Técnicas de Inseminación Artificial en Ovinos
Técnicas de Inseminación Artificial en Ovinos
Técnicas de Inseminación Artificial en Ovinos
ANTECEDENTES DE LA INSEMINACIN ARTIFICIAL La inseminacin artificial (IA) es la prctica de manejo ms valiosa para el productor de ganado. En el procedimiento se hace uso eficaz de la generosa dotacin de espermatozoides disponibles de un macho, de manera que se incrementa considerablemente el progreso gentico y se mejora en muchas ocasiones la eficiencia de la reproduccin. La eficiencia de la reproduccin usando inseminacin artificial por lo menos es tan buena como el apareamiento natural cuando no hay enfermedades. Cuando aparecen stas, especialmente venreas, la inseminacin artificial representa un importante factor de control. El desarrollo de la vgina artificial para grandes especies puede muy bien ser el desarrollo ms importante en la historia de la inseminacin artificial y an se prefiere la vgina artificial cuando se colecta semen de toros, borregos o garaones en forma regular. El electroeyaculador se desarroll a finales de los aos cuarenta. Ha sido una innovacin til para la coleccin en toros y borregos que se muestran renuentes. Los investigadores y muchos criadores reconocieron a finales de los aos 30 que la inseminacin artificial representa un tremendo apoyo para el progreso gentico. Una limitacin era que el semen tena que ser utilizado para que diera buenos resultados. Cuando Phillips y Lardy de la Universidad de Wiscolnsin descubrieron un medio nutritivo amortiguador para diluir el eyaculado, se dio el primer paso para corregir el problema Ellos desarrollaron un diluyente fosfatado de yema que protega a los espermatozoides durante el enfriamiento a temperaturas de 5C, los provea de una fuente de energa para su metabolismo y prevena el cambio de pH. Con este diluyente los espermatozoides permanecan viables y capaces de fertilizar vulos por tres o cuatro das. Salisbury y colaboradores mejoraron este diluyente al substituir el citrato de sodio por los fosfatos usados por Phillips y Lardy. La ventaja del diluyente de citrato-yema era la visibilidad del espermatozoide bajo el microscopio, permitiendo una determinacin ms exacta de la motilidad despus de la dilucin. Las primeras inseminaciones se llevaron a cabo simplemente depositando el semen en la vgina. La tcnica se refin ms tarde con el uso de un espculo y un tubo de vidrio para inseminacin. El espculo se colocaba dentro de la vagina y con una fuente de luz (primero una lmpara de pilas en la cabeza y ms tarde una lmpara del tamao de una pluma) se haca visible la parte posterior de la crvix. El tubo de inseminacin se insertaba en la apertura y se depositaba el semen aproximadamente 2 cm. dentro de la crvix. En 1937, los veterinarios daneses desarrollaron el mtodo de inseminacin rectovaginal (o de fijacin cervical). Se introduce una mano en el recto para manipular la crvix, en tanto que se inserta un tubo de inseminacin por la vgina y se pasa a travs de la crvix. Luego se puede depositar el semen en la crvix anterior, en el cuerpo del tero o en ambos sitios. Esta tcnica a este periodo se le conoce en la actualidad como de equilibrio y en este tiempo los espermatozoides absorben parte del glicerol para reemplazar cierta cantidad de agua en la clula. El glicerol acta como anticongelante para evitar la formacin de cristales de agua durante la
congelacin. Estos investigadores utilizaron hielo seco como refrigerante y almacenaron los espermatozoides a -79C Ica an se usa en la actualidad.
Conservacin prolongada de semen El semen procedente de sementales valiosos se puede conservar para utilizarlo en aos venideros, incluso despus de muerto aquel. Algunos ganaderos conservan el semen de sus mejores sementales para prevenir el trastorno que ocasionara una muerte temprana de los mismos. Los bancos de semen se pueden utilizar tambin para conservar semen control en los programas de seleccin a largo plazo. En este caso, el semen se conserva para uso futuro. Con lo que los animales producidos despus de varios aos de seleccin se pueden comprar con los animales bsicos como monitores de los progresos genticos. Aumento de eficacia reproductora Los carneros subfertiles pueden identificarse con facilidad y eliminarlos del grupo de sementales. La inseminacin artificial puede asegurar el que se inseminen todas las hembras, evitndose as problemas relacionados con las preferencias macho-hembra que a menudo se manifiestan en algunos estros de hembras. Si se utilizan inseminaciones secunciales, las hembras podrn cubrirse as cuando no presenten comportamiento estral. Reduccin o eliminacin de sementales en la ganadera Los pequeos ganaderos no precisan mantener sementales en sus explotaciones siempre que puedan obtener el semen de otros lugares. El costo y los inconvenientes de mantener los sementales quedan eliminados. Por otro lado, existen razones de tipo esttico ya que en los rebaos de cabras no es necesario mantener a los machos malolientes, sobre todo en aquellos rebaos que estn prximos a zonas urbanas. Prevencin y control de enfermedades La inseminacin artificial elimina el contacto directo macho-hembra con lo que se controla o previene el propagar enfermedades venreas u otras enfermedades. Es conveniente advertir que la inseminacin artificial es una medida profilctica, pero no curativa, de la enfermedad. Utilizacin de machos incapacitados En muchas ocasiones machos de estimable valor no pueden ser utilizados para cubrir por sufrir lesiones o por razones de edad. Si su semen es de calidad suficiente con la inseminacin artificial se pueden seguir utilizando. Mantenimiento de registros seguros La utilizacin de la inseminacin artificial permite mantener unos registros de reproduccin muy seguros. Estos registros se pueden utilizar para aumentar la seguridad de la seleccin o para eliminar caracteres indeseables en un rebao.
