Identificación de Aminoácidos y Proteínas

Autores:

Keila Torcoroma Avendaño Arengas

Código: 161932

Juan José Cárdenas

Código: 161822

Docente:

Ramón José Lobo Jácome

Universidad Francisco de Paula Santander Ocaña

Facultad de Ciencias Agrarias y del Ambiente

Ingeniería Ambiental

Bioquímica

Ocaña, Norte de Santander Septiembre, 2019

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Tabla de Contenido

1. Introducción...........................................................................................................................1

2. Justificación.................................................................................................................................2

3. Objetivos......................................................................................................................................3

4. Fundamento Teórico....................................................................................................................4

5. Materiales....................................................................................................................................6

6. Metodología y Procedimiento.....................................................................................................7

6.1 Reacción de Ninhidrina..........................................................................................................7

6.2 Reacción de Biuret..................................................................................................................7

6.3 Reacción Xantoproteica..........................................................................................................7

6.4 Reacción con acetato de plomo..............................................................................................7

7. Datos y Resultados......................................................................................................................8

8. Cuestionario...............................................................................................................................12

9. Conclusión.................................................................................................................................13

10. Bibliografía..............................................................................................................................14

11. Evidencias Fotográficas...........................................................................................................15

11.1 Reacción de Ninhidrina......................................................................................................15

11.2 Reacción de Biuret..............................................................................................................15

11.3 Reacción Xantoproteica.........................................................................................................15

11.4 Reacción con acetato de plomo..........................................................................................16

Lista de Tablas
Tabla 1: Análisis de los resultados de la reacción con Ninhidrina................................................8
Tabla 2: Análisis de los resultados de la reacción con Biuret........................................................9
Tabla 3: Análisis de los resultados de la reacción xantoproteica................................................. 9
Tabla 4: Análisis de los resultados de la reacción con acetato de plomo..................................... 10
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1. Introducción

Los aminoácidos se pueden también clasificar según diversos criterios. Con fines analíticos y
limitándonos a los grupos representativos que se tratan en esta práctica, distinguiremos:
aminoácidos con anillo fenólico, aminoácidos que contiene azufre, aminoácidos que contienen
azufre, aminoácidos con un grupo gunidinico y aminoácidos derivados del anillo indol.
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2. Justificación

Las reacciones que permiten identificar estos y otros grupos de aminoácidos, no son
suficientes para identificar inequívoca de unos aminoácidos, por tanto cuando se analiza un
hidrolizado proteico o una mezcla de aminoácidos de otro origen, debe verificarse con
aminoácidos patrones. Las reacciones de desnaturalización y precipitación de proteínas son de
importancia en métodos de separación y se explican por efecto de calor o de ácidos sobre la
actividad enzimática. Los residuos de aminoácidos tienen la presencia de un grupo carboxílico y
un grupo amino, más un radical por la cadena.
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3. Objetivos

 Verificar reacciones de desnaturalización y precipitación por calor y por ácidos.

 Reconocimiento por reacción de color, típicas del enlace peptídico (Biuret).
 Probar la solubilidad de las proteínas variando las características del medio en que se
hallan disueltas.
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4. Fundamento Teórico

Las proteínas son herramientas moleculares que realizan una sorprendente variedad de
funciones además de servir como materiales estructurales en todos los organismos vivos (p. ej.,
actina y miosina en las células musculares animales) las proteínas participan en funciones tan
diversas como la catálisis, la regulación metabólica, el transporte y la defensa. Las proteínas
están compuestas de uno o más polipéptidos, polímeros no ramificados de 20 aminoácidos
distintos. Los genomas de la mayoría de los organismos especifican las secuencias de
aminoácidos de miles o decenas de miles de proteínas.

