Efectos de las fitohormonas (auxinas, giberelinas y citoquininas) en el

crecimiento de hipocótilos de Caesalpinea spinosa Molina Kuntze Tara

G. Bustamante; J. Imata; L. Linares; D. Mostajo; R. Pacheco; M. Quispe; A. Vilca
Laboratorio de Fisiología Vegetal, Curso de Fisiología Vegetal. Universidad Nacional de San Agustín. Arequipa. Perú.

RESUMEN
Se evaluó el efecto de diferentes concentraciones de tres fitohormonas en el crecimiento de
hipocótilos de Caesalpinia spinosa Moli a Ku tze ta a co 5 t ata ie tos y u co t ol e u
diseño completamente al azar (DCA) con arreglo factorial. Se probaron cinco concentraciones de
IBA: 0, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8 ppm; cinco concentraciones de AG3: 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8 ppm y
cinco concentraciones de BAP: 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 ppm. Así mismo se hicieron interacciones AG3
10-8 vs IBA 10-7 ppm; AG3 10-8 vs IBA 10-8 ppm; AG3 10-8 vs IBA 10-9 ppm; IBA 10-4 vs BAP 0.4 ppm;
IBA 10-4 vs BAP 0.5 ppm; IBA 10-4 vs BAP 0.6 ppm; BAP 0.5 vs AG3 10-8 ppm; BAP 0.5 vs AG3 10-8
ppm; BAP 0.5 vs AG3 10-8 ppm.
Los resultados de la prueba de Fisher sobre la aplicación individual de las hormonas muestran que
la mayor concentración de BAP produjo un mejor crecimiento de los hipocótilos y los resultados
correspondientes a la Interacción entre las hormonas, muestran que existe un mejor crecimiento
tanto en la combinación de IBA y BAP como de IBA y AG3, sin embargo, la aplicación individual
supera sustancialmente los resultados de la interacción entre hormonas.

PALABRAS CLAVE ADICIONALES: tara, hipocótilos, crecimiento, auxinas, giberelinas, citoquininas

ABSTRACT
The effect of different concentrations of three phytohormones on the growth of hypocotyls of
Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze "Tara" was evaluated with 15 treatments and a control in a
completely randomized design (CRD) with factorial arrangement. We tested five concentrations of
IBA: 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8 ppm five concentrations of AG3: 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8 ppm and five
concentrations of BAP: 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5 ppm. Also interactions were AG3 10-8 vs IBA 10-7 ppm;
AG3 10-8 vs IBA 10-8 ppm; AG3 10-8 vs IBA 10-9 ppm; IBA 10-4 vs BAP 0.4 ppm; IBA 10-4 vs BAP 0.5
ppm; IBA 10-4 vs BAP 0.6 ppm; BAP 0.5 vs AG3 10-8 ppm; BAP 0.5 vs AG3 10-8 ppm; BAP 0.5 vs AG3
10-8 ppm.
The results of Fisher's test on the individual application of hormones showed that the highest
concentration of BAP produced a better growth of the hypocotyls and the results for the
interaction between hormones, show that there is a better growth in both the combination of IBA
and BAP and IBA and GA3, however, substantially exceed the individual application results from
the interaction between hormones.