PREPARACIN DE LOS MACHOS Los machos pueden mostrar esterilidad transitoria como consecuencia de condiciones estresantes, por ejemplo, altas temperaturas o humedad, cambio de ambiente o de dieta, molestias por las moscas, enfermedades y otros factores. Por ello, se recomiendan tratamientos adecuados, unas 6-8 semanas antes del comienzo de los programas de inseminacin. Advirtase que muchos de los manejos rutinarios que reciben los machos pueden causar estrs como, por ejemplo, el recortar las pezuas, administrar purgantes, esquileo y bao. Se ha demostrado que las raciones con alto contenido en protena pueden incrementar la produccin de espermatozoides por el testculo y al no ser que se trate de machos en ptimas condiciones, se aconseja mejorar las raciones unas 6-8 semanas antes de comenzar la coleccin del semen. Los suplementos nutritivos se suelen administrar en el campo, aunque si se les administra en los cobijos puede que se familiaricen con otros ambientes, buenos desde el punto de vista de la adaptacin para recoger el semen .Por ello, se aconseja planear los programas de inseminacin coincidiendo con la estacin reproductora natural. Si se precisa utilizar semen fuera de estacin y conservarlo congelado hasta precisarlo. Se han realizado varios intentos de manipular la estacin reproductora de los machos utilizando luz artificial. Estos mtodos han obtenido algunos xitos, pero en la prctica son impredecibles y no se logra mantener un alto nivel de calidad del semen, a lo largo del ao
aceite de cacahuate. Las hembras tratadas mostraran sntomas de estro a los 12 das, pero el tratamiento no debe persistir mas de 5 das. Una vez los carneros y machos cabrios estn entrenados, las hembras maniqus no necesitan estar en estro, ya que los sementales estn condicionados a montar a cualquier hembra que este colocada en el aparato sujetador del cobertizo. Es aconsejable seleccionar hembras maniqus apacibles, ya que los machos pueden distraerse por aquellas hembras que no se estn completamente quietas.
en una estufa de cultivo a 37 C antes de aadir al agua. Sin embargo, la exposicin prolongada, a estas temperaturas, producir cierto deterioro del tubo interior El semen se debe recoger en un ambiente libre de polvo. Antes de la recogida de semen, se debe limpiar, cuidadosamente, el prepucio del macho, para evitar cualquier contaminacin de aquel. Los movimientos vigorosos hacia arriba y hacia delante significan que se ha producido la eyaculacin. Se debe dejar que el macho retire el pne de la vagina antes de intentar retirar esta. Inmediatamente despus de la recogida la vagina se cambia de posicin, quedando el tubo de vidrio en la parte inferior, a la vez que se sujeta este con la mano. Se quita la presin al abrir la espita, teniendo la precaucin de que no salpique agua cerca del tubo de recogida de semen. Luego se quita el polvo, se etiqueta, se tapa y se coloca en un bao a 30 C. Recogida de semen por estimulo elctrico Existen diferentes tipos de estimuladores elctricos, los mas corrientes son los que tienen un electrodo bipolar para el recto. El aparato mas comnmente utilizado, en Australia y Nueva Zelanda, es el Ruakura Ram Probe. Se trata de un estimulador accionado por bateras que proporciona una salida de 10 15 voltios. Cuando el recto del macho esta seco se recomienda utilizar los 15 voltios. Experimentalmente se ha utilizado estimuladores ms automticos. Para la coleccin de semen, el macho se debe colocar en decbito lateral, sobre una mesa o en el suelo, siempre que este limpio. Se deben cortar el pelo o lana que bordee la vaina y el prepucio se debe limpiar correctamente. La sonda se humedece o lubrica con vaselina y se inserta en el recto a una profundidad de 15-20 cm. procurando no lesionar la mucosa El pene se debe extender por enderezamiento de la flexura sigmoidea de tal forma que el glande del pne se pueda sujetar con la mano, limpia, y liberar el pne del prepucio. Por detrs del glande se coloca una pieza de gasa y se introduce el glande y el proceso uretral en un tubo de ensayo estril. Lo mejor es sujetar el pne y el tubo de ensayo con la misma mano dejando la otra libre para dar masaje en el pne en direccin hacia delante entre para cada estimulo elctrico Un ayudante debe presionar sobre la sonda hacia el suelo de la pelvis, aplicndose luego cortos estmulos (3-8 segundos) a intervalos de 15-20 segundos. Despus de unos cuantos estmulos fluir la secrecin de las glndulas accesorias y luego el semen. Cuando se obtenga inicialmente grandes cantidades de liquido claro, se deben desechar para evitar diluciones innecesarias del semen. Existe una amplia variedad entre los estmulos que necesitan los diferentes sementales hasta producir un eyaculado satisfactorio. Sin embargo, si se excepta lo poco confortable que debe resultar y las contracciones musculares que aparecen al aplicar la corriente, no existen efectos nocivos achacables a esta tcnica.
