64 Especial Cerezos .

Agosto / Septiembre 2023

Tres décadas conviviendo con el problema

Cáncer bacteriano del cerezo: móvil. Dentro de este género se en-

cuentran bacterias patógenas de plan-
tas, animales y humanos, y también,
Avances en la comprensión de saprófitas de suelo y agua. La diversi-
dad ecológica de este género, y a la vez

la interacción patógeno, planta su cercanía genética, ha significado un

desafío para la clasificación taxonómi-

y ambiente ca, haciendo que pruebas bioquímicas

como la emisión de fluorescencia en
medio de cultivo específico o la secuen-
Es quizás uno de los ‘enemigos’ más longevos del cerezo y con el ciación del gen 16S rRNA resulten ser
poco informativas.
que los productores han aprendido a convivir. Sin embargo, aún hay Junto con el avance de las tecnologías
mucho por descubrir. Eso ha estudiado un grupo de investigadores de secuenciación, se han desarrolla-
de la Universidad de Chile, trabajo que se presenta en el siguiente do diferentes metodologías para la
clasificación taxonómica de especies
artículo. bacterianas, como el análisis de se-
AUTOR REFERENTE NICOLA FIORE, ACADÉMICO E INVESTIGADOR DE LA UNIVERSIDAD DE CHILE. cuencia multilocus (MLSA, Multilocus
M. FRANCISCA BELTRÁN, CLAUDIA CARRERAS, LORENA PIZARRO, CARLOS RUBILAR, DANIELA sequence analysis) el cual se basa en la
MUÑOZ, ANDRÉE ÁLVAREZ, FRANCO FIGUEROA, ALAN ZAMORANO, DANIELA DÍAZ, WEIER comparación de varios genes conser-
CUI, BORIS SAGREDO, FRANCISCO CORREA, JAIME OTÁROLA, VALENTINA MUÑOZ, PAULA
PIMENTEL, LUIS VILLALOBOS, MANUEL PINTO. vados dentro del género Pseu-
domonas y que son útiles

L
a ocurrencia y severidad de terias. En los últimos 20 para la identificación
enfermedades en las plantas años la preocupación de especies y pato-
resultan de la interacción de por esta enferme- vares bacterianas.
cuatro factores: la virulencia del pató- dad ha ido en au- Utilizando esta
geno, la susceptibilidad del hospedero, mento, lo que metodología, el
las condiciones ambientales y el tiem- se evidencia en equipo de bio-
po durante el cual patógeno y hospe- el número de tecnología del
dero interactúan. Entendiendo que la trabajos cien- INIA Rayen-
modificación de uno de estos factores tíficos rela- tué generó
podrían disminuir o anular la intensi- cionados que un cepario de
dad de la enfermedad, es preciso po- cada año se Pseudomonas
seer un amplio conocimiento de cada publican. Esto aisladas desde
uno de estos elementos. va de la mano huertos comer-
Definir aquellos factores que más con el aumento ciales de cerezo
influyen en la intensidad de una en- de la producción de y, en particular, de
fermedad no es tarea fácil, aún más sí cerezas en el mundo,y 31 cepas patógenas
consideramos el cambio climático que en particular en Chile, correspondientes a la es-
está viviendo el planeta. Por su parte, donde la superficie de plan- pecie Pss. Análisis MLSA de
además, los patógenos constantemente tación en este período, aumentó estas cepas confirmaron su iden-
modifican su genoma, lo que les per- de 6.800 ha a 61.500 ha, según la in- tificación, agrupándose entre sí y con
mite superar las barreras de resistencia formación del Catastro Frutícola 2023. Figura 1. Árbol las cepas de Pss disponibles en bases
de relaciones
que levantan las plantas. Finalmente, de datos, pero también revelaron cier-
filogenéticas basado
en el caso de las especies frutales, el DOS ESPECIES COMO AGENTES CAUSAL en análisis MLSA (genes ta diversidad genética que se evidencia
mejoramiento genético se enfoca rara En Chile, se han identificado dos espe- acnB, gapA, gltA, gyrB, con la formación de pequeños grupos
pgi y rpoD) de 31 cepas
vez en optimizar la resistencia frente cies como agentes causantes del cáncer dentro del árbol de relaciones filogené-
de Pseudomonas
al ataque de patógenos. bacteriano en cerezo: Pseudomonas aisladas de huertos ticas (Figura 1).
En el cultivo del cerezo, la sanidad syringae pv. syringae (Pss) y Pseudomo- comerciales de cerezo Considerando la variabilidad genética
de la región de la
de las plantas es una preocupación nas amygdali pv. morsprunorum (Pam), evidenciada en las cepas de Pss presen-
Araucanía ( ), región
constante, ya que se han identificado anteriormente conocido como Pseudo- del Ñuble ( ), región de tes en los huertos de cerezo en el país,
varias enfermedades causadas por hon- monas syringae pv. morsprunorum. El Los Ríos ( ), región del el Laboratorio de Fitovirología de la
Maule ( ), región de Los
gos, bacterias y virus. Una de las más género Pseudomonas es uno de los más Universidad de Chile trabajó en el de-
Lagos ( ) y región de
importantes es el cáncer bacteriano, complejos y actualmente alberga más O’Higgins ( ). Figura sarrollo de un nuevo método de detec-
caracterizado por la formación de can- de 140 especies que se caracterizan por extraída de Correa et ción molecular utilizando la informa-
al. 2022 (https://doi.
cros que agrietan y deforman la corte- ser bacterias Gram negativas, aeróbicas ción genómica disponible. El método
org/10.1094/MPMI-04-
za, con exudación de goma y de bac- obligadas, dotadas de un flagelo polar 22-0092-A). generado se basa en la técnica LAMP

