MANUAL DE MICROBIOLOGÍA II(CLÍNICOS)

Escuela de Técnicos Laboratoristas

PRÁCTICA No 5
“UROCULTIVO”

OBJETIVO:

• Realizar la toma de muestra y sembrar en los diferentes medios de cultivo con las
condiciones de calidad.

PRELABORATORIO:

Investiga

• 5 especies de bacterias uropatógenas comunes.

• 5 especies de bacterias uropatógenas poco comunes (No crecen en medios de rutina)

• 5 especies uropatógenas relacionadas a catéteres vesicales de corta duración.

• Menciona características de orinas no útiles para urocultivo

• Define: cistitis, pielonefritis, hematuria.

INTRODUCCIÓN:

El cultivo de orina, también llamado urocultivo, es la prueba indicada para el diagnóstico

de infección del tracto urinario. Como los riñones y la vejiga son estériles, es decir, no hay

microbios presentes, la identificación de bacterias en la orina suele ser un fuerte indicador de

una infección del tracto urinario. Es importante tener en cuenta, sin embargo, que no siempre

la presencia de bacterias indica una infección activa. Algunos de ellas pueden colonizar la uretra

y la vejiga sin necesariamente causar enfermedad.

Las infecciones del tracto urinario(ITU) son una de las infecciones nosocomiales más

comunes y constituyen entre el 20 y 40% de las infecciones contraídas en el hospital, el 80%

de estás están asociadas al sondaje vesical.

Un cultivo de orina se considera positivo cuando, después de este tiempo, es posible

identificar más de 100.000 colonias de bacterias, llamadas colonias de unidades formadoras de

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colonias (UFC). Cuando el urocultivo es positivo, el resultado muestra todavía el nombre de la

bacteria que ha sido identificada, junto con los antibióticos que han demostrado ser eficaces en

la prevención de su crecimiento, el llamado antibiograma.

Agentes productores de ITU Todo microorganismo puede potencialmente producir

infección urinaria; sin embargo, las más frecuentes son: Escherichia coli (85%

aproximadamente), Proteus sp. (especialmente Proteus mirabilis), Klebsiella pneumoniae,

Enterococcus sp., Enterobacter sp. Pseudomonas sp., Serratia y Acinetobacter generalmente

en pacientes hospitalizados con sondas permanentes o con otra patología de base. Levaduras,

Staphylococcus saprophyticus (generalmente en mujeres en edad reproductiva), Haemophilus,

principalmente en niños.

Etapa pre-analítica Antes de iniciar el estudio de la muestra, el microbiólogo debe

conocer algunos datos concernientes al paciente: edad, género, factores predisponentes,

síntomas, antecedentes de ITU, tratamiento actual o previo con antibióticos. El paciente no

debe haber recibido terapia antimicrobiana durante los tres días anteriores a la recolección,

excepto en los casos de control de tratamiento y pacientes gravemente enfermos.

Recomendaciones previas a la toma de muestra Mujeres: se debe higienizar la zona

genital con agua y jabón, de adelante hacia atrás, secarse con toalla limpia, se deben colocar

un tapón vaginal (torunda de gasa o algodón) y se recomienda orinar separando los labios

mayores.

Recolección de la muestra • Niños y adultos que controlan esfínteres: La muestra de

elección es el chorro medio miccional, entre 15 a 30 ml. El tiempo de retención deseado es

por lo menos 3 o 4 horas, siendo la muestra más representativa la primera orina de la

mañana. • Niños y adultos que no controlan esfínteres Al acecho: se aplica a los lactantes y

es similar al descrito para los pacientes que controlan esfínteres. El operador deberá esperar
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el momento de la micción y recogerá en un envase estéril lo que seguramente será la porción

media del chorro miccional. Punción suprapúbica: se reserva para casos especiales, por

ejemplo: pacientes cuyos urocultivos previos presentan resultados conflictivos, neonatos

graves, entre otros. Deberá ser realizada por médicos entrenados. Cateterización: Debe ser

realizada por personal entrenado y se recomienda en enfermos con vejiga neurogénica,

lactantes entre otros. La muestra recolectada debe ser la porción media del chorro de orina

que sale por la sonda. • Enfermos sondados: Nunca tomar la orina que fluye del extremo

distal de una sonda que no es nueva. En caso de estar recién colocada tomarla directamente

del extremo distal en un recipiente estéril.