DILUYENTES PARA UTILIZAR SEMEN EN FRESCO Los medios ms comnmente usados para diluir el semen de carnero y, que se vaya a utilizar en fresco se clasifican en sintticos o naturales. Diluyentes sintticos Los diluyentes sintticos ms comnmente usados para diluir semen de carnero, para inseminacin artificial vaginal o cervical, contienen como amortiguador el tris o citrato, glucosa o fructosa como fuente de energa y yema de huevo para proteger a la membrana del espermatozoide contra el shock por fri. Estos diluyentes tambin se utilizan para el semen del macho cabrio, aunque con menor cantidad de yema de huevo, para evitar que se ponga de manifiesto una reaccin enzimtica, como consecuencia de que coagula la yema de huevo. La concentracin de la enzima vara entre los diferentes machos cabrios y es ms alta cuando se obtiene el semen mediante electroeyaculacin. El problema se puede resolver por: 1) utilizando menor concentracin de yema de huevo, en el diluyente, 2) utilizando un medio que no contenga yema de huevo (leche) y, 3) descartando el plasma del semen, por centrifugacin, con lo que se eliminara la enzima. Diluyentes para utilizar en inseminacin artificial intrauterina (quirrgica) Cuando, en los programas de transferencia de embriones, se deban inseminar ovejas directamente en el tero, con espermatozoides frescos, se recomienda utilizar como diluyente, a fin de aumentar el volumen real de semen fresco, solucin salina de fosfato tamponada (PBS), con antibiticos, una forma comercial de este diluyente es el Dulbecco PBS, a la que se recomienda adicionar 1.000 UI de penicilina G sdica y 1 mg de sulfato de estreptomicina por ml de solucin. Si el diluyente se adquiere en forma de polvo se debe reconstituir, con mucho cuidado, con agua destilada y esterilizar haciendo pasar por un filtro de 0.22cm. Diluyente natural En condiciones de campo el diluyente del semen ms fcilmente aceptable es la leche de vaca, que se puede utilizar tanto entera, como descremada o en polvo para reconstituir, siempre que se vaya a proceder a la inseminacin artificial cervical o vaginal. En algunos lugares tambin se utiliza leche UHT (tratada a temperatura muy alta), que tiene la propiedad de conservarse mejor. Este producto es estril, no precisa esterilizacin y, a diferencia de otras formas de leche, se puede utilizar directamente como diluyente. Solo se precisa abrir cada da un nuevo envase de leche UHT. Si se utiliza leche completa, descremada o en polvo se debe calentar a 92-95 C, en bao de agua, durante 8-10 minutos, para inactivar los factores txicos de su funcin proteica. MTODO DE DILUCIN La dilucin del semen se debe hacer tan pronto como se pueda una vez recolectado y analizado de forma rutinaria. Tanto el semen como el diluyente se colocan en bao de agua a 30 C para que en el momento de la dilucin tenga la misma temperatura. El diluyente se debe colocar en el bao antes que el semen.La dilucin de diluyente fri al semen puede ocasionar el shock por el fri con la consiguiente reduccin de la fertilidad. Para la dilucin se debe
utilizar una pipeta calibrada o la misma pipeta de inseminacin unida a una jeringa de 1,0 ml. La pipeta que se utilice debe estar estril y seca. La dilucin se realiza pipetenando una cantidad adecuada de diluyente y adicionndola lentamente al recipiente donde se encuentre el semen. Siempre adicionar el diluyente al semen, nunca al contrario, ya que pueden alterarse los espermatozoides con lo que se reducir su mortalidad. Despus de adicionar el diluyente se agita todo convenientemente y se examina al microscopio para comprobar la mortalidad de los espermatozoides. VOLUMEN DE INSEMINADO El volumen de inseminado puede variar ligeramente dentro de ciertos limites. El lmite inferior viene determinado por el volumen mnimo que se puede manejar convenientemente y con cierta seguridad. El limite superior esta determinado por la capacidad de rgano o lugar de la inseminacin para retener el semen. As, por ejemplo, la colocacin de ms de 0,2 ml de semen dentro del crvix de la oveja no ofrece ninguna ventaja ya que rebasara dentro de la vagina. Tabla 1 Volmenes recomendados para inseminacin. Tcnica Volumen Para inseminacin vaginal Para inseminacin cervical Para intrauterina cuerno) 0.30-0.50 ml 0.05-0.10 ml
Los aparatos de inseminacin semi-automticos no suelen utilizarse por su dificultad en limpiarlos y porque es difcil de mantener la temperatura ideal del semen, en ellos, antes de practicar la inseminacin. Para la aplicacin de semen contenido en pajuelas (en forma liquida o congelada) se utiliza un aparato llamado pistola de inseminacin o pistoleta. Equipo para inseminacin artificial intrauterina Esta formado por un telescopio, dos equipos de trocar-cnula, uno para el telescopio con una conduccin de gas y llave de dos vas para este y el otro para la pipeta de inseminacin 5 mm con la vlvula del gas quitada; una fuente de luz y cable de fibra ptica; una bomba de gas (dixido de carbono o aire) con regulador y una lnea de conduccin de ese gas. Las pipetas de inseminacin puede ser de vidrio o de plstico. Tienen un dimetro interno de 2 mm, el externo es de 4,5 mm y tienen unos 30 cm. de longitud. Si se utilizan pipetas de vidrio deben tener un dimetro externo de 0,04 mm. superior. Las pipetas de plstico van provistas de una aguja hipodrmica de 5 mm, calibre 24. El otro extremo de la pipeta se une a una jeringa de 10 ml para permitir la aspiracin y expulsin de semen.
