ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
INGENIERIA AMBIENTAL
MICROBIOLOGIA

NOMBRES:
• Allauca, Daniela
• Guamán, Anahy
• Sarango, Valeria
• Solano, Karolina
• Solis, Paula
FECHA: 10/01/2024

TEMA: Cultivo de microalgas

OBJETIVOS:
Objetivo General
• Aislar microalgas presentes en muestras de aguas residuales.
Objetivos Específicos
• Identificar microalgas mediante el microscopio.
• Determinar el crecimiento celular de las microalgas utilizando una
bomba de aire.
• Realizar el conteo en la cámara de Neubauer.
INTRODUCCION:
Las microalgas son organismos unicelulares fotosintéticos que pertenecen al
grupo de las algas, específicamente al reino Protista. Aunque son diminutas, su
importancia en diversos ecosistemas y aplicaciones humanas es significativa. Y
el cultivo de estas hoy en día se ha vuelto popular para combatir la
contaminación, por eso son eco-amigables, ya que reciclan eficientemente
contaminantes desde medios líquidos y gaseosos.(1)
El cultivo de microalgas se presenta como un proceso que abarca distintas
escalas, desde la obtención de especies hasta el cultivo en laboratorio y,
eventualmente, en los fotobiorreactores. En este estadio inicial, se prioriza la
obtención de un cultivo, reconociendo que la velocidad de crecimiento y las
condiciones ideales pueden ajustarse en etapas posteriores.(2)
Para el cultivo de algas usamos como medio de cultivo la Nitrofoska la cual es
una fuente de nutriente que a la vez actúa como agente de bioestimulación
para otros microrganismos. En su composición combina nitrógeno, fósforo y
potasio en proporciones equilibradas. El nitrógeno es esencial para la
formación de proteínas y clorofila en las microalgas. El fósforo es crucial para
procesos metabólicos y el desarrollo de estructuras celulares, mientras que el
potasio contribuye a la resistencia al estrés y la regulación osmótica. (3)
MATERIALES Y REACTIVOS:
MATERIALES

• Botellas de vidrio de
400ml a 50ml.

• 300 ml Agua destilada

• Nitrofoska foliar
concentración de 5%

• Erlenmeyer de 500ml
• Gasas

• Un metro de manguera

• Plastilina

• Algodón
 • Guantes

• Una jeringa estéril

• Agua residual o agua de

laguna.

EQUIPOS

• Microscopio.
• Autoclave

• Bomba de aire

• Un fotobiorreactor
PROCEDIMIENTO:
1. Desinfectamos el área donde trabajamos.
2. Ubicamos de manera ordenada los materiales.
3. Preparamos la balanza y pesamos 10,0311 gr de Nitrofoska foliar con concentración
ideal del 5%.
4. Colocamos 200 ml de agua en las botellas de vidrio para mezclar con la Nitrofoska
foliar.
5. Luego las etiquetamos y las llevamos a la autoclave por 30 minutos.
6. Luego sacamos de la autoclave y las enfriamos con un trapo en el grifo de agua.
7. Pasamos a desinfectar las cosas para proceder a poner la muestra de agua residual
que teníamos.
8. Nos trasladamos hacia la campana extractora en donde colocamos 14 ml de agua
residual, evitando meter basuras o tierra.
9. Luego pasmos armar el fotobiorreactor con una manguera que distribuía oxígeno a
las botellas ya preparadas.
10. Tapamos las botellas de agua con la tapa que ya estaba hecha un agujero
previamente.
11. En el agujero colocamos la manguera para que el oxígeno pase a las microalgas.
12. Sellamos con plastilina el agujero con el tuvo para que el oxígeno no pase.
13. Lugo acomodamos las botellas y las luces.
14. Al final hicimos revisiones diarias de que las microalgas se estén oxigenando bien y
estén creciendo.
RESULTADOS:

Figura 1: Peso de Figura 2: Mezcla de la Figura 3: Resultado de la

Nitrofoska foliar 10g Nitrofoska en 200ml de Mezcla en dos envases
agua purificada distintos

