Práctica No. 5 Procedimiento Operativo Estándar (POE) : Pruebas de Identificación Cocos Gram Positivo

UNIVERSIDAD GALILEO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD (FACISA)

TECNICO UNIVERSITARIO EN LABORATORIO CLÍNICO
BACTERIOLOGÍA
Práctica No. 5
Procedimiento Operativo Estándar (POE):
Pruebas de Identificación Cocos Gram positivo
Streptococcus spp.
Equipo, reactivos, insumos:

o Incubadora 35º - 37ºC
o Mechero Bunsen
o Refrigeradora
o Agar sangre de Carnero al 5%
o Disco de Bacitracina 0.04 unidades (Taxo A)
o Disco de Trimetoprim sulfametoxazol (SXT)
o Disco de Optoquina (Taxo P)
o Jarra Gaspak
o Candela
o Asas bacteriológicas
o Gradillas
o Soporte para asas
o Palillos
o Pinzas
o Alcohol 70%
o Jabón desinfectante
o Toallas desechables
o Fósforos
o Guantes
o Mascarilla
o Lentes de seguridad
o Cepas de Streptococcus spp. ATCC
o Cepa de Staphylococcus aureus productor de doble hemólisis
Streptococcus spp.
Los estreptococos son organismos anaerobios facultativos, Gram Positivo que a menudo
aparecen formando cadenas o por pares. Catalasa-negativo. Los estreptococos se
subdividen en grupos mediante anticuerpos que reconocen a los antígenos de superficie.
Estos grupos incluyen una o más especies. Las agrupaciones de estreptococos más
importantes son A, B, y D. Entre los grupos de estreptococos, la enfermedad contagiosa
(específicamente faringitis) es causada por Streptococcus pyogenes del grupo A.
Licda. Claudia Mérida

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BACTERIOLOGÍA
Streptococcus pneumoniae (es la causa principal de pulmonía humana), Streptococcus

mutans y otros estreptococos llamados viridans (entre las causas de caries dental) no
pertenecen a grupos antigénicos.
Procedimiento:
Gram Catalasa
Prueba de Taxo "A"

CAMP SXT
Gram:
Cocos Gram positivo su forma de agrupación es en cadenas.

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BACTERIOLOGÍA
Catalasa:
Catalasa
Positivo Negativo
Género Género
Staphylococcus spp. Streptococcus spp.
Esta prueba permite diferenciar los microorganismos aerobias y facultativas Catalasa

positiva de las anaeróbicas y de las microaerofílicas, las cuales son Catalasa NEGATIVA.
La catalasa es una enzima respiratoria, es una porfirina de hierro cuya función es desdoblar
los peróxidos en H2O y O2.
Se utiliza en el laboratorio para diferenciar el Género Estafilococo del Género Estreptococo.
En un portaobjetos colocar una gota de peróxido de hidrógeno al 3%, con un palillo agregar
una colonia sospechosa.
CATALASA NEGATIVA: No se evidencia formación de burbujas. Streptococcus spp.
Hemólisis:
Es la destrucción de los glóbulos rojos. Muchos microorganismos producen sustancias

(enzimas) que lisan los eritrocitos o glóbulos rojos, estas sustancias se denominan
Hemolisinas. La Hemólisis se puede observar en un medio de cultivo de agar sangre.
Hemolisina: enzima que permite la clasificación de los Streptococcus en alfa, beta y gamma
hemolíticos.

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BACTERIOLOGÍA
Identificación de colonias hemolíticas.
Después del crecimiento de estreptococos en agar con sangre de carnero al 5% se observan

tres tipos de reacción de hemólisis (alfa, beta y gamma).
Hemólisis beta:
Cuando las bacterias producen hemolisinas solubles que dan por resultado la aparición de
una zona clara transparente alrededor del crecimiento de la colonia, se ha producido una
Hemólisis tipo Beta. Hemólisis completa o total de los eritrocitos.
Hemólisis alfa:
La hemólisis alfa se refiere a una lisis parcial de eritrocitos que produce una coloración verde
que se observa alrededor de las colonias, transformación a meta hemoglobina (debido a la
liberación de un producto de degradación de la hemoglobina llamado bili-verdina).
Hemólisis Gamma:
La hemólisis gama se refiere a la ausencia de hemólisis, cuando no se produce ningún
cambio (no existe hemólisis).
Los estreptococos del grupo A y B son beta hemolíticos, mientras que D es generalmente
alfa o gamma. Streptococcus pneumoniae y viridans ("verde") son alfa-hemolíticos.
La reacción de hemólisis es importante para la clasificación de los estreptococos.