general, una altura conveniente de la barra, para utilizarla en ovejas, puede ser de 85-90 cm. con un ancho de 60-65 cm. y una longitud de 6-8 metros para un total de 15-25 ovejas. Este tipo de corral se puede construir a nivel del suelo o algo ms elevado, a conveniencia del inseminador. En este caso la elevacin de los primeros travesaos no debe ser superior a los 50 cm. La posicin deber ser tal que la luz de las ventanas no se proyecte de frente del inseminador. Las hembras para inseminacin cervical son sujetadas por un ayudante que, desde el interior de este corral, mantiene los cuartos traseros sobre la barra del mismo mientras las patas delanteras quedan apoyadas en el suelo. Sujecin de las hembras para inseminacin intrauterina Para practicar la laparoscopia a las ovejas se utiliza un carrillo especial. Este carrillo esta provisto de elementos para sujetar las patas de los animales y de una especie de charnelas para poder elevar sus cuartos traseros. Es muy conveniente disponer de dos carritos y mejor si estn provistos de ruedas, pues as los animales pueden ser preparados para la inseminacin en un rea e inseminados en otra.
INSEMINACIN ARTIFICIAL
La inseminacin de la oveja puede ser vaginal, cervical transcervical intrauterina. Los mtodos difieren en cuanto a su complejidad y expectativas de xito. La inseminacin vaginal es el mtodo ms simple y ms rpido cuando se realiza semen fresco diluido pero requiere una dosis de semen generalmente mayor que si se utiliza alguno de los otros mtodos. Aunque no se pueda recomendar de una forma general, la inseminacin vaginal puede ser til cuando el tiempo y las disponibilidades sean factores limitantes o para inseminar hembras vrgenes en las que la estrechez de la parte vestibular no permite la penetracin del espculo. El mtodo ms comnmente utilizado para ovejas es la inseminacin cervical utilizando semen fresco. Cuando se practica adecuadamente, la inseminacin cervical de semen fresco o semen sin diluir da por resultado una alta fertilidad, comparable a la obtenida en rebaos con monta natural. Este es el mtodo generalmente recomendado de inseminacin cuando se utiliza semen freso diluido o sin diluir. El porcentaje de xitos de la inseminacin cervical utilizando semen de carnero congelado-descongelado ha sido relativamente bajo, pero se pueden obtener resultados satisfactorios al practicar la inseminacin intrauterina que lleva implcito una ciruga menor (laparotoma exploratoria). En algunas cabras se puede practicar la inseminacin intrauterina, va crvix. La inseminacin intrauterina con semen fresco diluido se utiliza para inseminar hembras superovuladas en los programas de transferencia de embriones. En la oveja, la inseminacin cervical artificial a tiempo fijo resultados del estro hormona el transporte de esperma ha reducido en la crvix y disminuy la fertilidad. Estos resultados estn en contraste con la inseminacin intrauterina que evita la crvix y resultados en las proporciones de gestaciones altas e indica eso durante inseminacin artificial que la crvix ovina no permite al pasaje libre de semen.
