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antioxidantes

Artículo

Capacidades Antioxidante, Antiproliferativa y Antienzimática,

Análisis Nutricional y Caracterización UHPLC-PDA-MS de Frutos
de Palma Ungurahui (Oenocarpus batauaMart) de la Amazonía
peruana
Gabriel Vargas Arana1,2,* , Claudia Merino-Zegarra1,AÁngel Martínin rodriGuez del Castillo1, Cristina Quispe3y
Ezequiel Viveros-Valdez4 Mario J. Simirgiotis5,*

1 Laboratorio de Quimica de Productos Naturales, Instituto de Investigaciones de la Amazoniaia Peruana,

Avenida Abelardo Quiñones, Iquitos 16001, Perú
2 Facultad de Industrias Alimentarias, Universidad Nacional de la Amazoníaia Peruana, Iquitos 16001, Perú
3 Facultad de Ciencias de la Salud, Universidad Arturo Prat, Iquique 1110939, Chile
4 Facultad de Ciencias Biológicasogicas, Universidad Autonombre de Nuevo Leo
n, San Nicolás de los Garza 66450, Nuevo Leon, México
5 Facultad de Ciencias, Instituto de Farmacia, Universidad Austral de Chile, Valdivia 5090000, Chile
* Correspondencia: [email protected] (GV-A.); [email protected] (MJS);
Tel.: +51-943609569 (GV-A.); +56-(63)-2386110 (MJS)

Citación:Vargas-Arana, G.; Resumen:Las frutas Ungurahui, o Patawa, son una fruta popular y un alimento medicinal utilizado en el
Merino-Zegarra, C.; Amazonas. Aquí, hemos estudiado nueve poblaciones naturales de ungurahui de la Amazonía peruana con
del-Castillo, Á.MR; Quispe, C.; respecto a sus actividades nutricionales y biológicas, incluida la composición de metales, análisis proximales,
Viveros-Valdez, E.; Simirgiotis, MJ actividades citotóxicas, antioxidantes y de inhibición de la colinesterasa. Se han detectado veinticuatro
Capacidades antioxidantes, compuestos en estas poblaciones naturales peruanas mediante UHPLC-MS, incluidos nueve ácidos fenólicos
antiproliferativas y antienzimáticas, (picos 1–6, 8, 9 y 11), cuatro flavonoides C-glicosilados (picos 12, 16, 17 y 18), dos flavonoles (picos 7 y 10), un
Análisis Nutricional y Caracterización
flavanol (pico 15), tres antocianinas (picos 13, 14 y 22) y cinco derivados de resveratrol (picos 19–21, 23 y 24). La
UHPLC-PDA-MS de Frutos de Palma
muestra 9, Tunaants, presentó la mayor capacidad de aclaramiento de DPPH respecto al contenido de
Ungurahui
equivalentes de Trolox (2208.79µmol Trolox/g), pero una prueba ORAC de la muestra recolectada en San
(Oenocarpus batauaMart) de la
Lorenzo mostró la mayor actividad de limpieza (1222.28µmol Trolox/g) y la muestra colectada en Allpahuayo
Amazonía peruana.Antioxidantes2022
Mishana mostró el ABTS más potente (1803.72µmol Trolox/g). La muestra de Jenaro Herrera fue la más potente
, 11, 1598. https://doi.org/10.3390/
antiox11081598 en la inhibición de AChe (IC502.05±0.03µg/mL), seguida de la muestra de Contamana (IC502.43±0.12µg/mL). En
inhibición de BChE, la muestra de Palestina fue la más activa (4,42±0.06µg/mL), seguido de muestras de
Editores Académicos: Acade
Tunaants y San Lorenzo. Las diferencias entre las bioactividades pueden estar relacionadas con las diferentes
Antonio F. Zielinski y Aline Alberti
condiciones de crecimiento de las poblaciones de ungurahui. El fruto de la palmera demostró ser una buena
Recibido: 1 julio 2022 fuente de antioxidantes naturales y ácidos grasos dietéticos, y su consumo representa una alternativa para la
Aceptado: 15 agosto 2022 prevención de enfermedades neurodegenerativas o relacionadas no crónicas transmisibles.
Publicado: 18 agosto 2022

Nota del editor:MDPI se mantiene neutral

con respecto a reclamos jurisdiccionales en Palabras clave:actividad antioxidante; UHPLC-DAD; citotóxico; valores nutricionales; ESI-MS; fenólicos;
mapas publicados y afiliaciones colinesterasa;Enocarpo
institucionales.

1. Introducción
Derechos de autor:© 2022 por los
ci son un componente omnipresente
En la zona tropical amazónica, las especies de palmeras
autores. Licenciatario MDPI, Basilea,
de la flora. Las palmas de la Amazonía han sido utilizadas desde tiempos remotos como fuente de
Suiza. Este artículo es un artículo de
materiales, alimentos y medicinas naturales por la población local [1]. La gente local usa palmeras
acceso abierto distribuido bajo los
en la vida cotidiana y sus frutos son muy apreciados por su sabor único y sus propiedades
términos y condiciones de la licencia
Creative Commons Attribution (CC BY)
nutricionales. En el Perú amazónico, varias especies de palmeras se utilizan para la preparación de
(https:// creativecommons.org/
bebidas tradicionales o helados muy apreciados.Oenocarpus batauaMart, más comúnmente
licenses/by/ 4.0/). llamado ungurahui o patawa, es un fruto de palmera amazónica muy extendido en el neotropical.

Antio oxidantes2022,11, 1598. https://doi.org/10.3390/antiox11081598 https://www.mdpi.com/journal/antioxidantes

Antioxidantes2022,11, 1598 2 de 17

selvas tropicales Crece silvestre y tiene un fruto oleaginoso comestible de color oscuro (Figura1) de
agradable y nutritivo sabor que se consume a diario, especialmente en la Amazonía peruana. Esta
palmera es de la tribu Areceae y pertenece a la misma subtribu (Euterpeinae) que el assai y la
bacaba, que son frutas muy populares, especialmente en Brasil [2].

Figura 1.Frutas (Correcto) de palmeras ungurahui (izquierda).

Información fitoquímica conocida sobreO. batauaMart se refiere principalmente a su

composición de ácidos grasos y tocoferoles [2,3]. Sin embargo, algunos estudios sobre la
química de las frutas [4] y hojas [5], pero hasta la fecha no se han comparado poblaciones
naturales del Perú. Además, un estudio sobre tres grupos genéticos distintos de Onocarpus
batauaen Perú fue realizado por Escobar et al. [6], pero actualmente no existen estudios
sobre la comparación de la composición química y actividades biológicas entre individuos de
estos clusters genéticos, que puedan servir de base para la identificación de las mejores
poblaciones que pueden ser utilizadas para el cultivo y/o repoblamiento de esta especie
El presente estudio examina las actividades químicas (HPLC-MS completa de composición fenólica,
contenido de ácidos grasos, minerales, valores nutricionales) y biológicas (antioxidante y
antiproliferativa, además de actividades anticolinesterásicas) del ungurahui (Oenocarpus batauaMart)
frutos creciendo en poblaciones naturales de nueve localidades diferentes pertenecientes a tres clusters
genéticos en la Amazonía peruana (Figura2).

Figura 2.Sitios de recolección de frutos de ungurahuiOenocarpus batauapoblaciones naturales.

Antioxidantes2022,11, 1598 3 de 17

2. Materiales y métodos
2.1. quimicos
El metanol HPLC y el ácido fórmico (para espectrometría de masas) se obtuvieron de JT
Baker (Phillipsburg, NJ, EE. UU.). Agua ultrapura (<5µg/L TOC) se obtuvo de un sistema de
purificación (Arium 126 61316-RO), más una unidad UV Arium 611 (Sartorius, Goettingen,
Alemania). Reactivo comercial de Folin-Ciocalteu, hexahidrato de cloruro férrico, 2,2-difenil-1-
picrilhidrazilo (DPPH), 2,4,6-tris(2-piridil)-s-triazina, Trolox, dimetilsulfóxido (DMSO), Amberlita
®(XAD-4), tirosinasa (EC1.14.18.1), acetilcolinesterasa (AChE, EC 3.1.1.7), butirilcolinesterasa
(BChE, EC 3.1.1.8), tampón fosfato, L-DOPA, ácido kójico, ácido tricloroacético (Merck ,
Darmstadt, Alemania), suero bovino fetal (FCS, Gibco, Grand Island, NY, EE. UU.), L-glutamina
(Merck, Darmstadt, Alemania), carbonato de sodio y persulfato de sodio, sulfato ferroso,
acetato de sodio, sulfato de sodio anhidro y etanol absoluto se obtuvieron de Sigma Aldrich
Chem. Co. (Sigma, St. Louis, MO, EE. UU.) y estándares de HPLC (ácido gálico, (±)-α-tocoferol,
quercetina, ácido clorogénico, 3-O-glucósido de quercetina, vicenina 2, orientina, vitexina e
isovitexina (pureza del 95 % por HPLC) se obtuvieron de Merck (Lima, Perú),Extrasintetizador
mise (Genay, Francia) o Phytolab (Vestenbergsgreuth, Alemania).