Figura 4: Autoclavado Figura 5: Resultado Figura 6: Colocación de la

durante 30 min a 121°C posterior al autoclavado muestra de agua residual
en los frascos
 Figura 7: Armamiento del Figura 8: Conexión del Figura 9: Medio de cultivo
fotobiorreactor fotobiorreactor a oxigenádose, revisado el
temperatura de 22°C y día 15/12/2023
encendido de la bomba de
oxígeno

DISCUSION:
Cuando aislamos las microalgas presentes en las muestras de aguas residuales
es un proceso crucial. Las microalgas son organismos unicelulares
fotosintéticos que estas pueden proliferar en aguas residuales debido a la
presencia de nutrientes como nitrógeno y fosforo. La identificación y
cuantificación de las microalgas podrían ser importantes para evaluar la calidad
del agua, ya que su estadía nos podría indicar la cantidad de nutrientes o
contaminantes que puede haber.
El implementar un sistema de tratamiento, por medio de un cultivo de
microalgas presentan importantes ventajas como lo son el mejoramiento de la
calidad del efluente mediante un mecanismo de bajo costo energético, así
como también el aprovechamiento de nutrientes, que están siendo
desechados, al ser incorporados a la biomasa. Comúnmente las aguas
residuales urbanas contienen los nutrientes requeridos para el
crecimiento microalga, por lo que constituyen un medio apropiado para su
desarrollo.
Las cámaras de crecimiento son ampliamente utilizadas para la incubación de
las células aisladas de microalgas. La fuente de luz suministrada y la intensidad
deben ser consideradas. Las luces -frías fluorescentes blancas son apropiadas
y ampliamente utilizadas; mientras que la luz incandescente debe evitarse. Por
otra parte, algunas algas requieren un ciclo de luz-oscuridad, es decir, que no
crecerán bajo continuas condiciones de luz. Para la mayoría de las algas, se
utiliza un ciclo de luz-oscuridad entre 12:12 y 16:8 horas. Andersen (2005).
Otros de los factores que se toman en cuentan son el pH, temperatura y
aireación. (4)
En una de las fuentes, nos habla de la aislación de la microalga Ankistrodesmus
falcatus, esta podría ayudar a bio remediar los malos olores de las aguas
residuales y diversos contaminantes orgánicos presentes en las aguas, ya que
los utilizan como fuente de carbono y/o energía para su propio desarrollo. (5)
Las microalgas solucionan grandes problemas ambientales con ayuda de la
técnica de biorremediación brinda aportes como la definición de
biorremediación en que se utilizan seres vivos para solucionar un problema
ambiental.
Este análisis no solo es valioso para evaluar la salud del ecosistema acuático,
sino también para orientar estrategias de tratamiento de aguas residuales y
diseñar medidas de control que minimicen los riesgos asociados con la
proliferación de microalgas. En resumen, el aislamiento de microalgas en aguas
residuales es esencial para una gestión efectiva de recursos hídricos y para
mitigar los impactos adversos derivados de la presencia excesiva de estos
organismos en el medio ambiente.
CONCLUSIONES:
• La técnica de aislamiento de microalgas de muestras de aguas residuales
ha resultado exitosa, destacando la diversidad y adaptabilidad de las
microalgas en este entorno. Este paso es esencial para comprender la
composición de la comunidad microbiana en aguas residuales.
• La identificación microscópica ha permitido un análisis detallado de las
características morfológicas de las microalgas. Esta fase fue
fundamental, ya que nos tardamos en identificar las microalgas ya que
pensábamos que todas debían ser iguales y verdes.
• La aplicación de una bomba de aire y la luz para estimular el crecimiento
celular ha demostrado ser un método efectivo. La introducción
controlada de oxígeno, y la luz que recibían a diario ha mejorado las
condiciones de cultivo.
• El proceso de conteo en la cámara de Neubauer ha demostrado ser una
herramienta valiosa para obtener datos cuantitativos sobre cuantas
microalgas existen por muestra de la fuente donde tomamos el agua
residual. Este método proporciona una medida precisa y reproducible
de la concentración de microalgas en la muestra.