Varios marcadores de inflamacin, incluso, prostaglandinas y el interleucina 8 (IL-8) est presente en la crvix y es parte de la cascada inflamatoria que lleva a la contratacin eventual de neutrofilos, descargo de la enzima y avera del tejido. Las respuestas inflamatorias ocurren el funcionando normal de varios rganos reproductores, incluso el ovario y el tero, as como la crvix. La proporcin de fertilizacin est sumamente alta en las ovejas despus de la monta natural en un estro espontneo, indicando una diferencia en la funcin cervical entre las ovejas inseminaron naturalmente y las ovejas inseminaron artificialmente. La fertilidad del estro inducido por un progestageno solo o con gonadotropina es ms bajo que en las ovejas cclicas. Aumenta la fertilidad con las concentraciones mayores de progestageno probablemente es el resultado del desarrollo folicular ms apropiado, cronometrando la oleada de LH, y transporte de esperma, la proporcin de ovulacin es baja durante el anestro pero se aument por el CG. INSEMINACIN VAGINAL La inseminacin vaginal consiste en la deposicin el semen fresco diluido dentro de la vgina anterior sin el uso del espculo ni el intento de localizar el crvix. Con frecuencia se hace referencia a esta tcnica como disparo en la oscuridad. Precisamente por los malos resultados obtenidos, esta tcnica se reemplaza por la cervical y solo se utiliza cuando la segunda es imposible de realizarse. La vulva de la hembra se debe limpiar con un poco de algodn para evitar la contaminacin de la vgina al introducir la pipeta, esta se carga primero con un poco de aire, hasta la divisin 0.2 ml, y luego con la dosis requerida de semen, cogida del tubo que se mantiene en bao a 30 C. El aire tiene la misin de ayudar a que se expulse toda la cantidad de semen contenida en la jeringa. La pipeta se debe introducir, con sumo cuidado, lo ms lejos posible en la vgina, deslizando su punta por la parte superior de esta, evitndose as su introduccin accidental en la uretra, que esta en el piso de la vgina. Como por lo general no se utiliza espculo, la introduccin de la pipeta libre y tratando de mover de un lado a otro, con suavidad, la pipeta para que penetre mejor. Se aprieta, una vez en su sitio, el embolo de la jeringa y se retira la pipeta. La pipeta de inseminacin se puede utilizar varias veces siempre que se limpie concienzudamente, despus de utilizarla. Si se contamina cualquier pipeta se debe desechar. Para asegurarnos de que las pipetas estn limpias y secas adecuadamente y que no interfieran el proceso de la inseminacin se debe encargar a una nica persona de este cometido. Es muy importante que el xito de la inseminacin no se vea empaado por prisas indebidas. INSEMINACIN CERVICAL A la fecha es la prctica ms comnmente utilizada. La deposicin del semen se realiza dentro de los primeros pliegues cervicales, los cuales son visibles con la ayuda de un espculo con fuente de luz. El mtodo, barato y relativamente fcil, regularmente utiliza semen fresco el cual puede o no ser refrigerado. La utilizacin de semen congelado ha resultado en rangos poco aceptables de fertilizacin, pudiendo ser de hasta 10-30% en ovejas. En cabras el uso del semen congelado resulta en mayores tasas de concepciones (hasta 70%). Lo anterior probablemente refleja la diferencia en la profundidad de
inseminacin alcanzada en ambas especies. La anatoma de la crvix permite una penetracin completa dentro del cuerpo del tero en un 30-60% de las hembras adultas (con lo cual la tcnica se convierte en una inseminacin intrauterina no quirrgica). As, el rango de concepcin se encuentra aparentemente correlacionado de una forma positiva con la profundidad de inseminacin dentro del crvix, incrementndose aproximadamente un 10 % por cada centmetro de avance. La tcnica cervical se convierte en intrauterina transcervical cuando se logra atravesar por completo el cuello del crvix y depositar el semen intrauterinamente. Recientemente, se ha evaluado una modificacin en el mtodo transcervical en ovejas. Dicha modificacin implica la sujecin y retraccin del crvix por la vgina con un par de pinzas para permitir introduccin del instrumento inseminatorio en el canal cervical. En condiciones de prueba el tiempo recurrido para lograr la retraccin del crvix y la penetracin uterina suele ser, en promedio, de 2.6 minutos por oveja. La utilizacin en campo de esta tcnica es limitada, aun cuando se logran fertilidades aceptables. El procedimiento envuelve un alto grado de manipulacin y cualquier sangrado accidental de la vgina podra causar adherencias y comprometer la habilidad fuera de concebir naturalmente. Los resultados de concepcin pueden ser tan bajos como 18% y tan buenos como 90%, sin embargo, no hay datos disponibles de su eficacia en usos repetidos. Para la inseminacin cervical se suele emplear la tcnica de sobre la barra. La vulva de la hembra, se limpia con algodn. Los genitales externos suelen estar limpios, de todas formas la introduccin del espculo ser ms sencilla si el animal carece de pelo o lana en la regin. Si se utiliza un espculo, tipo pico de pato, se debe introducir en la vgina con las