2.2. Material vegetal y tratamiento de muestras

El estudio se realizó conOenocarpus batauafrutos de nueve poblaciones naturales ubicadas en
diferentes localidades seleccionadas de la Amazonía peruana (Cuadro1, Cifras1y2y Figura S1 en Material
complementario). Los puntos de recolección fueron seleccionados con la intención de cubrir localidades
dentro de los tres grupos genéticos distintos identificados en Perú paraOnocarpus bataua[6]. En este
sentido, frutos maduros, maduros, libres de infección fúngica, daño por insectos y daño físico fueron
seleccionados de esos lugares de recolección y transportados al laboratorio. Los frutos se despulparon
manualmente con un cuchillo, eliminando las semillas. A continuación, la fruta entera se liofilizó a−55◦C y
0,021 mbar durante 72 h (Alpha 1-2 LDplus, Christ, Alemania). Finalmente, el material de frutos secos se
redujo a un polvo fino utilizando un molino de cuchillas (Grindomix GM 200, Retsch, Haan, Alemania), se
envolvió en bolsas de plástico y se almacenó en un congelador a temperatura ambiente.−20◦C hasta su
uso. Los extractos fenólicos enriquecidos para actividades biológicas y análisis HPLC se prepararon
extrayendo cada uno de los frutos liofilizados y desgrasados (500 mg, desgrasado con 10 mL de hexano
tres veces) con 10 mL de etanol con ácido fórmico al 1% mediante extracción asistida por ultrasonido
(ELMA baño ultrasónico, GmbH, Alemania) a 600 W y 35 kHz de frecuencia durante 10 min. Después de la
extracción, los sobrenadantes se combinaron y centrifugaron durante 30 min a 9000 g, luego se filtraron
a través de papel Whatman número 1 y se concentraron al vacío a 40◦C para dar los extractos finales
(rendimientos en torno al 10%), que se almacenaron a−20◦C. Los sitios de recolección están
georreferenciados en la Tabla1.

Tabla 1.Georeferenciación de sitios de acopio de frutos de ungurahui.

Muestra Ubicación Distrito Provincia Región Latitud Longitud

Santa Rosa de mariscal
1 bellavista Loreto 03◦56′13.34"S 70◦13′28.66"W
Yavari RAMoen castilla
2 Hacienda Concepciónonorte Tambopata Tambopata madre de dios 12◦36′34.27"S 69◦04′49.12"73◦
3 jenaro herrera jenaro herrera Requena Loreto 04◦55′11.63"S 36′48.57"W 75◦
4 Contamana Contamana Ucayali Loreto 07◦18′38.93"S 00′10.76"W
San Juan
5 Allpahuayo Mishana maynas Loreto 03◦57′48.52"S 73◦25′09.40"W
Bautista
Fecha de salida
6 San Lorenzo Barranca Loreto 04◦43′55.49"S 76◦31′02.79"W
Marañonorte
7 Atalaya Atalaya Atalaya Ucayali 10◦42′26.79"S 73◦47′40.29"W
Nueva
8 Palestina la Rioja San Martíninorte 05◦55′0.00"S 77◦21′15.19"W
Cajamarca
9 atunes Nieva Condorcanqui amazonas 04◦36′55.36"S 77◦52′14.99"W
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2.3. Instrumento UHPLC-PDA-MS

El análisis de HPLC-MS se realizó como se describe por [7] con algunas modificaciones. Brevemente,
se utilizó un aparato UHPLC Scientific Ultimate 3000 conectado a una máquina Thermo Q exactive plus
(Thermo Fischer Inc., Bremen, Alemania). Para el análisis se disolvió el extracto (1 mg) en 1 mL de
metanol, se filtró (filtro de PTFE), y 10µSe inyectaron L en el instrumento, con todas las especificaciones
establecidas de la siguiente manera: Parámetros Escaneo completo de MS: IT máximo: 80 ms, objetivo de
AGC: 5×106Resolución: 35 000 Rango: 100–1500metro/z, Microescaneos: 1, Parámetros MS2 IT máximo:
100 ms AGC objetivo: 1×106, Gas portador: N2(Caudal de gas envolvente: 48, Caudal de gas de barrido: 2),
Resolución: 17 500, Parámetros de la fuente de ionización: ESI (positivo y negativo) voltios de
pulverización: 3,5/2,5 KV, Temperatura del capilar: 260◦C, temperatura del calentador de gas: 280/280◦C,
nivel de RF de lente S: 100.

2.4. Parámetros LC y parámetros MS

Material de frutas de los nueve.Oenocarpus batauapoblaciones seleccionadas de la Amazonía
peruana fue liofilizada, desengrasada con hexano y extraída con etanol, y estos extractos (Sección2.2) se
inyectaron en el sistema UHPLC (10µL a 1 mg/mL) y analizada para componentes fenólicos de acuerdo
con nuestro protocolo estándar anterior [7], utilizando una columna C-18 Luna© (Omega C-18 100 A,
Phenomenex 150 mm×2,1 mm×1.6µm) operado a 25◦C. Las líneas de detección fueron 254, 280, 330 y
354 nm, y se registró PDA a 200-800 nm para la identificación de picos. Las fases móviles fueron las
siguientes (A): solución fórmica acuosa al 1% y (B) acetonitrilo con ácido fórmico al 1%. El programa de
gradiente en tiempo (min), y porcentaje B) fue el siguiente: (0,00 min, 5% B); (1.500 min, 15B); (1,5
minutos, 5% B); (35,00 min, 95% B); (36,00, 95% B); (38,00 minutos, 5% B); Tiempo de espera de 15 min
antes de cada inyección. El caudal fue de 0,300 ml/min y el volumen de inyección fue de 10µL. Los
estándares y los extractos de frutas disueltos en metanol se mantuvieron a 10◦C durante el
almacenamiento en el inyector automático. Los compuestos se caracterizaron mediante la determinación
precisa del peso molecular de alta resolución (HRAM) y el uso de patrones de fragmentación de masa
típicos de compuestos fenólicos clásicos en Ungurahui y espectros UV-vis, que se obtuvieron mediante
un detector de matriz de fotodiodos (PDA), además de revisiones de la literatura de masa completa datos
espectrales.

2.5. Ensayos de actividad antioxidante

2.5.1. Prueba de DPPH

El DPPH•radical fue ensayado por el método de decoloración [8]. DPPH•radical (3,9 mL, 100µ
M disuelto en metanol al 80 %), se le agregó 0.1 mL del extracto disuelto (a 2 mg/mL en metanol al
80 %), previamente filtrado en un filtro de disco (0.45µm), la mezcla se dejó en la oscuridad
durante 30 min a 25◦C con agitación. Luego se tomó la absorbancia a 517 nm utilizando un
espectrofotómetro UV-visible Cary60 (Agilent, Santa Clara, CA, EE. UU.). La concentración de DPPH•
se generó a partir de una curva de calibración por regresión lineal. Los resultados se expresaron
en TEAC, o actividad antioxidante equivalente a Trolox (µmol Trolox/g de extracto). El antioxidante
sintético de referencia Trolox, en una concentración de 5–30µM en solución de metanol al 80 %, se
ensayó en las mismas condiciones. Se realizaron tres experimentos individualmente para la
solución de prueba y estándar y los valores se registraron como la media±SD (Y = 2.1871X +
2.6219; R2= 0,9996).

2.5.2. Capacidad de blanqueo ABTS

El ensayo ABTS se realizó blanqueando el radical catiónico ABTS•+ como se describe por Re et
al. [9]. Para la preparación del radical ABTS•+ 2,5 mL de la solución ABTS 7 mM, se mezcló con 2,5
mL de 2,45µpersulfato de sodio M durante 12 h en la oscuridad a 4◦C. Luego, la solución resultante
se diluyó con etanol absoluto hasta una absorbancia inicial de aproximadamente 0,70±Se obtuvo
0,02 a 734 nm. La reacción comenzó con la adición de 1500µL de ABTS•+ solución a 500µL del
extracto (2 mg/mL) en una cubeta mantenida a 30◦C. Se agitó vigorosamente y se dejó reaccionar
por 7 min, luego se leyó la absorbancia a 734 nm utilizando un espectrofotómetro UV-visible
Cary60 (Agilent, Santa Clara, CA, EE. UU.). Los resultados se expresan en TEAC (µmol Trolox/g de
extracto). La curva de calibración para TEAC
Antioxidantes2022,11, 1598 5 de 17

fue construido utilizando diferentes concentraciones de Trolox (4-14µM, Y = 3,9763X + 19,808; R2=
0,996) en solución tampón PBS en las mismas condiciones. Se realizaron tres experimentos
individualmente para la prueba y los valores se registraron como la media±DAKOTA DEL SUR.

2.5.3. Ensayo ORAC

Se empleó un método previamente establecido [10]. Se usó AAPH como generador de peroxilo. En
este ensayo, las soluciones de calibración Trolox, 40µL de muestra, más el blanco se mezclaron por
triplicado. La fluorescencia de la fluoresceína disódica (FL) de cada ciclo se midió utilizando un lector de
microplacas Synergy HTX (Biotek, Winooski, VT, EE. UU.). Los parámetros del lector de placas fueron el
tiempo de ciclo, 210 s; agitación orbital (ancho de agitación de 4 mm), retardo de posición, 0,3 s;
velocidad de inyección, 420µL/s, número de ciclo, 35; modo agitación, 8 s antes de cada ciclo. Los cálculos
se realizaron mediante una ecuación de regresión cuadrática entre el Trolox o la concentración de la
muestra y el área neta bajo la curva de caída de FL. Los datos se expresan como micromoles de
equivalentes de Trolox (TE) por gramo de muestra (µmol de TE g−1). Se realizaron tres experimentos por
triplicado para cada medición y los valores se registran como la media±SD, mientras que el área bajo la
curva (AUC) se calculó de la siguiente manera:

ABC = 0:5 + f4/f3 + f5/f3 + f6/f3 +···+f32/f4 + f33/f4)×Connecticut

donde f3 = lectura de fluorescencia en el ciclo 3; fn = lectura de fluorescencia en el ciclo n; CT, tiempo de

ciclo en minutos. (Y = 0.1451X + 1.4962; R2= 0,9721). (Figura S2 Material complementario).