ADDITIONAL KEY WORDS: tara, hypocotyls, growth, auxins, cytokinins, gibberellins

 INTRODUCCIÓN auxinas) inhibe el crecimiento de yemas
La Tara (Caesalpinia spinosa) es una especie axilares cercanas. Estimulan la formación de
forestal nativa, posee un inmenso potencial raíces laterales o adventicias. Inhiben la
médico, alimenticio e industrial, elongación de la raíz principal. (UAM, 2010)
principalmente en la producción de gomas o Las giberelinas estimulan la elongación
hidrocoloides, taninos, ácido gálico, etc. celular al incrementar la plasticidad de la
(INFOBOSQUES-INIA 2006). Teniendo en pared y aumentar el contenido de glucosa y
cuenta que la tara es una especie de fructosa, provocando la disminución del
crecimiento lento, se estima que alcanza su potencial hídrico. Las giberelinas controlan el
máximo desarrollo fisiológico a los 40 años, a crecimiento y elongación de los entrenudos
partir del cual se detiene los incrementos en de tallos, inducen la floración en plantas de
biomasa; debido a que su madurez comercial día largo cultivadas en época no apropiada y
comienza a los 4 o 6 años y su máxima eliminan la dormancia que presentan las
producción a los 15 o 20, comenzando a yemas y semillas de numerosas especies,
disminuir desde los 65 o 50 para convertirse promoviendo su germinación. (Blanco, A.
en improductiva a los 85 o 65 años (en 2010).
relación de riego o sequia, respectivamente). Las citoquininas a su vez son un grupo muy
(ALNICOLSA 2002) reducido de hormonas. En conjunto con las
Al obtener conocimiento del efecto de las auxinas estimulan la proliferación de células
auxinas, giberelinas y citoquininas en la tara, meristemáticas y también estimulan la
podemos utilizar la o las fitohormonas que expansión de los cotiledones tras el primer
mejor influyan en el crecimiento de dicha haz de luz que reciben. Estimulan el
planta con la finalidad de incrementar la crecimiento de yemas laterales inhibiendo la
eficiencia de su producción. Las hormonas dominancia apical (contrario a las auxinas,
vegetales o fitohormonas, de forma natural, por lo que deben estar en equilibrio).
son sustancias químicas producidas Provocan cambios en la morfología según el
endógenamente por las plantas, las cuales tipo de crecimiento, junto a las auxinas
están contribuyendo a la mejor comprensión estimulan la formación de raíces y tallos.
de los diversos mecanismos que gobiernan la (UAM, 2010)
fisiología de las plantas, como en el caso de Por lo que el presente trabajo tiene por
los fenómenos de crecimiento y desarrollo objetivo evaluar los distintos niveles de
(Lazo, H. 1981). La auxina ocupa un lugar fitohormonas (auxinas, giberelinas y
destacado en cualquier discusión sobre citoquininas) en el crecimiento de hipocótilos
hormonas vegetales porque fue la primera de Caesalpinia spinosa Ta a ; dete i a la
hormona del crecimiento descubierta en concentración optima de elongación de
plantas. La acción de las auxinas como hipocótilos con estas fitohormonas; evaluar
reguladoras del crecimiento vegetal está el efecto de las interacciones entre estas
asociada al desarrollo y regulación de la hormonas y determinar cuál de éstas es la
planta, entre los cuales se encuentra la más efectiva en la crecimiento de
elongación celular en tallos y coleoptilos hipocótilos.
(tallos jóvenes), incrementar la extensibilidad
de la pared celular y estimulan la
diferenciación del xilema y el floema. Son
responsables del fototropismo y
gravitropismo, así como de la dominancia
apical, puesto q al ubicarse en la yema apical
del tallo (efecto producido por la mayoría de
 HIPÓTESIS diariamente su crecimiento y retirando las
Se conoce que las auxinas junto a las semillas en mal estado, manteniendo una
citoquininas estimulan la división celular de temperatura de 23 ± 0.5°C.
meristemos; a su vez, las auxinas regulan los
niveles endógenos de citoquininas, Transcurrido este período, se seleccionaron
disminuyendo la concentración de las semillas cuyo hipocótilo presentara una
citoquininas activas, y las giberelinas longitud entre 2 – 3 cm, procediendo a cortar
estimulan la elongación celular, con una hoja de bisturí un segmento de 1
incrementando la plasticidad de la pared; por cm, sobre una placa de vidrio milimetrada,
lo tanto, al experimentar con diferentes teniendo en cuenta no tomar las zonas de
concentraciones de las fitohormonas (ppm) transición entre la radícula y el hipocótilo
en plántulas de Caesalpinia spinosa ta a , se (cuello) y entre el epicótilo e hipocótilo
esperaría una interacción entre la cantidad (curvatura); luego se colocaron 5 hipocótilos
aplicada y la que pudiera presentar los por cada matraz conteniendo las diferentes
hipocótilos, inhibiendo o estimulando su concentraciones e interacciones de
crecimiento. hormonas.

