Enzimas

enzimas

Son proteínas que catalizan las reacciones químicas en los organismos vivos, cuando se habla de catalizar se
refiere a acelerar la velocidad, por lo que las enzimas aceleran mucho la velocidad de las reacciones para que así
sucedan mucho más rápido; esto lo hacen disminuyendo la energía de activación.

PROPIEDADES DE LAS ENZIMAS

• Son moléculas proteicas que catalizan reacciones químicas, hay más moléculas en la célula que pueden
catalizar algunas reacciones químicas y no son proteínas (un ejemplo, el RNA), en ese caso no se llaman
enzimas (enzima siempre se refiere a proteínas).
• Son altamente específicas, sólo actúan sobre la molécula que es el sustrato, o a veces tienen una variedad
de unas pocas moléculas muy relacionadas estructuralmente entre sí, que pueden ser su sustrato, pero
son altamente específicas. Incluso hay enzimas capaces de diferenciar entre isómeros de la misma
molécula.
• Son sumamente efectivas, se requieren en pequeñas cantidades y no es necesario agregar nueva enzima
porque no se modifican permanentemente ni se consumen durante la reacción. Durante el proceso de la
reacción química la enzima va a sufrir modificaciones, pero al terminar la reacción va a volver a su estado
original.
• Actúan a una temperatura y pH óptimos (moderados), a presión atmosférica y en ambiente acuoso. Las
enzimas son capaces de catalizar reacciones en el medio celular, como, por ejemplo: en el citoplasma, pH
alrededor del neutro, temperatura corporal 37°C, presión atmosférica y ambiente acuoso. Si se quieren
replicar reacciones en un tubo de ensayo, muchas veces es necesario agregar ácido o calentar en un
mechero.
• Su acción es regulada, las enzimas no funcionan de forma permanente, sino que la célula tiene
mecanismos para regular la actividad de estas de manera que solo se catalice la reacción cuando se
necesite el producto de esta, las enzimas se activan e inhiben según lo requiera la célula.
• Se saturan y se denaturan. Con lo primero se refiere a que hay un número limitado de moléculas de
enzima, entonces si se usan todas las disponibles no se puede ir más rápido que eso; y por denaturarse se
refiere a que al ser proteínas si se someten a condiciones en que pueda alterarse su estructura pueden
llegar a perder la función.

ENZIMAS CONJUGADAS

Estas son enzimas que necesitan de sustancias no proteicas para

poder llevar a cabo su reacción, estas sustancias no proteicas
denominadas “cofactores” colaboran en la catálisis. No todas las
enzimas necesitan cofactores, pero hay muchas enzimas que sí los
necesitan.

Estos cofactores, con respecto a la naturaleza química pueden ser

iones inorgánicos o moléculas orgánicas.
En la tabla 6-1 hay ejemplos de enzimas y el ion que utilizan como cofactor. Muchos de estos iones son elementos
traza, estos se requieren en pequeñas cantidades, pero deben estar presentes.

Si faltan, habrá enzimas que no funcionarán bien y distintos procesos biológicos se verán afectados. Una función
importante de los elementos traza, es que muchos son cofactores enzimáticos. Por ejemplo, la enzima enolasa
que participa en la glicólisis, utiliza magnesio.

COENZIMAS

El cofactor también puede ser una molécula orgánica, y recibe el nombre de coenzima, por lo tanto, esta es una
molécula orgánica que actúa como cofactor.

Las coenzimas muchas veces se sintetizan a partir de vitaminas y suelen participar en reacciones de
transferencias de grupos químicos, donde la enzima toma un grupo de una molécula y se lo agrega a otra. En la
siguiente tabla se muestran ejemplos:

• Coenzima A: Transfiere grupos

acilos y viene del ácido
pantoténico.
• Flavina adenina dinucleótido
(FAD): Transfiere electrones, los
que son importantes para el
metabolismo y síntesis de ATP a
partir de procesos de degradación
de nutrientes. Viene de la
riboflavina (vitamina B2).
• Nicotinamida adenina dinucleótido (NAD): Transfiere electrones como iones hidruro. Viene del ácido
nicotínico o niacina.
• Piridoxal fosfato: Transfiere grupos aminos. Viene de la piridoxina (vitamina B6)
• Tiamina pirofosfato: Transfiere aldehídos. Viene de tiamina (B1)

Por lo tanto, es importante que en la alimentación se consuman vitaminas, ya que a partir de ellas se sintetizan
algunos cofactores enzimáticos. Hay procesos biológicos que pueden fallar si no se tiene la vitamina precursora
para la coenzima que se necesita.

GRUPOS PROSTÉTICOS

Algunas enzimas requieren el uso de algún cofactor y les basta con que el cofactor esté presente en el medio,
para usarlo y luego devolverlo. Otras, tienen el cofactor unido fuerte y permanentemente, por lo que es parte
de su estructura, en este caso se habla de grupos prostéticos.

Los grupos prostéticos corresponden a cuando los cofactores, ya sean iones inorgánicos o coenzimas, se
encuentran unidos fuertemente o incluso covalentemente a la enzima. Esta unión puede ser por interacciones
débiles no covalentes, pero que al final terminan en una unión fuerte. Estos son parte de la estructura de la
enzima, si se aísla la enzima, siempre tendrá unido al grupo prostético.
 • Holoenzima: Forma catalíticamente activa de la
enzima, es decir, la enzima unida al grupo prostético.
• Apoenzima: Corresponde a la parte proteica sin el
grupo prostético por lo tanto no es activa, no tiene
actividad catalítica.

ISOENZIMAS

Son múltiples formas de una enzima que catalizan la misma reacción, pero difieren en su secuencia de
aminoácidos, afinidad de sustrato, Vmáx y/o propiedades regulatorias.

Las enzimas reciben el nombre según la reacción que catalizan. Todas las proteínas que catalizan la misma
reacción son el mismo tipo de enzimas, pero si se analizan las proteínas se puede observar que no son idénticas,
son dos proteínas distintas capaces de catalizar la misma reacción, cuando ocurre esto, se les denomina
isoenzimas.

• Tienen distinta estructura molecular y su función biológica es similar.

Son muy importantes en el funcionamiento del metabolismo, ya que permite una regulación de este. La
capacidad de regularse en forma diferente puede hacer que en un cierto momento un proceso biológico haya
comenzado, por ejemplo, en un músculo, pero no en el hígado (enzima hexoquinasa).

Se puede observar la existencia de isoenzimas en función de:

• Tipo de tejido: La lactato deshidrogenasa presenta isoenzimas distintas en músculo y corazón.

• Compartimento celular donde actúa: La malato deshidrogenasa del citoplasma es distinta a la de la
mitocondria. Catalizan la misma reacción, pero si se comparan las proteínas aisladas de citoplasma y
mitocondria no son idénticas.
• Momento concreto del desarrollo del individuo: Algunas enzimas de la glicólisis del feto son diferentes
de las enzimas en el adulto. Entonces, cuando nace el bebé, va dejando de producir las enzimas fetales
hasta llegar a producir solo las enzimas del adulto.

Ejemplo: lactato deshidrogenasa

• Tiene 5 isoenzimas distintas, las cuales se expresan distinto en los diferentes tejidos.
• Tiene 4 subunidades.
• Tiene 2 versiones de subunidad: A y B. En la
imagen (a) se representan con los colores
verde y rosado respectivamente.
• La primera forma tiene 4 subunidades verdes
(A4), la segunda tiene 3 unidades verdes y
una rosada (A3B1), y así sucesivamente.
Todas catalizan la misma reacción, pero no
tienen la misma estructura. Por lo tanto, no
funcionan exactamente igual, puede que
tengan distinta afinidad por el sustrato o que
se regulen de forma diferente.
 • La imagen (b) muestra las formas que predominan en distintos tejidos. Por ejemplo, en el hígado
predomina la forma A4 y las otras son casi inexistentes. En el corazón predomina la forma B4.

