Laboratorio 5 de Abril

Laboratorio 8: Evaluación de la Calidad Microbiológica del Agua por las
Técnicas de Filtración por Membrana y Número Más Probable (NMP)
1. Puede el agua actuar como vehículo de agentes patógenos, cuántos, cuáles, qué
enfermedades producen?
Existen diversos tipos de agentes patógenos que pueden transmitirse por el agua de
consumo contaminada.
Fiebre paratifoidea: el agente causal es Salmonella paratyphi.
Fiebre tifoidea: Salmonella typhi.
Salmonelosis gastroenteritis: producida por otras especies de Salmonella.
Shigelosis: producida por 4 especies de Shigella: Shigella dysenteriae, S. flexneri, S. boydii y S.
sonnei.
Infecciones por Escherichia Coli.
Colitis hemorrágica: Escherichia Coli.
Cólera: Vibrio cholerae.
Campilobacteriosis (Enteritis campilobacteriana): Campylobacter jejuni.
Yersiniosis.
2. Cuál cree que es el objetivo de analizar microbiológicamente una muestra de
agua?
El muestreo de agua es una actividad dirigida a la recolección de una pequeña porción de
ésta, que represente exactamente la calidad de la masa de agua en el lugar y en el momento
de obtención de la muestra. La recolección de la muestra representativa constituye uno de
los elementos fundamentales de un programa de control de calidad analítica a fin de obtener
datos reales de las características físicas, químicas y microbiológicas de los cuerpos de agua.
La vigilancia de la calidad del agua es fundamental para reducir los riesgos de transmisión
de enfermedades a la población por su consumo, como las de tipo gastrointestinal y las
producidas por contaminantes tóxicos.
3. Cuales son aquellos parámetros que se examinan en un análisis microbiológico de

agua, que se detecta o qué, mide por qué?
El desarrollo de un microorganismo en un ambiente, sea éste su ambiente natural o un
medio de cultivo de laboratorio, está determinado por los nutrientes disponibles y las
condiciones físicoquímicas. Son muchos los factores físicoquímicos que pueden afectar el
crecimiento microbiano, entre los cuales los más importantes son: temperatura, pH,
biodisponibilidad de agua, presión osmótica, disponibilidad de O2 , tensión superficial y
radiaciones. Ellos modifican la velocidad de crecimiento de los microorganismos,
provocando cambios que, a determinados valores de dichos factores pueden llegar a
ocasionar la detención del crecimiento e incluso su muerte. Ninguno de los factores
ambientales actúa independientemente y un cambio en uno de ellos puede afectar la acción
del otro. Así como los requerimientos nutricionales son diferentes para los distintos
microorganismos, también lo son las condiciones fisicoquímicas adecuadas para su
desarrollo, así se explica la variada distribución de los mismos en la naturaleza. Conocer la
respuesta de los microorganismos a su medio ambiente es importante para darles
condiciones óptimas de desarrollo o, por el contrario, para inhibir su crecimiento. Es decir,
permite ejercer un control del crecimiento microbiano. Las recientes directrices y legislación
impartida por la oms, afirman que el agua potable debe contener microorganismos
patógenos sólo en un número tan bajo que el riesgo de contraer infecciones transmitidas por
el agua esté por debajo de un límite aceptable
-se supone que la NO presencia de estas bacterias hace que el agua sea potable
bacteriológicamente hablando. Son:
● Escherichia coli
● Estreptococos fecales
● Clostridium (anaerobios y formadores de esporas).
La medición se hace empleando técnicas estadísticas"número más probable" (índice NMP)

en 100 ml de agua.
Las aguas con un NMP inferior a 1 son satisfactoriamente potables.
4. Mencione qué metodologías son utilizadas para analizar microbiológicamente una
muestra de agua, describa brevemente en qué consisten?
La medición del crecimiento microbiano implica distinguir entre el número de células
viables y el número de células totales. El segundo incluye células vivas y muertas, mientras
el primero incluye sólo las células vivas. Para distinguir entre ambos tipos de células se
utilizan métodos físicos y químicos. Frecuentemente pueden correlacionarse los datos
obtenidos a partir de más de un método. Algunas de las técnicas empleadas se muestran en
la tabla 2. A título informativo, se resumen dos de los métodos más empleados.
Recuento en medio sólido: El recuento de colonias es la forma más práctica para distinguir
células viables y no viables en una suspensión bacteriana. Cada bacteria viable da lugar a la
formación de una colonia después de la incubación en un medio agarizado apropiado. Se
diluye la muestra, se toma un volumen determinado y se siembra en un medio agarizado
contenido en cajas de Petri. Se incuba y una vez desarrollado el cultivo, se cuenta el número
de colonias expresándose el resultado como UFC mL-1 (unidades formadoras de colonia por
mL).
Turbidimetría: Las bacterias poseen un elevado índice de refracción que permite la
dispersión de la luz que incide sobre ellas y el crecimiento queda determinado por el
enturbiamiento originado en un medio líquido. Debido a los colores de los medios de
cultivo, generalmente se usan longitudes de onda entre 490 y 660 nm. Esta técnica es de fácil
ejecución y da resultados inmediatos, y se la conoce vulgarmente como método DO
(densidad óptica).
5. Cuál es el fundamento de la técnica de número más probable NMP y filtración por