MATERIAL Y MÉTODOS Preparación de concentraciones de

Acondicionamiento de las semillas y fitohormonas
selección de hipocótilos Para la preparación individual de las
Se seleccionaron 1500 semillas silvestres de hormonas, se utilizaron soluciones madre de
ta a Caesalpinea spinosa (Molina) Kuntze, BAP (6-bencilaminopurina), IBA (ácido 3-
en muy buen estado, luego éstas fueron indobutírico) y AG3 (ácido giberélico) en una
escarificadas con ácido sulfúrico durante concentración de 100 ppm cada uno.
aproximadamente 35 minutos, moviéndolas En tubos de ensayo se hicieron diluciones
constantemente, posteriormente fueron para obtener concentraciones de 0, 10-4, 10-5,
lavadas con agua corriente durante una hora; 10-6, 10-7, 10-8 ppm de IBA; 0, 10-4, 10-5, 10-6,
una vez lavadas, fueron imbibidas en frascos 10-7, 10-8 ppm de AG3 y 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5
de gerber y colocadas en una estufa a 25° C ppm de BAP; preparando 60 ml de cada
durante 5 días cambiándoles el agua concentración distribuidos en tres
diariamente, transcurrido este tiempo se repeticiones.
utilizaron las semillas en mejor estado y
éstas pasaron por un proceso de Para la preparación de las interacciones
desinfestación, el cual constaba de un lavado entre las hormonas, se utilizaron las
con etanol 70% durante 1 minuto, otro concentraciones de hormonas de aplicación
lavado con Hipoclorito de Sodio 5% por dos individual con mejor respuesta al
minutos y tres últimos lavados con agua crecimiento de los hipocótilos, de la
estéril por cinco minutos cada uno, siguiente forma: AG3 10-8 vs IBA 10-7 ppm;
finalmente se colocaron cuidadosamente 35 AG3 10-8 vs IBA 10-8 ppm; AG3 10-8 vs IBA 10-9
semillas en cada placa Petri (18.5cm de ppm; IBA 10-4 vs BAP 0.4 ppm; IBA 10-4 vs
diámetro), las cuales contenían un disco de BAP 0.5 ppm; IBA 10-4 vs BAP 0.6 ppm; BAP
papel toalla (del diámetro de la placa) 0.5 vs AG3 10-8 ppm; BAP 0.5 vs AG3 10-8
humedecido con 20ml de agua destilada; las ppm; BAP 0.5 vs AG3 10-8 ppm.
placas fueron envueltas con una bolsa de
plástico transparente y colocadas en
estantes dentro del cuarto de transferencia
(Laboratorio de Biotecnología) por un
período de seis a siete días, observando
Toma de datos RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Transcurrido 24 horas, se procedió a extraer
y medir los hipocótilos en las placas
milimetradas de vidrio, los datos obtenidos
se promediaron para aplicar el programa
estadístico correspondiente.