2.6. Contenido de polifenoles (Test de Folin-Ciocalteu)

El contenido de fenoles se obtuvo por un método colorimétrico descrito por Velioglu et al. [11
] con algunas modificaciones. Brevemente, 100µL del extracto (a 2 mg/mL en metanol al 80%) se
mezcló con 750µL del reactivo de Folin-Ciocalteu (diluido en una proporción 1/10 de agua Milli-Q).
Después de 5 min en la oscuridad, 750µA la mezcla se le añadió L de bicarbonato de sodio (60 g/L).
Los tubos se mantuvieron en la oscuridad durante 90 min a 30◦C, luego se obtuvo la absorbancia a
725 nm utilizando un espectrofotómetro UV-visible Cary60 (Agilent, Santa Clara, CA, EE. UU.). Ácido
gálico (10–100µg, Y = 0.0076X−0,0182; R2= 0,9998) para la elaboración de la curva estándar. Luego
se expresó el contenido de compuestos fenólicos en mg de ácido gálico por gramo de extracto. Se
realizaron tres experimentos por triplicado para cada medición y los valores se registraron como la
media±DAKOTA DEL SUR.

2.7. Contenido de tocoferoles (vitamina E)

El análisis de tocoferoles se realizó por HPLC de acuerdo con lo descrito por Rezaire et al. [4],
con algunas modificaciones. Los frutos liofilizados (3 g) se colocaron en un matraz con ácido
ascórbico (1 g), metanol (150 mL) e hidróxido de potasio (50 mL; a 50 g/100 mL) a reflujo y
atmósfera de nitrógeno durante 40 min a 80ºC.◦C. Después de la saponificación y enfriamiento del
matraz con agua, se realizó la extracción de tocoferoles con diclorometano (10 mL, tres veces cada
uno, durante 10 min con sonicación). El aparato consistía en un cromatógrafo HPLC (Hitachi
LaCrhom Elite®, Tokio, Japón) equipado con un desgasificador de vacío, una bomba cuaternaria y
un detector de matriz de diodos (DAD). Se inyectaron 20 microlitros de extracto crudo disueltos en
metanol (1 mg/mL) en una columna (RP-18E, 250×4,6nm, 5µmetro). La fase móvil fue agua/
metanol (3/97v:v), y el caudal fue de 1,5 ml/min a 30◦C. La detección de tocoferoles se llevó a cabo
usando un espectrofluorómetro (longitud de onda de excitación: 295 mM; longitud de onda de
emisión: 330 nm). Se realizaron tres experimentos por triplicado para cada medición y los valores
se registraron como la media±DAKOTA DEL SUR. Las concentraciones se calcularon utilizando las
áreas de los picos. Las curvas de calibración se obtuvieron usando α-tocoferol comercial como
estándar. LOD y LOQ para α-tocoferol fueron 1,75 y 5,20µg/mL, respectivamente, (Y = 171.61X−
3,6903; R2= 0,998). Los resultados se obtuvieron a mg de equivalente de α-tocoferol/100 g de
materia seca.
Antioxidantes2022,11, 1598 6 de 17

2.8. Ensayo de actividad antiproliferación

La actividad de citotoxicidad y los efectos antiproliferativos de los extractos se detectaron con
el método descrito previamente por Viveros-Valdez et al. [12]. HeLa (ATCC)®CCL-2), MCF-7 (ATCC®
HTB-22) y HT-29 (ATCC®Se utilizaron líneas celulares de cáncer HTB-38). Las células se sembraron
en 25 cm2matraces de cultivo de tejidos en medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM) y se
añadió suero fetal bovino (FBS) al 10%, con un pH ajustado a 7,2. Mezcla de antibióticos compuesta
por estreptomicina-penicilina (10.000µg/ml: 10 000 UI/ml; Se añadió 1 mL de mezcla/1L de medio).
Las células se incubaron a humedad constante a 37◦C bajo un 5% de CO2/95% atmósfera de aire.
Las células se recolectaron mediante tripsinización y se evaluó su densidad mediante un
hemocitómetro (línea brillante, Sigma-Aldrich, Saint Louis, MO, EE. UU.) y viabilidad mediante
Trypan Blue (4%). Las diferentes líneas de células cancerosas se sembraron con 5000 células por
pocillo en una placa de 96 pocillos. Después de la incubación durante 24 h, 100µL de extractos de
frutas (62,5, 125, 500, 750 y 1000µg/ml) y se incubaron durante otras 24 h. En total, 20µSe
añadieron l de solución Alamar Blue Invitrogen™ (10 %) a cada pocillo. La placa se agitó y la
fluorescencia se midió después de 4 h en un fluorómetro FLx800 (BioTek Instruments, Winooski,
VT, EE. UU., 535 nm de excitación y emisión a 595 nm de longitud de onda). Se usó medio de cultivo
sin ningún extracto o compuesto como control cero (sin células muertas). Paclitaxel (Taxol), un
agente antiproliferativo y citotóxico, se utilizó como control positivo. Los resultados se presentan
como valores medios de SD. Cada medición se realizó al menos por triplicado. el CI50los valores se
calcularon mediante análisis probit [13].

2.9. Determinación de la inhibición de la colinesterasa

La inhibición de la actividad de la colinesterasa se realizó de acuerdo con el método de

Ellman, como se informó anteriormente [10], utilizando un lector de microplacas Synergy HTX
(Biotek, Winooski, VT, EE. UU.). Las muestras (2 mg/mL) se prepararon mezclando el tampón tris-
HCl (50 mM, pH 8,0), el reactivo 5-ditio-bis (ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB) a pH 8,0 y la solución
enzimática (AChE o BChE). La reacción comenzó simplemente agregando yoduro de acetil-tiocolina
(ATCI) o cloruro de butiril-tiocolina (BTCl). La absorbancia del extracto se midió a 405 nm después
de 30 min a 37◦C. Se realizaron tres experimentos por triplicado en cada prueba y los valores se
registraron como la media±DAKOTA DEL SUR. Los resultados se expresaron como IC50
(µg/mL, la concentración final de la placa osciló entre 0,05 y 25µg/mL). Se utilizó galantamina
como control positivo.

2.10. Determinación de la Composición Proximal

Se utilizaron los procedimientos de la AOAC en todas las determinaciones [14,15]. El contenido de
humedad se determinó utilizando un horno para secar la muestra (fruta fresca) hasta peso constante, el
contenido de proteína cruda obtenido por el método Kjeldahl (N×6.25), utilizando un aparato Kjelmaster
k375 (Büchi Labortechnik AG, Flawil, Suiza) y el contenido de fibra por método gravimétrico tras hidrólisis
ácida de las muestras, mientras que los lípidos totales obtenidos mediante un aparato Soxhlet (Sigma-
Aldrich, Saint Louis, MO, EE. UU.) usando éter de petróleo como solvente, el contenido de ceniza tomado
por una incineración en un horno de mufla a 550±15◦C. Los carbohidratos totales se calcularon como la
siguiente diferencia: 100−(g agua + g proteína + g fibra + g grasa + g ceniza). Los resultados se
expresaron en g por 100 g de peso fresco (g/100 g pf).

2.11. Análisis de minerales

Para el análisis mineral, las pulpas frescas se secaron a cenizas a 550◦C [15,dieciséis]. La
ceniza se hirvió en cada caso con 10 mL de ácido clorhídrico al 20% y luego se filtró en un matraz
estándar de 100 mL y se llevó a 100 mL con agua desionizada. Los niveles de los minerales potasio
(K), sodio (Na), calcio (Ca), magnesio (Mg), zinc (Zn), cobre (Cu), manganeso (Mn) y hierro (Fe) se
determinaron a partir de la solución resultante mediante análisis atómico. espectroscopía de
absorción (Varian AA240, Belrose, Australia), previamente calibrada con soluciones estándar que
contienen cantidades conocidas de los minerales que se están determinando con reactivos de
grado analítico. Se utilizaron los siguientes dos tipos de llamas: aire-acetileno y nitroso
Antioxidantes2022,11, 1598 7 de 17

óxido-acetileno, este último solo para análisis de calcio. Se utilizaron lámparas monometálicas de cátodo
hueco para cada elemento analizado. Todos los análisis se realizaron por triplicado.