membrana?
Técnica de número más probable NMP:La determinación de microorganismos coliformes
totales por el método del número más probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de
este grupo microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a
35°C durante 48 h, utilizando un medio de cultivo que contenga sales biliares. Esta
determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase confirmativa.
Filtración por membrana:La muestra de agua se puede pasar a través de un filtro de
celulosa de 0,45 micras de tamaño de poro, para que las retenidas en él, las bacterias de tipo
coliformes y las mesófilas. El filtro se encuentra en un medio de cultivo específico para lo
que se puede determinar en la muestra (coliformes totales, coliformes fecales y
microorganismos mesófilos), incubando a 35 grados centígrados más o menos dos grados
durante 18 a 20 horas.
6. Cuál es el fundamento de los medios de cultivo: Caldo LMX fluorocult y Agar

Chromocult, qué microorganismos se desarrollan en estos medio y cómo se aprecian?
Los medios de cultivo Fluorocult tienen los mismos componentes que los medios
convencionales y además el sustrato MUG (4-metilumbeliferil-β-glucurónido). Algunos de
los medios también contienen triptófano como sustrato para una posible reacción indol para
confirmar adicionalmente la presencia de E. coli. El método Fluorocult puede producir un
resultado positivo en solo 24 – 48 horas. En el caso del medio cromogénico, es posible una
identificación directa usando el color característico de las colonias en el propio medio de
cultivo sin la aplicación de más aditivos. Es posible la identificación de colonias únicas
positivas, incluso en presencia de un alto recuento microbiano.
Más rápido, ahorra 3 a 4 días en comparación con el método convencional

Identificación rápida con lámpara UV (Fluorocult) o gracias al color (Chromocult)
Fácil interpretación; es posible la visualización de una serie completa de diferentes colores
de organismos en un solo medio de cultivo.
Si E. coli está presente entre los coliformes, sus enzimas β-glucuronidasas hidrolizan el
sustrato MUG (4-metilumbeliferil-β-glucurónido) contenido, produciendo fluorescencia
azul, que es visible a la luz UV (366 nm). Esta reacción del MUG no es completamente
específica de E. coli. Otras pocas especies de bacterias también pueden hidrolizar el MUG
(mug positivas) y se sabe que ciertas cepas de E. coli son MUG negativas.
7. En qué áreas considera que es importante evaluar microbiológicamente el agua,

por qué?
La presencia de microorganismos patógenos en el agua de bebida es un riesgo que se
incrementa en las áreas marginales de mayor densidad poblacional o en zonas sin
disponibilidad de agua potable. La seguridad que un agua contaminada puede ser causal de
enfermedades, ha conducido a la necesidad de controlar rutinariamente la calidad
microbiológica de muestras de diversos orígenes.
8. Consultar cuales son los parámetros establecidos en la legislación colombiana para

