Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas

Análisis Espectrofotométricos

Introducción a la

VALIDACIÓN DE UN
MÉTODO ANALÍTICO
Equipo:
Bando Vázquez Brayan Jared. 202213619
Bravo Narcizo Anayeli Guadalupe. 202215740
Cortés Hernández Reyli Fernando. 202216693
Cuatzo Mendoza Diana Karen 202214587
MÉTODO ANALÍTICO
Consiste en las técnicas, métodos, procedimientos y protocolos para
comprender un fenómeno.

Mediciones analíticas
Tienen por objetivo obtener datos
consistentes, confiables y precisos.
 Validación
De acuerdo con la FDA:
Procedimiento de control de producción y proceso diseñado para
asegurar que los productos farmacéuticos tengan su identidad,
concentración, calidad y pureza.
Objetivo:
El objetivo de la validación de un procedimiento analítico es demostrar que
es adecuado para el fin previsto.

Información necesaria y procedimientos de prueba

Demostrar que el sistema y proceso cumple con los requisitos.

¿POR QUÉ ES IMPORTANTE LA VALIDACIÓN DEL
MÉTODO?

1 Asegura la calidad

2 Optimiza el proceso

3 Reduce costos, evita gastos de capital

4 Reduce fallas en el proceso y en lotes

5 Mejora el conocimiento, eficiencia y productividad

6 Aumenta una producción confiable

 PROCESO DE VALIDACIÓN

INICIO RESPONSABLES MANTENIMIENTO

Inicia en el laboratorio, se Departamentos: La validación nunca termina,
descubre cómo reacciona el Comité de validación del sitio. requiere de mantenimiento,
producto y los parámetros para Departamento de fabricación. calibraciones periódicas y
producirlo. Seguro de calidad. ajustes. Se esta en evaluación
Se conocen condiciones en Control de calidad. constante.
que el producto falla o se Autoridades:
vuelve inestable, inutilizable y Gerente de producción.
Gerente de control de calidad.
cuándo su calidad comienza a
Ejecutivo de control de calidad.
verse afectada.
Gerente de mantenimiento.
Tipos de validación
Garantiza una buena calidad.
Ahorra tiempo y dinero.
Validación de procesos
Proporciona robustez.
Garantiza una fabricación consistente.

Establece una prueba para proporcionar

Validación de métodos seguridad en un proceso específico, el
analíticos cual produce el resultado deseado con la
calidad establecida.
 Según la USP: US Pharmacopeia

PARÁMETROS Exactitud, precisión, especificidad, límite de detección, límite de

cuantificación, linealidad, rango, robustez.

ANALÍTICOS A
VALIDAR Según el ICH: International Council for Harmonisation
Exactitud, precisión, especificidad, límite de detección, límite de
cuantificación, linealidad, rango, idoneidad del sistema y robustez.

En caso de:
Antes de uso inicial en pruebas de Según la FDA: Food and Drug Administration
rutina. Exactitud, precisión, especificidad/selectividad, límite de detección,
Cuando se cambia de laboratorio. límite de cuantificación, linealidad, rango, idoneidad del sistema,
Cuando alguna de las condiciones reproducibilidad, estabilidad de la solución de muestra y robustez.
cambie.
Según directrices europeas.
Exactitud, precisión, especificidad, límite de detección, límite de
cuantificación, linealidad y rango.
¿QUÉ PROCESOS ANALÍTICOS SE EVALÚAN?

Pruebas de identificación

Garantiza la identidad del analito en una muestra, se logra al comprobar

alguna propiedad:
Espectro, comportamiento cromatográfico, reactividad.

Pruebas para control de impurezas

A través de pruebas cuantitativas o pruebas límite para detectar

impurezas en la muestra.
Pruebas cuantitativas de la fracción activa en muestras de sustancia o
producto farmacéutico.
Se utilizan para medir el analito presente en una muestra.
El ensayo representa una medición cuantitativa de los componentes
principales de la sustancia farmacológica.
PROTOCOLO DE VALIDACIÓN

Definir aplicación, finalidad y alcance.

Definir parámetros de rendimiento.

Definir experimentos de validación. Se realizan experimentos de

validación de documentos y
Verificar características del equipo. resultados.

Verificar materiales, estándares y reactivos. Definir controles de calidad para rutina.

Realizar una prevalidación experimental. Definir los criterios para una revalidación.

Ajustar los parámetros del método. Desarrollar procesos operativos estándar.