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Figura 2. Esquema de etapas de metodología LAMP diseñada.

(Loop-mediated isothermal am- 1 Secuencia gen HopAUI

plification) y permite la detección
de 4 a 6 secuencias específicas del 3
genoma de un patógeno (Figura
2), asegurando alta especifici- Detección positiva
dad de detección, permitiendo la
identificación específica de bacte-
rias patógenas de la cepa de Pam
en cerezo, diferenciándola de Pss.

UN ENEMIGO DE HACE
TRES DÉCADAS
Después de más de 30 años de
estudios del cáncer bacteriano
en el cerezo, se concluye que es Amplificación en loop
un enemigo con el que se debe
2
convivir. No obstante, diferentes
investigaciones demuestran res- Región de O’Higgins, donde está han permitido confirmar estas patógenos utilizando diferentes
puestas diferenciales en cuanto a la mayor superficie plantada de conclusiones, y en la figura 3 se estrategias, las cuales pueden ser
la severidad de la enfermedad, la cerezo en el país, que muestran observa una disminución en el moduladas de acuerdo al estadío
que, además de la virulencia del una mayor severidad de la en- grado de la infección (área necro- de desarrollo de la planta, como
patógeno depende de la variedad, fermedad en la variedad Bing, sada) de discos de hoja tomados lo sugiere el ensayo de infección
la edad de la planta y su estado seguida de Royal Dawn y Lapins. de plantas de diferentes varieda- en discos de hoja (Figura 3). El
de salud general, indicando una En cambio, la severidad es baja des en estado fenológico de fruto conocimiento de estas estrategias
cierta especificidad en la interac- en la variedad Santina (Fuente: inmaduro y fruto maduro listo sería de gran utilidad para refor-
ción patógeno-planta. Boletín INIA Nº420, 2020). Ensa- para su cosecha. zar e incluso activar las defensas
Desde el 2017 se han desarro- yos de infección de discos de hoja Las plantas son capaces de propias de las plantas. Sin em-
llado diferentes estudios en la de algunas de estas variedades responder frente al ataque de bargo, a pesar de la importancia