Conservación y trasporte de la muestra: La muestra para urocultivo debe refrigerarse a

4 – 8 ºC inmediatamente después de recolectada. Si el traslado al laboratorio demora más de

15 minutos, debe colocarse el recipiente con la orina dentro de un contenedor con hielo. Este

procedimiento permitirá que el número de microorganismos permanezca relativamente

constante por un tiempo no mayor de 24 horas

MATERIAL REACTIVOS
Pipeta Pasteur con embolo Agar MacConkey
Mechero Fisher Agar Sangre
Agar Sal y manitol
Agar EMB
Agar Mueller Hinton
Antibiograma
Kit para tinción de Gram
MATERIAL QUE DEBEN POR APARATOS Y EQUIPOS
EQUIPO Incubadora a 37˚C.
--Muestra de orina recolectada Microscopio
correctamente
--Asa de cultivo calibrada a 0.001 ml
(3mm de diámetro) o 0,01 ml (4mm
de diámetro)
--Portaobjetos
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--Cubreobjetos
--Guantes de nitrilo
--Cubrebocas
--Lentes de protección
--Maskintape

OBTENCIÓN DE LA MUESTRA
Obtención de la muestra:

Micción espontánea:
1. Colección de la primera muestra matutina y con las manos previamente lavadas.
2. Exponer el área urogenital
3. Lavar con jabón líquido con compresas estériles
4. Enjuagar con compresas estériles húmedas
5. Dejar caer el primer chorro al excusado, recolectar en un recipiente estéril el chorro
intermedio y dejar ir al excusado el ultimo chorro.
6. Tapar, etiquetar, enviar de inmediato al laboratorio

Hombres: se debe retraer el prepucio e higienizar el glande y surco balanoprepucial

con agua y jabón (no usar antisépticos). Se elimina el primer chorro de orina y luego se
recolecta en un envase estéril la fracción siguiente

PROCEDIMIENTO:
Etapa analítica
Procesamiento de la muestra: antes de iniciar el estudio de la muestra, el microbiólogo debe
conocer algunos datos concernientes a la misma.
Muestra: tipo de recolección: chorro medio, punción suprapúbica, sonda (punción, sonda
nueva). Conservación.

Examen directo
1. Examen macroscópico: olor, color, aspecto, pH, densidad.
2. Examen microscópico: estudio del sedimento (en fresco): se centrifuga entre 10 - 15 ml de
orina a 3000 rpm durante 10 min, el sedimento obtenido se coloca entre lámina y laminilla y se
observa al microscopio con objetivo de 40X.

Interpretación
Presencia de 5 o más leucocitos por campo, es signo inequívoco de piuria y refuerza el
diagnóstico de infección. • La demostración de cilindros leucocitarios en una muestra en la
que se ha identificado un germen con recuento significativo, sugiere posibilidades de
pielonefritis. • En infecciones vesicales agudas, además de piuria, puede comprobarse
hematuria. • La presencia de gran cantidad de células epiteliales escamosas, evidencia
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contaminación y la necesidad de repetir la muestra.

3. Preparación del frotis: Se toma una gota (con pipeta Pasteur) o una asada de orina, se
coloca sobre una lámina portaobjeto y se deja secar sin extender, luego se fija y se colorea
con la técnica de Gram. Cuando se sospecha de tuberculosis renal, la orina se centrifuga y se
toma una gota del sedimento, se coloca sobre una lámina portaobjeto, se deja secar sin
extender, se fija y se colorea con la técnica de Zielh Neelsen, para la búsqueda de bacilos
ácidos resistentes

PROCEDIMIENTO SIEMBRA
Método del asa calibrada: Es un método práctico, sencillo y económico, que consiste en
sembrar la orina sin centrifugar con un asa calibrada a 0.001 ml (3mm de diámetro) o 0,01 ml
(4mm de diámetro).

1.-Hacer una bitácora que incluya

• Datos del paciente: código de ingreso, nombre, fecha,
• Aspecto macroscópico y sedimento urinario
• Resultado del cultivo con recuento de colonias expresado en UFC (unidades
formadoras de colonias).
• Resultado de antibiograma (susceptible o resistente a.)
2.- Rotular el medio de cultivo con los datos del paciente escritos en una cinta de maskintape
colocando del lado del medio y no de la tapa.
3.- Homogenizar la muestra.
4. Insertar el asa calibrada estéril verticalmente en la muestra y luego diseminarla sobre la
superficie de la placa desde el centro, formando una línea y posteriormente hacer estrías
sobre la placa cruzando la línea del inóculo varias veces.
5. Incubar las placas durante 18–24 horas a 37 ºC en aerobiosis y el AS en microaerofilia y en
anaerobiosis si la muestra así lo exigiera. En caso de tener cultivos negativos a las 24 horas,
se deben incubar 24–48 horas más
6.-Interpretación de resultados, tinción de Gram y siembra en bioquímicas.
7.-Resiembra en medio Mueller Hinton con antibiograma.
8.-Interpretación de bioquímicas y antibiograma

EL REPORTE SON TODAS LAS EVIDENCIAS DE FOTOS CON TUS RESULTADOS Y

DIAGNÓSTICO EN TABLA

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