REVALIDACIÓN DEL MÉTODO

La revalidación del método es necesaria en los

siguientes casos:

1 Cambios en la síntesis del farmaco

2 Cambios en la composición del producto final

3 Cambios en el procedimiento analítico

Parámetros de validación

Exactitud Cercanía de los resultados de las pruebas obtenidos por

el método al valor verdadero.
Usando un analito de pureza conocida: un estándar.
Utilizando un método alternativo que ya esté validado.
Utilizando una muestra blanco y comparando.
Utilzando una replicación de 9 por cada nivel de concentración.

Resultado: dentro de un 15%

 Precisión Cercanía entre valores de una serie de mediciones de una
muestra estandarizada.
Usando muestras auténticas y homogéneas.

Se consideran 3 niveles de precisión:

Repetibilidad: Precisión con las mismas condiciones de tiempo, equipo y método.
Intermedia: Utilizando diferentes días, analistas y equipos.
De reproducibilidad: Entre laboratorios diferentes.

La precisión no debe exceder el 15% del coeficiente de variación.

 Especificidad Capacidad de medir de forma precisa y específica el
analito en presencia de otros.
Respuesta para un único analito.

Se consideran 3 categorías:
Pruebas de identificación.
Pruebas de pureza.
a) Discriminación de analito donde están presentes las impurezas.
b) Discriminación de analito donde no están presentes las impurezas.
Ensayo.
 Selectividad Detectar el analito aún si otros componentes están
presentes en la muestra.

Capacidad de un método para separar diferentes compuestos.

Se mide:
Midiendo dos muestras: con y sin el compuesto adicional, comparando los
resultados.
 Cantidad más baja de analito que se puede
Límite de detección
detectar en las condiciones experimentales.

Depende del análisis y tipo de instrumento.

Basado en:
Evaluación visual.
Relación señal-ruido: Para muestras que presentan ruido de interferencia, se
comparan medidas de muestras con concentración conocida con muestras
blanco. Se acepta una relación de 2:1 o 3:1.
Desviación estándar y pendiente.
Desviación estándar de la respuesta.
Pendiente de la curva de calibración.
 Cantidad más baja de analito que se
Límite de cuantificación puede detectar y cuantificar en las
condiciones experimentales.
Depende del análisis y naturaleza de la muestra.
Se usa para impurezas y productos de degradación.
Basado en:
Evaluación visual.
Relación señal-ruido: Se acepta una relación de 10:1.
Desviación estándar y pendiente.

Desviación estándar de la respuesta.

Pendiente de la curva de calibración.
 Capacidad del método de obtener resultados
Linealidad
directamente proporcionales en un rango.

Puede ser mediante diluciones de una solución madre.

Se evalúa con gráficos de C vs. Respuesta.
Se recomiendan mínimo 5 concentraciones.

Se toma en cuenta:
La intersección con el eje Y.
Coeficiente de correlación.
 Intervalo entre la menor y mayor concentración en el que el
Rango
método es preciso, exacto y lineal.

Ensayo: Debe incluir del 80 al 120% de concentración.

Uniformidad: 70 a 130% de concentración.
Disolución: +/- 20% sobre el rango.
 Capacidad del método de no verse afectado por pequeños
Resistencia
cambios en el procedimiento

Ante:
Estabilidad de las soluciones.
Tiempo de extracción.
Variación de pH.
Variaciones en composición.
Temperatura.
 Grado de reproducibilidad ante la evaluación con diferentes
Robustez
condiciones.

Ante:
Diferentes analistas.
Diferentes instrumentos.
Diferentes días de prueba.
Diferentes reactivos.
 Se verifica si el método es el apropiado para el
Idoneidad del sistema
propósito específico dentro de los límites.

Se analizan:
Los equipos.
Operaciones analíticas.
Muestras para analizar.
Comparaciones con los estándares.
ESTADÍSTICA EN LA VALIDACIÓN DE LOS MÉTODOS
ANALÍTICOS.

Se debe realizar para revelar la validez del método analítico.

Los cálculos se realizan utilizando paquetería de software

estadístico (Excel, Minitab, entre otros).

Su propósito es la revisión de datos que otorga la

comprensión de la característica del método examinado.
 Es el valor que se obtiene al dividir la suma de
Promedio un conjunto de datos numéricos entre el número
total de datos
Se denota por x y se calcula con:

Donde:
Xi = Valores individuales.
n = Número de puntos de datos individuales.
 Es la evaluación de la dispersión de los valores
Desviación estándar
en el conjunto de muestras.
Se calcula midiendo la variación o diferencia entre la media y los valores
individuales de un conjunto.