BIBLIOGRAFIA:
1. HERNÁNDEZ-PÉREZ, Alexis and LABBÉ, José I. Microalgas, cultivo y beneficios. 2014.
Universidad de Valparaiso.

2. RUIZ, Ana. Puesta en marcha de un cultivo de microalgas para la eliminación de nutrientes

de un agua residual urbana previamente tratada anaeróbicamente. Universidad Politécnica de
Valencia. 2011.

3. VILLALBA PRIMITZ, Julia, VÁZQUEZ, Susana, RUBERTO, Lucas, LO BALBO, Alfredo and MAC
CORMACK, Walter. Bioremediation of hydrocarbon-contaminated soil from Carlini Station,
Antarctica: effectiveness of different nutrient sources as biostimulation agents. Polar Biology. 2021.
Vol. 44, no. 2. DOI 10.1007/s00300-020-02787-z.

4. TAFUR ALVAREZ, Jairo Enrique and ESTRADA PALENCIA, Lluliana. Tratamiento De Aguas
Residuales in Vitro Por Medio De La Microalga Chlorella Sp En El Municipio De Barrancabermeja,
Colombia. Citecsa. 2015. Vol. 6, no. 10.

5. RengelBustamanteJorgeArturo2018. .
 ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO
FACULTAD DE CIENCIAS
INGENIERIA AMBIENTAL
MICROBIOLOGIA

NOMBRES:
• Allauca, Daniela
• Guamán, Anahy
• Sarango, Valeria
• Solano, Karolina
• Solis, Paula
FECHA: 10/01/2024

TEMA: Conteo de microalgas

OBJETIVOS:
Objetivo General
• Aislar microalgas presentes en muestras de aguas residuales o aguas de
laguna.
Objetivos Específicos
• Identificar y realizar un conteo de las microalgas en una cámara de Neubauer
utilizando el microscopio.
INTRODUCCION:
Nos vimos en la tarea de aislar y analizar microalgas presentes en muestras de
aguas residuales o aguas de laguna. Las microalgas, organismos microscópicos
fotosintéticos, desempeñan un papel esencial en los ecosistemas acuáticos al
contribuir significativamente a la producción de oxígeno y actuar como
indicadores de la salud ambiental. Este estudio no solo aspira a identificar y
contar estas microalgas, sino también a explorar sus características únicas,
proporcionando una visión más completa de su papel en los cuerpos de agua
estudiados.
En el marco del cultivo de microalgas, se abordan diversas escalas, desde la
obtención de especies hasta el cultivo masivo en fotobiorreactores de gran
volumen. La amplificación y purificación de la población de microalgas no solo
persigue objetivos académicos, sino que también alberga aplicaciones
prácticas, como la producción de biomasa para usos comerciales o la
fitorremediación de aguas contaminadas. Este proceso es multifacético,
requiriendo la consideración de factores cruciales como temperatura, pH,
nutrientes e intensidad luminosa para garantizar un desarrollo óptimo. (6)
El procedimiento, detallado y cuidadosamente diseñado, no solo se limita al
conteo de microalgas, sino que también explora aspectos cruciales como la
observación de su distribución en la cámara de Neubauer y su comportamiento
en condiciones específicas. Estos resultados no solo tendrán implicaciones
académicas, sino que también ofrecerán información valiosa para comprender
mejor la biodiversidad en entornos acuáticos, con posibles aplicaciones en la
gestión ambiental y la investigación biotecnológica. (7)
MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES

• Algodón.

• Gasas.

• Guantes.

• Jeringa.
EQUIPOS

• Microscopio.

• Cámara de Neubauer.

