“Separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina y determinación de colesterol en

la yema de huevo”
Arteaga Arellano Katrina Ryane, Hurtado Mancilla Jesús Daniel | 3FV2 | Sección II
Introducción Resultados
Los lípidos son biomoléculas orgánicas formadas M Dm Ds Rf
básicamente por carbono e hidrógeno, y en porcentajes cm cm (Dm/Ds)
muchos más bajos de oxígeno, fósforo, nitrógeno y 1 0.3 0.049
azufre, son un grupo heterogéneo de compuestos
hidrofóbicos y solubles en solventes no polares.
2 2.4 6.05 0.396
clasificación: Los lípidos se clasifican en simples y 3 4.2 0.694
complejos; los simples son derivados del isopreno y no
Ninhidrina
son saponificables debido a que no contienen ácidos
grasos, y los complejos son saponificables gracias a qué Presencia de manchas violeta:
contienen ácidos grasos. Algunos ejemplos de lípidos grupo amino
simples es colesterol, hormonas sexuales, ácidos
biliares, algunas vitaminas, terpenos (se sintetizan a M Dm Ds Rf
partir del acetil coenzima A), prostaglandinas (son cm cm (Dm/Ds)
moderadores de la actividad hormonal), y esteroides 1 1.1 0.17
(derivados de alcoholes cíclicos de alto peso molecular).
En lípidos complejos tenemos a triacilglicéridos (son
2 2.9 0.46
esteres del glicerol y ácidos grasos), esfingolípidos y 6.2
3 3.1 0.5
fosfoacilgliceridos (presentan grupo fosfato), ceras (son
esteres de ácidos grasos con alcoholes diferentes al 4 4.1 0.66
Molibdato
glicerol).
El colesterol se clasifica cómo un lípido esteroide, Presencia de manchas azules:
formado por una molécula de lípidos
ciclopentanoperhidrofenantreno,
constituida por cuatro carbociclos
condensados o fundidos, M Dm Ds Rf
denominados, A, B, C y D, cm cm (Dm/Ds)
que presentan varias 1 1.8 0.29
sustituciones. 6.2
2 3.0 0.48
El colesterol es necesario para la formación de
hormonas, metabolismo de la vitamina D,
imprescindible para la absorción de ácidos biliares. Presencia de manchas
Bismuto amarillo-naranja: Colina
La cromatografía en capa fina es útil para la separación
de diversas clases de lípidos, antes de que esté técnica
se aplique, Los lípidos deben extraerse de los tejidos por
un sistema de solventes, generalmente cloroformo- M Dm Ds Rf
metanol 2:1. cm cm (Dm/Ds)
Fundamento de la reacción de Lieberman-Burchard: En 1 1.3 0.20
solución clorofórmica, el colesterol reacciona con
anhídrido acético y ácido sulfúrico, para dar color verde, 2 2.5 0.39
que resulta de la mezcla de un complejo color azul y otro
3 3.3 0.51
amarillo y que se cuantifica a 640 nm.
Yodo 6.4
Importante: Realizar lecturas antes de 20 minutos 4 3.7 0.57
debido a que es una reacción inestable.
Presencia
Objetivos 5 5.2 0.81
de
manchas 6 6.3 0.98
▪ Aplicar la técnica de cromatografía en
café:
capa fina para la separación de los
dobles
fosfolípidos de la yema de huevo
enlaces
▪ Obtener una curva tipo de absorbancia en
función de la concentración de colesterol
por el método de Lieberman-Burchard
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Fosfolípido Rf Discusión
Lisofosfatidil colina 0.17
Esfingomielina 0.26 Molibdato: La prueba de molibdato salió
Fosfatidil colina 0.33 positiva (color azul) así como lo marca la
Fosfatidil serina 0.33 teoría, ya que la yema de huevo está
Fosfatidil 0.71
etanolamina constituida de 28% de fosfolípidos y
Lípidos neutros 1.0 recordemos que el reactivo de molibdato nos
Tabla de valores teóricos de los fosfolípidos ayuda a identificar fosfolípidos en general, ya
que el reactivo se une con los grupos fosfatos
Curva tipo de absorbancia contra µg de revelando este color azul.
colesterol Bismuto: La reacción del bismuto nos ayuda a
identificar fosfolípidos con colina, la teoría
Abs µg de colesterol
marca que la yema de huevo contiene colina
0 (0𝑚𝐿)(80µg)
1𝑚𝐿
=0 en bajas proporciones y al hacer el
0.157 (0.25𝑚𝐿)(80µg) cromatograma nos dio un color amarillo
1𝑚𝐿
=20 brillante que indica que la prueba es positiva.
0.138 (0.50𝑚𝐿)(80µg)
=40 Ninhidrina: El reactivo de ninhidrina nos ayuda
1𝑚𝐿
(0.75𝑚𝐿)(80µg) a identificar fosfolípidos con grupos amino, la
0.223 =60
1𝑚𝐿 teoría muestra 2 tipos de fosfolípidos con
0.177 (1.0𝑚𝐿)(80µg) grupo amino (lisofosfatidil serina y
1𝑚𝐿
=80
fosfatidietanol amina), en la práctica salieron
0.331 (1.25𝑚𝐿)(80µg)
1𝑚𝐿
=100 manchas violetas que indican una prueba
positiva.
Yodo: Los cristales de yodo indican lípidos con
0.4 dobles enlaces al presentar color café, en la
práctica se revela la presencia de lípidos
0.3 saturados en la yema de huevo ya que estos
Absorbancia

tienen doble enlaces.

0.2 Las placas realizadas con reactivo de
molibdato y de yodo actuaron como referencia
0.1
puesto que muestran todos los fosfolípidos
0 presentes en la yema de huevo.
0 20 40 60 80 100 En la placa de bismuto presenta 3 Rf, fosfatidil
colina, esfingomielina, y lisofosfatidil colina
que son fosfolípidos que contiene colina en su
Y=2.5714x+0.0424
estructura.
En la extracción de colesterol en yema de
huevo se usó el modelo de Lieberman-
Para calcular µg de colesterol Burchard para hacer reaccionar el colesterol
con el anhídrido acético y ácido sulfúrico que
𝐴𝑏𝑠 − 0.0424 da un complejo de color verde, el cuál es
𝑥=
2.5714 derivado de la reacción del grupo hidroxilo con
los reactivos y el aumento de la conjugación
Tubo Abs µg de colesterol
de la instauración en el anillo fusionado
B 0 0 adyacente.
1 0.157 0.044 En los valores de absorbancia se muestra
2 0.138 0.037 cómo va aumentando la concentración de
3 0.223 0.070 colesterol, algo que es lógico ya que en la
4 0.177 0.052 práctica se fue aumentando los mililitros de
5 0.331 0.112 estándar de colesterol siendo el 5to tubo el
más concentrado y el tubo B el menos
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concentrado. Dándonos una ecuación del tipo
lineal, con pendiente positiva.

Conclusión
▪ La yema de huevo contiene
fosfolípidos con grupos amino (2),
fosfolípidos con colina (3) y
fosfolípidos insaturados (con dobles
enlace).
▪ La cantidad de colesterol de la yema
de huevo depende de varios factores
como lo es: tamaño de la yema de
huevo (entre más grande más
concentración de colesterol) y las
condiciones generales de la gallina.
▪ La intensidad del color formado por la
reacción de Lieberman-Burchard es
proporcional a la concentración del
colesterol.
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