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BACTERIOLOGÍA
Identificación de S. pyogenes:
Con un asa en argolla estéril, trasladar una sola colonia típica a una caja con agar sangre de
carnero al 5%. Diseminar la colonia en varias direcciones.
Colocar el disco de Bacitracina 0.04 unidades (TAXO “A”) en un extremo de la caja y en el

otro extremo, un disco de SXT (Trimetoprim sulfametoxazol).

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BACTERIOLOGÍA
Incubar en jarra GasPak (jarra con candela) y humedad a 36°C de 18 a 24 hrs.
Inhibición por disco de Bacitracina:
Positivo (+) = Si se produce un halo de inhibición

Negativo (-) = No se produce un halo de inhibición
Se considera un cultivo positivo para S. pyogenes si es:
Bacitracina (Taxo A) = (+) Positivo

SXT (R) = Resistente
Prueba de CAMP:
Identificación presuntiva de S. agalactiae (Grupo B):

Los estreptococos del grupo B (S. agalactiae) producen una proteína difusible y
termoestable (factor CAMP) que aumenta la beta-hemólisis de Staphylococcus aureus.

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BACTERIOLOGÍA
S. aureus (sembrado desde la parte superior hasta la parte inferior de la caja de agar sangre)
produce esfingomielinasa C que se puede unir a las membranas de los eritrocitos. Cuando
son expuestas al factor CAMP del grupo B, las células sufren hemólisis.
En una caja de agar sangre al 5% colocar una estría recta de S. aureus productor de doble
zona de beta hemólisis.
Hacer una estría perpendicular a la estría de S. aureus con el Streptococcus beta hemolítico
a identificar.
Incubar en jarra con candela (GasPak) y humedad a 36°C de 18 a 24 hrs.
Interpretar
Prueba de CAMP positiva:

Si se produce una “flecha” de intensa beta hemólisis que apunta hacia la estría del S. aureus.
Identificación de S. pneumoniae:
Con una asa estéril, trasladar una sola colonia típica alfa hemolítica a otra caja con agar
sangre de carnero al 5%.
Diseminar la colonia en varias direcciones.
Colocar un disco de Optoquina (Taxo “P”)
Incubar en jarra con candela (GasPak) y humedad a 36°C de 18 a 24 hrs.
Medir la zona de inhibición alrededor del disco de optoquina.
Taxo “P” Susceptible (Una zona de inhibición de las colonias alfa-hemolíticas > a 14 mm
permite una identificación de S pneumoniae.

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Streptococcus pneumoniae (es la causa principal de pulmonía humana), Streptococcus

Prueba de Taxo "A"

Cocos Gram positivo su forma de agrupación es en cadenas.

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Esta prueba permite diferenciar los microorganismos aerobias y facultativas Catalasa

Es la destrucción de los glóbulos rojos. Muchos microorganismos producen sustancias

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Identificación de colonias hemolíticas.

Después del crecimiento de estreptococos en agar con sangre de carnero al 5% se observan

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Colocar el disco de Bacitracina 0.04 unidades (TAXO “A”) en un extremo de la caja y en el

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Incubar en jarra GasPak (jarra con candela) y humedad a 36°C de 18 a 24 hrs.

Inhibición por disco de Bacitracina:

Positivo (+) = Si se produce un halo de inhibición

Se considera un cultivo positivo para S. pyogenes si es:

Bacitracina (Taxo A) = (+) Positivo

Identificación presuntiva de S. agalactiae (Grupo B):

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Prueba de CAMP positiva:

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