CLASIFICACIÓN INTERNACIONAL DE LAS ENZIMAS

Las enzimas se clasifican según el tipo de reacción

que catalizan. Existen 6 clases principales y en cada
clase hay subclases que especifican aún más la
reacción de la enzima.

Hay que saber el tipo de enzima y qué es lo que

hace1.

• En el caso de las isomerasas, lo que hacen, por

ejemplo, es reordenar un grupo químico, lo
cambian de posición de un carbono a otro,
formando isómeros.
• Ejemplo clásico de las ligasas es la DNA-ligasa
que une los fragmentos de Okazaki.

ENERGÍA DE ACTIVACIÓN

LAS ENZIMAS ACELERAN LA VELOCIDAD DE LAS REACCIONES DISMINUYENDO LA ENERGÍA

DE ACTIVACIÓN

A menor energía de activación, mayor es la velocidad.

Entonces en una reacción donde el sustrato se va a
transformar en producto se ve el nivel de energía que se da
durante la reacción y se observa que hay una energía, una
barrera energética que traspasar para que el sustrato se
transforme en producto.

Esa energía que se tiene que suministrar, se va a usar para

todo lo que implica transformar el sustrato en productos
(alinear grupos, romper o formar enlaces, reacomodar
átomos, etc.), siempre se va a tener que suministrar alguna
cantidad de energía.

El estado de transición es la forma que adquiere el sustrato cuando está a punto de transformarse en producto.
El máximo de energía coincide con el estado de transición.

Ejemplo: una barra metálica como sustrato, en la cual la reacción consiste en romper la barra en dos partes,
entonces se toma la barra metálica y se dobla, cuando está doblada y a punto de romperse, se le llama estado

1 Importante aprenderse esta tabla.

de transición. Si se le aplica un poco más de fuerza se rompe y pasa a producto, pero si se suelta se devuelve a
su forma original como sustrato.

Esa forma del estado de transición coincide justo en el máximo de energía por suministrar de la reacción.
Entonces la energía de activación es la diferencia entre el nivel inicial o basal de energía del sustrato y el
máximo de energía que hay que suministrar. Es cuánta energía hay que darle al sustrato para que se transforme
en producto.

Y esta energía es necesaria para que le ocurran todos los cambios

que implican transformar el sustrato en producto.

En el gráfico de la derecha, se observa la reacción sin enzima, que

es la curva azul, se parte de reactantes, se les da toda la energía de
activación necesaria 𝛥𝐺!"#$% , la energía no está catalizada. Y la
reacción con enzima que es la curva roja, a la cual se le disminuyó
la energía de activación gracias a la catalización de la enzima,
dejándola en 𝛥𝐺#$% . Ambas se transforman en los mismos
productos.

Al disminuir la energía de activación, la reacción ocurre más

rápido. Entonces la energía de activación no catalizada es mayor
que la energía de activación catalizada por la enzima.

OJO: que al disminuir la energía de activación no disminuye el estado de transición, este se mantiene. Debido a
que es la forma que adquiere el sustrato, por lo que es la misma, pero al disminuir la energía de activación se
alcanza el estado de transición con menor energía.

• Las enzimas entonces van a hacer que la reacción ocurra de la misma manera, pero más rápido.
• No afecta ni la dirección ni el equilibrio de la reacción, solo aumentan la velocidad a la cual ocurre.
• Si está en ese momento favorecido que los reactantes se transformen en productos, en presencia de
enzimas, los reactantes se transforman a productos mucho más rápido, pero la enzima no puede hacer
que los productos se transformen en reactantes si esto no está favorecido.
• Si se tiene una reacción en el equilibrio o que es reversible, que vaya de derecha a izquierda o de izquierda
a derecha, depende de las concentraciones relativas de sustratos y productos. Entonces en un cierto
momento la reacción va a ocurrir de izquierda a derecha. Entonces la enzima va a hacer que ocurra la
reacción de izquierda a derecha mucho más rápido, pero no puede hacer que ocurra de derecha a
izquierda.
• Hacia donde se mueva el equilibrio depende de la constante de equilibrio, la cual depende de las
concentraciones de los reactantes y de los productos y la enzima no puede cambiar eso. Por lo que, lo
único que hace la enzima es que lo que vaya a ocurrir (de forma favorable), ocurra mucho más rápido.

OJO: cuando se dice que aumenta la velocidad de reacción, no es el doble ni 10 ni 100 veces más rápido, a veces
es millones de veces más rápido.
LA ENERGÍA DE UNIÓN 𝛥𝐺& AYUDA A DISMINUIR LA ENERGÍA DE ACTIVACIÓN 𝛥𝐺 ǂ

Parte de cómo las enzimas ayudan a bajar a la energía de

activación, es debido a la energía de unión 𝛥𝑮𝑩

La enzima va a unir el sustrato en un lugar específico, y ahí se van

a establecer entre la enzima y el sustrato muchísimas
interacciones, generalmente débiles no covalentes. Cada vez que
se establecen estas interacciones entre la enzima y el sustrato, se
va liberando una pequeña cantidad de energía. En conjunto eso se
llama energía de unión 𝛥𝐺& y esa energía se le puede restar a la
energía de activación de la reacción no catalizada.

𝛥𝐺 ǂ !"#$% − 𝛥𝐺& = 𝛥𝐺 ǂ #$%

Entonces, a la energía de activación de la reacción no catalizada (𝛥𝐺 ǂ !"#$% ), se le resta la energía de unión (𝛥𝐺& )
y el resultado sería la nueva energía de activación catalizada (𝛥𝐺 ǂ #$% ), que es menor a la no catalizada.

• Las interacciones del sustrato y la enzima proveen una vía alternativa de menor energía para la reacción
permitiendo que ocurra más rápido.
• Las interacciones enzima-sustrato, son óptimas en el estado de transición. La máxima complementariedad
de la enzima es con la forma que tiene el sustrato en el estado de transición, entonces eso ayuda a que el
sustrato se transforme en producto.
• Y además al estar ocurriendo la reacción dentro de la enzima y no en solución, se elimina el factor de las
colisiones o choque al azar, la enzima va a posicionar al sustrato en la posición más favorable para que
ocurra la reacción, el factor de colisiones al azar sería en el caso de que tanto la enzima como el sustrato
estuvieran en solución, y por constantes choques o colisiones entre ellos llegue uno de estos que sea
efectivo, o sea, que se encuentren de repente y que se realice la reacción; sin embargo, la enzima lo que
hace es tener su espacio complementario y dejar bien posicionado al sustrato, en la orientación más
favorable para que reaccione.
• También, como la reacción ocurre dentro de la enzima, le “quita” el agua, y el sustrato al no estar rodeado
de agua, reacciona más fácilmente.

SITIO ACTIVO

Toda la reacción del sustrato ocurre en un lugar específico de la enzima, que se llama
el sitio activo.

El sitio activo es un área pequeña, un bolsillo, hendidura o espacio hacia el interior

de la enzima, y corresponde al lugar específico donde están los aminoácidos cuyas
cadenas laterales (grupos sustituyentes) directamente unen el sustrato y lo
transforman en producto.

• La enzima es una molécula grande, de tipo globular.

 • El interior de esta enzima es mayoritariamente hidrofóbico (su ambiente
[gris]), pero quedan algunos aminoácidos con cadena hidrofílica dentro que
participarán en unir el sustrato y transformarlo en producto.
• El sitio activo nunca estará en la superficie.
• Al ser hidrofóbico, el agua que acompañaba al sustrato fuera de la enzima no
entra con el sustrato hacia el sitio activo (lo desolvata).

Este sitio activo es complementario a la forma que tiene el sustrato en el estado de

transición. Antes se hablaba de la teoría de la llave-cerradura; el sustrato (llave) cabía
perfectamente en la enzima (cerradura), pero esto ya está descartado.

