Quito, 02 de Mayo del 2017

Título: Métodos de siembra de microorganismos

1. Resumen:

En la realización de los métodos de siembra de microorganismos, se resaltó la

importancia de las diferentes técnicas de siembra para el aislamiento y crecimiento
microbiano, utilizando el método aséptico para evitar la contaminación del cultivo. Se
compararon los tipos de siembra por medio de la observación de resultados en los
diferentes tipos de siembra, para determinar la funcionalidad de cada uno de ellos.
Siendo así en el método por estriamiento se observó crecimiento microbiano en
colonias agrupadas, en la siembra masiva por estriamiento se notó crecimiento
microbiano pero no en colonias, en el tubo de ensayo con caldo nutritivo se observó
un líquido de color turbio con crecimiento microbiano poco visible, en el tubo de
ensayo con agar pico de flauta se observó una línea de color amarillento y por último
el tubo de ensayo con agar semisólido en siembre por punción con poco crecimiento
sin colonias.

2. Marco teórico:

Los microorganismos crecen en su hábitat natural en poblaciones consideradas de

tipos mixtas o complejas, de esta forma es complicado el estudio ya que no se puede
observar un único tipo de microorganismo. Los cultivos deben ser puros para cultivar
una especie de forma individual, el bacteriólogo Robert Koch, revoluciono la
microbiología como se la conocía, estableciendo procedimientos de siembra donde se
toman un volumen pequeño de varias células microbianas diluidas y se extiende de
forma uniforme en el agar de tal forma que se desarrollan en colonias aisladas, esto
sirve para contar colonias poblaciones microbianas. Uno de los métodos es la siembra
por estrías, esta permite obtener colonias puras, este proceso consiste en tomar una

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 muestra de dos o tres colonias con una asa previamente esterilizada o un hisopo y
extenderlo en forma de estrías por el agar, también existen otros métodos de siembra
como Kirby Bauer, pico de flauta, agar semisólido y en caldo nutritivo, entre otros.
Estos métodos son de gran importancia para el estudio de la microbiología ya que
permite el aislamiento y crecimiento de las diferentes especies para que puedan ser
estudiadas de forma específica. (Harley, J.P; Klein, D.A; Prescott, J.M, 1999)

3. Materiales y métodos

Los materiales necesarios para la realización del laboratorio fueron: cámara digital,
rollo de papel absorbente, frasco de Gatorade de vidrio, 2 pares de guantes de nitrilo,
mascarilla de polvo, mandil celeste, cofia, marcador para vidrio y la bitácora. Por parte
de la universidad se obtuvieron los siguientes materiales: cepas bacterianas en agar
nutritivo de E. Coli, 2 cajas Petri con agar nutritivo, 1 tubo de solución 0,9%, 1 tubo
de ensayo con caldo nutritivo, 1 tubo de ensayo con agar nutritivo en pico de flauta, 1
tubo de ensayo con agar nutritivo semisólido, 1 tubo de ensayo con simulación
McFarland 0,5, hisopos estériles, cajas metálicas de galletas, mechero con alcohol
industrial, fósforos, asa de estocada, asa de siembra y gradilla para los tubos de
ensayos.

Una vez listo el área de trabajo se comenzó a colocar los nombres en las cajas Petri y
en los tubos de ensayo; para el primer procedimiento de siembra por estiramiento se
prendió el mechero con los fósforos y se colocó frente a la persona que se encargó de
realizar el proceso, se puso la caja con bacterias al lado derecho y la caja con agar se la
colocó al lado izquierdo. El frasco con hisopos y el asa de siembras se ubicaron al lado
izquierdo a la altura del mechero. Se abrió el frasco de hisopos, automáticamente se
cerró, con uno de los hisopos se tomó una muestra de E. coli. En la caja Petri 1 se
dividió en 4 cuadrantes, en el primer cuadrante se colocó el hisopo con muestra
bacteriana y se esparció a lo largo de la mismo en forma anti horaria y al final del
proceso se desechó el hisopo en el bidón de desechos. Con otro hisopo se esparció la

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muestra bacteriana en el resto de los cuadrantes de extremo a extremo en forma de
zigzag. Se cerró la caja y se colocó en un lugar seguro.

En el segundo procedimiento se realizó la siembra masiva en la caja Petri, al igual que

en la primera siembra bacteriana se encendió el mechero y se colocó los hisopos en el
lado derecho mientras que la caja con agar al lado izquierdo. En este procedimiento se
utilizó la solución salina, se abrió la caja con bacterias y con los hisopos se obtuvo de
dos a tres colonias de E. coli, el hisopo se mezcló en el tubo de solución salina hasta
dejarlo homogenizado. Una vez terminada la homogenización, se desechó el hisopo en
el bidón de desechos. Al culminar este paso se comparó con el tubo de estándar de
McFarland, en donde los dos se encontraban del mismo color, se continuó con el
siguiente paso en donde se tomó un hisopo y se lo introdujo en el tubo que contiene la
solución salina y la bacteria y se lo humedeció bien. El tubo se lo colocó en la gradilla
y con el hisopo se inoculó de forma uniforme la mitad de la caja Petri, la siembra se
realizó de manera anti horaria y nuevamente se inoculó la mitad de la caja Petri, este
movimiento se realizó por tres veces consecutivas. Finalmente se cerró la caja de
cultivo y se dejó en un lado de la mesa de trabajo.

