Practica 1 Ingenieria Bioquimica

Preparación de Medios de Cultivo y Aislamiento de Microorganismos
Nombre de la materia: ingeniería bioquímica
Carrera: ingeniería química
Plantel: UNITEC campus león
Práctica 1 Preparación de Medios de Cultivo y Aislamiento de Microorganismos
Nombre del profesor:. Oscar Daniel Aldana Martínez. I.B.Q
Integrantes
Daniela Tenorio Flores 316008611
Javier Alejandro González Hernández 316007387
Laura Fabiola Rodríguez Lozano 316011449
Fecha de entrega 1 de marzo del 2022

Índice
 Introducción
 Objetivos
 Hipótesis
 Materiales y reactivos
 Procedimiento
 Resultados
 Discusión
 Conclusión
 Anexos
 Referencias
Introducción
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de

nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del equilibrio
osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un agar o caldo que
sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos. La preparación de
los medios de cultivo microbiológico es una tarea habitual en el monitoreo regular de
los microorganismos descomponedores y patógenos en las muestras microbiológicas.
Los medios de cultivo microbiológico deben proporcionar condiciones de crecimiento
óptimas para todos los microorganismos o para tipos específicos de microorganismos.
La composición precisa de un medio depende de la especie que vaya a cultivarse y del
objetivo de la aplicación. El pH del medio debe ajustarse en función de los
microorganismos. Los medios de cultivo microbiológico se clasifican en función de
diversos parámetros, como los componentes químicos, su característica física y su
función.
(Preparación de Los Medios de Cultivo Microbiológico, n.d.)
En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones mixtas con
otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se llaman por
ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los microorganismos se consigue
mediante el estudio de cepas aisladas, cultivadas en el laboratorio en cultivos puros (o
axénicos). En ocasiones el estudio molecular conduce a la caracterización de los
microorganismos, aún en poblaciones mixtas. Sin embargo, la identificación bacteriana
y la caracterización completa solo es posible tras el aislamiento de la bacteria y la
obtención de cultivos puros.
El aislamiento es la separación de un determinado microorganismo del resto de
microorganismos que le acompañan. El método más usual es la siembra por estría sobre
un medio de cultivo sólido adecuado dispuesto en una placa de Petri.
(Introduccion, n.d.)
Objetivos
 Aprender a cómo preparar el medio de cultivo.

 Aprender como cultivar de forma correcta.
 Llevar a cabo una práctica correcta para lograr los objetivos anteriores con los
debidos protocolos de seguridad y sanidad.
Hipótesis
Se realizarán medios de cultivo en los que se sembrarán microorganismos que al poner

en autoclave crecerán fácilmente.
Materiales y reactivos
Materiales
 Matraces Erlenmeyer de 250 ml
 Vidrio de reloj
 Espátula
 Balanza analítica
 Parrilla de calentamiento
 Embudo
 Asa bacteriológica
 Pisetas con agua destilada
 Probetas de 100 ml
 Autoclave
 Algodón
 Emplaye
 Tubos de ensayo de tapa rosca
 Papel encerado
 Agitador
 Papel aluminio
 Vaso de precipitado
 Cinta Masking
Reactivos
 Peptona
 Cloruro de sodio
 Extracto de levadura para cerveza
 Glucosa
 Agar dextrosa y papa
Procedimiento
Preparación de agar para hongos y levaduras

1. Preparara 200 ML de Agar dextrosa papá para hongos y levaduras (usar guantes
de nitrilo o látex en todo momento si este llegase a romperse cambiarlo de
manera inmediata quitarse los guantes hasta que la práctica acabe)
2. Usar la cantidad recomendada en el contenedor de este agar para su preparacion.
3. Una vez pesada la cantidad suficiente para 200 ML disolverlos en agua destilada
hasta tener un volumen final de 200 ML ( usar matraz elermeyer de preferencia)
4. Calentar durante aproximadamente 90 a 100 grados durante 10 min en una

parrilla de calentamiento para que este se disuelva.
5. Pasado los 10 min colocar una torunda en boca del matraz sellarlo con papel
aluminio y algo de emplaye para trasladar a un autoclave.
Preparación de Agar L.B