Se sabe que el sitio activo tiene la mayor complementariedad con la forma que tiene el sustrato en el estado de
transición, de manera que ocurre lo siguiente:

(a) Tenemos como sustrato una barrita metálica; se dobla

al punto de casi romperse para llegar al estado de
transición; al romperla se forman los productos.

(b) Si la enzima es complementaria 100% al sustrato en su

forma original, se estabilizará el sustrato y nunca pasaría
a producto.

(c) Inicialmente, el sustrato se une a la enzima con algunas

interacciones, suficientes para que esta interacción sea
específica y no cualquier molécula se pueda unir.

(c) Después ocurre un cambio de forma (encaje inducido)

de la enzima y el sustrato, y cuando el sustrato alcanza
la forma del estado de transición, se da la máxima
complementariedad con la enzima.

(c) Luego, el sustrato se transforma en producto, estos son liberados y la enzima se recupera para volver a
comenzar.

ENCAJE INDUCIDO DE LA HEXOQUINASA (ENZIMA)

*Para algunas enzimas como esta, se puede ver la

diferencia de estructuras con/sin sustrato; en
otras no es tan evidente.

La enzima entonces tiene el sitio activo, y una

apertura que permite la entrada del sustrato
hacia el sitio activo. El sustrato es la molécula roja,
cuando la enzima tiene unido el sustrato, la
apertura ya no existe, la enzima se cierra al
Sitio activo Sustrato cambiar de forma. Cuando libera los productos,
Apertura
vuelve a su forma original.
ETAPAS DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA

Se parte con la enzima y el sustrato libre [E+S]:

1. La enzima y el sustrato se unen, formando el complejo enzima-sustrato. Ocurre el encaje inducido, el cual
es una modificación temporal de la enzima y el sustrato, alcanzando la mayor complementariedad [ES].
2. Ocurre la catálisis, una reacción química donde se transforma el sustrato en producto.
3. Por un tiempo muy corto, cuando recién se forma el producto, este existe unido a la enzima [EP, dura muy
poco, por lo que no se considera].
4. Liberación de productos, los productos se liberan, la enzima se recupera en su forma original y puede
volver a comenzar el ciclo [E+P].

¿El sustrato tiene que viajar hacia la enzima, o al revés? Están el sustrato y la enzima en solución en el mismo
medio, y se encuentran los dos. No hay uno que busque al otro, simplemente se encuentran por movimiento.

MECANISMOS DE CATÁLISIS ENZIMÁTICA

Una vez que tenemos la enzima unida al sustrato y ocurrió el encaje inducido, el sustrato tiene que transformarse
en producto, y para eso existen 3 mecanismos de catálisis enzimática, que la enzima puede combinar (no tiene
que elegir uno):

• Catálisis general ácido-base

• Catálisis covalente
• Catálisis por iones metálicos

CATÁLISIS ÁCIDO-BASE

Si se ve que, en el mecanismo de reacción del sustrato pasando a

producto, se transfieren protones desde o hacia el sustrato, es
catálisis ácido-base. De las cadenas laterales de estos residuos de
aminoácidos que hayan quedado en el ambiente hidrofóbico del sitio
activo, es importante que sean grupos que puedan ceder y captar
protones.

Ej: Glutámico-aspártico, Lisina-arginina, Cisteinas, Histidinas, Serinas,

Tirosina.
CATÁLISIS COVALENTE

Normalmente, la interacción del sustrato con la enzima se debe a muchas interacciones débiles no covalentes,
pero hay veces que, por un tiempo corto, durante la reacción, se forma un enlace covalente entre la enzima y el
sustrato. Es una etapa dentro de la transformación del sustrato en producto, esta es la catálisis covalente.

CATÁLISIS POR IONES METÁLICOS

Si se detecta que de alguna manera iones metálicos ayudan a que la enzima catalice su reacción, es catálisis por
ion metal; por ejemplo, ayudando a unir el sustrato, ayudando a estabilizar estados intermedios que son
cargados, participando en reacciones de transferencias de electrones, etc.

LA MAYORÍA DE LAS ENZIMAS UTILIZA UNA COMBINACIÓN DE DIFERENTES MECANISMOS

Ejemplos de catálisis:

Reacción de Enolasa: La enolasa tiene Mg2+ en su

sitio activo, por lo que probablemente hará
catálisis por ion metálico.

La enzima entonces tiene iones magnesio, tiene

una lisina desprotonada y un glutámico protonado;
y tenemos al sustrato.

La lisina saca el protón del sustrato, queda

protonada. Los electrones forman un enlace doble
y el oxígeno queda con carga negativa, por lo que
quedarán dos cargas negativas, lo que es inestable.
Al unirse al magnesio, se estabiliza ese
intermediario cargado.

Se va a eliminar una molécula de agua y queda el glutámico desprotonado. Hay un cambio de electrones, se
forma un nuevo enlace y se libera el producto.

Para que se finalice la reacción y la enzima vuelva a su estado inicial, el glutámico que había quedado
desprotonado se protona con el protón tomado por la lisina y resulta la enzima igual que al comienzo.

• Traspaso de protones del sustrato a la enzima: catálisis ácido-base

• Participa un magnesio (está en el sitio activo): catálisis por ion metálico.

QUIMIOTRIPSINA

• Enzima que realiza catálisis ácido-base y catálisis covalente.

• Es una proteasa cuya estructura se mantiene por puentes de azufre y que en su sitio activo tiene serina-
aspártico-histidina.
• Rompe enlaces peptídicos adyacentes a aminoácidos aromáticos.
 Por ejemplo, his57, Asp102 y Ser195 2 se encuentran participando de la reacción. Y si se ve bien,
también participa Gly193.

La enzima en su sitio activo posee un “bolsillo” hidrofóbico que va a unir

parte del sustrato. El sustrato tiene aminoácidos aromáticos, la cadena
lateral del aminoácido aromático se va a encajar en el bolsillo para
posicionar el sustrato.

Pasos de formación del enlace covalente:

• Se visualizan: el bolsillo hidrofóbico (hidrophobic pocket) la serina e histidina.

• La cadena lateral del aminoácido aromático se coloca en el bolsillo hidrofóbico mientras que el resto
del sustrato se visualiza en celeste en la tercera imagen de la derecha. Cuando el sustrato se une, la
cadena lateral del residuo adyacente al enlace peptídico se rompe y se acomoda en el bolsillo
hidrofóbico y ahí queda en posición el
sustrato en el sitio activo.
• Luego se saca un protón del sustrato hacia
la histidina y la serina forma un enlace
covalente con el sustrato. Ahí se forma el
enlace covalente: histidina saca un protón y
queda un enlace covalente entre la serina y
el sustrato.
• Posteriormente se va a romper el enlace
peptídico y el enlace covalente, liberándose
los dos pedazos de la proteína que se está
cortando.
• Entonces se tiene catálisis ácido-base
(cuando se saca el protón) y catálisis
covalente (cuando se forma un enlace
covalente temporal).

2 Histidina, Aspártico y Serina

PROTEASA DEL VIRUS HIV

El virus HIV produce inicialmente una proteasa y una proteína, solo una. luego la proteasa corta a la proteína en
varios trozos que forman el resto de las proteínas que necesita el virus para volver a ser partículas virales.

La proteasa realiza una catálisis ácido-base.

En la imagen:

• El agua ataca al carbonilo del enlace peptídico generando un intermediario (destacado en anaranjado con
un cuadrado). Había un aspártico que saca un protón y ayuda a que esto pase.
• Después hay un reacomodamiento y se parte en dos trozos.
• Hubo movimientos de protones por lo cual es catálisis ácido-base.