2.12. Análisis fisicoquímico y perfil de ácidos grasos

Los análisis fisicoquímicos (índice de acidez, índice de peróxidos, índice de saponificación, índice de
yodo, materia insaponificable, índice de refracción y densidad), de los aceites extraídos de las pulpas
liofilizadas con éter de petróleo en frío, se realizaron según la metodología recomendada por la AOCS [17
]. El perfil de ácidos grasos (Figura S3 Material complementario) se obtuvo mediante cromatografía de
gases de ésteres metílicos de ácidos grasos (FAME). Los aceites se convirtieron en sus correspondientes
ésteres metílicos, los cuales se prepararon por saponificación y esterificación con hidróxido de potasio en
metanol (2 M). Los ésteres metílicos de ácidos grasos se extrajeron con hexano y se procesaron en un
cromatógrafo de gases Varian 450-GC (Walnut Creek, CA, EE. UU.). El cromatógrafo estaba equipado con
un VF-WAXms, 60 m×0,25 mm de diámetro interior, 0,25µm columna capilar, CP9207, detector de
ionización de llama y autoinyector Varian CP-8400. Se utilizó helio como gas portador. El programa de
temperatura utilizado fue el siguiente: 3 min a 130◦C; calentamiento gradual a 220◦C durante 9 minutos;
35 minutos a 220◦C, enfriamiento a 130◦C y 130◦C durante 5 min. La temperatura del detector fue de 280◦
C y la temperatura del inyector era de 245◦C [18]. Los ácidos grasos esterificados se identificaron y
cuantificaron por comparación con los tiempos de retención conocidos de los estándares inyectados
previamente. Para los ácidos grasos C16, C18, C18:1, C18:2, los LOD fueron: 2,2, 2,5, 2,3 y 3,4, y los LOQ
fueron: 25, 26, 28 y 54 ng, respectivamente.

2.13. Análisis estadístico

El análisis estadístico se realizó con el paquete de software originPro 9.1 (Originlab
Corporation, Northampton, MA, EE. UU.). La determinación se realizó al menos tres veces
para cada solución de muestra. Diferencias significativas entre medias por la comparación de
Tukey (pagsvalores < 0,05 se consideraron significativos).

3. Resultados y discusión
3.1. Propiedades Nutricionales y Fisicoquímicas de los Frutos de Ungurahui
Mesa2muestra la composición proximal de frutos de ungurahui de nueve poblaciones naturales,
como la humedad, cenizas, proteína, lípidos, carbohidratos y fibra, mientras que la Tabla3 muestra los
contenidos de minerales (macro y micronutrientes), y la Tabla4muestra las propiedades fisicoquímicas de
los aceites crudos de frutos de ungurahui. Los resultados de composición mostraron que el valor calórico
y el aporte nutricional de este fruto son similares a los mostrados por otras especies de palmeras [1],
pero con un alto contenido de proteína cruda (de 3,07 a 17,58 por ciento), fibra (de 11,58 a 22 por ciento)
y carbohidratos (de 12,10 a 27,50 por ciento). La porción comestible de los frutos se analizó para el
contenido de minerales (Ca, Na, Mg, K, Cu, Mn, Zn y Fe). Los frutos de ungurahui de poblaciones
totalmente naturales fueron generalmente altos en manganeso (de 34,47 a 65,29 mg Mn/100 g de
porción comestible), bajos en sodio (de 0,63 a 2,78, excepto la muestra 4 con 17,39 mg Na/100 g de
porción comestible) y moderada en magnesio (de 34,41 a 50,93 mg Mg/100 g porción comestible) y cobre
(de 0,58 a 1,06 mg Cu/100 g porción comestible). Los valores encontrados para manganeso y cobre están
de acuerdo con las cantidades diarias recomendadas en adultos, Cu (1 mg) y Mn (2 mg) [19]. En cuanto a
los ácidos grasos en total, algunas muestras mostraron un mayor contenido de ácidos grasos que el
informado previamente en Brasil (14,4 g/100 g) [2], y las proteínas totales en estas poblaciones naturales
peruanas fueron superiores a lo informado por Darnet et al. (4,9 g/100 g) [2], Mesa4, convirtiendo a esa
población peruana en frutas alimentos más saludables que sus contrapartes brasileñas. Las propiedades
fisicoquímicas de los aceites crudos y los perfiles de identificación de ácidos grasos de los aceites crudos
de frutos de ungurahui fueron diferentes a los informados por Serra et al. [17]. Por ejemplo, los índices
de acidez fueron más bajos que la muestra brasileña de Serra et al. (7,52 mg KOH/g) y el índice de
peróxido (20,85 meqO2/kg) y el índice de yodo fueron mayores (73,18 g I/100 g) [17]. En este estudio se
identificaron seis ácidos grasos. El ácido oleico fue mayoritario en todas las poblaciones naturales,
seguido del palmítico (Cuadro5). Estos resultados son consistentes con anteriores
Antioxidantes2022,11, 1598 8 de 17

estudios realizados por otros autores [2,3,20]. Sin embargo, la muestra 6, San Lorenzo, mostró el mayor
porcentaje de ácido oleico (83.35±0,61%). La proporción de ácidos grasos insaturados del aceite de
ungurahui es comparable a la del aceite de oliva, por lo que este aceite debe ser considerado dentro de
nuestra dieta por su buen valor nutritivo. Las diferencias observadas para las diferentes poblaciones de
diferentes parámetros medidos pueden deberse a los diferentes entornos (precipitación, suelo y
temperatura).

Tabla 2.Composición proximal de la pulpa del fruto de ungurahui expresada en g/100 g en peso fresco.

Muestra Humedad Cenizas Lípidos totales Proteína cruda Fibra cruda carbohidratos
1 37.42±0.38a 1.05±0.02a 16.19±0.58a 6.69±0.01a 22.00±0.47a 16.65
2 28.50±0,92b 1.41±0.02b 22.37±0.19b 13.98±0.14b 18.78±0,68b 14.96
3 32.50±0.50C 1.19±0.01C 23.01±0.35b 11.66±0.99C 19.54±0.93b 12.10
4 21.65±0.41d 1.93±0.03d 25,98±0.97C 11.64±0.07C 15.68±0.25C 23.12
5 35.33±0.52mi 1.81±0.02mi 18.14±0,68d 17.58±0.12d 11.58±0.06d 15.56
6 44.95±0.71F 1.29±0.03F 13.88±0.12mi 5.82±0.34mi 14.31±0.34ce 19.75
7 47.51±0.22gramo 1.30±0.03F 15.87±0.16a 3.19±0.33F 12.13±0.29d 20.00
8 26.91±0.51h 1.85±0.02mi 22.36±0.79b 7.56±0.22gramo 13.82±0,61mi 27.50
9 39.85±0.31i 1.45±0.01b 13.60±0.10mi 3.07±0.17F 15.54±0.50ce 26.49
Los valores marcados con la misma letra en la misma columna no son estadísticamente diferentes (pags<0,05).
Muestras: 1: Bellavista, 2: Hacienda Concepcion, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San
Lorenzo, 7: Atalaya, 8: Palestina, 9: Tunaants.

Tabla 3.Contenido de minerales (mg/100 g de pulpa fresca) de frutos de ungurahui.

Muestra k N/A California magnesio zinc cobre Minnesota Fe

1 3.50±0.11a 1.44±0.06a 49.41±1.51a 44.46±1.25a 1.00±0.02a 1.06±0.02a 3.63±0.07a 0.56±0.02a
2 8.08±0.21b 1.07±0.05b 15.32±0.58b 42.90±1.01a 0.79±0.03b 0.93±0.02b 3.58±0.15a 1.00±0.01b
3 4.32±0.20C 1.15±0.06abdominales 12.70±0.39antes de Cristo 50.63±0.77b 1.28±0.07C 0,68±0.02C 3.04±0.10b 0,68±0.02C
4 8.31±0.22b 17.39±0.36C 88.14±2.40d 65.29±2.11C 0.86±0.04b 0.86±0.03d 4.23±0.21C 1.18±0.04d
5 4.07±0.17discos compactos 1.75±0.06d 41.23±1.05mi 50.93±2.06b 0.52±0.02d 0.58±0.01mi 5.82±0.12d 0.71±0.07C
6 3.80±0.18anuncio 1.00±0.02b 6.88±0.25F 34.41±1.17d 0,61±0.03Delaware 0.72±0.02C 4.51±0.12C 0.77±0.05C
7 4.46±0.12C 0,63±0.03mi 69.99±1.50gramo 48.12±0.73abdominales 0.74±0.03novio 0,95±0.01b 10.60±0.41mi 0.58±0.02a
8 6.72±0.08F 2.78±0.06F 10.96±0.30C 41.11±1.76a 0,66±0.03ef 0.80±0.01F 3.36±0.09abdominales 0.73±0.03C
9 4.57±0.10C 1.38±0.04abdominales 15.46±0,67b 45.23±1.13a 0,60±0.03Delaware 0.90±0.03bd 3.13±0.06abdominales 0,66±0.03C.A

Los valores marcados con la misma letra en la misma columna no son estadísticamente diferentes (pags<0,05).
Muestra: 1:
Bellavista, 2: Hacienda Concepciónon, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San Lorenzo, 7:
Atalaya, 8: Palestina, 9: Tunaants.

Tabla 4.Propiedades fisicoquímicas de aceites crudos de frutos de ungurahui.