valvas cerradas y paralelo a los labios de la vulva. Se debe evitar el tratar de introducir el espculo por fuerza, ya que esto puede ocasionar lesiones en los tejidos. Despus de insertado unos 10-13 cm., el espculo, puede rotar unos 90 (arriba o abajo) o abrir sus valvas. Se dirige, entonces, el haz de luz de la bombilla hacia la vgina anterior, a travs del espculo hacia los lados. Las valvas del espculo no deben permanecer abiertas mucho tiempo para evitar que molesten al animal. Si se hace difcil la colocacin del crvix, es aconsejable mover la postura de sujecin del animal. Algunas hembras, particularmente las que no son susceptibles de estrs o las que se manejan con poco cuidado, pueden orinar cuando se las coloca en posicin de inseminar. Si la orina se acumula en la vgina se debe drenar de inmediato y lavar la vgina con solucin salina, leche u otro diluyente o dejarla en recinto aparte para inseminarla ms tarde. La pipeta de inseminacin debe ser cargada por un ayudante. Para realizar esto se tira del embolo hasta la marca 0.2 ml y luego se introduce la punta de la pipeta en el tubo, inmerso en el bao a 30 C, que contiene el semen y se aspira la cantidad necesaria. El inseminador intentara introducir la pipeta lo ms profundamente posible dentro del crvix, pero sin utilizar la fuerza. Si la pipeta penetra el crvix, el semen puede depositarse dentro del tero al empujar el embolo de la jeringa, esa retirada del espculo permite el cierre de la vgina anterior lo que impide el reflujo del semen. Despus de depositado el semen se retiran, primero la pipeta y luego el espculo . La posicin y forma de los pliegues de la entrada del crvix vara considerablemente de unos animales a otros y en algunas hembras se puede
introducir la pipeta dentro del crvix manipulando, cuidadosamente, sus pliegues. La utilizacin de pipetas con la punta angulada ayuda a este proceder. Se necesita un tanto de prctica para localizar la crvix e introducir la pipeta lo ms profundamente posible. En las cabras suele ser necesario introducir la pipeta como si se tratara de la rosca de un tornillo. Si no hay resistencia la penetracin de la pipeta suele ser muy fcil, pero tambin habr que tener cuidado, en estos casos, de no introducirla demasiado ya que se podra lesionar la pared del tero. Se ha demostrado, que cuanto ms profundamente se deposite el semen mayor es el ndice de fertilidad. En la oveja, con frecuencia es posible practicar la deposicin de semen con ms profundidad de 1 cm. en el canal cervical debido a la estructura anatmica del crvix. Un mtodo de inseminacin artificial transcervical factible para la oveja debe incluir un mtodo por cubrir con los desafos anatmicos de la crvix sin inducir el trauma. El mtodo es incluir oxitcica (OT) el tratamiento indujo la dilatacin cervical y disminuy la dificultad de pasar un catter a travs de la crvix y en el tero. A pesar de eso, hay varios factores desconocidos asociados con este tratamiento. Aunque la oxitcica no afect la proporcin de fertilizacin, los efectos de manipulacin cervical o efectos del tratamiento global no se ha evaluado. INSEMINACIN INTRAUTERINA POR LAPAROTOMA Inicialmente, para depositar el semen directamente en el tero se realizaba una laparotoma media-ventral. Lo anterior hacia que la tcnica solo tuviera uso para propsito de investigacin. El mtodo se empez a asociar con bajos ndices de recuperacin y sobrevivencia de embriones. Para 1982, se empez a modificar la tcnica y a realizarse mediante laparoscopia. INSEMINACIN INTRAUTERINA POR LAPAROSCOPIA La deposicin del semen directamente dentro del lumen uterino, evitando la barrera natural del crvix, ha mejorado de una forma radical la fertilidad. Se les suprime el agua y alimento por 12-16 horas, antes de practicar la operacin esta medida reduce el contenido de la vejiga y el rmen, lo que da por resultado una ms fcil localizacin del tero y evita asimismo, la regurgitacin del contenido ruminal durante la laparoscopia, se rasura y esteriliza la piel del rea anterior de la ubre, se anestesia localmente en un espacio de 5-7 cm. delante de la ubre y 3-4 cm. de cada lado de esa lnea. A continuacin se anestesia localmente por ejemplo 2-4 ml de clorhidrato de lidocaina al 2% inyectada por va subcutnea, 5-7 cm. anteriores a la ubre y 3-4 cm. laterales a la lnea alba. Poner especial cuidado para evitar lesionar vasos sanguneos al poner la anestesia. Se hacen dos pequeas incisiones para permitir la entrada del laparoscopio. La cavidad es insuflada con oxgeno o gas para facilitar la localizacin y manipulacin del tero al que se le encuentra anterior a la vejiga. La pipeta inseminatoria (aguja hipodrmica) es introducida va una segunda cnula y se inserta en la pared del tero hasta el lumen liberndose el semen. Normalmente se inseminan ambos cuernos uterinos antes de retirar el aparato. El tiempo tomado por hembra para la inseminacin con esta tcnica es de 1-2 minutos dependiendo de la habilidad del operador. Cuando se utiliza semen fresco con este mtodo se logran fertilizaciones mayores del 80%, con semen congelado los rangos alcanzados van desde 50 hasta 80% de concepcin.