En la tercera práctica se realizó la siembra en caldo nutritivo, igualmente como en los

otros cultivos se utilizó el mechero frente a la persona a realizar la siembra, se colocó
la caja de bacteria al lado derecho, mientras que la gradilla que contenía el tubo con el
caldo de cultivo al lado izquierdo. Con el hisopo tomamos de dos a tres colonias de la
caja con bacteria. Una vez con las colonias, se las colocó en el tubo de solución salina
y se homogenizó hasta que quedara turbio. Finalmente se sacó el hisopo y se lo
desechó en los desechos punzantes. Para finalizar se dejó el tubo en la gradilla para
evitar algún derrame.

En la cuarta parte se realizó la siembra en estrías en pico de flauta, al igual que las
otras siembras se necesitó el mechero, la caja de bacterias al lado derecho y el tubo de
ensayo con agar de pico de flauta al lado izquierdo en la gradilla. Primero se tomó la

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asa de siembra y se la esterilizó en el fuego, mientras se enfría en un lugar de la caja
Petri sin bacteria, con la misma asa de siembra se obtuvo de dos a tres colonias de la
caja Petri con bacteria. Se colocó el asa de siembra al fondo del tubo y se sembró en
forma de zigzag sobre el agar hasta el pico del tubo. Se colocó el tubo en la gradilla.

En la quinta parte del procedimiento se realizó la siembra por punción, se necesitó el

mechero encendido, la caja con bacteria al lado derecho y el tubo de ensayo en la
gradilla al lado izquierdo, se tomó un palillo esterilizado, se abrió la caja Petri con
bacteria y se obtuvo de dos a tres colonias de la caja. Se tomó el tubo con agar y se
realizó una pequeña punción con el palillo unos milímetros antes de llegar al fondo, en
donde se quedaron las colonias de E. coli. Finalmente se colocó en la gradilla para más
seguridad.

4. Resultados.
4.1 Dibujar los resultados de todas las siembras y anotar las observaciones del
crecimiento:

Figura 1. METODO DE SIEMBRA POR ESTRIAMIENTO (DESGASTE) EN

CAJA PETRI CON E. coli. Se observó crecimiento microbiano en los cuadrantes 1,
2,3 teniendo como finalidad colonias agrupadas de color amaril8lo claro

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Figura 2. MÉTODO DE SIEMBRA MASIVA E. coli EN CAJA PETRI. Se observó
líneas tenues esparcidas en todo el agar donde hubo crecimiento microbiano pero no
en colonias sino en cadenas largas

Figura 3. MÉTODO DE SIEMBRA MASIVA EN TUBO DE ENSAYO CON

CALDO NUTRITIVO E.coli. Se observó crecimiento microbiano con un color
amarillento presentando turbidez sin presencia de colonias aisladas

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 Figura 4. MÉTODO DE SIEMBRA EN ESTRÍAS EN TUBO DE ENSAYO CON
AGAR PICO DE FLAUTA E.coli. Se observó un color amarillo claro en las colonias
aisladas de E.coli y como descendían hacia el agar formando una línea.

Figura 5. MÉTODO DE SIEMBRA POR PUNCIÓN EN TUBO DE ENSAYO CON

AGAR SEMISÓLIDO E. coli. Se observó un color amarillo con apariencia de gelatina
y pequeñas burbujas alrededor de la colonia mostrando poco crecimiento

Tabla 4.2. Descripción de los resultados de la práctica de métodos de siembra con E. coli
donde observamos sus métodos de crecimiento en diferentes tipos de sembrado.

N° Caja/Tubo Método de Crecimiento Descripción Colonias

Sembrado (si/no) crecimiento aisladas

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 (si/no)

1 Caja Petri 1 Estriamiento Si en los Crecimiento por No porque se

cuadrantes estrías observaron
1,2,3 agrupadas
2 Caja Petri 2 Siembra Si pero no En cadenas largas No
masiva en colonias
/estriamiento
3 Tubo de Siembra Si Presente turbidez No porque es
ensayo con masiva en por crecimiento líquido solo
caldo caldo nutritivo de se observa el
nutritivo microorganismos color turbio
líquido
4 Tubo de Siembra por Si No presenta Si por su
ensayo con estrías en pico colonias aisladas color
agar pico de de Flauta porque se observa amarillento
flauta una línea
5 Tubo de Siembra por Si Poco crecimiento No
ensayo con Punción
agar
semisólido