LAS ENZIMAS POSEEN UN PH ÓPTIMO

A medida que aumenta el pH la actividad aumenta hasta un máximo y

luego si se sigue aumentando el pH la actividad de la enzima disminuye.
Entonces hay un valor de pH al cual la enzima tiene su máxima actividad
y sobre o bajo esos valores la enzima pierde actividad.

Si la enzima tiene mecanismo ácido-base, por ejemplo, y necesita que un

grupo químico esté protonado, pero el medio tiene un pH al cual la
molécula está desprotonada la enzima va a perder actividad. O también,
el pH puede afectar la estructura de las proteínas y causar denaturación.
Por lo tanto, no da lo mismo el pH del medio, la enzima tiene un pH
óptimo.

Distintas enzimas poseen distintos pH óptimo en la escala de pH. Muchas funcionan alrededor del pH neutro,
por ejemplo, en el citoplasma de la célula.

LAS ENZIMAS POSEEN UNA TEMPERATURA ÓPTIMA

Otras, necesitan una temperatura óptima, sobre esta pierden actividad porque las proteínas se denaturan. La
temperatura óptima va a coincidir con la temperatura a la cual la enzima funciona. Muchas enzimas, por no decir
todas, tienen temperatura óptima entre 36 y 42° C. Pero existen algunas bacterias termales que poseen enzimas
 que funcionan a una temperatura óptima de 75° C. Eso depende de cada enzima
y normalmente la temperatura óptima coincide con la temperatura del
organismo en que actúa.

Se tiene entonces que aumenta la actividad hasta un máximo de temperatura y

sobre esta comienza a disminuir.

Temperatura y pH son factores muy importantes que van a afectar la actividad

enzimática.

CINÉTICA ENZIMÁTICA

Para evaluar cómo funciona la enzima se puede determinar la velocidad a la que se genera el producto, es decir,
cómo aparecen y desaparecen sustancias durante la reacción. A eso se refiere la cinética.

Se resume la reacción de la siguiente forma:

• Enzima + sustrato parten separados.

• Se forma el complejo enzima-sustrato (ahí ocurre el encaje inducido).
• El sustrato se transforma en producto.
• La enzima libera los productos.
• La enzima vuelve a su estado inicial.
• Se repite el ciclo.

Se analiza la concentración de distintas especies a medida que avanza

el tiempo de reacción.

Al comienzo no hay producto, solo sustrato. Empieza a correr el

tiempo, el sustrato va a ir disminuyendo a medida que se transforma
en producto, este aumenta.

La concentración de enzima permanece constante, no se va a

transformar permanentemente ni se consume, se recicla, por tanto, la
enzima total es constante y es la suma de las moléculas de enzima
libres y las moléculas unidas a sustrato.

Siempre van a haber algunas moléculas de enzima que van a estar

libres y otras que van a estar unidas al sustrato, pero la cantidad de enzima total permanece constante.

CURVA DE PROGRESO

Generalmente, la reacción se va siguiendo porque se puede ver la formación de productos, y este análisis está
basado en la aparición de producto, también se puede ver la desaparición del sustrato, pero no se usa mucho
este análisis.

Normalmente se busca poder medir un producto que va apareciendo en el tiempo.

A la curva de concentración en el tiempo se llama curva de
progreso.

En la primera curva de abajo hacia arriba, a medida que avanza

el tiempo, el producto aumenta en forma lineal hasta llegar a
un máximo y la curva se aplana. Cuando ya todo el sustrato se
transforma en producto, la cantidad de producto se mantiene
constante en el tiempo.

El gráfico curvo de progreso muestra cómo se forma el

producto a medida que pasa el tiempo de reacción. La
diferencia entre cada una de las curvas es la cantidad de
sustrato con la que comienzan, si se comienza con poco
sustrato, se forma menos producto; si se tiene más sustrato,
se va a conseguir más producto. La cantidad de sustrato con
la que se parte determina con cuánto producto se va a
terminar.

Al principio hay una parte lineal y luego la curva se va a aplanar, si se proyecta esta parte lineal y se saca la
pendiente, se va a llegar una velocidad (cambio en la concentración de producto en un tiempo determinado) la
pendiente de la parte lineal de las curvas de progreso representa la velocidad a la cual se forma el producto al
comienzo de la reacción, se llama velocidad inicial (velocidad con la cual se va a sintetizar el producto al comienzo
de la reacción). Cuando se está al comienzo de la reacción y la concentración de sustrato es mucho mayor que la
concentración de enzima.

Si se ven las rectas, a mayor concentración de sustrato, mayor pendiente tienen las curvas, por lo tanto, a mayor
concentración de sustrato, mayor velocidad inicial y con mayor velocidad se va a formar el producto.

ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

El gráfico dice cómo varía la velocidad inicial

respecto a la concentración del sustrato. Al
comienzo, a concentraciones de sustrato pequeñas,
un aumento del sustrato lleva a un aumento de la
velocidad con que se forma el producto, pero a
concentraciones de sustrato elevadas, se va a llegar
a una velocidad máxima porque la enzima se satura,
ya no se puede ir más rápido.

Se tiene una hipérbola, al comienzo un aumento de

la concentración de sustrato va a provocar un
aumento de la velocidad inicial hasta que se llega a
concentraciones elevadas de sustrato a una
velocidad máxima, no se detiene totalmente. Esto aumenta lentamente hasta el infinito porque siempre va a
haber una molécula de enzima libre que pueda tomar un sustrato y seguir catalizando la reacción.
Km (constante de Michaelis) representa la concentración de sustrato a la cual se alcanza la mitad de la velocidad
máxima. Es una medida para saber la afinidad que tiene la enzima con el sustrato, si se une al sustrato va a tener
una Km baja, a menor valor de Km mayor afinidad enzima-sustrato (se necesita menos sustrato para alcanzar la
velocidad máxima).

Este gráfico no sirve mucho, porque como no se aplana totalmente el valor de la velocidad máxima es una
estimación.

CÁLCULO DE K M Y V M Á X POR LA REPRESENTACIÓN DE LINEWEAVER-BURK (DOBLES

RECÍPROCOS DE MICHAELIS-MENTEN

Se logra hacer que la relación sea una línea recta,

entonces cuando se quiere determinar Km y
velocidad máxima, se grafica en el eje X 1/[S] y en el
eje Y 1/Velocidad inicial, y da una recta que corta a
ambos ejes. el punto donde corta el eje Y es 1/Vmáx
y de ahí se despeja Vmáx, el punto donde corta el eje
X es -1/km y despejo km.

Se usa para determinar valores exactos de Km y Vmáx.

PARÁMETROS CINÉTICOS

Además de la Km y Vmáx se tienen otras constantes que reflejarán cómo está funcionando la enzima (qué tan bien
está funcionando). Estos se llaman parámetros cinéticos.

Se usan para comparar actividades enzimáticas, pudiendo saber en distintas condiciones en las que puede
funcionar mejor o comparar distintas enzimas.

• Km (constante para cada enzima): concentración de soluto (S) a la cual la velocidad inicial (Vo) es la mitad
de la velocidad máxima (Vmáx). Es una medida de afinidad de la enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor
es la afinidad de la enzima por S.
• Vmáx (velocidad máxima teórica): velocidad que se alcanza cuando todos los centros activos están
ocupados con sustrato. Es teórica porque en la realidad nunca todas las moléculas de enzima están unidas
al sustrato, por lo tanto, nunca se alcanza. A esta velocidad se llega a altas concentraciones de sustrato.
• Kcat (constante para cada enzima): constante catalítica o número de recambio, refleja la eficiencia
catalítica (qué tan eficiente es esa enzima para transformar el sustrato en producto). Representa el
número de recambio, es decir, el número de moléculas de sustrato convertidas en producto por cada
molécula de enzima en una unidad de tiempo, en condiciones de saturación del sustrato.