PROCEDIMIENTO:
1. Desinfectamos el área donde vamos a trabajar.
2. Ubicamos de manera ordenada los materiales.
3. Pasados los 7 días de crecimiento de las microalgas procedemos a apagar
la bomba de oxígeno.
4. Retiramos las botellas con las microalgas y las llevamos al área de
trabajo.
5. Agarramos con la jeringa 1ml de la botella con las microalgas y ponemos
una gota en la cámara de Neubauer colocamos el cubreobjetos de la cámara
de Neubauer.
6. Calibramos el microscopio.
7. Llevamos la cámara de Neubauer al microscopio una vez en el
microscopio observamos por el lente a una resolución x10.
8. Mientras observamos por el microscopio dividimos en 5 cuadrantes la
cámara de Neubauer los cuales serán 1 en cada esquina y central.
9. Enfocamos el microscopio con el lente x10 y realizamos el conteo.
10. Repetimos 5 veces el procedimiento anterior.
11. Sacamos un promedio y calculamos el número de células totales en la
solución.
12. Preguntamos a la profesora la fórmula para sacar el número de células
totales en la solución.

RESULTADOS:
RESULTADOS

Figura 1: Inyectando las Figura 2: Se lo coloca en el Figura 3:Primer resultado

micro algas en la cámara microscopio para hacer el del conteo de algas.
para contaje de algas. conteo.
Total del cuadro de arriba:
45
 Total del cuadro inferior:
53
Promedio: 49

Figura 4: Segundo conteo Figura 5: Tercer conteo de Figura 6: Cuarto conteo de

de algas. algas. algas.
Total del cuadro superior: Total del cuadro superior: Total del cuadro superior:
8 70 61
Total del cuadro inferir: Total del cuadro inferior: Total del cuadro inferior:
45 84 50
Promedio: 26.5 Promedio: 77 Promedio:55.5
Figura 7: Quinto conteo de
algas.
Total del cuadro superior:
25
Total del cuadro inferior:
60
Promedio: 41.5
DISCUSION:
Después de haber finalizado la fase 1 del aislamiento de microalgas presentes
en muestras de aguas residuales a la siguiente semana empezamos con el
conteo de las microalgas en una cámara de Neubauer utilizando el
microscopio. Es necesario que al realizar esta clase de prácticas tener
conocimientos previos. Un dato importante sobre las algas es que al tratarse
de un grupo sumamente heterogéneo es difícil resaltar características
generales del grupo, por lo cual lo más objetivo es realizar estudios específicos
para cada grupo.(8)Existen distintas maneras de realizar un conteo celular, en
nuestro caso hicimos el conteo mediante la microscopía óptica, sobre esta
técnica nos basamos en un artículo científico donde nos detalla que esta
técnica es la más comúnmente empleada. Esto se debe a que es un método
simple y económicamente accesible. No obstante, es importante señalar que
este método puede resultar algo tedioso en términos de manipulación
instrumental, y su eficacia tiende a mejorar una vez que se adquiere la destreza
necesaria en el laboratorio.(9). Mientras hacíamos las respectivas
investigaciones encontramos que, aunque parezca un proceso trivial, la toma
de alícuota (muestra) es una etapa delicada dentro del proceso de conteo
celular, ya que la elección de una muestra no representativa puede generar
resultados engañosos. Al no tener un correcto conocimiento sobre la correcta
toma de muestra podemos cometer ciertos errores, por ejemplo: ●La alícuota
en cada muestra se ha tomado a una altura diferente ●Las muestras no estaban
correctamente homogenizadas en el momento de coger la alícuota Por tanto…
el investigador debe de repetir el trabajo de laboratorio, aunque no es
necesario que vuelva a las aguas residuales a tomar nuevas muestras. Luego
de hacer la correcta toma de muestra lo ubicamos en la cámara de Neubauer,
mientras visualizamos a través del microscopio observamos que en cada uno
de los compartimentos de recuento de la cámara existen multitud de
cuadrados y, además, cada uno de ellos tiene diferente tamaño y en cada uno
de ellos existe presencia de algas.(9) Al momento de realizar lo que es el conteo
de las algas las obtuvimos de dos botellas en las cuales existía distinta agua
residual, por lo cual el conteo de cada botella tenía la posibilidad de que su
conteo sea similar o muy diferentes, en nuestro caso a la botella de tapa blanca
le realizamos dos conteos en los cuales su promedio de algas en cada ml estaba
entre 49-77%, mientras que la botella de tapa verde le realizamos tres conteos
en el cual su promedio de algas en cada ml estaba entre 26.5-55.5%. En
conclusión, una de las ventajas del método microscópico es que por medio de
este se puede brindar información adicional sobre el tamaño y la morfología
de los objetos contados. En el método microscópico por cámara de Neubauer
el margen de error incrementa a medida que la muestra tiene una
concentración celular alta, además de que si el tamaño de la célula del
microorganismo es muy pequeño esta será difícil de ver.(10) Es importante
recordar que la estimación de la densidad celular es una herramienta muy
utilizada en una gran cantidad de procesos relacionados con la biotecnología,
biomedicina, producción animal, producción vegetal..., con aplicaciones
eminentemente prácticas como: Análisis de sangre, Técnicas de reproducción
asistida, Análisis de calidad del agua, etc.(9)