La inseminacin intrauterina por laparoscopia tiene su mayor utilidad en programas de transferencia de embriones, en donde la utilizacin de otras tcnicas tiene algunas desventajas que son rebasadas por la deposicin del semen intrauterinamente. TIEMPO DE LA INSEMINACIN La estacionalidad reproductiva de la oveja es poliestrica estacional de das cortos y la duracin del estro en la oveja es de 17 das y la ovulacin es espontnea de 24 a 27 horas despus del estro. Para obtener buenos xitos con la inseminacin artificial se precisa algn conocimiento sobre la duracin del estro y el tiempo de la ovulacin, para ajustar la prctica de la inseminacin al momento ms propicio. Tanto los cambios de volumen como el espacio fsico del mucus-vagino-cervical, que acontecen a lo largo del estro, se pueden utilizar como una gua para determinar el estadio del estro y el tiempo ms conveniente para la inseminacin. Se ha encontrado una correlacin entre estado del mucus y fertilidad, siendo el tiempo optimo para la inseminacin cuando el mucus es copioso y claro o ligeramente nebuloso. Sin embargo, es muy problemtico en la prctica determinar con certeza el tiempo de aparicin del estro y el momento adecuado para la inseminacin. La sincronizacin del estro hace que el tiempo de la ovulacin sea predecible. l tiempo de inseminacin vara segn el mtodo de inseminacin que se vaya a utilizar. En general, la inseminacin vaginal es utilizada para hembras con estro natural o sincronizado, siendo necesaria la sincronizacin para la inseminacin intrauterina. Tiempo de inseminar a hembras con estro natural (Inseminacin Artificial Vaginal o Cervical) Cuando se deba inseminar artificialmente, por va vaginal o cervical, se obtendrn mejores resultados si la inseminacin se hace antes de la ovulacin, pero muy prximo a ella. En general, el momento ptimo para inseminar ovejas es 12-18 horas despus de la aparicin del estro. Si se van a inseminar hembras con estro natural, este normalmente se detecta con la ayuda de los recelas marcadores. El contacto con machos puede alterar la duracin del estro, que estn continuamente con machos. Una vez marcadas las hembras en estro, por los recelas, deben ser inseminadas lo ms pronto posible si solo se utilizan los recelas una vez al da; pero en el caso de emplearlos dos veces maana y tarde, las hembras marcadas por la tarde se inseminaran a primera hora del da siguiente y luego, algo ms tarde, las sealadas por la maana. La utilizacin de recelas dos veces al da aumenta considerablemente (15-20%) el nmero de estros detectados con lo que la inseminacin se puede sincronizar mejor, con relacin a la ovulacin. Tiempo de inseminacin en estro sincronizado Cuando se sincroniza el estro no hay necesidad alguna de detectarlo, la sincronizacin se debe realizar a un tiempo preferido en relacin con la aplicacin del tratamiento sincronizador. El tiempo de ovulacin varia ligeramente entre las diferentes hembras, segn las estaciones climatologicas y con el uso de PMSG o el efecto macho para estimular dentro de unos mrgenes relativamente estrechos, entre los diferentes individuos. Si junto a la PMSG se
utilizan progestgenos, en forma de pesarios, y un 5-10 % de recelas, el estro aparecer, en la mayora de las hembras, a las 36-48 horas despus de retirar el pesario y ovularn unas 60 horas despus. Los tiempos de sincronizacin. Inseminacin cervical Como sucede en las hembras con estro natural, la inseminacin suele hacerse antes, pero muy cerca, de la ovulacin. El tiempo optimo para inseminar est entre 48 y 58 horas (por lo general, una sola inseminacin a las 55 horas) despus de retirado el pesario. Inseminacin intrauterina La manipulacin del aparato genital, cerca del momento de la ovulacin, puede interferir al transporte de los oocitos desde el ovario al oviducto, con lo que en ese tiempo no se debe practicar la inseminacin intrauterina. Para la inseminacin intrauterina se suele utilizar semen de carnero congelado-descongelado. En este caso, el tiempo ptimo para la deposicin del semen, en ovejas, es de 60-66 horas despus de retirar el pesario. Las hembras superovuladas y tratadas relativamente altas de gonadotropina, ovulan ms temprano que las normales. Estas hembras se deben inseminar con dosis altas de espermatozoides frescos (por lo menos 100 millones de espermatozoides mviles). En este caso la inseminacin intrauterina puede realizarse 36-48 horas, despus de retirados los pesarios. Cuando se utiliza semen congelado-descongelado en hembras superovuladas, la inseminacin intrauterina se debe hacer 44-48 horas despus de haber quitado los pesarios. Tabla 2 Resultados obtenidos en la inseminacin artificial utilizando semen fresco y congelado TECNICA FRESCO CONGELADO Vaginal Cervical Transcervical Laparoscopica 40-50% 40-65% 60-80% 70-90% 10-20% 20% 40-70% 50-80%