Se le da a la enzima cantidades de sustrato saturantes, es decir, lo suficiente para que todas las moléculas de la
enzima estén unidas al sustrato, y se ve cuántas moléculas de sustrato transforma en producto cada molécula
de enzima por segundo. Si la enzima está funcionando bien, tendrá una alta eficiencia, la Kcat dará un número
grande, quiere decir que en esas condiciones la enzima es capaz de cada molécula transformar muchas moléculas
de sustrato en producto en una mínima unidad de tiempo. A mayor número de recambio, mayor eficiencia.
 Kcat = Vmáx/[Et]

Velocidad máxima dividida por la concentración de enzima total.

• Constante de especificidad Kcat/Km: se usa para comparar la eficiencia catalítica de diferentes enzimas
(qué enzima es mejor) o el recambio de diferentes sustratos por una misma enzima (qué sustrato es mejor
para la enzima). Con un mayor número, la enzima es mejor que otra.

INHIBICIÓN ENZIMÁTICA

Habrá compuestos que pueden afectar negativamente en el funcionamiento de la enzima.

Esto no es la forma de cómo se regulan las enzimas en la célula, pero se puede hacer que la enzima se encuentre
con los inhibidores como por medio de medicamentos, por ejemplo, inhiben enzimas específicas y se elimina
una bacteria que esté causando algún mal, o pueden ser toxinas, que al ser ingeridas inhibe enzimas. La enzima
puede encontrarse con estos compuestos, pero la célula no sintetiza estos compuestos para regularla.

Los inhibidores son sustancias que reducen la actividad de una enzima al unirse a ella de un modo que influencia
la unión del sustrato y/o su número de recambio. Por lo tanto, en presencia del inhibidor, la enzima funciona
peor.

Muchos son sustancias que se parecen estructuralmente al sustrato y por eso logran unirse al sitio activo, pero
no reaccionan o reaccionan muy lento en comparación a este.

Se tiene:

Inhibición reversible: en donde el inhibidor se une y se disocia rápidamente de la enzima. Esta puede ser de 3
tipos:

• Competitivo.
• Acompetitivo.
• Mixto.3

Inhibición irreversible: en donde el inhibidor se une a la enzima fuertemente, puede ser covalente o no
covalente, pero fuerte y por lo tanto no se disocia y la enzima queda permanentemente afectada. También se
les llama inactivadores.

3 Ojo, aquel que se llama no competitivo no será revisado, es una excepción del mixto.
INHIBICIÓN REVERSIBLE

INHIBICIÓN REVERSIBLE COMPETITIVA

El inhibidor se parece estructuralmente al sustrato, por lo tanto,

se une en el sitio activo de la enzima compitiendo directamente
con el sustrato (ES [complejo enzima-sustrato] disminuye).

• El complejo enzima-inhibidor (EI) no lleva a producto.

• Se puede desplazar al inhibidor con altas concentraciones
de sustrato.
• Vmáx no cambia.
• Km aumenta. La afinidad baja por esta competencia.

EJEMPLO 1:

Medicamento llamado metotrexato, inhibe a la DHF

reductasa que participa en la síntesis de nucleótidos de
DNA. Se usa en la terapia contra el cáncer.

Las células de los tumores se están dividiendo

constantemente, por lo tanto, necesitan fabricar muchos
nucleótidos porque cada vez que se dividen hacen
replicación del DNA, entonces este compuesto es un inhibidor competitivo de esta
enzima, pues al inhibir esta enzima, la división celular se hace mucho más lenta.

Fijarse, pues el sustrato y el inhibidor se parecen estructuralmente, pues comparten

cosas estructurales que son claves.

Entonces, estructuralmente parecidos, se tienen los 2 anillos (y se tienen los nitrógenos), se tiene un CH2NHR y
un CH2NR, se parece al sustrato y por ello, logra unirse al sitio activo.

EJEMPLO 2: ESTATINAS

• Se utilizan para bajar el colesterol sanguíneo.

• Son inhibidores competitivos de la enzima clave de la síntesis
de colesterol, la HMGCoA-reductasa.
• El medicamento se une a la enzima y se inhibe la síntesis de
colesterol, al no haber síntesis de colesterol, las enzimas
obtienen el colesterol de la sangre y así baja el colesterol
sanguíneo.

Esta parte del inhibidor (en fucsia) se parece al producto de la

reacción por lo que puede unirse al sitio activo.

Recordar: El producto va a estar unido en algún momento al sitio activo.

INHIBICION REVERSIBLE ACOMPETITIVA

El inhibidor se une al complejo enzima-sustrato, no a la enzima

libre y en un sitio diferente al sitio activo (el único que se une al
sitio activo es el competitivo).

En la imagen de la derecha:

• Primero en el sitio activo se une el sustrato.

• Después en un sitio distinto se une el inhibidor.
• Mientras el inhibidor esté unido, el sustrato no puede
transformarse en producto.
• No es posible revertir el efecto con altas concentraciones
de sustrato, porque más complejos enzima sustrato se forma y, por lo tanto, más puede actuar el inhibidor.

Se va a tener que:

• Vmáx disminuye.
• Km disminuye.

Pareciera ser que tuviera más afinidad por la enzima porque se estabiliza el complejo enzima-sustrato, pero no
se transforma el sustrato en producto.

INHIBICIÓN REVERSIBLE MIXTA

El inhibidor se puede unir a la enzima libre y también al

complejo enzima-sustrato, en un sitio diferente del sitio
activo.

Puede ocurrir que primero se una el sustrato en el sitio activo

y después el inhibidor en un sitio distinto o puede que primero
se una el inhibidor en un sitio distinto y luego el sustrato en el
sitio activo.

De todas maneras, si está el inhibidor presente, el sustrato no

puede transformarse en producto. Como también se une al complejo enzima-sustrato, tampoco puede
desplazarse agregando mas sustrato.

Aquí se observa que:

• Vmáx disminuye.
• Km aumenta.

El tipo no competitivo es una excepción de inhibición mixta, en la que se observa que:

• Vmáx disminuye.
• Km no cambia.

El no competitivo ocurre con poca frecuencia. No confundirse entre acompetitivo y no competitivo.

INHIBICIÓN IRREVERSIBLE

La sustancia se combina de forma fuerte (puede incluso ser covalente) con un grupo que esté en el sitio activo o
destruye un grupo de un aminoácido clave del sitio activo provocando que la enzima ya no funcione más.

• Casi todos son sustancias tóxicas, ya sean naturales o sintéticas, venenos (plantas, hongos, sustancias
tóxicas).
• Son sustancias que inicialmente no le provocan la inactivación a la enzima, pero la enzima las comienza a
transformar y de repente aparece la forma que la inactiva.

Hay unos inactivadores basados en mecanismo porque el compuesto es capaz de sufrir las mismas
transformaciones que al comienzo sufre el sustrato. Entonces, la enzima lo une (sin darse cuenta de que no es el
sustrato), empieza a transformarlo y en un momento aparece esta forma que se queda unida permanentemente
o que destruye un grupo del sitio activo dejando a la enzima sin funcionar.

PENICILINA

Las penicilinas son sustancias que se utilizan como antibióticos, actúan

impidiendo la síntesis de la pared celular bacteriana.

• Entonces, cuando las bacterias se dividen necesitan sintetizar pared

celular. Las transpeptidasas son enzimas claves en ese proceso.
• Las penicilinas inhiben a las transpeptidasas, las bacterias no pueden
sintetizar pared celular, paran de dividirse y mueren.
• Las penicilinas tienen un anillo de 4 átomos que se llama anillo
betalactámico.
• En el sitio activo de la transpeptidasa hay un grupo OH de una serina
que es clave para la reacción.
• La penicilina se une covalente a la serina (se abrió el anillo
betalactámico) y no se suelta más, por lo que ahora la enzima tiene bloqueado este grupo que es clave
para su reacción y queda inactiva (imagen 1).
• Ejemplos de penicilina: Amoxicilina.