Diseño experimental
Para la experimentación individual de
hormonas exógenas, se utilizó un DCR con un
arreglo factorial dado por 15 tratamientos (5
concentraciones de IBA, 5 de AG3 y 5 de BAP)
+ 1 control; con 3 repeticiones por cada Fig. 1. Efecto del ácido giberélico (AG3) en
tratamiento y control = 48 unidades hipocótilos de Caesalpinia spinosa “Tara
experimentales que contenían 5 subunidades
(hipcótilos) cada uno. En la Fig. 1. se observa que la concentración 10-8
Para la experimentación con las ppm es la que produjo mayor aumento en el
interacciones se utilizó un DCR con un tamaño promedio (1.140 cm) de los hipocótilos
con respecto al grupo control (1.067 cm), lo que
arreglo factorial dado por 9 tratamientos (1
establece diferencias significativas entre
Concentración de AG3 vs 3 de BAP, 1 de IBA concentraciones con tendencia a estimular el
vs 3 de BAP y 1 de BAP vs 3 de AG3); con 3 crecimiento a medida que la hormona sea menor
repeticiones por cada interacción = 27 concentrada.
unidades experimentales; que contenían 5
subunidades (hipcótilos) cada uno.
Los resultados del tamaño total de las
subunidades fueron previamente
promediados y sometidos luego a un análisis
de varianza de medidas repetidas para
determinar la existencia de diferencias
significativas entre los tratamientos,
considerando la naturaleza de las hormonas
así como la manipulación de las mismas.
Para identificar la especificidad entre
variables que presentaron las diferencias se Fig. 2. Efecto de Citoquininas (CIT) en hipocótilos
aplicó un test a posteriori de diferencias de Caesalpinia spinosa “Tara
mínimas significativas (Test de Tukey).
En la Fig. 2. se observa que la concentración 0.5
ppm es la que produjo mayor aumento en el
tamaño promedio (1.160 cm) de los hipocótilos
con respecto al grupo control (1.067 cm),
estableciendo diferencias significativas entre
concentraciones con clara tendencia a mejorar el
crecimiento a medida que éstas aumentan.
 Fig. 5. Efecto de la interacción entre Giberelinas
Fig. 3. Efecto de auxinas (AUX) en hipocótilos de (AG) y Auxinas (AUX) en hipocótilos de
Caesalpinia spinosa “Tara Caesalpinia spinosa “Tara
-4
En la Fig. 3. se observa que la concentración 10 En la Fig. 5. se observa que la interacción entre
-8 -8
ppm es la que produjo mayor aumento en el AG 10 y AUX 10 ppm es la que produjo mayor
tamaño promedio (1.147 cm) de los hipocótilos aumento en el tamaño promedio (1.130 cm) de
con respecto al grupo control (1.067 cm), un los hipocótilos con respecto al grupo control
aumento similar se observa en la concentración (1.067cm)
-8
de 10 ppm, lo que establece diferencias
significativas entre concentraciones con una
tendencia a estimular el crecimiento tanto en la
mayor concentración como en la menor
concentración sin efecto diferenciado entre
concentraciones intermedias.

Fig. 6. Efecto de la interacción entre y

Citoquininas (CIT) y Giberelinas (AG) en
hipocótilos de Caesalpinia spinosa “Tara

