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Infecto 2019 SAM

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Infección de macrófagos humanos con Mycobacterium

tuberculosis latente: análisis transcripcional


Yong-Mendoza Samantha*1,2, Yong-Mendoza Angélica3, Campoy-Flores Emiliano4, Zaga-Clavellina Claudia V.2, León-Juárez Moisés2,
García-Herrera Rodrigo5 , Rivera-Gutiérrez Sandra1, Cerna-Cortés Jorge1, González-y-Merchand Jorge A.1, Helguera-Repetto Cecilia2.
(1)Laboratorio de Microbiología Molecular, Departamento de Microbiología, Escuela Nacional de Ciencias Biológicas, Instituto Politécnico Nacional, CDMX, MX.
(2) Departamento de Inmunobioquímica, Torre de Investigación, Instituto Nacional de Perinatología “Isidro Espinosa de los Reyes”, CDMX, MX. (3) Escuela
Nacional de Medicina y Homeopatía, Instituto Politécnico Nacional, CDMX, MX. (4) Universidad Autónoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa, CDMX, MX.
(5) Laboratorio Nacional de Ciencias de la Sostenibilidad, Instituto de Ecología, Universidad Nacional Autónoma de México, CDMX, MX.
Contacto: ceciliahelguera@yahoo.com.mx

Introducción ¿Cuáles fueron los resultados?


wag31 24hpi Formación de macrófagos
kdpC NRP1 y NRP2/Log espumosos
▪ La tuberculosis (TB) es un colesterol
24 y 48hpi SCARB1
problema de salud mundial. moeX
NRP1/Log
▪ M. tuberculosis es el agente
parE2
causal de la TB. vapC17 24 hpi
▪ En 2016 hubo 10.4 millones relG NRP1/NRP2
de casos nuevos y 1.67 tgs4
millones de personas Figura 1. Gráficas de volcán para la comparación Rv2484c
entre la infección con la fase NRP2 y la fase SREBF1
murieron. NRP1 de Mtb (NRP2/NRP1). Se observa (lado
▪ Es la novena causa de muerte superior izquierdo) un grupo de 20 genes
sub-expresados durante la infección con la fase
en el mundo. NRP2 respecto a la infección con la fase NRP1.
▪ Es la primera causa de muerte CXCL8
debido a una enfermedad 0: Virulencia, desintoxicación y 6: PE/PPE
adaptación. 7: Intermediarios del metabolismo IL-22
infecciosa por encima del 1: Metabolismo de lípidos. y respiración. Efecto quimioatrayente
2: Vías de señalización. 9: Proteínas reguladoras. IL-23A
VIH/SIDA. 3: Pared y procesos celulares. 10: Hipotéticos conservados. Las micobacterias latentes sobre-expresan distintos genes de
5: Secuencias de inserción y fagos. sobrevivencia ante la respuesta microbicida del macrófago, de Regulación de la respuesta
▪ Un tercio de la población metabolismo lipídico y de toxinas de sistemas TA que le permiten persistir inflamatoria
intracelularmente. Además, se evidencia que M. tuberculosis puede
cursa con tuberculosis latente manipular la respuesta inflamatoria del macrófago, la formación de
macrófagos espumosos y favorecer el recambio celular del granuloma.
(LTBI).
▪ Dentro del granuloma existen SREBF1**
HLA-DQB1*
condiciones de estrés, como la FTO*
CASP7*
hipoxia, que inducen un TLR2
estado de persistencia. RAB7A*
HLA-DRB3*
▪ El modelo de latencia in vitro CCL4
IL23A*
de Wayne y Hayes (1996) IL22
permite obtener dos fases de TGFB3
CTSD
latencia: NRP1 y NRP2. PTGS2
CXCL8
RAC1 * Genes sobre-expresados durante la infección temprana con bacilos latentes (NRP2) respecto a la infección
Figura 2. Grupos funcionales de los genes sobre-expresados VAMP7* con bacilos activos.
de M. tuberculosis respecto al gen rpsL proveniente de RILP ** Gen sobre-expresado durante la infección temprana con bacilos de ambas fases de latencia (NRP1 y

diferentes condiciones ambientales y que se encuentran POLR2H NRP2) respecto a la infección con bacilos activos.
Figura 3. Genes de macrófagos humanos sobre-expresados durante la infección con M. tuberculosis. Se muestra
infectando macrófagos. Se observa que hay un mayor que hay una mayor número de genes inducidos por la infección con bacilos latentes que con bacilos activos y que
¿Cuál fue el objetivo? número de genes sobre-expresados en los grupos funcionales
1, 2, 3, 7 y 10 en los bacilos provenientes de ambas fases de
entre estos genes se encuentran algunos asociados a síntesis de esteroles, respuesta inflamatoria, fusión del
fagosoma con el lisosoma, presentación de antígenos y muerte celular.
latencia.
Analizar la expresión global de
M. tuberculosis y de un grupo ** * Figura 5. Expresión diferencial por TR-qPCR
durante la infección de macrófagos THP-1
Expresión relativa a la fase Log

* *
de genes humanos *
con M. tuberculosis. (A) Expresión diferencial
* * * *
(fold change)

relacionados con la respuesta


Expresión relativa a la fase Log

* * de genes micobacterianos. (B) Expresión


* *
diferencial de genes humanos. En ambos
inmune innata, durante la
(fold change)

casos se confirma que existe una sobre-


infección temprana de expresión de genes durante la infección con
*
macrófagos humanos cuando *
* * bacilos activos respecto a la infección con
bacilos activos.
la micobacteria proviene de (* valores con diferencia estadísticamente significativa
un estado de latencia in vitro (p<0.001)).

inducido por hipoxia. parE2 vapC17 tgs4 Rv2484c kdpC rpsN1 adhA cut3 Rv3642c

¿Cómo se hizo? En conclusión:


▪ Se sugiere que hay una pre-adaptación de M. tuberculosis, proveniente
de la latencia in vitro, al ambiente intracelular.
▪ Se propone a wag31 (Rv2145c) y kdpC (Rv1031) como marcadores de
la infección temprana de macrófagos THP-1 con M. tuberculosis
latente.
▪ Se confirma que existe una modulación de la respuesta inmune de los
macrófagos durante la infección con bacilos latentes.
Mi

Validación por Microarreglo Agilent-083208 M.tb THP1 Infection


¿Qué sigue?
RT-qPCR ▪ Analizar la expresión global durante la infección de macrófagos humanos
Capacidad para analizar 4 138 genes: cuando la micobacteria proviene de un estado de latencia y en presencia
• 3 960 genes codificantes de M. tuberculosis. de colesterol.
• 178 genes de los macrófagos humanos.
▪ Estudiar los mecanismos de transmisión vertical de M. tuberculosis
mediante la caracterización de la interacción entre el patógeno y la
unidad materno-fetal.

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