BETA LACTAMASA

• Hay algunas bacterias resistentes a las penicilinas que tienen una enzima
llamada beta lactamasa.
• La Beta lactamasa se une a la penicilina, se abre el anillo y ahora la enzima es
capaz de soltar la penicilina la cual ahora ya no posee el anillo betalactámico y no
puede actuar contra la bacteria. Esta enzima destruye el antibiótico (imagen 2).
ÁCIDO CLAVULÁNICO:

• Es un inhibidor de la beta lactamasa, el cual se receta en conjunto con la

amoxicilina. Es un inactivador suicida o basado en mecanismo.
• Se une a la beta lactamasa, la beta lactamasa le comienza a hacer modificaciones
y en un momento aparece una forma del ácido clavulanico de la cual la beta
lactamasa no se puede soltar dejándola inactiva.
• En el comprimido viene la amoxicilina y el ácido clavulánico, entonces, el ácido
clavulánico inhibe a la beta lactamasa y la amoxicilina inhibe a la transpeptidasa y
la bacteria muere (imagen 3).

INHIBIDORES DE LA PROTEASA DEL VIRUS HIV

Inhibidores súper específicos que son análogos del estado de

transición. Los farmacéuticos pueden diseñar compuestos que
actúan como inhibidores sabiendo el mecanismo de reacción
de una enzima.

El sitio activo tiene la máxima complementariedad con el

sustrato en el estado de transición. Si se tiene un compuesto
que se parece al estado de transición, la unión en el sitio activo
va a ser fuerte.

• Entonces, se sintetizan análogos del estado de

transición.
• Se unen fuertemente a la enzima mediante
interacciones no covalentes, pero de forma irreversible.
• La enzima queda inactiva.

Ejemplo: Los antivirales que se usan en el tratamiento contra

el virus HIV, los cuales son análogos del sistema de transición
por el que pasa el sustrato al transformarse en producto. La
proteasa del virus HIV queda inactiva, el virus no puede tener
las partículas que necesita para seguir generando partículas
virales y la infección se detiene.
ENZIMAS REGULATORIAS

La clase pasada terminamos viendo los inhibidores, de ahí que se menciona que los inhibidores son sustancia
que afectan negativamente al funcionamiento de las enzimas, pero que no son la manera como las enzimas son
reguladas en nuestro organismo.

Ahora se verán los mecanismos que tienen las células para regular el funcionamiento de sus enzimas.

Debemos comenzar entendiendo qué es una vía metabólica, como por ejemplo la glucólisis, se alude a un
conjunto de reacciones secuenciales en la que un sustrato de partida (A en el caso de la imagen, glucosa en el
caso de la glicólisis) que tras pasar por sucesivas reacciones se transforma en una molécula final (en el caso de la
imagen F, en el caso de la glicólisis piruvato). Entonces se habla de reacciones secuenciales en donde el producto
de la enzima 1 es el sustrato de la enzima 2, el producto de la enzima 2 es el sustrato de la enzima 3 y así
sucesivamente.

Para controlar la velocidad a la cual ocurre una vía metabólica se debe controlar el funcionamiento de algunas
enzimas, que al controlarlas afectarán al funcionamiento de las demás. Esas enzimas que en una vía metabólica
son reguladas se llaman enzimas regulatorias o simplemente enzima regulada. Muchas veces la enzima regulada
es la primera, es común que lo sea porque si no se comienzan las reacciones de la vía es factible que esta vía no
ocurra.

La actividad de estas enzimas regulatorias va a aumentar o disminuir en respuesta a ciertas señales, según las
necesidades de la célula, afectando la velocidad de la vía completa.

MECANISMOS DE REGULACIÓN ENZIMÁTICA

• Regulación de la cantidad de enzima sintetizada por las células1

• Inhibición reversible por producto o retroalimentación (feedback)
• Interacción con moduladores (proteínas2 u otros)
• Modificación covalente reversible
• Activación proteolítica (irreversible)

RESPECTO A LA REGULACIÓN DE LA CANTIDAD DE ENZIMA

Se refiere a la regulación de la expresión génica, cómo la célula activa la expresión de genes en particular,
entonces activando la expresión del gen que codifica para la enzima se logra que la célula produzca una mayor
cantidad de enzima, o bien se deja de expresar ese gen y se detiene la producción de la enzima. También la
enzima puede ser enviada a degradarse y de esta manera la célula regula la cantidad que hay de la enzima. Si

1 No se entrará en detalle puesto que se vio en biología celular.

2 Aquí se encuentra el funcionamiento de enzimas alostéricas.
hay una mayor cantidad de las enzimas de la glicolisis de un tejido, esa vía se encontrara trabajando en mayor
cantidad y si las enzimas no están presentes en algún momento, las vías funcionaran menos.

REGULACIÓN POR RETROALIMENTACIÓN O “FEEDBACK” O INHIBICIÓN POR PRODUCTO

• En sistemas de múltiples enzimas, la enzima regulatoria puede ser inhibida por el

producto final de la vía una vez que la concentración excede los requerimientos de
la célula.
• Cuando la reacción de la enzima regulatoria se hace más lenta toda la vía se hace
más lenta.

Esto se da porque el último producto que se da en una vía metabólica inhibe a la primera
enzima de la vía que lo produce. Y al no funcionar esta primera enzima, ninguna otra
puede actuar. Es decir, la concentración de este producto está regulando su propia
producción.

En la imagen se tiene el ejemplo de la vía de síntesis de la isoleucina a partir de la treonina.

Entonces aplicando el mecanismo, cuando la concentración de isoleucina es baja la vía
estará activa, pero si la concentración aumenta se inhibirá la primera enzima y por lo
tanto volverá a bajar la concentración de isoleucina.

INTERACCIÓN CON MODULADORES: ENZIMAS ALOSTÉRICAS

Este mecanismo corresponde a la interacción con moduladores, específicamente moduladores que son
metabolitos, son compuestos químicos que van a aparecer en la célula en cierto momento y que van a poder
activar o inhibir enzimas. Entonces las enzimas alostéricas son un ejemplo de regulación por interacción con
moduladores, en este caso no proteínas, sino que metabolitos.

Las enzimas alostéricas se regulan por la unión reversible, no covalente de compuestos regulatorios llamados
moduladores alostéricos. Para poder unir a estos moduladores alostéricos las enzimas de este tipo tienen
además del sitio activo3 poseen uno o más sitios específicos de unión para cada uno de sus moduladores llamados
sitios alostéricos.

Si tiene 2 o 3 reguladores diferentes, cada uno tendrá su sitio específico de unión.

Generalmente estas enzimas alostéricas tienen estructuras

cuaternarias, aquí se observa una (aspartato transcarbamilasa)
en particular como ejemplo, la cual posee varias subunidades.
Algunas subunidades son catalíticas en donde se encuentran
los sitios activos (zonas en azul y morado) y subunidades
regulatorias donde están los sitios alostéricos para los
modulares alostéricos (zona en rojo y amarillo). Se destaca que
existe una diferencia de lugar específico entre los sitios
alostéricos (cada modulador con su sitio exclusivo) y los sitios
activos.

3 Que es donde se une el sustrato para transformarse a producto.

INHIBIDORES Y ACTIVADORES ALOSTÉRICOS

La regulación alostérica puede funcionar de forma inhibidora o activadora, de modo que la enzima va a tener un
grupo de moduladores que la van a activar y un grupo de moduladores que la va a inhibir.

Los moduladores son generalmente metabolitos pequeños o cofactores. Ejemplo de moduladores alostéricos
que veremos:

● ATP
● ADP
● AMP
● Fosfato inorgánico
● NaDH
● Algún intermediario de la vía metabólica como citrato, fructosa 2,6 difosfato.

Todas son moléculas pequeñas.