Las proteínas pueden distinguirse en base a su número de aminoácidos (llamados residuos

de aminoácidos), a su composición global de grupos aminoacilo, y a la secuencia de éstos.
(McGraw Hill, 1983)

Los aminoácidos son las unidades básicas que forman las proteínas. Su denominación
responde a la composición química general que presentan, en la que un grupo amino (-NH2) y
otro carboxilo o ácido (-COOH) se unen a un carbono (-C-). Las otras dos valencias de ese
carbono quedan saturadas con un átomo de hidrógeno (-H) y con un grupo químico variable al
que se denomina radical (-R).

Imagen 1: Fórmula general de aminoácidos

Fuente: Cobo, R. M. (2012). Los aminoácidos. Aula virtual de Biología. Recuperado de

https://www.um.es/molecula/prot06.htm
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Tridimensionalmente el carbono presenta una configuración tetraédrica en la que el

carbono se dispone en el centro y los cuatro elementos que se unen a él ocupan los vértices.
Cuando en el vértice superior se dispone el -COOH y se mira por la cara opuesta al grupo R,
según la disposición del grupo amino (-NH2) a la izquierda o a la derecha del carbono se habla
de " -L-aminoácidos o de " -D-aminoácidos respectivamente. En las proteínas sólo se
encuentran aminoácidos de configuración L.

En la naturaleza existen unos 80 aminoácidos diferentes, pero de todos ellos sólo unos 20
forman parte de las proteínas.

Tenemos aminoácidos apolares, polares sin carga y polares con carga.

Los aminoácidos que un organismo no puede sintetizar y, por tanto, tienen que ser
suministrados con la dieta se denominan aminoácidos esenciales; y aquellos que el organismo
puede sintetizar se llaman aminoácidos no esenciales.

Para la especie humana son esenciales ocho aminoácidos: treonina, metionina, lisina, valina,
triptófano, leucina, isoleucina y fenilalanina (además puede añadirse la histidina como esencial
durante el crecimiento, pero no para el adulto). (Cobo, 2012)
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5. Materiales

 Leche
 Huevo
 Tubos de ensayo
 Gradilla
 Pipeta
 Pinzas
 Mechero
 Glicina (C2H5NO2)
 Tirosina (C9H11NO3)
 Ninhidrina (C9H6O4)
 Hidróxido de Sodio (NaOH)
 Sulfato de Cobre (CuSO4)
 Ácido Nítrico (HNO3)
 Acetato de Plomo (Pb(C2H3O2)2)
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6. Metodología y Procedimiento

6.1 Reacción de Ninhidrina

En un tubo de ensayo, ponga 1 ml de solución proteica diluida. Agregue 0.5 ml de

disolución de ninhidrina y caliente suavemente hasta que se observe un cambio de color. La
producción de un color azul o rojizo-violeta indica que sí tiene aminoácido, recuerde que hay
tonos de color particulares para cada aminoácido.

6.2 Reacción de Biuret

A 3 ml de solución proteica y de problema adicione 1 ml de NaOH al 50% y dos gotas de

sulfato de cobre al 5%. Aprecie el color SIN AGITAR. Positivo desde un azul intenso a violeta o
rosado.

6.3 Reacción Xantoproteica

A 1 ml de solución proteica diluida, agregue lentamente y agitando 1 ml de HNO3

concentrado. Caliente con precaución hasta que hierva suavemente. El color rojo amarillo o
precipitado blanco obtenido se convierte en naranja cuando se alcalinice. Deje enfriar y añada
gota a gota, solución de NaOH al 40% hasta lograr alcalinizar. Anote el cambio de color. Si su
problema da igual al color que la clara de huevo, contiene tirosina o una proteína que contiene
éste aminoácido.

6.4 Reacción con acetato de plomo

A 2 ml de clara de huevo SIN DILUIR, agregue 5 gotas de NaOH al 40% y haga hervir
durante dos minutos, agitando. Agregue 5 gotas de disolución de acetato de plomo. Anote el
color del precipitado que se forma. Repita el procedimiento con las otras y su problema, si
obtiene el mismo color, tiene algún aminoácido azufrado.
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7. Datos y Resultados

Tabla 1

Análisis de los resultados de la reacción con Ninhidrina.