Índice de acidez Índice de peróxido Saponificación Índice de yodo insaponificable Índice de refracción
Muestra Densidad (g/cm3 )
(mgKOH/g) (meqO2/kg) Índice (mgKOH/g) (gl/100g) Asunto (%) (25◦C)
1 3.59±0.03a 7.05±0.23a 187.06±0,60a 117.44±0.20a 0,61±0.01a 1.465±0.00 0.91±0.00
2 4.14±0.06b 9.44±0.23b 180.90±0.50b 122.12±0.20b 0.86±0.03b 1.464±0.00 0.91±0.00
3 4.66±0.02C 8.91±0.23antes de Cristo 180.34±1.06b 112.36±0.34C 0.75±0.03C 1.459±0.00 0,92±0.00
4 3.52±0.16a 7.72±0.23d 171.61±0.32C 129.43±0.22d 0.51±0.01d 1.452±0.00 0.91±0.00
5 1,90±0.08d 7.32±0.23anuncio 177.82±0.22d 122.54±0.20ser 0.89±0.01b 1.462±0.00 0.91±0.00
6 1.39±0.03mi 7.50±0.22anuncio 182.43±1.36b 120.92±0.26F 0.88±0.02b 1.454±0.00 0.91±0.00
7 1.39±0.03mi 7.85±0.23d 179.59±0.47bd 116.86±0.33a 0.87±0.04b 1.432±0.00 0.91±0.00
8 2.16±0.07F 8.65±0.23C 171.42±0.29C 123.31±0.16mi 0.98±0.04mi 1.461±0.00 0.90±0.00
9 1.32±0.05mi 7.85±0.23d 179.91±0.54b 120.21±0.80F 0.85±0.04b 1.448±0.00 0.91±0.00

Los valores marcados con la misma letra en la misma columna no son estadísticamente diferentes (pags<0,05).
Muestra: 1:
Bellavista, 2: Hacienda Concepciónon, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San Lorenzo, 7:
Atalaya, 8: Palestina, 9: Tunaants.
Antioxidantes2022,11, 1598 9 de 17

Tabla 5.Perfil de ácidos grasos de aceites crudos de frutos de ungurahui.

Ácido graso

Muestra C16:0 C16:1 C18:0 C18:2 C18:3 Saturado Mononucleosis infecciosa-

C18:1 (oleico) Poli-UFA
(palmítico) (palmitoleico) (Esteárico) (Linoleico) (linolénico) FA UFA
1 13.22±0,64a 0.38±0.01a 2.75±0.03a 80.87±0,61a 2.10±0.05a 0,68±0.01a 15.97 81.25 2.78
2 12.17±0.31b 0.27±0.01b 4.96±0.03b 78.01±0,61b 3.87±0.05b 0.72±0.01b 17.13 78.28 4.59
3 11.93±0.28b 0.21±0.01C 3.44±0.03C 81.73±0,61C.A 2.03±0.05a 0,66±0.01C 15.37 81.94 2.69
4 11.87±0.24b 0.47±0.01d 3.99±0.03d 79.34±0,61d 3.66±0.05C 0,67±0.01d 15.86 79.81 4.33
5 12.53±0.34abdominales 0.27±0.00b 3.92±0.03d 78.41±0,61bd 4.12±0.05d 0.75±0.00b 16.45 78.68 4.87
6 11.60±0.26b 0.39±0.01a 1.47±0.03mi 83.35±0,61mi 2.70±0.05mi 0.49±0.01a 13.07 83.74 3.19
7 12.43±0.01abdominales 0.27±0.00b 5.07±0.03b 77.42±0,61b 4.07±0.05bd 0.74±0.00b 17.50 77.69 4.81
8 12.54±0.14abdominales 0.49±0.01d 1.55±0.03mi 82.29±0,61cf 2.39±0.05F 0.74±0.01b 14.09 82.78 3.13
9 11.43±0.15b 0.36±0.01a 2.52±0.03a 82.76±0,61ef 2.27±0.05si 0,66±0.01a 13.95 83.12 2.93
Los valores marcados con la misma letra en la misma columna no son estadísticamente diferentes (pags<0,05).
Muestra: 1:
Bellavista, 2: Hacienda Concepciónon, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San Lorenzo, 7:
Atalaya, 8: Palestina, 9: Tunaants.

3.2. Perfilado de metabolitos mediante UHPLC-ESI-MS/MS

A todos los frutos se les realizó el perfil de metabolitos con el correspondiente extracto desgrasado
por HPLC MS, con fines de identificación, y se cuantificaron los ácidos grasos y carotenoides. Figura3
muestra los cromatogramas de masa de UHPLC de corriente iónica total total de frutos de ungurahui de
las poblaciones naturales 1–9, y la Tabla6muestra el análisis completo de MS y la identificación tentativa
de los metabolitos detectados en las frutas de las poblaciones naturales. Figura4muestra las estructuras
de algunos compuestos fenólicos representativos. A continuación se presentan los análisis detallados. La
Figura S4, Material complementario, muestra algunos ejemplos de espectros de MS UHPLC Q-orbitrap.
Los iones hijos de MS son iones de diagnóstico para la identificación de los compuestos originales en
cada caso de grupo.

Tabla 6.Identificación orbitrap UHPLC PDA-Q de alta resolución de metabolitos en fracciones de frutos de
ungurahui de poblaciones naturales 1–9.

Masa medida
Retencion Tentativo Molecular Teórico Precisión EMnorteiones
Cima# UV máx. [METRO−H]−o Muestra
Tiempo (min) Identificación Fórmula Masa (metro/z) (dppm) (dppm)
[M + H]+(metro/z)

- 135.04477,
1 1.20 208 ácido quínico C7H11O6 191.0550 191.0557 2.34 1–9
85.02844
247.0612,
223.0611,
1-O-Sinapoyl- 205.0504,
2 1.32 329 C17H22O10 385.1142 385.1147 1.29 1–9
glucósido 190.0269
164.0704,
119.0342
395.0990,
4-O-(3′-O- 353.0876,
Glucopiranosil)- 191.0557,
3 8.21 325 C22H28O14 515.1401 515.1407 1.16 8
cafeína quínica 179.0344
ácido 161.0238,
135.0444
ácido siríngico
4 9.25 276, 328 C15 H19 O10 359.0981 359.0983 0,55 197.0453 2, 3, 6–9
glucósido
707.18420
(2M-H-),
Neoclorogénico
5 9.98 213, 287, 326 C17 H17O-9 353.08671 353.08804 3.78 191.05565 3
ácido
(quínico
mitad)
707.18463
(2M-H-),
6 10.12 213, 287, 326 Ácido clorogénico * C17H17O-9 353.08671 353.08826 4.38 191.05603 1–9
(quínico
mitad)
300.02634
271.0251,
255.0301,
quercetina
7 12.92 255–355 C21 H19O-11 463.08820 463.08630 4.10 178.9982 1–9
3-O-glucósido*
151.0032
(quercetina
aglicona)
Antioxidantes2022,11, 1598 10 de 17

Tabla 6.continuación

Masa medida
Retencion Tentativo Molecular Teórico Precisión EMnorte Ions
Cima# UV máx. [METRO−H]−o Muestra
Tiempo (min) Identificación Fórmula Masa (metro/z) (dppm) (dppm)
[M + H]+(metro/z)

3,5-Dcafeoilquínico - 353.08795,
8 13.34 213, 287, 326 C25 H23O12 515.11840 515.11932 1.78 3, 4
ácido 135.04449
3-cafeoil-5-
- 271.06137,
9 15.12 213, 287, 326 feruloilquínico C26H25O12 529.13405 529.13495 3.95 3, 9
135.04153
ácido
314.04166
Isorhamnetina-3-O- - isorham-
10 15.32 254, 354 C22 H21O12 477.10385 477.10159 4.73 1–9
glucósido redin
aglicona
191.0556,
179.0344,
Metilo
11 16.01 325 C17H20 O9 367.1031 367.10 35 1.08 161.0237, 3, 7
clorogenato
135.0443
93.0335
579.17193,
549.1613,
Apigenina di 519.1508
12 16.32 280 C-glucósido vicenina C27H29Odieciséis 609.14611 609.14609 0,69 521.1306, 1–9
2 491.1195,
473.1453,
457.1193
433.1080,
cianidina 271.0595,
13 16.87 520 3-O-(6-O-pags C30H27O13 595.14517 595.14529 0,67 215.0695, 1–9
cumaroil) glucosa 163.0596
127.0389
311.0556,
pelargonidina
14 17.92 520 C21H20O10 433.1121 433.1126 1.15 269.0460, 1, 3–9
3-O-glucósido
163.0031
313.0551,
271.0613,
Naringenina-5-O-
15 17.82 280 C21 H22O10 433.1132 433.1138 1.38 151.0030, 3, 5–9
glucósido
119.0493
93.00335
387.0322,
357.009797,
Luteolina-6-C-
329.0665,
dieciséis 18.02 265, 335 glucósido C21H19O11 -
447.09329 447.09148 − 4.04 1, 3–9
327.0668,
Orientación *
285.04046,
284.03128
387.0324,
359.07724,
Luteolina-8-C-
357.009792,
17 18.23 265,335 glucósido C21H19O 11
-
447.09326 447.09148 − 4.04 3–9
329.0666,
Isoorientina *
327.0671,
285.03122
371.0322,
389.0878,
Apigenina-6-C-
341.0822,
18 19.12 265,335 glucósido C21H19O 10
-
431.09832 431.09837 − 4.04 1–9
327.03135,
Isovitexina *
311.0717,
269.0454
metoxiresveratrol
19 18.53 283–303 C 27H33O14 581.1875 581.1870 − 0.84 243.0662 3, 6–9
diglucosa
metoxiresveratrol
20 20.01 283–303 C 27H33O14 581.1875 581.1873 − 0.34 243.0662 3, 9
diglucosa
metoxiresveratrol
21 20.23 283–303 C 27H33 O
13 565.1926 565.1921 − 0.88 243.0662 8, 9
rutinosa
Cianidina-3-O-
22 21.97 520 C 27H31O15 595.1663 595.1659 − 0,67 1–9
rutinósido
resveratrol
23 21.70 283–303 C 26H31O14 567.1719 567.1712 − 1.23 227. 0713 1–9
diglucosa
Hidroxiresveratrol
24 22.01 283–303 C 27H
33O12 551.1770 551.1765 − 0.90 243.0661 1–9
diglucosa

* Identificado mediante experimentos de enriquecimiento con compuesto auténtico. 1–9: frutas ungurahui. 1: Bellavista, 2:
Hacienda Concepciónon, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San Lorenzo, 7: Atalaya, 8: Palestina, 9:
Tunaants.
Antioxidantes2022,11, 1598 11 de 17

Figura 3.Cromatogramas UHPLC-PDA-ESI-OT-MS/MS (TIC, corriente iónica total) de frutos de ungurahui 1–9 de
poblaciones naturales.
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Figura 4.Estructuras de algunos compuestos fenólicos representativos detectados en frutos de

ungurahui: espermidina, pico 2, 1-O-Sinapoil-glucósido, pico 6, ácido clorogénico, pico 7, quercetina 3-O
-glucósido, pico 12, vicenina 2, pico 13, cianidina 3-O-(6-O-pags-cumaroil) glucosa y pico 21,
metoxiresveratrol rutinana.