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Figura 3. Fotografía de discos de hoja de diferentes variedades comerciales de cerezo, colectados en el estado de fruto inmaduro y
fruto maduro e inoculados con la cepa patogénica A1M3 de Pss. Las fotos corresponden al día 10 posinoculación. Color verde indica
zona sana y color café-negro indica zona necrosada y por tanto infectada. menor conductancia estomática
Royal Dawn Lapins Santina y una disminución en la tasa de
fotosíntesis neta en comparación
con las plantas no infectadas.
Además, las plantas inoculadas
con Pss mostraron un menor desa-
rrollo del área foliar con respecto
Fruto inmaduro

a las plantas no inoculadas con la

bacteria. Comparando el compor-
tamiento de las dos variedades
inoculadas con Pss, Bing desarro-
lló una mayor área foliar que San-
tina. Siendo Santina una variedad
que presenta mayor resistencia a
Pss, el menor desarrollo del área
foliar en las fases iniciales del
proceso infeccioso se justifica
con el alto gasto metabólico que
poscosecha
Cosecha o

la variedad enfrenta para contro-

lar la bacteria. Los parámetros de
crecimiento fueron afectados en
plantas inoculadas con Pss sin ob-
servarse una limitación sobre el
comercial del cerezo, se conoce pero también frente a los estreses to vegetativo y la respuesta fisio- transporte del agua o la asimila-
poco sobre sus mecanismos de abióticos como la deficiencia hí- lógica durante la sequía estival en ción de CO2.
defensa contra fitopatógenos. drica. Así, en ensayos en donde se las variedades de cerezo que pre-
Las plantas cuentan con recep- aplicó óxido nítrico exógenamen- sentan diferente susceptibilidad a NO BAJAR LA GUARDIA,
tores de reconocimiento de pa- te en cerezo, se observó una dis- Pss, como es el caso Bing y Santi- LA GRAN CONCLUSIÓN
trones (PRRs, pattern recogni- minución significativa del grado na. Como indicado previamente, La variabilidad genética de Pss es
tion receptors), cuya función es de infección con Pss tanto en ho- la susceptibilidad a Pss de Santina un hecho, y esto nos obliga a no
detectar a los microorganismos jas como en ramillas (Figura 4). es menor que en el caso de Bing. bajar la guardia para interceptar
a través de sus patrones molecu- Se llevó a cabo un experimento en cuanto antes la aparición de nue-
lares (MAMPs, microorganism- EL EFECTO DEL DÉFICIT HÍDRICO el Centro de Estudios Avanzados vos aislados y evaluar su nivel de
associated molecular patterns), El otro componente que es impor- en Fruticultura (CEAF) para estu- agresividad en las variedades de
denominados elicitores, desenca- tante estudiar en la interacción diar la interacción de la infección cerezo más importantes para Chi-
denando una respuesta PTI (Pat- planta-patógeno, es el ambiente, de Pss con el estrés hídrico. Para le. Por otro lado, las variaciones
tern triggered immunity). En este y dado que las nuevas condiciones esto, plantas de cerezo de las va- de la secuencia del genoma de la
sentido, el equipo de investigado- ambientales han redundado en riedades Bing y Santina de un año bacteria podrían perjudicar la efi-
res del Laboratorio de Inmunidad una notable falta de agua, es im- de edad fueron inoculadas con el ciencia de su detección (aparición
Vegetal ubicado en el Instituto portante estudiar no sólo el efec- aislado A1M3 de Pss a inicios de de falsos negativos) con evidentes
de Ciencia Agroalimentarias de to del déficit hídrico sobre el com- primavera y luego fueron some- complicaciones al momento de
la Universidad de O’Higgins está portamiento de las plantas, sino tidas a déficit hídrico controlado establecer estrategias de control
trabajando en caracterizar la in- que también sobre el patógeno y durante el verano siguiente. rápidas y efectivas.
ducción de inmunidad luego de la interacción entre ambos. Esto En las condiciones experimenta- Considerando la alta oferta de
la exposición a los elicitores xila- es parte importante del objetivo les utilizadas en este estudio, se nuevas variedades, la industria
nasa 11 inductora de etileno, Xy- del proyecto Anillo ACTO190001 ha observado que, en general, el del cerezo mundial está obliga-
n11e, proveniente de Trichoderma “Visión sobre la defensa del cere- déficit hídrico es el estrés domi- da a evaluar oportunamente la
viride y el epítopo conservado de zo en respuesta al cáncer bacte- nante si se compara con aquel que susceptibilidad de cada una de
la flagelina bacteriana flg22. Ade- rial en un escenario de restricción gatilla la infección por Pss. El défi- ella frente a Pss, previamente al
más de estos elicitores propios hídrica”, financiado con recursos cit hídrico tuvo un efecto negativo recambio varietal, para no perju-
de los microorganismos, existen de la provisión FIC del Gobierno de similar intensidad en diferen- dicar el negocio.
otras moléculas que pueden ac- Regional de O’Higgins a través de tes parámetros fisiológicos anali- Sin dudas el déficit hídrico es un
tivar mecanismos de defensa de la Agencia Nacional de Investiga- zados tanto en las plantas infec- factor limitante para el desarro-
la planta. Uno de ellos es el óxido ción y Desarrollo (ANID). tadas como en las no infectadas llo de las plantas de cerezo y apa-
nítrico, el cual es una molécula En este proyecto se busca mejorar con Pss. En cambio, con riego no rentemente enmascara los efec-
señalizadora importante en la la comprensión de los efectos en deficitario, en las plantas infecta- tos de la presencia de la bacteria,
respuesta que produce la planta plantas inoculadas en primavera das con Pss se observó un menor por lo menos durante el primer
frente al ataque de un patógeno, con Pss con respecto al crecimien- potencial hídrico de mediodía, año de infección. También corro-