1. Pesar dos gramos de peptona en un vidrio de reloj y pasarlos a un matraz
elermeyer.
2. Pesar 1 gramo de extracto de levadura en un vidrio de reloj y pasarlos a un
matraz elermeyer.
3. Pesar 1 gramo de cloruro de sodio en un vidrio de reloj y pasarlos a un matraz
elermeyer.
4. Añadir 20 ml de glucosa al 20%
5. Mezclar todo hasta llegar a un volumen final de 200 ML.
6. Traspasar de 5 a 10 ML a 2 tubos de ensaye de 30 ml.
7. Pasar a autoclave con los tubos previamente cerrados.
Vaciado en placas
1. Una vez que los medios estén esterilizados en el autoclave esperar a que enfríen
un poco antes de comenzar con su manipulación.
2. Colocar 3 mecheros de alcohol o un mechero Fisher en la mesa para crear una
zona estéril.(encender los mecheros en todo momento una vez que comience a
vaciar y hasta que se termine la siembra )
3. Ya que los medios que contengan agar estén menos calientes se puede comenzar
a vaciar el medio en cajas Petri de plástico.
4. Contar con una solución de alcohol al 70% para desinfectar manos y mesa.
5. Vaciar de 15 a 20 ml de agar en las cajas Petri teniendo cuidado de que esté no
se derrame fuera de las cajas. ( Si el medio llega a caerse o derramarse este se
contamina y el análisis ya no puede hacerse )
6. Una vez vaciado esperar a que esté se solidifique.( 10 a 20 min ).

Siembra de muestras por método de estriado

1. Cuando el medio este sólido se puede comenzar la siembra ( dependiendo si este
sea sólido o líquido)
2. Tomar una caja petri con el medio solidificado abrirla tener ala mano un aza de
platino.
3. Poner el aza de platino en el mechero en la parte azul hasta que este al Rojo
Vivo enfriarlo en el medio.
4. Abrir la muestra ya sea bacterias u hongos hacer un pequeño raspado con el aza
de platino.
5. Trasladar el aza de platino después de aver raspado la muestra hacia el medio

haciendo zic Zac en la caja petri una vez hecho esto cerrar la caja petri y
etiquetarla.
6. Repetir tanto con muestras de hongos y bacterias hacer duplicado o triplicado
según las cajas petri que tengan.
7. Una vez sembrado las muestras en las cajas petri tomar los tubos de ensaye con
el medio líquido y proceder a hacer la siembra.
8. Tomar el aza de platino colocarla en el fuego del mechero en la parte azul hasta
que este al Rojo Vivo enfriarlo en el medio líquido.
9. Raspar la muestra con el aza de platino.
10. Pasar el aza al medio sumergiendola solamente sacar el aza y quemarla en el
mechero.
11. Una vez terminada la siembra etiquetar todos los medios para trasladarlos a la
incubadora.
12. Medios sólidos que contengan hongos y levaduras dejarlos de cabeza en la
incubadora.
13. Medios sólidos que contengan bacterias dejarlos boca arriba en la incubadora.
14. Esperar de 48 a 72 horas para el crecimiento de estás.
Resultados
Agar lb sin crecimiento observable debido a una

interrupción en los equipos ( alguien apagó incubadora
durante poco más de 24 horas afectando todo su
crecimiento)
Agar dextrosa papa

Crecimiento de microorganismos(bacterias) pese a una interrupción por parte del equipó

siembra por método de estriado
Agar dextrosa papa

Crecimiento de hongos Sin levaduras observables
Método de siembra estriado
Discusión
Los microorganismos necesitan nutrientes para crecer, específicamente proteínas y

carbohidratos.
Aunque hay que señalar que, cada microorganismo tiene unas necesidades nutricionales
específicas, existiendo especies que por ser poco exigentes pueden crecer sobre una
gran variedad de substratos y otras, por el contrario, precisan vitaminas, aminoácidos,
etc. para poder crecer y desarrollarse.
Cada especie crece en un rango determinado de pH y tiene un pH óptimo de
crecimiento. Según el pH óptimo, las bacterias son aquellas que crecen mejor a pH
próximos a la neutralidad, los mohos se desarrollan en un intervalo de pH más amplio,
por eso los vemos en la mayoría de los alimentos.
La mayoría de los microorganismos crecen a temperaturas entre los 5ºC y los 60ºC.
Cada microbio se desarrolla únicamente entre una temperatura mínima y otra máxima,
situándose la temperatura óptima de crecimiento (aquella a la cual la velocidad de
crecimiento es mayor) próxima a la máxima.
Los microorganismos necesitan estar durante algún tiempo en condiciones óptimas para
crecer.
(Factores Que Afectan Al Desarrollo de Microorganismos En Los Alimentos - Blog de
Juvasa, n.d.)
El CALDO LURIA (Luria Bertani LB) o caldo LB contiene peptona de caseína y
extracto de levadura que proporcionan al medio los nutrientes necesarios para el
desarrollo óptimo de la mayoría de los microorganismos. El cloruro de sodio ayuda a
mantener el equilibrio osmótico.
(CALDO LURIA (Luria Bertani LB) – Probiotek, n.d.)
Medio de cultivo Agar de Dextrosa y Papa es de la marca DIBICO, y es conocido como
PDA por sus siglas en ingles, tiene la infusión de papa como fuente de almidones y la
dextrosa son la base para el crecimiento de hongos y levaduras. El bajo pH (3.5) evita el
crecimiento de las bacterias.
(AGAR DE DEXTROSA Y PAPA – Probiotek, n.d.)
Conclusión
En conclusión, gracias a esta practica pudimos ver las diferentes formas de hacer crecer
los hongos y las bacterias y el como las debemos de tratar para que crezcan, el como
preparar los medios de cultivos no es algo tan sencillo y más en formas especificas pero
sobre todo el como debemos de ser exactos en nuestras medidas para tener la forma de
cultivo completa y tener nuestros microorganismos completos. Daniela Tenorio Flores
Podemos concluir que sembrar microorganismos requiere de muchos parámetros de

