreadas:

Según su afinidad tisular:

✔ Colorantes básicos: poseen una carga global positiva (catiónicos) y reaccionan con los

componentes aniónicos de las células como la HEMATOXILINA.

✔ Colorantes ácidos: poseen una carga global negativa (aniónicos) y reaccionan con los

componentes catiónicos de las células como la EOSINA.

✔ Colorantes neutros: su carga global es neutra y colorea estructuras juntas o separadas

como el GIEMSA.

✔ Colorantes metacromáticos: colorantes básicos que producen tonos de colores

distintos al que se espera.

✔ Colorantes indiferentes: no poseen carácter ácido, básico o salino definido. Colorean

mediante impregnación.

EOSINA

- Es un colorante ácido (aniónico) y citoplasmático.

- Se une y colorea estructuras catiónicas del citoplasma y la matriz extracelular:

✔ Filamentos citoplasmáticos.

✔ Membranas intracelulares.

✔ Fibras extracelulares.

HEMATOXILINA

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- Es un colorante básico.
- Se une y colorea estructuras aniónicas que tengan fosfatos, sulfatos o carboxilos
ionizados.

ÁCIDO PERYODICO DE SCHIFF

- Identifica macromoléculas con hidratos de carbono:

✔ Membrana basal.

✔ Rojo magenta.

TRICÓMICOS

- Identifica
fibras
colágenas y elásticas.
- Se pueden observar los tejidos de distintos colores.

GIEMSA

- Se emplea en hematología.
- Permite distinguir los gránulos de diferentes leucocitos
polimorfonucleares.
- Contiene mezcla de colorantes catiónicos y aniónicos.

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 IMPREGNACIÓN ARGENTICA

- Identifica fibras reticulares y nerviosas.

- Color: pardo o negro.

ORCEINA

- Identifica fibras elásticas.

- Color: pardo oscuro.

TÉCNICA MICROSCOPICA ELECTRONICA

1. Utilizar fragmentos de menos de 1mm.
2. Proceder rápidamente a la fijación, con tetróxido de osmio, aldehído glutárico o
glutaraldehído.
3. Deshidratación.
4. Utilizar Resina Epoxi: brinda dureza para los cortes finos.
5. Cortar lentamente con ultra micrótomo, cuchillas de vidrio o diamante.
6. Guardar los cortes en agua, luego en una rejilla de cobre cubierta por una película
plástica.
7. Pasar por ácido osmico, acetato de uranilo, sales de plomo, etc.
8. Observar en pantalla fluorescente.
9. Tomar fotografías y ampliaciones.

MICROSCOPIA
El conocimiento de esta estructura se hizo posible en el siglo XVII mediante instrumentos de
magnificación: MICROSCOPIOS.

✔ Lupa: lente convergente de corta distancia focal que da imágenes aumentadas.

✔ Microscopio compuesto: da imágenes invertidas. Tres tipos de lentes: ocular,

objetivo y condensador.

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✔ Campo claro: la muestra se observa más oscura que el campo que la rodea.

A) PARTE OPTICA:
- Ocular.
- Objetivo.
- Sistema de iluminación.

🡺 OCULARES: cilindro hueco metálico con un sistema de lentes convergentes, que

sirven para aumentar la imagen real e invertirla. Están

colocados en la parte superior del tubo, poseen un
aumento de 10x, 15x y 20x.

🡺 OBJETIVO:

- Están colocados en el revolver.

- Un anillo coloreado indica los aumentos.
- Poseen un aumento de 4x, 10x, 40x y 100x.

✔ AUMENTO:

- Se calcula multiplicando el aumento del objetivo por el aumento del ocular.

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✔ PODER DE RESOLUCIÓN

- Capacidad para discriminar dos puntos separados entre sí, por una distancia mínima.
- Capacidad del lente de distinguir detalles.
- MO = aumenta la resolución de los objetos unas 500 veces más con relación a la vista
directa.
- ME = aumenta 500 veces más con respecto al microscopio óptico.

🡺 SISTEMA DE ILUMINACIÓN:

- Fuente de luz: es una lámpara halógena de intensidad graduable, la cual se enciende

y apaga con un interruptor y, dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

- Condensador: lente convergente que concentra los rayos luminosos sobre la

preparación.
- Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

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B) PARTE MECANICA:
- Pie.
- Columna.
- Tubo.
- Mecanismo de movimiento.
- Platina.

🡺 MECANISMO DE MOVIMIENTO: sirve para facilitar el desplazamiento del tubo

y lograr un enfoque correcto.

- Tornillo macrométrico: aproxima el enfoque (permite un enfoque rápido de la
preparación).
- Tornillo micrométrico: se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación.

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TIPOS DE MICROSCOPIOS

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

🡺 La observación se realiza con luz ultravioleta.

🡺 Se emplean sustancias naturales de la célula o colorantes que tienen la capacidad de

absorber longitudes de onda y emitir luz fluorescente.

🡺 La luz ultravioleta se enfoca sobre el espécimen y es absorbida por ciertas estructuras,

que luego la emite dentro de la banda visible.

MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA

🡺 Emplea luz ultravioleta.

🡺 La imagen se registra en películas fotográficas.

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🡺 Posee una resolución mayor que el microscopio óptico.

🡺 Detecta ácidos nucleicos y proteínas.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASE

🡺 Se basa en modificaciones de la trayectoria de los rayos de luz, los cuales producen

contrastes notables en la preparación.

🡺 Permite observar células sin colorear.

🡺 Útil para células vivas.

🡺 Se puede utilizar para ver parásitos y bacterias en cortes histológicos, y para objetos

transparentes y no coloreados (sedimento urinario).

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

🡺 Se usa una luz muy intensa en forma de cono hueco sobre el espécimen.

🡺 Condensador: hace que los rayos luminosos no penetren directamente en el objetivo,

sino que iluminan oblicuamente en la preparación.

🡺 Las porciones claras aparecen en un fondo oscuro y los objetos minúsculos aparecen

como una luz brillante sobre el fondo.

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🡺 Se usa para analizar elementos biológicos transparentes y sin manchas.

MICROSCOPIO CONFOCAL

🡺 Emplea iluminación con rayo láser.

🡺 Usa un sistema de espejos para mover el rayo láser a través del espécimen,

iluminando un solo punto por vez.

🡺 Se registran los datos de cada punto y se guardan en la computadora.

🡺 Se lleva la imagen a un monitor de alta resolución.

🡺 Se pueden tomar imágenes.

🡺 Las regiones fuera de foco se sacan de las imágenes mediante un programa.

🡺 Crean imágenes múltiples a diferentes profundidades dentro del espécimen y realizan

construcciones tridimensionales.

MICROSCOPIO ELECTRONICO

🡺 Tiene alto poder de resolución que nos permite ver y conocer la ultraestructura de las

células.

🡺 Los lentes son remplazados por bobinas electromagnéticas.

🡺 Fuente de energía: haz de electrones.

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 🡺 Los electrones son invisibles y la imagen que forman se ve en una pantalla

fluorescente o se registra fotográficamente.

🡺 Se requiere el máximo de delgadez del espécimen para una mejor absorción de

electrones y para que estos puedan atravesarlo.

🡺 Los cortes se hacen con el ultramicrotomo.

PASOS
1. Conectar el microscopio a la corriente eléctrica.
2. Conectar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente.
3. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
4. Encender la fuente de luz con la intensidad mínima y se va aumentando de a poco.
5. Comenzar la observación con el objetivo de 4x.
6. Realizar el enfoque.
7. Lograr un enfoque fino.

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