3.2.1. antocianinas
Se identificaron tres antocianinas conocidas en los frutos (picos 13, 14 y 22) con iones
moleculares en modo positivo enmetro/z595.1451, 433.1126 y 595.1659 (C30H27O13, C21H20O
10y C27H31O15) y mostrando MS de diagnóstico2iones enmetro/z303 (MS3ion en metro/z257),
287 (MS3iones enmetro/z213, 147), 317 (MS3ion enmetro/z302), 301 (MS3ion enmetro/z
286) y 331 (MS3ion enmetro/z299, 179) respectivamente, correspondientes a la cianidina 3-O-(6-O-
pags-cumaroil) glucosa, pelargonidina 3-O-glucósido y cianidina-3-O-rutinosido (λ max: 275–
341sh-512), ref. [21] respectivamente. La identidad se verificó por coelución con antocianinas
estándar y datos de la literatura.

3.2.2. Flavonoides
El pico 7 y el pico 10 se identificaron como los compuestos relacionados quercetina 3-O-glucósido [
22] e isorhamnetina-3-O-glucósido, respectivamente (Tabla6). Pico 15, con UV max a 280 nm y un ion
pseudomolecular ametro/z: 433.1138, fue identificado como naringenina-5-O-glucósido (C21H22O10). Pico
16 con un ion MH- enmetro/z: 447.09148 fue identificado como el luteolin-
6-C-glucósido, isoorientina (C 21H19O11,−Uv max: 270 nm) y pico 18 como el relacionado
apigenina-6-C-glucósido, isovitexina (MS: 431.09837) [23], ambos mostrando pérdidas diagnósticas
típicas de 60, 90 y 120 Daltons. De la misma manera, el pico 12 con un ion MH- enmetro/z:
609.14609 se identificó como la apigenina di C-glucósido, vicenina 2 (C27H29Odieciséis) [24].

3.2.3. Derivados de resveratrol

Pico 19 con un ion MH- enmetro/z: 581.1870 fue identificado como metoxiresveratrol diglucosa (C
27H33O14), ref. [4]. De manera similar, el pico 20 se identificó como metoxiresveratrol diglucosa (C27H33O
14), el pico 21 como metoxiresveratrol rutinosa y el pico 23 como resveratrol diglucosa y el pico 24 como
un derivado hidroxilado de este último [4]. Los iones de resveratrol hijos son fragmentos de diagnóstico
para su identificación (Tabla6).
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3.2.4. Ácidos fenólicos

El pico 1 se identificó como ácido quínico, el pico 2 se identificó como 1-O-sinapoil-glucósido (C17H
22O10) [25] y el pico 4 como glucósido de ácido siríngico (C15H19O10). Los picos 5 y 6 muestran el aducto
de 2 iones MH enmetro/z: 707.18420 y padre ion alrededormetro/z: 353.08826, e iones hijos en
alrededormetro/z: 191.05603 (resto quínico) se identificaron como isómeros del ácido cafeoilquínico
(ácido clorogénico), ref. [26] pico 8 como el ácido 3,5-dicafeoilquínico relacionado (C25H23O12 −)
−
y el pico 9 como ácido 3-cafeoil-5-feruloilquínico (C 26H25O12), ref. [10] pico 11 como metilo
clorogenato (C17H20O9), mientras que finalmente, el pico 3 con un ion MH- enmetro/z: 515.1407 fue
identificado como 4-O-(3′-O-glucopiranosil)-cafeoil ácido quínico (C22H28O14). Los iones secundarios de
ácido quínico y ácido feruloílo hijos son fragmentos de diagnóstico para la identificación (Tabla6).

3.3. Actividad Antioxidante, Contenido Total de Polifenoles y Tocoferoles, Actividades

Antiproliferativas y Colinesterasa
En este estudio, las capacidades antioxidantes de las nueve poblaciones naturales se evaluaron
mediante la captura de ABTS, DPPH y ORAC por fluorometría y se expresaron comoµmol Trolox/g
extracto seco (Tabla7). La prueba ORAC es más sensible que las demás y se basa en el método de
fluorescencia que mide los radicales peroxilo, desarrollado por DeLange y Glaze en 1989. Esta es la
prueba más confiable utilizada en la industria de alimentos y frutas. Además, se evaluó el método de
Folin y Ciocalteu para el contenido de fenoles totales y se correlacionó con las capacidades antioxidantes.
El atrapamiento de radicales ABTS y DPPH mostró valores similares en las diferentes poblaciones
naturales y se correlacionó con los contenidos fenólicos para los frutos secos y desgrasados. La muestra
9, Tunaants, mostró la mayor capacidad de limpieza de DPPH en términos del contenido de equivalentes
de Trolox (2208.79µmol Trolox/g), pero curiosamente, en la prueba ORAC, la muestra 6, San Lorenzo,
mostró la mayor actividad de limpieza (1222.28µmol Trolox/g) y en ABTS, la más potente fue la muestra
5, Allpahuayo Mishana (1803.72µmol Trolox/g). Estos valores de actividad antioxidante son similares a los
informados por Rezaire et al. [4] para una muestra de ungurahui y cercana a la de la popular fruta assai.
Diferencias en la correlación entre los ensayos de antioxidantes (Tabla7) podría deberse a la diferente
naturaleza de los ensayos ya que el ensayo de capacidad de absorción de radicales de oxígeno (ORAC) se
basa en la transferencia de un átomo de hidrógeno y es diferente del ensayo de fenólicos totales Folin-
Ciocalteu', que se basa en la transferencia de un electrón, y las pruebas que involucran la transferencia
de un electrón y un átomo de hidrógeno, que incluyen el 2,2′-Azinobis-(3-etilbenzotiazolina-6-ácido
sulfónico (ABTS) y la prueba [2,2-di(4-tert-octilfenil)-1-picrilhidrazil] (DPPH). Sin embargo, se encontró una
buena correlación entre el total fenólico y el DPPH (r = 0.8615,pags<0,001) y ABTS (r = 0,7718,pags<
0,0001) ensayos de antioxidantes. Los valores obtenidos para todas las muestras sobre el contenido de
tocoferoles (de 6,46 a 8,19 mg de α-tocoferol/100 g de fruto seco) son consistentes con los encontrados
en la literatura [2–4]. Las actividades de colinesterasa de las poblaciones naturales de ungurahui se
presentan en la Tabla8. La muestra 3 fue la más poderosa en la inhibición de AChe (IC502.05±0.03µg/mL),
seguido de la muestra 4 (IC502.43±0.12µg/mL), y en la inhibición de BChE, la muestra 8 fue la más activa
(4.42±0.06µg/mL), seguido de las muestras 9 y 6 (Tabla8). Se ha demostrado que los compuestos
fenólicos son activos contra las colinesterasas. De hecho, algunos compuestos fenólicos polares de
plantas sudamericanas demostraron ser activos contra estas enzimas. Por ejemplo, el flavonoide polar
isoastilbin [7] mostró una buena actividad de inhibición explicada por el acoplamiento en los sitios de
colinesterasa AChE: 4,68±0.03 (51.70% a 2.2µM) y BChE: 8,51±0,03 (50,10 % a 2,2µM) enzimas. Otros
fenoles aislados, como la apigenina glicosilada y el kaempferol, mostraron energías de enlace de 9,76 y−
2,04 kcal/mol paratcAChE y−5.93 y−8.92 parahBChE, respectivamente, en los sitios activos de estas
enzimas [10]. Estos informes muestran la importancia de los fenoles en las frutas que podrían ser
adecuadas para su uso en la prevención de enfermedades neurodegenerativas. Las diferentes
actividades biológicas encontradas pueden estar relacionadas con pequeñas diferencias en la
composición fenólica, ácidos grasos y tocoferoles debido a diferencias en las condiciones de crecimiento
de las diferentes localidades de ungurahui y también diferencias en los valores ya publicados para otras
localidades amazónicas.
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Tabla 7.Actividad antioxidante (DPPH, ABTS, ORAC), contenido de fenoles totales y tocoferoles.