los siguientes tipos de agua
- Agua potable: Para garantizar que el agua cumpla con las condiciones para consumo
humano, la empresa contrata un laboratorio externo que realiza el seguimiento de la calidad
de agua en las redes de distribución. De modo que podamos obtener resultados confiables
como producto final del proceso de tratamiento del agua, cumpliendo los rangos
permisibles estipulados en la resolución 2115/2007. En la siguiente tabla se relacionan los
parámetros de mayor relevancia y control en el monitoreo de la calidad de agua, según la
resolución 2115 de 2007:
- Agua embotellada:
- Agua de piscina o recreativa:
PH (7.2–7.6)
Mantener el pH entre estos valores es esencial para que los desinfectantes actúen
correctamente y puedan oxidar la materia orgánica. El valor de pH es el catalizador de la
reacción que produce la desinfección del agua.
CLORO LIBRE ( 1.5 ppm)
1,5 ppm de cloro libre es el valor indicado y recomendado para que la desinfección del agua de
la piscina sea óptima.
El cloro libre no es el único cloro que tiene el agua, el cloro combinado es aquel que se combina
con la materia orgánica del agua). La suma del cloro libre y del cloro combinado es el cloro total
del agua.
DUREZA CÁLCICA ( 300 ppm)
Controlar la dureza del agua es importante para mantener las incrustaciones calcáreas
controladas. Una dureza cálcica alta puede provocar incrustaciones en las paredes de la piscina
de origen calcáreo.
ALCALINIDAD (100 ppm)
Es importante mantener la alcalinidad en 100 ppm aunque un valor entre 80 y 120 ppm es
correcto. La alcalinidad funciona como estabilizador del valor de pH. Si mantenemos la
alcalinidad óptima el pH también será más estable.
ESTABILIZADOR ( 40 ppm)
El ácido cianuro funciona como estabilizador del cloro en el agua de la piscina. Es importante
que no esté muy alto evitando que suba más de 40 ppm. Si el valor del estabilizador es 0 ppm
tampoco ayudará a la desinfección mediante el cloro de la piscina.
FOSFATOS (0 ppb)
Mantener los fosfatos a 0 ayuda a que el agua de la piscina no tenga problemas de algas. Las
algas se alimentan de compuestos formados por fosfatos y por tanto si se eliminan totalmente
del agua las algas no pueden crecer porque no tienen alimento.
- Agua para riego o agricultura: En este contexto se tienen los siguientes lineamientos
9. Cuáles son los tipos de agua definidos por la USP, cuáles son sus usos, cuáles son
los requisitos específicos que debe cumplir?
1. Agua potable: El agua potable puede ser empleada en la síntesis química y en las
primeras etapas de limpieza de los equipos empleados en los procesos farmacéuticos de
manufactura a menos que existan requerimientos técnicos específicos o requerimientos de
mayor calidad de agua. Es el agua de alimentación definida para la producción de Agua
Calidad Farmacéutica.
2. Agua purificada: “Es agua obtenida por un proceso adecuado. Se prepara a partir de agua
que cumple con la Regulación Primaria para Agua Potable de la Agencia de Protección del
Medio Ambiente (USEPA) o regulaciones comparables de la Unión Europea o Japón. No
contiene sustancias agregadas.”
“Se usa como un excipiente en la producción de preparaciones oficiales, en aplicaciones

farmacéuticas, tales como limpieza de ciertos equipos y en la preparación de algunos
productos químicos farmacéuticos (materias primas). El agua purificada debe cumplir los
requerimientos de pureza tanto inorgánica como orgánica y debe estar protegida de la
proliferación bacteriana“
“Se prepara utilizando Agua Potable como agua de alimentación y se la purifica usando
operaciones unitarias que incluyen desionización, destilación, intercambio iónico, ósmosis
inversa, filtración u otros procedimientos adecuados”.
“El Agua Purificada debe cumplir con los test de Conductividad y de Carbono Orgánico
Total”.
Con referencia a los equipos e instalaciones utilizados para su obtención, la norma indica:
“La planta que permite obtener el Agua Purificada debe ser validada.”
“Las plantas de Agua Purificada, que producen, almacenan, y distribuyen agua bajo
condiciones ambientales, son susceptibles a la formación de tenaces biofilms provocados por
microorganismos, los cuales son fuentes de niveles indeseables de microorganismos viables
o endotoxinas en el agua producto. Estos sistemas requieren frecuentes sanitización y
monitoreo para asegurar la apropiada calidad microbiológica en los puntos de usos”.
3. Agua para inyectables: “El Agua para Inyectable es un excipiente en la producción de

inyectables y para uso en aplicaciones farmacéuticas, tales como la limpieza de ciertos
equipos y en la preparación de algunos productos químicos farmacéuticos (materias
primas). La fuente para la preparación de este producto es Agua Potable, la cual debe ser
preliminarmente purificada, pero que está finalmente sujeta a destilación u ósmosis
inversa”.
“Debe cumplir con todos los atributos del Agua Purificada y además los requerimientos
dados bajo el título Test de Endotoxinas Bacterianas”.
También solicita que:

“Las plantas usadas para producir, almacenar y distribuir Agua para Inyectables deben estar
diseñadas para prevenir la contaminación y la formación de endotoxinas microbianas y
deben ser validada.”
Con referencia al procedimiento de control, la USP24 considerada adecuado el siguiente:
Agua Purificada Agua Para Inyectable

(PW) (WFI)
Método Conteo en placa Filtración por membrana
Volumen mínimo de 1,0 ml 100 ml
muestra
Medio de cultivo
Tiempo de incubación 48 a 72 horas 48 a 72 horas
Temperatura 30 a 35 ºC 30 a 35 ºC

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La medición se hace empleando técnicas estadísticas"número más probable" (índice NMP)

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6. Cuál es el fundamento de los medios de cultivo: Caldo LMX fluorocult y Agar

Más rápido, ahorra 3 a 4 días en comparación con el método convencional

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8. Consultar cuales son los parámetros establecidos en la legislación colombiana para

“Se usa como un excipiente en la producción de preparaciones oficiales, en aplicaciones

3. Agua para inyectables: “El Agua para Inyectable es un excipiente en la producción de

También solicita que:

Con referencia al procedimiento de control, la USP24 considerada adecuado el siguiente:

Agua Purificada Agua Para Inyectable

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