CONCLUSIONES:
• El proceso de aislamiento de microalgas de muestras de aguas residuales
o lagunas nos salió bastante bien, gracias a esto pudimos contar cada
una de las microalgas. Este paso es esencial para estudios de
biodiversidad y para comprender cómo las microalgas pueden adaptarse
y prosperar en diferentes condiciones ambientales.

• La identificación y el conteo de microalgas mediante el uso de la cámara

de Neubauer y el microscopio han proporcionado datos cuantitativos y
cualitativos cruciales. La capacidad de observar y contar microalgas
individualmente permite una comprensión detallada de la composición
y densidad de la población. Este conocimiento es fundamental para
evaluar la salud del ecosistema acuático y puede ser crucial en contextos
de monitoreo ambiental y gestión de recursos hídricos.
CUESTIONARIO:
¿Qué formas pueden presentar las microalgas?
Siendo organismos unicelulares fotosintéticos, exhiben diversas formas
morfológicas adaptativas. La mayoría puede adoptar estructuras esféricas para
maximizar la exposición a la luz solar como el tipo Microalga Nannochloropsis,
(11) configuraciones filamentosas para formar estructuras alargadas, células
ovoides para adaptarse a condiciones variables, formas irregulares según su
entorno, y algunas tienen cubiertas calcáreas llamadas cocolitos.
¿Cómo es la reproducción de las algas?
Las algas presentan una amplia variedad de métodos de reproducción. La
reproducción asexual puede ocurrir mediante fragmentación, donde partes del
alga generan nuevos individuos, o a través de la división celular en algas
unicelulares. En la reproducción sexual, algunas algas tienen gametos
isogámicos o anisogámicos, y muchas muestran una alternancia de
generaciones con fases haploides y diploides.(12) También se utiliza la
esporulación(13), produciendo esporas resistentes que germinan en nuevas
algas. Estos diversos mecanismos de reproducción permiten a las algas
adaptarse a una amplia gama de entornos acuáticos y desempeñar un papel
crucial en los ecosistemas acuáticos.
¿Cuál es el fundamento del agar Nitrofoska?
En su composición combina nitrógeno, fósforo y potasio en proporciones
equilibradas. El nitrógeno es esencial para la formación de proteínas y clorofila
en las microalgas. El fósforo es crucial para procesos metabólicos y el desarrollo
de estructuras celulares, mientras que el potasio contribuye a la resistencia al
estrés y la regulación osmótica. (3)
¿ Qué tipo de microalgas existen mencione 3 y sus características?
Diatomeas o algas cristal(14)
Características:
• Son algas unicelulares con paredes celulares de sílice.
• Su forma es diversa, desde células simples hasta estructuras más
complejas.
• Abundan en ambientes acuáticos y son un componente importante del
fitoplancton marino.
Spirulina(15)
Características:
• Es un tipo de cianobacteria fotosintética que a menudo se clasifica
erróneamente como alga.
• Tiene forma de espiral y puede encontrarse en aguas cálidas y
alcalinas.
• Contiene una alta concentración de proteínas, vitaminas y minerales, y
se utiliza como suplemento alimenticio.
• Su color característico es azul verdoso debido a la presencia de
pigmentos como la clorofila y la ficocianina.
Chlorella(16)
Características:
• Es un alga verde unicelular.
• Tiene un alto contenido de clorofila, lo que le confiere un color verde
intenso.
• Se utiliza en suplementos alimenticios y estudios de investigación
debido a su riqueza en nutrientes como proteínas, vitaminas y
minerales.
• Puede crecer en una variedad de entornos acuáticos, desde agua dulce
hasta agua salada.
BIBLIOGRAFIA:
3. VILLALBA PRIMITZ, Julia, VÁZQUEZ, Susana, RUBERTO, Lucas, LO BALBO, Alfredo and MAC
CORMACK, Walter. Bioremediation of hydrocarbon-contaminated soil from Carlini Station,
Antarctica: effectiveness of different nutrient sources as biostimulation agents. Polar Biology. 2021.
Vol. 44, no. 2. DOI 10.1007/s00300-020-02787-z.