5. Conclusión y discusión.

En la práctica de métodos de siembra se realizó las técnicas de tipo Kirby Bauer, por
estriamiento, tubo de ensayo con caldo nutritivo, con agar en pico de flauta y agar
semisólido, aplicando el método de asepsia para evitar la contaminación, donde se
obtuvo diferentes resultados de aislamiento y crecimiento microbiano. En la figura 1.
Método por estriamiento, se observó crecimiento microbiano de colonias agrupadas,
en la figura 2. Siembra masiva por estriamiento se observó crecimiento microbiano en
cadenas largas, en la figura 3. Siembra masiva en caldo nutritivo se presenta líquido
con color turbio con crecimiento microbiano, en la figura 4. Siembra por estrías en
pico de flauta no presenta colonias aisladas, en la figura 5. Siembra por punción en
agar semisólido se evidencio poco crecimiento microbiano.
De acuerdo a los diferentes técnicas utilizadas en la práctica, se pudo evidenciar que
existen métodos más eficaces cuando se trata de aislar colonias microbianas como el

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de estriamiento, sin embargo depende de lo que se busca estudiar o el enfoque del
trabajo. (Harley, J.P; Klein, D.A; Prescott, J.M, 1999)

6. Preguntas.

6.1. ¿Por qué se debe trabajar cerca del mechero?

Los materiales y medios donde vamos a trabajar y observar crecer a los

microorganismos debe ser utilizado manteniendo los métodos asépticos para evitar
contaminar al ambiente por lo que el mechero de bunsen ayuda a esterilizar tanto el
asa de siembra como otros implementos expuestos al calor (Cane & Sellwood, 1975).

6.2. ¿Qué es un cultivo puro o axénico?

Un cultivo que contiene una sola clase de microorganismos (Staner, Ingraham,

Wheelis, & Painter, 1996)

6.3. ¿Por qué es útil aislar de una muestra biológica ej. Líquido cefalorraquídeo
un microorganismo?

Es una técnica útil para la observación e identificación microbiana de la muestra como

en un cultivo de líquido cefalorraquídeo donde se busca bacterias, hongos y virus que
circulan en la médula espinal entre esas son Neisseria meningitidis, Streptococcus
pneumoniae y Haemophilus influenzae de tipo b que causan meningitis dañando todo
lo que es el sistema nervioso. Al momento de aislar esta muestra podemos distinguir
diferentes factores de crecimiento y su inhibición para poder determinar un
diagnóstico clínico que nos ayude a curar en casos de una infección o con presencia de
bacterias (Klosterman, 2006).

6.4. ¿Qué sucede si se toma una colonia bacteriana con el asa al rojo vivo?

Destruye los microorganismos si no procedemos al paso de enfriar el asa de siembra

ya que ayuda a evitar la contaminación en nuestro estudio o que ya hayan existido en
el asa al momento de cultivar

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6.5. Los medios de cultivo se clasifican de acuerdo a su composición. ¿Cuál es la
particularidad de cada uno de ellos?

Métodos enriquecidos

Son un medio simple que permite un aporte de crecimiento o sustancias que

neutralizan agentes inhibidores del crecimiento en microorganismos que tienen gran
cantidad de nutrientes (Montoya Villafañe, 2008).

Ejemplo: Suero, sangre, huevo, líquido ascítico, glucosa, vitaminas (Montoya

Villafañe, 2008)

Medios diferenciales o de aislamiento

Son un medio que permite distinguir entre algunos géneros o especies de

microorganismos añadiendo sustancias que solo crezcan en ciertas bacterias
permitiendo observar sus propiedades de crecimiento y diferenciar sus colonias de
otras (Montoya Villafañe, 2008).

Ejemplo: Agar eosina azul de metileno, DLA, agar sangre (Montoya Villafañe, 2008)

Métodos selectivos e inhibidores

Son medios solidos que se usa para seleccionar y aislar microorganismos a partir de
poblaciones mixtas alterando las condiciones físicas del medio añadiendo compuestos
químicos al agar nutritivo con el fin de inhibir el crecimiento de un grupo de
microorganismos y ayudar en su crecimiento en otros (Montoya Villafañe, 2008).

Ejemplo Agar salado-manitol o Chapman, cristal violeta, Thayer- Martin (Montoya

Villafañe, 2008)

Medios de transporte

Son un medio utilizado para asegurar la viabilidad de las bacterias y evitar su

reproducción alterando su bacteria inicial desde su muestra hasta su siembra (Montoya
Villafañe, 2008).

Ejemplo: Medio de Stuart (Montoya Villafañe, 2008)

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Fuentes de información:
Cane, B., & Sellwood, J. (1975). QUIMICA ELEMENTAL BÁSICA 1. Río de Janeiro:
REVERTÉ S.A. Recuperado el 02 de Mayo de 2017
Harley, J.P; Klein, D.A; Prescott, J.M. (1999). Microbiologia (Vol. 4 edición).
México.
Klosterman, L. (2006). Meningitis. New York: Marshall Cavendish.
Montoya Villafañe, H. (2008). Microbiología básica para el área de la salud y afines.
(Segunda ed.). Colombia: Universidad de Antiquioa.
Staner, R., Ingraham, J., Wheelis, M., & Painter, P. (1996). Microbiología (Segunda
ed.). New Yersey: REVERTÉ S.A.

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