Donde:
X = Valor individual.
x̄ = Media muestral.
n = Número de puntos de datos individuales.
 Se calcula tomando la desviación estándar del
Desviación estándar conjunto de muestras multiplicada por 100%, y
relativa dividiéndola por el promedio de conjunto de
muestras.
Se expresa como porcentaje.
 Se utiliza para indicar confiabilidad de una
Intervalo de confianza
estimación.

Nos dan límites alrededor de la media muestral para predecir el rango de

la población real de la media.
Suele basarse en una probabilidad del 95%.

Se calcula midiendo la variación o diferencia entre la media y los valores

individuales de un conjunto.
Depende de la desviación estándar muestral y de la media muestral.
 Donde:
S = Desviación muestral.
x̄ = Media muestral.
n = Número de puntos de datos individuales.
Z = Constante obtenida de tablas estadísticas para z.

Notas:
z depende del nivel de confianza en las tablas estadísticas.
Para muestras pequeñas, z se puede reemplazar por el valor de
t obtenido en tablas de distribución t de Student.
t corresponde a n-1.
 Se utiliza para evaluar la relación lineal entre los
Análisis de regresión
resultados de las pruebas.

La regresión lineal evalúa la relación entre dos variables ajustando una

ecuación lineal a datos experimentales.

Donde:
X = Variable independiente.
Y= Variable dependiente.
b1 = pendiente de la recta.
bo = intersección (valor de y cuando x = 0).
 INFORME DE VALIDACIÓN
Una vez que el método ha sido desarrollado y validado, se debe realizar un
informe que incluye:
Propósito y alcance del método.
Metodología.
Responsabilidades.
Tipos de compuestos, estándares, muestras, grado de pureza,
instrucciones.
Procedimientos de control de calidad.
Precauciones de seguridad.
Parámetros para los experimentos.
Cálculos representativos.
Pruebas de idoneidad del sistema.
Gráficos representativos.
Criterios de revalidación.
Registros de personas que desarrollaron y validaron el método.
Referencias.
Desviaciones presentes.
Resumen.
Conclusiones.
 Opción de tema 1
Titulo del articulo: “Environment-Friendly Approach to Isolate Ascorbic Acid
from Plants and Micro-identified Using Fourier Transform Infrared Spectroscopy”

DOI: https://doi.org/10.1021/acsfoodscitech.3c00575
Sensibilidad: Se valoró de acuerdo con los resultados de la
El rango lineal: desviación estándar después de que se aplicaron seis análisis
repetidos para cada concentración.
Limite de detección: No es necesario realizar la cuantificación.
Limite de cuantificación: este estudio encontró que el QL era 41,69
nmol·L^–1.
Este estudio ha utilizado la prueba t para la aplicación de
espectroscopía FTIR y espectrofotometría UV-vis. Según el nivel de
confianza del 95%, el valor t estuvo por debajo de 2,365, lo que
muestra que la detección mediante espectroscopia FITR y
espectrofotometría UV/vis no mostró distinciones significativas.
Se observó una buena reproducibilidad de la absorbancia tanto (RSD
≤ 0,23%) para intradiario como (RSD ≤ 1,15%) para interdiario.
Opción de tema 2
Titulo del articulo: “Determination of Alcohol and Extract Concentration in
Beer Samples Using a Combined Method of Near-Infrared (NIR) Spectroscopy and
Refractometry”
DOI: https://doi.org/10.1021/jf1030604
El rango lineal:

Para validar la exactitud del modelo obtenido, se calcularon el

error cuadrático medio de validación (RMSEV) y el error cuadrático
medio relativo de validación (RRMSEV) para un conjunto de muestras
diferente al utilizado para la construcción del modelo (conjunto de
validación). Se calculó una medida adicional, la desviación de
predicción residual (RPD), para evaluar el rendimiento del modelo
multivariado. El valor RPD se define como la relación entre la
desviación estándar de la población (SD) y el error estándar de
validación (SEV). Como medida de precisión y repetibilidad, también
se calculó la desviación estándar.
 Opción de tema 3
Titulo del articulo: “Comparison of an infrared anaesthetic agent analyser
(Datex-Ohmeda) with refractometry for measurement of isoflurane, sevoflurane
and desflurane concentrations”
DOI: 10.1111/vaa.12118
El rango lineal:

En el presente artículo se utilizó un refractometro como prueba

estándar de medición contra un IR. La concordancia entre métodos
está relacionada con la precisión y exactitud de ambos métodos de
forma independiente; por lo tanto, la precisión del método de
referencia debe ser confirmado.

En la validación del método se menciona que los coeficientes de

repetibilidad fueron mayores para la prueba de IR que para el
refractómetro. Los coeficientes de reproducibilidad fueron más
altos que que los de repetibilidad y fueron similares para los dos
métodos.
GRACIAS