En la Fig. 6. se observa que la interacción entre

-7
CIT 0.5 y AG 10 ppm es la que produjo mayor
aumento en el tamaño promedio (1.091 cm) de
Fig. 4. Efecto de la interacción entre Auxinas
los hipocótilos con respecto al grupo control
(AUX) y Citoquininas (CIT) en hipocótilos de (1.067cm), estableciendo diferencias
Caesalpinia spinosa “Tara significativas entre concentraciones, cuya
tendencia refleja una mejor respuesta de
En la Fig. 4. se observa que la interacción entre crecimiento conforme la concentración de AG
-4
AUX 10 y CIT 0.4 ppm es la que produjo mayor aumenta.
aumento en el tamaño promedio (1.130 cm) de
los hipocótilos con respecto al grupo control
(1.067cm).
Los resultados correspondientes al análisis AZCON- BIETO, J. y TALON, M. (2000) señala
de varianza (véase tabla 1 y 2 del ANEXO II), que cada órgano presenta una sensibilidad
sobre el efecto individual de las diferentes diferente a la auxina. Teniendo en cuenta la
concentraciones de fitohormonas exógenas concentración de hormona, la respuesta de
(IBA, AG3 y BAP) en el crecimiento de los los receptores hormonales en las raíces es
hipocótilos de Caesalpinia spinosa (Molina) más sensible que en las yemas y éstas a su
Ku tz ta a , evidencian a través de la vez más sensibles q en los tallos; esto
prueba de Fisher diferencias significativas explicaría la similitud de respuesta que la
(p<0.05); lo que establece una marcada concentración 10-8 ppm presenta con
relación entre las diferentes concentraciones respecto a la máxima encontrada de 10-4
y el crecimiento de los hipocótilos. Así mismo ppm, debido a que la primera estimula
la prueba de especificidad de Tukey señala fuertemente las yemas y ligeramente la
que la mejor respuesta la dieron los elongación de tallos por un incremento en la
tratamientos de IBA: 10-8 ppm, AG3: 10-8 ppm extensibilidad celular, mientras que la
y BAP: 0.5 ppm segunda influye en el crecimiento de la raíz
bajo los mismos procesos.
Los resultados correspondientes al análisis
de varianza (véase tabla 3 del ANEXO II) URIBE, M. et al. (2008) en sus experimentos
sobre el efecto de las interacciones entre las sobre hormonas en el desarrollo y
diferentes concentraciones de fitohormonas proliferación de microtallos de Berberidopsis
exógenas sobre el crecimiento de los corallina, sostiene que sus resultados
hipocótilos de Caesalpinia spinosa (Molina) muestran un efecto estadisticamente mayor
Ku tz ta a , evidencian a través de la en el número promedio de hojas por
prueba de Fisher (F=6.81) diferencias explanto, refiriéndose a las concentraciones
altamente significativas para las combinadas de 1,0/0,1 ppm de BAP/IBA
interacciones entre IBA y BAP sobre la (CIT/AUX respectivamente); sin embargo, el
Longitud de los hipocótilos de Ta a e las desarrollo en longitud de los microtallos se
tres concentraciones establecidas. De esta vio afectado por el tratamiento hormonal
forma, Los resultados de la prueba de empleado, apreciándose que la
contraste de Tukey señalan una mejor concentración 0,5/0,1 ppm de BAP/IBA se
respuesta tanto para IBA 10-4 ppm vs BAP presentó como la más adecuada; esto
0.6ppm como para IBA 10-4 ppm vs BAP 0.4 indicaría una diferencia hacia nuestros
ppm al ser estadísticamente iguales con una resultados obtenidos, cuya máxima
probabilidad (99%). Las pruebas de Análisis respuesta fue la interacción de IBA 10-4 con
de varianza evidencian diferencias BAP 0,4 ppm, seguida de IBA 10-4 con BAP 0,6
significativas tanto para las interacciones ppm; esto supone una alta diferencia
entre AG3 e IBA, como para AG3 y BAP, que significativa utilizando la concentración
según los resultados de la prueba de optima de BAP (0.5ppm) al aplicarse en
contraste de Tukey, señalan una mejor combinación con bajas concentraciones de
respuesta tanto para BAP 0.5 ppm vs AG3 AUX (10-8 ppm), por presentar un efecto
como para IBA 10-8 vs AG3 10-8 ppm, éste inhibitorio en el crecimiento y tamaño total
ultimo de respuesta similar al encontrado en de los hipocótilos.
La interacción de IBA 10-4 ppm vs BAP 0.4
ppm, siendo la mejor encontrada en
interacciones.
LAZO, H. (1981) establece que las REFERENCIAS
concentraciones de 10ppm y 0.1ppm de
sustancias parecidas a las Giberelinas (AG3) AZCON- BIETO, J. y TALON, M. 1933.
son las de mejor respuesta a la estimulación Fisiología y Bioquímica Vegetal.
del crecimiento, respaldando en cierta Editorial Iberoamericana. Madrid-
medida nuestros resultados de aplicación
España.
combinada de AG3 y BAP, que supone una
mejor respuesta a mayor concentración del AZCON- BIETO, J. y TALON, M. 2000.
AG3; no obstante, existe un contraste a
Fundamentos de Fisiología Vegetal.
nuestros resultados encontrados sobre la
aplicación individual del AG3 en donde Editorial Mac Graw - Hill
hallamos una mejor respuesta a Interamericana. Madrid-España
concentraciones de 10-8ppm, lo que supone
una clara estimulación en el crecimiento BARCELO, J. 2001. Fisiología Vegetal. Editorial
cuando es aplicada en menores Pirámide.
concentraciones, incluso mejor que al ser
aplicada en interacción del BAP. BLANCO, A. 2010. Hormonas vegetales.

CONCLUSIONES SÁNCHEZ, M. 2011 Caesalpinia spinosa.

