E.M.B. Agar (Con Eosina y Azul de Metileno)

E.M.B.
Agar (con Eosina y Azul de Metileno)

El agar EMB es un medio de cultivo solido muy útil para el aislamiento de
enterobacterias , es decir, aquellas que habitan de forma natural nuestros intestinos pero
que, ante determinadas situaciones, pueden pasar a comportarse como patógenos.
Eschericha coli es el claro ejemplo de ello,y, además, este medio permite que se
observen claramente sus colonias, las cuales desarrollan un color brillante negro
verdoso.
El Agar con Eosina y Azul de Metileno es una combinación del medio de Levine y el de
Holt-Harris y Teague, contiene una mezcla de peptonas según Levine y presenta dos
carbohidratos lactosa y sacarosa.
Este medio de cultivo permite una diferenciación muy clara entre las colonias de
organismos fermentadores de lactosa y aquellos que no la fermentan; el contenido de
eosina y azul de metileno inhiben en cierto grado organismos Gram positivos. La
presencia de sacarosa permite para algunos miembros del grupo coliforme fermentarla
con más facilidad que la lactosa. Las colonias lactosa positiva son azules a moradas con
brillo metálico o poseen centros oscuros con periferias transparentes incoloras y las que
son negativas en lactosa o sacarosa, se observan incoloras o rosa pálido transparentes.
MODO DE USO:
Sembrar el medio de cultivo con la muestra de ensayo por estría cruzada. Incubar 24 –
48 h a 35ºC.
PREPARACION:
Rehidratar 36 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos.

Calentar agitando frecuentemente hasta el punto de ebullición durante 1 minuto para
disolverlo por completo. Esterilizar en autoclave a 121ºC ( 15 lbs de presión) durante 15
minutos. Enfriar aproximadamente a 45ºC. Vaciar en cajas de Petri estériles. Conservar
a temperatura ambiente.
 Presentación de 500 g
 Es un medio ligeramente selectivo y diferencial para el aislamiento de
microorganismos entéricos a partir de diversas muestras
 FÓRMULA EN GRAMOS POR LITRO DE AGUA DESTILADA:
 Agar 13.5, Lactosa 5.0, Azul de metileno 0.065, Peptona especial 10.0, Eosina Y
0.4, Fosfato dipotásico 2.0, Sacarosa 5.0 (pH 7.2 ± 0.2).
 CRECIMIENTO POR MICROORGANISMO:
 Escherichia coli–Colonias azul a moradas, con brillo metálico azul
verdoso, Enterococcus faecalis–Inhibición parcial, Salmonella typhimurium–
Colonias incoloras y/o transparentes, Shigella flexneri–Colonias incoloras y/o
transparentes, Staphylococcus aureus–Crecimiento parcialmente inhibido o
colonias puntiformes (1), Candida albicans–Colonias plumosas, rosa pálido
atípicas.
Agar macConkey
El agar MacConkey es un medio de cultivo sólido. selectivo y diferencial, que permite el

aislamiento exclusivo de bacilos gramnegativos. Por esta razón permite distinguir entre bacilos
fermentadores y no fermentadores de la lactosa. Es uno de los medios de cultivo más utilizados
en un laboratorio de microbiología.
Este medio se usa principalmente para aislar bacilos gramnegativos pertenecientes a la familia
Enterobacteriaceae, incluyendo las especies oportunistas y las enteropatógenas.
También se puede usar para aislar otros bacilos entéricos que habitan en el tracto
gastrointestinal, pero que no pertenecen a Enterobacteriaceae, como Aeromonas sp,
Plesiomonas sp, entre otros.
Finalmente, puede aislar otros bacilos gramnegativos no fermentadores de glucosa que se
encuentran en ambiente, agua o suelos, pero que en ocasiones pueden ser patógenos
oportunistas, como Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcalígenes sp, Chromobacterium
violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, entre otros.
Fundamento
Agar MacConkey
El fundamento de este medio se puede explicar a través de la descripción de sus componentes,

pues cada uno posee una finalidad que determina una propiedad.
Sales biliares y cristal violeta
En este sentido, el agar MacConkey tiene una composición compleja. En primer lugar, contiene
sales biliares y cristal violeta.
Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas y algunos

bacilos gramnegativos exigentes. A su vez, favorece el desarrollo de los bacilos gramnegativos
que no son afectados por estas sustancias. Por ello es un medio selectivo.
Se dice que es ligeramente selectivo en comparación a otros medios que igualmente inhiben el
crecimiento de bacterias grampositivas y también de la mayoría de las bacterias gramnegativas.
Peptonas, polipectonas y lactosa
Contiene sustancias que aportan los nutrientes necesarios a los microorganismos que se
desarrollan en este medio, como las peptonas, polipectonas y la lactosa.
La lactosa es el punto clave para que el medio sea diferencial, pues los microorganismos
que poseen la capacidad para fermentar la lactosa desarrollarán colonias rosadas fuertes.
Algunas bacterias pueden fermentar la lactosa lenta o débilmente, desarrollando colonias color
rosado pálido, y siguen siendo lactosa positiva.
Las que no fermentan la lactosa utilizan las peptonas como fuente de energía, produciendo
amoníaco, alcalinizando el medio. Por ello las colonias que se originan son incoloras o
transparentes.
Indicador de pH
El cambio de color se logra a través de otro compuesto esencial que posee el agar MacConkey.
Este compuesto es el indicador de pH, que en este caso es el rojo neutro.
La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos mixtos. Los mismos acidifican el

medio a un pH por debajo de 6,8.
Esto hace que el indicador de pH vire hacia una tonalidad rosada intensa. La intensidad del
color puede variar dependiendo del pH final.
Agua destilada, cloruro de sodio y agar
Por otra parte, contiene agua destilada y cloruro de sodio que le dan la hidratación y equilibrio
osmótico al medio. Finalmente, el medio contiene agar, que es la base que proporciona la
consistencia de medio sólido.
El medio agar MacConkey preparado debe tener un pH final ajustado a 7,1 ± 0,2.
Preparación
Para un litro de agar MacConkey se debe pesar 50 gr del medio deshidratado, luego se coloca en
una fiola y se disuelve en un litro de agua destilada. Después de 10 minutos de reposo se
calienta mezclando constantemente hasta dejar hervir por 1 minuto.
Luego se coloca la fiola en el autoclave y se esteriliza a 121 °C por 20 minutos. Culminado el

tiempo, se saca del autoclave y se deja enfriar hasta alcanzar una temperatura de 45 °C, para
posteriormente servir en placas de Petri estériles dentro de una campana de flujo laminar o
frente al mechero de Bunsen.
Dejar solidificar y guardar en un portaplaquero de forma invertida y refrigerar en nevera a 2-

8 °C hasta su uso.

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Agar (con Eosina y Azul de Metileno)

Rehidratar 36 g del medio en un litro de agua destilada. Reposar 10 a 15 minutos.

El agar MacConkey es un medio de cultivo sólido. selectivo y diferencial, que permite el

El fundamento de este medio se puede explicar a través de la descripción de sus componentes,

Sales biliares y cristal violeta

Estos elementos se encargan de inhibir el crecimiento de bacterias grampositivas y algunos

Peptonas, polipectonas y lactosa

La fermentación de la lactosa genera la producción de ácidos mixtos. Los mismos acidifican el

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Luego se coloca la fiola en el autoclave y se esteriliza a 121 °C por 20 minutos. Culminado el

Dejar solidificar y guardar en un portaplaquero de forma invertida y refrigerar en nevera a 2-

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