DPPH ABTS ORAC Fenólico total Contenido de tocoferoles

Muestra
(µmol Trolox/g) (µmol Trolox/g) (µmol Trolox/g) (mg AG/g) (mgα-Tocoferol/100 g)
1 1510.94±73.90a 870.57±16.05a 869.74±17.75a 1408.90±27.46a 6.46±0.12a
2 1402.18±20.51b 748.81±14.43b 521.71±11.87b 1468.95±25.57abdominales 8.19±0.08b
3 1557.51±17.05a 892.65±11.55a 715.81±6.47C 1428.68±19.74abdominales 6.85±0.07C
4 1356.08±17.93b 831.51±14.82C.A 687.94±7.65C 1373.63±16.25a 6.55±0.04anuncio
5 2082.27±41.10C 1803.72±20.86d 921.30±3.06d 2037.70±24.95C 6.76±0.08discos compactos

6 962.21±13.46d 804.64±15.80antes de Cristo 1222.28±20.88mi 1003.63±18.31d 6.63±0.07ac

7 1727.35±36.07mi 1306.66±31.51mi 1109.19±3.34F 1475.99±21.00b 7.23±0.08mi
8 1798.72±24.56mi 1263.57±20.49mi 914.48±17.66gramo 1268.19±10.95mi 7.71±0.07F
9 2208.79±29.54F 1441.71±26.74F 997.97±9.01b 1900.18±29.20F 6.91±0.07C
Muestra: 1: Bellavista, 2: Hacienda Concepcion, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San Lorenzo,
7: Atalaya, 8: Palestina, 9: Tunaants. Los valores marcados con la misma letra en la misma columna no son
estadísticamente diferentes (pags<0,05).

Tabla 8.Actividad antienzimática (AChE y BChE) de frutos de ungurahui (IC50±DAKOTA DEL SUR,µg/mL).

Muestra CI50Dolor CI50BChE

1 4.52±0.08a 7.13±0.10a
2 8.22±0.06b 10.40±0.07b
3 2.05±0.03C 5.95±0.02C
4 2.43±0.12d 22.38±0.04d
5 2.91±0.04mi 7.02±0.01a
6 2.82±0.07mi 4.78±0.04mi
7 8.20±0.15b 11.30±0.04F
8 6.46±0.04F 4.42±0.06gramo
9 2.52±0.03d 4.66±0.06mi
Galantamina * 0.26±0.01gramo 3.82±0.03h
Muestra: 1: Bellavista, 2: Hacienda Concepcion, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San Lorenzo, 7:
Atalaya, 8: Palestina, 9: Tunaants. * Control positivo. Los valores marcados con la misma letra en la misma columna no son
estadísticamente diferentes (pags<0,05).

La actividad antiproliferativa de los diferentes extractos se examinó mediante el método de cultivo celular
utilizando las líneas celulares de cáncer de mama humano dependiente de estrógeno MCF-7, cáncer de colon
Ht-29 y tumor de cuello uterino HeLa. CI50Los valores (concentración que inhibe el crecimiento del cultivo
celular en un 50%) se obtuvieron a partir de la concentración del extracto ensayado, utilizando gráficos de
relaciones de viabilidad celular (expresadas en porcentaje con respecto al control). el CI50
los valores de las muestras se muestran en la Tabla9. Según lo establecido por el Instituto Nacional
del Cáncer (NCI, EE. UU.), un extracto crudo puede considerarse activo cuando IC50≤20 (µg/mL). Es
interesante notar el efecto casi exclusivo que los extractos analizados mostraron contra el
crecimiento de células de cáncer de mama MCF-7 hormono-dependientes, lo que permite suponer
que el efecto inhibidor está más relacionado con la estructura de ciertos flavonoides (como
apigenina y luteolina) con su capacidad antiestrogénica [27], que con la capacidad antioxidante y
antienzimática (AChE y BChE), así mismo ya se ha demostrado que se podrían detectar algunos
flavonoides y resveratrols ya que varias moléculas derivadas de resveratrols. En este sentido, la
fitoalexina resveratrol, presente en la uva y otras frutas y productos derivados, es un compuesto
anticancerígeno y también es antiinflamatorio, antimutagénico y antioxidante. Se demostró que
induce enzimas metabolizadoras de fármacos de fase II e inhibe la ciclooxigenasa y la
hidroperoxidasa.28]. Por otro lado, es importante considerar que estos frutos han sido
consumidos de forma segura desde la época prehispánica por las poblaciones amazónicas, lo que
podría explicar la escasa o nula actividad citotóxica/antiproliferativa que mostraron frente a las
líneas celulares Ht-29 y HeLa a nivel dosis analizadas.
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Tabla 9.Actividad antiproliferativa de frutos de ungurahui (IC50±DAKOTA DEL SUR,µg/mL).

Muestra MCF-7 Ht-29 hela

1 443±57b 864±121a > 1000
2 270±15d > 1000 > 1000
3 484±33b > 1000 > 1000
4 685±88a 723±48b > 1000
5 366±21C 765±sesenta y cincob > 1000
6 255±17d > 1000 > 1000
7 291±25d > 1000 > 1000
8 747±97a > 1000 > 1000
9 > 1000 > 1000 > 1000
Taxol* 13±1mi 15±2C 11±1
Muestra: 1: Bellavista, 2: Hacienda Concepcion, 3: Jenaro Herrera, 4: Contamana, 5: Allpahuayo Mishana, 6: San Lorenzo,
7: Atalaya, 8: Palestina, 9: Tunaants. * Control positivo. Los literales de cada columna muestran diferencias significativas
entre cada determinación, según la prueba de Tukey (pags<0,05).

4. Conclusiones
En este estudio se detectaron 24 compuestos en poblaciones naturales de frutos de ungurahui de
la Amazonía peruana. De ellos, nueve eran ácidos fenólicos (picos 1–6, 8, 9 y 11), cuatro flavonoides de C-
glicosilo (picos 12, 16, 17 y 18), dos flavonoles (picos 7 y 10), un flavanol (pico 15), tres antocianinas (picos
13, 14 y 22) y cinco derivados del resveratrol (picos 19–21, 23 y 24). La mayoría de las muestras mostró
una excelente actividad antioxidante, mientras que algunas muestras mostraron una buena actividad
contra la inhibición de las enzimas colinesterasa, y algunas muestras fueron ligeramente
antiproliferativas contra la línea celular de cáncer de mama MCF-7. Nuestro estudio mostró que la
química más los resultados de bioactividad obtenidos con diferentes poblaciones naturales de frutos de
ungurahui, que pueden considerarse sobresalientes, abre la puerta al uso potencial de esta planta para
el manejo de enfermedades crónicas. El cultivo y/o repoblación de esta palmera, seleccionando como
semillero las poblaciones naturales destacadas, dota a este fruto común de la capacidad de ser una rica
fuente de sustancias bioactivas que pueden potenciar su consumo, no sólo como alimento sino también
como una medicina natural La química y la bioactividad de Ungurahui le dan a esta especie un gran
potencial para bionegocios, mejorando la calidad de vida de los pueblos amazónicos que viven de los
recursos del bosque.

Materiales complementarios:La siguiente información de apoyo se puede descargar en:https: //

www.mdpi.com/article/10.3390/antiox11081598/s1, Figura S1: Palmeras con frutos, Figura S2: Curva
ORAC con muestras de Ungurahui, Figura S3: Perfiles de ácidos grasos, Figura S4: Ejemplo de algunos
espectros UHPLC-Q-Orbitrap, picos 6, 7 y 16.

Contribuciones de autor:Conceptualización, MJS y GV-A.; colecciones de frutas,UNA.MRd-C.;

metodología, análisis HPLC formal PDA-MS, CQ y MJS; ensayos de antioxidantes in vitro, CM-Z. y
UNA.MRd-C.; ensayos antiproliferativos in vitro, EV-V.; recursos, GV-A., MJS, redacción—preparación
borrador original, CQ, CM-Z., EV-V., EV-V., MJS y GV-A.; redacción—revisión y edición, MJS y GV-A.;
administración de proyectos y adquisición de fondos, GV-A. Todos los autores han leído y aceptado
la versión publicada del manuscrito.

Fondos:Esta investigación fue financiada por CONCYTEC, a través de su unidad ejecutora ProCiencia
[Contrato N◦101-2018-FONDECYT]. MJS reconoce fondos de FONDECYT 1220075.

Declaración de la Junta de Revisión Institucional:No aplica.

Declaración de consentimiento informado:No aplica.

Declaración de disponibilidad de datos:Los datos están contenidos en el artículo y materiales complementarios.

Expresiones de gratitud:Milena Ríos es reconocida por su ayuda en pruebas in vitro, y a Lizardo Fachin-Malaverri por la
elaboración del mapa de ubicación de los sitios de recolección de frutas.

Conflictos de interés:Los autores declaran no tener conflicto de intereses.