La unión de los moduladores alostéricos provoca cambios conformacionales en las enzimas (ocurre
interconversión entre conformaciones más activas y menos activas), es decir, la conformación pasa de
conformaciones más activas a menos activas y viceversa.

Aquellas enzimas en que el sustrato y el modulador son idénticos se llaman homotrópicas. Entonces hay enzimas
que se regulan por la presencia del sustrato de su reacción, generalmente esto ocurre para activarse.

Entonces, aparece el sustrato en la célula, una molécula de sustrato se une al sitio alostérico, la enzima se activa,
otra molécula de sustrato se une en el sitio activo y se transforma en producto, es decir, la presencia del sustrato
activa la enzima. Como el sustrato y el modulador son moléculas idénticas se llaman enzimas alostéricas
homotrópicas.

Si el sustrato y el modulador son moléculas diferentes, se llaman enzimas heterotrópicas. En este caso, aparece
el modulador en la célula, se une al sitio alostérico y provoca un cambio de forma en la enzima que la activará o
inhibirá.

EJEMPLO DE CAMBIO CONFORMACIONAL

La enzima se encuentra en un estado activo “R” y en un

estado inactivo “T”. En el estado activo la enzima se
encuentra en una estructura más relajada, y en las
mitades de la enzima se observan dos espacios.

CTP es un inhibidor de la
enzima, y cuando aparece se
une en sus sitios alostéricos y
la enzima sufre un cambio de forma (como si la aplastaran) y los espacios
desaparecen. Por otro lado, un activador en otro sitio la haría volver a su estado
activo “R” mediante un cambio conformacional también.

Enzima que se estudiará más adelante para observar que los sitios alostéricos y
activos son diferentes. Utiliza como sustrato fructosa 1,6-bifosfato, sus sitios activos
serán los verdes. Es regulada por ADP y ATP. El ADP la activa y se une en sitios
diferentes al activo (rojo) y el ATP la inhibe, uniéndose también a regiones distintas del sitio activo. Es decir, la
enzima además del sitio activo posee sitios alostéricos específicos para ir uniendo cada uno de sus moduladores.

PROPIEDADES CINÉTICAS DE LAS ENZIMAS ALOSTÉRICAS

Estas enzimas poseen propiedades cinéticas diferentes de las enzimas no alostéricas.

● No siguen el comportamiento de Michaellis-Menten, no se ajustan a su ecuación.

A la derecha se ve enzima que sí sigue el

comportamiento: al graficar la velocidad
inicial v/s la concentración de sustrato se
obtiene una hipérbola. Esto permite
distinguir la Vmáx y la Km (concentración de
sustrato a la que se alcanza la mitad de la
Vmáx).

En una enzima alostérica si se grafican la Vo

v/s concentración del sustrato de obtiene la
curva graficada en negro (sigmoidal), y al
verla sabremos que es una enzima que se
está activando por la presencia de sustrato
(enzima homotrópica) y que no sigue la
cinética planteada por Michaellis-Menten.

Igual se llega a una Vmáx y se puede definir una K0.5 (concentración de sustrato a la que se alcanza la mitad de la
Vmáx), pero como no sigue el comportamiento de la cinética de Michaellis-Menten no se puede definir como Km,
sino que como “K0.5”.

La curva sigmoidal es reflejo de que hubo un cambio conformacional. La enzima comienza con una menor
velocidad inicial (menos activa) y al aparecer el sustrato se activa repentinamente.

Ejemplo de enzimas heterotrópicas

• La curva negra corresponde a la que está sin moduladores.

• En estas enzimas cuando se están en presencia de activador alostérico
las curvas se desplazan a la izquierda (celeste) y el K0.5 se hace más
pequeño, por lo que un activador alostérico aumenta la afinidad de la
enzima por el sustrato
• En presencia de un inhibidor alostérico (curvas rosadas) las curvas se
desplazan a la derecha y el K0.5 aumenta. Es decir, estos inhibidores
modifican la conformación de la enzima hacia unas con menor afinidad
por el sustrato.
MODIFICACIÓN COVALENTE REVERSIBLE

Otro mecanismo de regulación, donde a la

enzima por un tiempo corto se le une
covalentemente algún grupo químico
(fosforilo, adenilo, uridilo, metilo, casi toda la
molécula de ATP, etc.) en un aminoácido
específico.

• Dentro de los grupos químicos, el más

común es el de la fosforilación (agregar
el grupo fosforilo).

FOSFORILACIÓN-DESFOSFORILACIÓN

En este mecanismo se comienza con una proteína desfosforilada: serina-treonina-tirosina + grupo OH libre.

1. Por acción de una enzima quinasa (fosforila otras

proteínas utilizando un fosfato de ATP, es decir,
gastando ATP) se le agrega un grupo fosforilo a
cualquiera de los 3 aminoácidos que componen la
proteína inicial (serina, treonina o tirosina).
2. La enzima queda fosforilada.
3. Después de un tiempo, una enzima fosfatasa
(desfosforila) saca el grupo fosforilo y vuelve a
dejar la proteína desfosforilada.

Con este mecanismo se puede activar/ inhibir las enzimas (dependerá de cada enzima en particular)

En la imagen se ve el ejemplo de una proteína que se activa al fosforilarse, y corresponde a una enzima del
metabolismo (degradación) del glucógeno, por lo que se debe activar cuando la glicemia está baja en presencia
de glucagón en el hígado, o cuando se está haciendo ejercicio (presencia de epinefrina en el músculo). En
presencia de estas hormonas, se activa la quinasa, la enzima desfosforilada es menos activa, la quinasa la fosforila
y queda una su forma más activa. Luego de un tiempo la fosfatasa la desfosforila y vuelve a su estado menos
activo.
ACTIVACIÓN PROTEOLÍTICA

La enzima se va a activar cuando una proteasa le corte un trozo de

su secuencia de aminoácidos. Las enzimas que se activan de esta
manera son porque se producen como precursores inactivos
denominados: zimógenos, proproteínas o proenzimas.

Lo que se postula es que ese trozo que se corta se encontraba

tapando la entrada al sitio activo, evitando que el sustrato llegue
a este. Al cortar ese trozo hay un cambio de forma en la enzima
que expone al sitio activo, permitiendo que el sustrato pueda
llegar a transformarse en producto.

Este mecanismo es irreversible porque para volver a inhibir la enzima no puedo volver a pegar el trozo que acabo
de cortar. Para eso se necesitaría poder hacer enlaces peptídicos, y eso solo se hace durante la traducción, por
lo que sí se puede inhibir la enzima, pero mediante otros mecanismos. Esto es común en las proteasas.

Las proteasas suelen producirse como zimógenos y activarse por cortes proteolíticos entonces:

1. Quimiocriptisinogeno: Es la forma inactiva de la

quimiotripsina
2. Tripsina le corta un trozo y nos queda
semiactivada la quimiotripsina con capacidad
para volver a cortarse a sí misma, ella misma se
corta otro trozo y obtenemos la porción C que
es la quimiotripsina activa que ahora puede
actuar digiriendo proteínas en el sistema
digestivo.
3. A su vez, la tripsina se produce como
tripsinógeno, (trimogeno inactivo) una
enteropeptidasa produce un corte en su
secuencia de aminoácidos y obtenemos la
tripsina activada.

Mecanismo para activar estas enzimas que actúan en el estómago: estas se encuentran activas a pH ácido.

• Cuando el contenido del estómago llega al intestino donde el pH es cercano a la neutralidad, por cambio
de pH se inhibe, pero no porque se le pueda haber vuelto a pegar el trozo que se le había cortado, en ese
sentido es irreversible.