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Figura 4. Efecto de la aplicación del dador de óxido nítrico nitroprusiato de Na (SNP) en la infección causada por Pss en cerezo. En la
inoculación ‘in vitro’ de Pss (izquierda), las hojas expuestas cuatro días antes a diferentes dosis de SNP presentan un menor daño causado
por la acción del fitopatógeno. A su vez, las ramillas tratadas con SNP cuatro días antes de la inoculación de Pss in vivo (derecha) presentan
una menor herida interna causada por la bacteria y una menor cantidad de bacteria viable cerca de la zona de inoculación.

Inoculación de Pss in vitro Inoculación de Pss in vivo

1.0
Control 0.05mM SNP Control 0.05mM SNP
0.8 b

Wound length (cm)

0.6
a
0.4
a a
0.2

0.0
Mock Pss Mock Pss
Control SNP

0.2 mM SNP 0.5 mM SNP

8 c
b
6

CFU/g (log10)
4

a
2 a

0
Mock Pss Mock Pss
Control SNP

boramos que, en ausencia de res- mismo diseño experimental, pero tenidos en el arco de un solo año
tricciones hídricas, Pss es capaz realizando los análisis a los 5-6 de observaciones. Para esclarecer
de ocasionar daños cuantiosos a años de vida de las plantas. In- la compleja interacción patógeno-
las plantas. troduciendo entre los parámetros hospedero es obligatorio proce-
Es importante subrayar que los experimentales el factor tiempo, der por etapas y solo cuando se
Escanea el
resultados de esta investigación sería posible levantar informa- disponga del cuadro completo, código QR
corresponden al periodo de un ciones también acerca de la pro- o lo más completo posible, será para acceder
a toda la
año desde el momento de la ino- ductividad y, muy probablemente, posible entender el mecanismo
información
culación con Pss. Altamente in- algunos resultados presentarían mediante el cual las plantas se de- del Centro de
formativo sería poder repetir el diferencias con respecto a los ob- fienden de los patógenos. Fruticultura Sur.

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