inseminacin se realiza tan pronto aparecen marcadas por los recelas y la segunda 8-12 horas despus. Se debe indicar que, en circunstancias particulares, el aumento (6-10 %) de corderos por la inseminacin doble no garantiza el esfuerzo extra que se realiza. Sin embargo, se recomienda la doble inseminacin, en un estro, cuando se utiliza semen conservado o congelado y se emplea la inseminacin cervical. Si se practica la inseminacin intrauterina, la doble inseminacin no esta recomendada. DOSIS DE INSEMINADO El nmero total debe repartirse, por igual, en cada cuerno cuando se practica la inseminacin intrauterina por laparoscopia. Aun cuando los espermatozoides depositados en un cuerno uterino son capaces de fertilizar los oocitos desprendidos en el ovario contralateral, se ha observado un ligero aumento de la fertilidad cuando el total del inseminado se reparte entre ambos cuernos. Cuando se realiza la doble inseminacin, vaginal o cervical, las dosis recomendadas son para cada inseminacin. Tabla 3 Nmero mnimo de seguridad de espermatozoides mviles en Inseminado para practicar la inseminacin en las tcnicas diferentes (Nmero expresado en millones). TCNICA TIPO DE SEMEN FRESCO LIQUIDO CONGELADO CONSERVA DO INSEMINACIN VAGINAL 300 NO NO EFECTIVO EFECTIVO INSEMINACIN CERVICAL 100 150 180 INSEMINACIN 60 60 60 INTRAUTERINA VA CRVIX(CABRA) VA LAPAROSCOPIA (N TOTAL 20 20 20 EN AMBOS CUERNOS)
Recruce de las hembras que no conciben despus de la inseminacin artificial La proporcin de hembras que conciben depende de varios factores, pero normalmente no excede del 75%. Sin embargo, las hembras que no conciban despus de la inseminacin pueden ser recruzadas en un estro prximo con el fin de aumentar el ndice de corderaje, esto es posible si el programa de inseminacin artificial se realiza dentro de la estacin reproductiva. Las hembras en las que el estro y la ovulacin ha sido estimado artificialmente, fuera de la estacin reproductora, normalmente no continan cclicas. Las hembras pueden cruzarse de nuevo bien por inseminacin artificial o por monta natural, siendo preferible este ultimo mtodo dada su simplicidad y bajo precio.
Recruce por inseminacin artificial El recruce por inseminacin artificial requiere la utilizacin de recelas de arneses (mandiles) y sistemas marcadores para detectar el estro. Si la hembra no concibi a la inseminacin artificial, en la mayora de las ovejas el estro suele aparecer, de nuevo, a los 16-17 das. Sin embargo, ante la posibilidad de que el ciclo pueda ser ms corto se recomienda introducir los recelas 10-12 das despus de practicada la primera inseminacin artificial, asegurndose de que los marcadores tengan diferente color. Se suelen utilizar el 2% de recelas en los rebaos no sincronizados, en los que se sincronizo el estro, los recelas debern ser del orden de 3-4 %. En este ultimo caso, la mayora de las hembras no gestantes presentaran celo en un periodo de 4-5 das. Las hembras pueden ser probadas una o dos veces al da para inseminarlas. Recruce por monta natural En este caso, se suelen introducir los sementales 10-12 das despus de practicada la inseminacin artificial. Se suelen utilizar el 2% de carneros cuando las hembras no fueron sincronizadas, cifra que sube a 3-4% cuando se sincronizan en el ciclo anterior. No se precisa el uso de arneses ni marcadores a no ser que se quiera registrar el nmero de hembras que retornaron al. Independientemente del mtodo de recruce que se utilice es importante que el tiempo de nacimientos sea registrado cuidadosamente. Aquellos animales que conciban tras la inseminacin artificial suelen parir a los 155 das de inseminados; los que conciben en el subsiguiente cruce parirn unos 160 das despus de la inseminacin artificial original. Aunque las hembras en las que se detecta estro despus de la inseminacin artificial es poco probable que hayan concebido; lo contrario, no es exactamente verdad, ya que las hembras que no muestran estro no quiere decir que estn gestantes. La proporcin de hembras que no retornan al servicio es una indicacin, pero no una seguridad, del xito de la inseminacin artificial.
CONCLUSIONES
Actualmente los objetivos de produccin ganadera se ven sometidos a una rpida evolucin, por lo cual necesitan de progresos continuos en todas las disciplinas, una de ellas, es la reproduccin animal, la cual adquiere importancia debido a que el incremento de los rebaos depende fundamentalmente de la multiplicacin de los ovinos, es decir, de que estos se reproduzcan, as como del equilibrio fisiolgico del organismo y por lo tanto del buen funcionamiento del aparato genital y sistemas relacionados. El conocimiento de la reproduccin animal en la actualidad, incluye una serie de reas temticas diversas que van desde los temas bsicos de fisiologa hasta la manipulacin de los gametos, sin olvidar los aspectos aplicables a la mejora del rendimiento reproductivo de una unidad pecuaria. Todo esto ha evolucionado en los ltimos aos con el incremento de la tecnologa aplicada en dos lneas principales: el estudio de la endocrinologa y el control del ciclo sexual utilizando tratamientos hormonales hasta culminar con la inseminacin artificial.