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Referencias
1. Jaramillo-Vivanco, T.; Balslev, H.; Montetulejos, R.; Camara, RM; Giampieri, F.; Battino, M.; CaMara, M.; Alvarez-Suarez, JM Tres palmas amazónicas
como fuentes subestimadas y poco conocidas de nutrientes, compuestos bioactivos e insectos comestibles.Química alimentaria 2022,372,
131273. [Referencia cruzada] [PubMed]
2. Darnet, SH; da Silva, LHM; Rodrigues, AMdC; Lins, RT Composición nutricional, contenido de ácidos grasos y tocoferoles de pulpa de frutos de buriti
(Mauritia flexuosa) y patawa (Oenocarpus bataua) de la región amazónica.Cimincia e Tecnol. Alimento.2011,31, 488–491. [Referencia cruzada]

3. mestulejos, R.; Laffargue, A.; Pintaud, JC; Hamon, S.; Avallone, S.; Dussert, S. Oenocarpus bataua Mart. (arecaceae): redescubriendo una fuente de aceite
vegetal alto oleico de la amazonia.Mermelada. Química del aceite. Soc.2010,87, 167–172. [Referencia cruzada]
4. Rezaire, A.; Robinson, JC; Bereau, D.; Verbaere, A.; Sommerer, N.; Kan, MK; Durand, P.; Prost, E.; Fils-Lycaon, B. Palma amazónica
Oenocarpus bataua (“patawa”): Actividad antioxidante química y biológica-Composición fitoquímica.Química alimentaria2014, 149, 62–
70. [Referencia cruzada] [PubMed]
5. Leba, LJ; Brunschwig, C.; Saout, M.; Marcial, K.; Bereau, D.; Robinson, JC Folletos y raíces de Oenocarpus bacaba y Oenocarpus bataua: una nueva
fuente de compuestos antioxidantes.En t. J. Mol. ciencia2016,17, 1014. [Referencia cruzada]
6. Escobar, S.; Pintaud, J.; Balslev, H.; Bernal, R.; Carnero Moraesirez, M.; Molinoan, B.; Montetuhasta ahora, R. Estructuración genética en una palma neotropical
analizada a través de un escenario-orogénesis andino.Ecol. Evol.2018,8, 8030–8042. [Referencia cruzada]
7. Barrientos, R.; Helechoandez-Galleguillos, C.; Pastene, E.; Simirgiotis, M.; Romero-Parra, J.; Ahmed, S.; Echeverria, J. Análisis metabolómico,
aislamiento rápido de compuestos fenólicos y evaluación de actividades biológicas de la corteza de Weinmannia trichosperma Cav.
(Cunoniáceas).Frente. Farmacol.2020,11, 780. [Referencia cruzada]
8. Brand-Williams, W.; Cuvelier, ME; Berset, C. Uso de un método de radicales libres para evaluar la actividad antioxidante.LWT-ciencia de los alimentos. Tecnología 1995,28,
25–30. [Referencia cruzada]
9. Re, R.; Pellegrinia, N.; Protegente, A.; Pannalaa, A.; Yang, M.; Rice-Evans, C. Actividad antioxidante aplicando un ensayo mejorado de decoloración de cationes
radicales ABTS.Radico libre. Biol. Medicina.1999,26, 1231–1237. [Referencia cruzada]
10. Larrazabal-Fuentes, MJ; Helechoandez-Galleguillos, C.; Palma-Ramirez, J.; Romero-Parra, J.; SeptuIveda, K.; Galetovic, A.; gonzalezalez,
j.; Paredes, A.; BoÁrquez, J.; Simirgiotis, MJ; et al. Perfil químico, potencial antioxidante, anticolinesterásico y antiprotozoario de
Artemisia copa Phil. (Asteráceas).Frente. Farmacol.2020,11, 1. [Referencia cruzada]
11. Velioglu, YS; Mazza, G.; Gao, L.; Oomah, BD Actividad antioxidante y compuestos fenólicos totales en frutas, verduras y cereales seleccionados.J. Agric.
Química alimentaria1998,46, 4113–4117. [Referencia cruzada]
12. Viveros-Valdez, E.; Rivas-Morales, C.; Oranday-CaRdenas, A.; Castro-Garza, J.; Carranza-Rosales, P. Efecto antiproliferativo del poleo
mexicano (Hedeoma drummondii).J.Med. Alimento2010,13, 740–742. [Referencia cruzada]
13. Carranza-Torres, IE; Guzman-Delgado, NE; Coronado-Martinez, C.; Bañuelos-Garcia, JI; Viveros-Valdez, E.; másan-Martinez,
j.; Carranza-Rosales, P. Cultivo organotípico de explantes de tumores de mama como sistema multicelular para el cribado de compuestos
naturales con potencial antineoplásico.Res. biomédica. En t.2015,2015, 618021. [Referencia cruzada]
14. Métodos oficiales de análisis de AOAC International-18th Edition, Revisión 3. Disponible en línea:https://www.techstreet.com/standards/
official-methods-of-analysis-of-aoac-international-18th-edition-revision-3?product_id=1678986(consultado el 12 de julio de 2021).

15. Vargas-Arana, G.; Merino-Zegarra, C.; Riquelme-Penaherrera, M.; Nonato-Ramírez, L.; Delgado-Wong, H.; Pertino, MW; Parra,
C.; Simirgiotis, MJ Capacidades antihiperlipidémicas y antioxidantes, análisis nutricional y caracterización uhplc-pda-ms de frutos de
cocona (Solanum sessiliflorum dunal) de la amazonía peruana.Antioxidantes2021,10, 1566. [Referencia cruzada]
16. Asaolu, MF; Asaolu, SS Composiciones próximas y minerales de Solanum melongena cocinada y sin cocinar.En t. J. ciencia de los alimentos. Nutrición2002,53,
103–107. [Referencia cruzada]
17. Serra, JL; Rodrigues, AMdC; de Freitas, RA; Meirelles, AJdA; Darnet, SH; Silva, LHM Fuentes alternativas de aceites y grasas de plantas
amazónicas: Ácidos grasos, metiltocoles, carotenoides totales y composición química.Alimentos Res. En t.2019,116, 12–19. [Referencia
cruzada]
18. Vargas-Arana, G.; Merino-Zegarra, C.; Tang, M.; Pertino, MW; Simirgiotis, MJ Caracterización por UHPLC–MS y análisis antioxidante y
nutricional de harinas de desecho de cacao de la Amazonía peruana.Antioxidantes2022,11, 595. [Referencia cruzada]
19. Gabarra, AG; Soley, MC; Helechoandez, AC Ingestas de energíaiay nutrientes recomendados en la Union Europea: 2008–2016. Nutrición Hosp.
2017,34, 490–498. [Referencia cruzada]
20. Da Cruz Rodrigues, AM; Darnet, S.; Da Silva, LHM Perfiles de ácidos grasos y contenido de tocoferoles de frutos de buriti (mauritia
flexuosa), patawa (oenocarpus bataua), tucuma (astrocaryum vulgare), mari (poraqueiba paraensis) e inaja (Maximiliana Maripa).
J. Brasil. química Soc.2010,21, 2000–2004. [Referencia cruzada]
21. Leon-gonzalez, AJ; Sharif, T.; Kayali, A.; Abbas, M.; Dandache, I.; Etienne-Selloum, N.; Kevers, C.; Pincemail, J.; Auger, C.; Chabert, P.; et al.
Delphinidin-3-O-glucósido y delphinidin-3-O-rutinósido median el efecto proapoptótico relacionado con la caspasa 3 sensible a redox del jugo
de grosella negra en las células de leucemia Jurkat.Función J. Alimentos2015,17, 847–856. [Referencia cruzada]
22. Simirgiotis, MJ; Theoduloz, C.; Caligari, PDS; Schmeda-Hirschmann, G. Comparación de la composición fenólica y las propiedades antioxidantes de
dos genotipos de fresa nativa chilena y una doméstica.Química alimentaria2009,113, 377–385. [Referencia cruzada]
23. Simirgiotis, MJ; Schmeda-Hirschmann, G.; BoÁrquez, J.; Kennelly, EJ La fruta Passiflora tripartita (maracuyá): una fuente de glucósidos C
flavonoides bioactivos aislada por HSCCC y caracterizada por HPLC-DAD-ESI/MS/MS.Moléculas2013,18, 1672–1692. [Referencia
cruzada] [PubMed]
Antioxidantes2022,11, 1598 17 de 17

24. Ferreres, F.; Silva, BM; Andrade, PB; Seabra, RM; Ferreira, MA Aproximación al estudio de C-glicosil flavonas por trampa de iones HPLC-
PAD-ESI/MS/MS: Aplicación a semillas de membrillo (Cydonia oblonga).Fitoquímica. Anal.2003,14, 352–359. [Referencia cruzada] [
PubMed]
25. Pereira, APA; Angolini, CFF; Adani, HB; Usberti, FCS; Paulino, BN; Clerici, MTPS; Neri-numa, IA; Moro, TdMA; Eberlin, MN; Pastore,
GM Impacto de la maduración en los componentes promotores de la salud de la fruta-do-lobo (Solanum lycocarpum
San Colina).Alimentos Res. En t.2021,139, 109910. [Referencia cruzada] [PubMed]
26. Willems, JL; Khamis, MM; Mohamed Saeid, W.; Purves, RW; Katselis, G.; Bajo, NH; El-Aneed, A. Análisis de una serie de isómeros de ácido
clorogénico utilizando movilidad iónica diferencial y espectrometría de masas en tándem.Anal. quim. acta2016,933, 164–174. [Referencia
cruzada]
27. Collins-Burow, BM; Burow, ME; Duong, BN; McLachlan, JA Actividades estrogénicas y antiestrogénicas de los fitoquímicos flavonoides a través de
mecanismos dependientes e independientes de la unión al receptor de estrógeno.Nutrición Cáncer2000,38, 229–244. [Referencia cruzada]

28. Jang, M.; Cai, L.; Udeani, IR; Desaceleración, KV; Tomás, CF; Beecher, CWW; Fong, HHS; Farnsworth, NR; Kinghorn, AD; Mehta, RG; et al.
Actividad quimiopreventiva del cáncer del resveratrol, un producto natural derivado de las uvas.Ciencias1997,275, 218–220. [
Referencia cruzada]