La concentración óptima de cada hormona
LAZO, H. 1981. Aislamiento e Identificación
exógena de aplicación individual, que
produjo una mejor respuesta al traducirse en de Sustancias parecidas a las
mayor tamaño de los hipocótilos, se Giberelinas, presentes en la
establece como sigue: 10-8ppm para IBA, 10- Inflorescencia del Agave americana
4
ppm para AG3 y 0.5ppm para BAP; de ellas Maguey . A e uipa – Perú.
se deduce que la concentración de BAP 0.5
ppm tiene mejor efecto comparativo. TAIZ, L. & ZEIGER, E. 2002. Fisiología Vegetal.
Publicaciones Ed. III. Volumen II.
Las interacciones con respuesta más efectiva
la comparten tanto IBA 10-8 vs AG3 10-8 ppm, UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MÉXICO.
como IBA 10-4 ppm vs BAP 0.4 demostrando 2010. Reguladores del Crecimiento.
un mayor crecimiento con respecto al Ciudad de Mexico – México.
control.
URIBE, M. et al. 2008. Efecto de asepsia y
La aplicación de hormonas individuales fitohormonas en el establecimiento in
presenta un mejor resultado encontrado en
vitro de Berberidopsis, a partir de
el crecimiento de hipocótilos, comparando
con la mejor respuesta encontrada en la segmentos nodales. Pp 59. Concepción
aplicación combinada de las mismas. Chile.
 ANEXO I

Fig. 1. Selección de semillas de C. spinosa Fig. 2. Semillas de C. spinosa (Molina) Kuntz ta a

(Molina) Kuntz ta a con ácido sulfúrico siendo escarificadas

Fig.4. Semillas de C. spinosa (Molina) Kuntz ta a

Fig. 3. Semillas escarificadas
siendo lavadas con agua estéril para ser inbibidas

Fig.5. Semillas de Caesalpinia spinosa (Molina) Fig. 6. Batería de esterilización alcohol al 70% ,
Kuntz ta a listas pa a se colocadas al hipoclorito de sodio 7% y agua estéril
germinador

Fig. 8. Semillas de Caesalpinia spinosa (Molina)

Fig.7. Semillas de C. spinosa (Molina) Kuntz
Kuntz ta a su e gidas e alcohol al 7 % po
ta a sie do este ilizadas pa a su poste io
minuto
sembrado
Fig. 9. Semillas de Caesalpinia spinosa (Molina) Fig.10. Sembrado en placas Petri de semillas
Kuntz ta a su e gidas e hipoclo ito de imbibidas para su germinación
sodio al 7% por 2 minutos

Fig. 11. Semillas de Caesalpinia spinosa Fig. 12. Corte de un centímetro de los hipocotilos
(Molina) Kuntz ta a ge i adas de Caesalpiniaspinosa

Fig. 13. Batería de preparación de las Fig. 14. Matraces con soluciones de hormonas y 5
diferentes concentraciones de hormonas BAP , hipocotilos en cada uno de ellos completamente a
AG3 , IBA y buffer utilizado para las diluciones la oscuridad

Fig. 15. Matraces con soluciones control Fig. 16. Tratamientos fitohormonas en Shaker para
(buffer) con 5 hipocótilos en cada matraz su correcta oxigenación

Fig. 17. Evaluación de los hipocótilos después Fig. 18. Solución Buffer y fitohormonas, utilizados
de 24 horas para la preparación de soluciones
 ANEXO II

TABLA 1: Análisis de Varianza - Confiabilidad 95%

TABLA 2: Test de especificidad de Tukey para efecto individual de las hormonas (IBA, AG y BAP)

TABLA 3: Análisis de varianza para la interacción entre hormonas (IBA, AG y BAP) – 95%
Media
Suma de cuadrátic
cuadrados gl a F Sig.
AUX y Inter-
.072 2 .036 6.806 .003
CIT grupos
Intra-
.224 42 .005
grupos
Total .296 44
AG y Inter-
.019 2 .009 2.871 .068
AUX grupos
Intra-
.137 42 .003
grupos
Total .156 44
CIT y AG Inter-
.028 2 .014 4.623 .015
grupos
Intra-
.128 42 .003
grupos
Total .156 44
AUX y CIT CV= 6.47%
AG y AUX CV= 4.95%
CIT y AG CV= 5.18%