ENZIMAS QUE SE ACTIVAN DE ESTA MANERA: (ACTIVACIÓN PROTEOLÍTICA)

Caspasas: gatillan la apoptosis, se activan por cascada proteolítica en que las procaspasas van siendo cortadas y
se empiezan a ensamblar entre ellas formando las caspasas activadas.
RESUMEN DE LOS MECANISMOS DE REGULACIÓN ENZIMÁTICA 4

N° 1-2-3-4-5 → regulación de la cantidad de enzima que hay en la célula.

• Frente a una señal extracelular se puede activar un factor de transcripción que en el núcleo activa el gen
que codifica para la enzima. Se produce el RNA mensajero que es traducido en el citoplasma para provocar
la aparición de la enzima.
• Se puede regular la transcripción, el tiempo que dura el RNA mensajero (su degradación) y si la enzima
permanece o es enviada a degradarse
• Con el número 7 se tiene que la aparición del sustrato regula la enzima.
• Con el número 8 se tienen enzimas alostéricas, donde un efector alostérico regula la enzima.
• Con el número 9 se tiene una modificación covalente, la enzima se regula por
fosforilación/desfosforilación.
• Con el número 10 se tiene la Interacción con una proteína reguladora, la enzima para activarse o inhibirse
se une a otra proteína
o Ej.: CDK Y Ciclina, la ciclina es la proteína reguladora.
• Y con el número 6 la enzima puede ser secuestrada a un compartimento subcelular distinto al que actúa,
si actúa en el citosol y no quiero que actué me la llevo al retículo endoplásmico.
o Ej. enzima de la glicólisis, es secuestrada hacia el núcleo.

Las enzimas no necesariamente van a ser reguladas por un mecanismo, encontraremos enzimas que se van a
regular por más de 1, esta combinación de mecanismos en conjunto logrará que se regule la actividad de la
enzima.

Estos son los mecanismos fisiológicos por los que se regulan las enzimas, nuestras células no usan inhibidores
para regular a las enzimas.

4Aparecen otros que no explico en detalle, pero no son comunes. Recordar que los que vimos no son los únicos que
existen.
USO CLÍNICO DE LAS ENZIMAS

Existen algunas enzimas que son de utilidad clínica que nos pueden servir para apoyar el diagnóstico de una
patología.

CUMPLEN CON LAS SIGUIENTES CARACTERÍSTICAS:

• Enzimas que normalmente no se encuentran en la sangre (o se encuentran en cantidad baja) , pero que se
vierten en ella al existir daño en algún órgano, proliferación o muerte celular. De manera que puede ver
una diferencia en la cantidad de enzimas entre una persona que está sana y una que sufre una
enfermedad.
• También pueden aparecer en la orina.
• Su actividad y niveles en el tiempo son útiles para el diagnóstico,
pronóstico y evaluación de la evolución y tratamiento de enfermedades.
• Muchas enzimas son específicas de un órgano, por lo tanto, nos va a
indicar qué órgano está siendo afectado.

Sobre la imagen:

Enzimas intracelulares que aparecen en el plasma en pequeña cantidad en

pacientes que no tienen ninguna patología por el recambio normal de
proteínas que existe en la célula, cuando la célula tiene un daño o muerte
celular, aumentan su cantidad en la sangre, de manera que medir su actividad
en la sangre que también puede ser en la orina nos indicará que hay una
patología de un órgano en particular.

PRINCIPALES ENZIMAS DE SIGNIFICANCIA CLÍNICA

• Fosfatasa ácida: indica carcinoma prostático

• Alanina aminotransferasa: enfermedad hepática
• Aldolasa: enfermedad del músculo esquelético
• Fosfatasa Alcalina: enfermedad hepática o problema
a los huesos.
• Creatina quinasa: Infarto al miocardio, problema al
músculo esquelético.
• 𝜸-Glutamil transferasa: desorden hepático
• Glutation s-transferasa: desorden hepático
• Lipasa: pancreatitis aguda

Un aumento de la actividad de estas enzimas en sangre u

orina más los signos y síntomas que presenta el paciente nos
puede ayudar a afinar un diagnóstico y un tratamiento.
 En el perfil bioquímico (imagen, perfil bioquímico estándar) se mide
actividad enzimática. Enzimas que son parte del perfil bioquímico
(encerrada en cuadro rojo). Estas nos indican el funcionamiento de
distintos órganos, es un examen de rutina.

ENZIMAS EN EL DIAGNÓSTICO DE INFARTO AL MIOCARDIO

Algunas proteínas y enzimas pueden servir para

diagnóstico o sospecha de infarto al miocardio.

A veces el infarto al miocardio es fulminante y el

paciente llega con dolor en el pecho y todos los
síntomas, por lo que no se van a necesitar solicitar
muchos exámenes para saber que el paciente está
sufriendo un infarto; a veces el infarto comienza a
desarrollarse lentamente, en ese caso puede ser
necesario realizar alguna de estas mediciones para
apoyar el diagnóstico.

Por ejemplo; la lactato-deshidrogenasa tiene varias isoenzimas (esto se ve en la tabla 12-4), la aparición de
isoenzimas específicas en sangre puede indicar un infarto al miocardio:

• La LDH-1 se encuentra en el corazón y aumenta cuando hay un infarto al miocardio.

• La LDH-2 se encuentra en el corazón, pero no necesariamente aumenta cuando hay un infarto, puede
aumentar en otras condiciones.
• LDH-3 no se encuentra en el corazón, pero sí en otros órganos, por lo que puede indicar enfermedades en
estos.

La creatina-kinasa también tiene isoenzimas en

diferentes tejidos (tabla 12-3).

La CK-MB es una de las isoenzimas que está en el

corazón y se utiliza para el diagnóstico de infarto al
miocardio, esta aparece de 4 a 6 horas después de un
infarto al miocardio, alcanza el nivel más alto a las 24
horas y regresa a su nivel basal en 48-72 horas.

Lo que se va a querer es que la enzima que se está

usando como mecanismo de diagnóstico aumente
tempranamente para que indique a tiempo que el
paciente está sufriendo un infarto; por lo que la CK-
MB es una buena opción ya que aparece a las 4-6
horas.
ENZIMAS Y PROTEÍNAS USADAS EN EL DIAGNÓSTICO DE INFARTO AL MIOCARDIO

En la figura 27.3 se tiene una combinación de distintas

enzimas y proteínas que se han usado como indicadores de
infarto al miocardio, la idea es que aparezcan
tempranamente, ojalá antes de un 1 día desde que comenzó
el evento.

En la figura, donde aparece el 0 (en el origen) se indica que

en ese punto todos los resultados estaban bien según los
valores de referencia, luego comienza el infarto al miocardio.

Una de las proteínas que se utiliza mucho es la troponina

cardiaca (curva en negro), esta es específica de corazón y su
nivel aumenta de forma importante tempranamente cuando
se produce un infarto.

La otra es la CK-MB (curva en rojo), al igual que la troponina,

aumenta tempranamente durante el infarto al miocardio.

La creatina-kinasa es la curva en verde.

La lactato-deshidrogenasa si bien es indicadora de infarto al miocardio, aumenta de forma muy tardía, por lo
tanto, puede confirmar, pero no va a indicar tempranamente que se está produciendo un infarto.

Hay otras patologías donde se piden por ejemplo pruebas hepáticas, ahí lo que se mide principalmente son
transaminasas específicas, si estas están elevadas se puede sospechar un problema en el hígado, por ejemplo
junto con otros signos y síntomas como color amarillo de piel y ojos, dolor, etc.; el aumento importante de
transaminasas sirve para el diagnóstico de la hepatitis, y para ir siguiendo el tratamiento se van midiendo las
transaminasas a lo largo de los días, y si la enfermedad va evolucionando favorablemente, los niveles de
transaminasas van a ir bajando.

Estos son ejemplos, hay más patologías que se pueden ir diagnosticando y siguiendo por la determinación de
actividad de enzimas específicas en la sangre o en la orina, de esta manera, las enzimas pueden ser útiles para el
diagnóstico.