sanidad y esterilización ya que cualquier situación o mala manipulación puede generar
contaminación y eso afecta directamente tanto el medio de cultivo como en el resultado
de la siembra de los microorganismos, se corre el riesgo de no llegar a los resultados
esperados. Si en la práctica no se realiza debidamente en el ámbito laboral se tendría
demasiados problemas. Otro factor importante es tener todos los equipos necesarios,
para así evitar cualquier desviación y sobre todo la revisión constante de los cultivos, ya
que cualquier situación podría afectar todo, en este caso se apago el autoclave y eso
generó que no crecieron correctamente los hongos y las bacterias en los medios
líquidos, pero en los medios sólidos si se observó crecimiento. Laura Fabiola Rodríguez
Lozano
La organización en el laboratorio es fundamental para este tipo de prácticas por el uso

de materiales microbiologicos ya que estos son muy fáciles de contaminar y muy
laboriosos para hacer, se checo la manera correcta de hacer la siembra por el método del
estriado y se vieron los cuidados para no contaminar medios de cultivo previamente
esterilizados, además de tener una limpieza y comunicación en este tipo de prácticas.
Anexos
Para agar LB:
Se pesaron 2 g de peptona, 1 g de extracto de levadura, 1 g de cloruro de sodio y 20 g de
glucosa, la cual posteriormente se diluyo en 80 ml de agua destilada.
Y a que se peso todo, se incorporo a 200 ml de agua destilada, de la solución de glucosa
solo se añadieron 10 ml.
Para el agar Dextrosa y papa solo se pesó 7.8 g de este que posteriormente se diluyeron
en 200 ml de agua destilada.
Referencias
AGAR DE DEXTROSA Y PAPA – Probiotek. (n.d.). Retrieved February 28, 2022, from
https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-reactivos/agar-
de-dextrosa-y-papa/
CALDO LURIA (Luria Bertani LB) – Probiotek. (n.d.). Retrieved February 28, 2022,
from https://www.probiotek.com/productos/reactivos/medios-de-cultivo-
reactivos/caldo-luria-luria-bertani-lb/
Factores que afectan al desarrollo de microorganismos en los alimentos - Blog de
Juvasa. (n.d.). Retrieved February 28, 2022, from
https://www.juvasa.com/es/blog/factores-que-afectan-al-desarrollo-de-
microorganismos-en-los-alimentos/
Introduccion. (n.d.). Retrieved February 27, 2022, from
https://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iv/pb-iv-2-introduccion.htm
Preparación de los medios de cultivo microbiológico. (n.d.). Retrieved February 27,
2022, from https://www.sigmaaldrich.com/MX/es/applications/microbiological-
testing/microbial-culture-media-preparation

Practica 1 Ingenieria Bioquimica

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Practica 1 Ingenieria Bioquimica

Cargado por

Información del documento

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Practica 1 Ingenieria Bioquimica

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Preparación de Medios de Cultivo y Aislamiento de Microorganismos

Nombre de la materia: ingeniería bioquímica

Carrera: ingeniería química

Plantel: UNITEC campus león

Práctica 1 Preparación de Medios de Cultivo y Aislamiento de Microorganismos

Nombre del profesor:. Oscar Daniel Aldana Martínez. I.B.Q

Fecha de entrega 1 de marzo del 2022

La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de

 Aprender a cómo preparar el medio de cultivo.

Se realizarán medios de cultivo en los que se sembrarán microorganismos que al poner

 Matraces Erlenmeyer de 250 ml

 Pisetas con agua destilada

 Tubos de ensayo de tapa rosca

 Extracto de levadura para cerveza

 Agar dextrosa y papa

Preparación de agar para hongos y levaduras

4. Calentar durante aproximadamente 90 a 100 grados durante 10 min en una

Preparación de Agar L.B

6. Una vez vaciado esperar a que esté se solidifique.( 10 a 20 min ).

Siembra de muestras por método de estriado

5. Trasladar el aza de platino después de aver raspado la muestra hacia el medio

Agar lb sin crecimiento observable debido a una

Agar dextrosa papa

Crecimiento de microorganismos(bacterias) pese a una interrupción por parte del equipó

Agar dextrosa papa

Los microorganismos necesitan nutrientes para crecer, específicamente proteínas y

Podemos concluir que sembrar microorganismos requiere de muchos parámetros de

La organización en el laboratorio es fundamental para este tipo de prácticas por el uso

También podría gustarte