6. MANZONI MARONEZE, Mariana, MONTENEGRO HERRERA, Carlos Alberto and MARTÍNEZ

JIMÉNEZ, Alfredo. Perspectivas sobre los sistemas de cultivo de microalgas: una revisión crítica.
BioTecnología. 2021. Vol. 25, no. 5.

7. ROMO-PIÑERA, Abril Karim. Manual para el cultivo de microalgas. Biologia Marina. 2002.
Vol. 16.

8. MORENO, Jr, MEDINA, Cd and ALBARRACÍN, Vh. Aspectos ecológicos y metodológicos del
muestreo, identificación y cuantificación de cianobacterias y microalgas eucariotas. REDUCA
(Biología). 2012. Vol. 5, no. 5

9. GALLEGO, V and PÉREZ, M. Estimación de la densidad celular mediante el uso de cámaras

de recuento. Universidad politécnica de valencia. 2021.

10. RAMÍREZ S, Julián A., PARRA V., John A. and ALVAREZ ALDANA, Adalucy. Análisis de técnicas
de recuento de Microorganismos. Mente Joven. 2017. Vol. 6. DOI 10.18041/2323-
0312/mente_joven.0.2017.3665.

11. HINESTROZA DURANGO, Yennifer. Microalga Nannochloropsis sp y la importancia de la

ruptura de la pared celular para liberar y cuantificar metabolitos de interés (lípidos y proteínas).
URABÁ Científica. 2019.

12. ALFONSO VALDÉS, Cuba and SOTO, Blanco. Universidad de Oriente. Online. Available from:
http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=445543757005

13. Las algas de México _ Ciencias. .

14. LORA VILCHIS, María Concepción, LÓPEZ FUERTE, Francisco Omar and PÉREZ ROJAS, Carlos
Alejandro. Algas de Cristal; diatomeas. Recursos Naturales y Sociedad. 2020. Vol. 6, no. 1

15. FAIS, Giacomo, MANCA, Alessia, BOLOGNESI, Federico, BORSELLI, Massimiliano, CONCAS,
Alessandro, BUSUTTI, Marco, BROGGI, Giovanni, SANNA, Pierdanilo, CASTILLO-ALEMAN, Yandy
Marx, RIVERO-JIMÉNEZ, René Antonio, BENCOMO-HERNANDEZ, Antonio Alfonso, VENTURA-
CARMENATE, Yendry, ALTEA, Michela, PANTALEO, Antonella, GABRIELLI, Gilberto, BIGLIOLI,
Federico, CAO, Giacomo and GIANNACCARE, Giuseppe. Wide Range Applications of Spirulina: From
Earth to Space Missions. 2022.

16. BITO, Tomohiro, OKUMURA, Eri, FUJISHIMA, Masaki and WATANABE, Fumio. Potential of
chlorella as a dietary supplement to promote human health. 2020.