Muestra Huevo Huevo Puro Leche Pura Leche Glicina Tirosina

Diluido Diluida
Proceso
Reacción de El cambio de Se evidencian Este proceso Luego de ser Se obtuvo luego Se identificó
Ninhidrina coloración se dos fases, una nos da una expuesta de pasar por un resultado
logra al ser más grande que sustancia nuestra calentamiento positivo
sometido al la otra, ubicada líquida muestra al una sustancia para
calor, en la parte coloreada de calor bastante líquida reconocer
obteniendo inferior de tubo, violeta mediante de color violeta aminoácidos
una sustancia esta es de color pastel, más flameado, se azul oscuro a través de
un poco blanco, posee la fuerte que el obtuvo intenso. la
gelatinosa característica de de la leche sustancia Permitiendo ninhidrina,
color rojizo. ser un poco diluida, líquida con deducir un luego de ser
Esta dura y indicando presencia de resultado positivo sometida la
tonalidad desnaturalizada, que es color violeta para muestra al
sobre la ya positivo reconocimiento
indica pálido, esto calor y
mencionada, para de aminoácidos
resultado se logra finalmente
Está la otra fase Identificar característicos
negativo para gracias a la deducido
que es líquida aminoácidos con un grupo
identificación presencia de gracias al
de color vino debido a que amino y
de aminoácidos color violeta
tinto, este posee un carboxilo que
aminoácidos con un grupo azul que
resultado indica grupo amino reaccionan con
amino y uno tomó.
negativo para la y uno la ninhidrina,
carboxilo.
identificación carboxilo produciendo
de aminoácidos libre que esta tonalidad
con grupo reacciona característica.
amino libre. con la
ninhidrina.
Nota. Fuente: Autores.

Tabla 2

Análisis de los
resultados de la
reacción con Biuret
Muestra Huevo Diluido Huevo Puro Leche Leche Diluida Glicina Tirosina
Pura

Proceso
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Se observa Se coaguló, Se observa en Al igual que En la glicina La sustancia

que en la se observa la parte en la leche al igual que toma un color
parte inferior una superior una pura, esta en la transparente
queda la coloración coloración muestra tomó tirosina, con presencia
sustancia violeta en la violeta y en el color violeta presenciam de color azul
inicial y en la parte resto de la en la parte os una muy diluido
parte superior superior y sustancia se superior de la sustancia en la parte
se formó un en la mitad obtuvo un misma y la transparente superior de la
anillo de de la tono blanco. parte inferior, con sustancia
color violeta. sustancia. El violeta nos el resto, fue coloración transparente,
Positivo para Positivo permite decir de color azul muy este tono azul
confirmar la para la que es blanco. El nos indica un
tenue en la
presencia de tono violeta
presencia de positiva la parte resultado
aminoácidos nos dice que
aminoácidos identificación superior de acertado para
con este es positivo
pero de la misma. el
reactivo, pero para
identificado aminoácidos. Esto es reconocimient
se percibe reconocimien
s en baja positivo o de
También que to de
cantidad por para aminoácidos
se aminoácidos.
este identificaci con reactivo
identificaron
reactivo. ón de de biuret.
en baja
aminoácido
cantidad.
s, debido al
color azul.
Nota. Fuente: Autores.

Nota. Fuente: Autores.

Tabla 3

Análisis de los resultados de la reacción xantoproteica.

Muestra Huevo Diluido Huevo Puro Leche Pura Leche Diluida Glicina Tirosina

Proceso

Esta reacción Se Se observa En este tubo Se forma una Se evidencia

da lugar a dos desnaturalizo que existe el resultado se sustancia la formación
fases, la y formo un variación en divide muy totalmente de dos fases
inferior de tapón en el la coloración claramente en transparente, de igual
color amarillo tubo de de la dos fases, una negativa para tamaño, la de
claro y la ensayo de sustancia en de ellas (parte reconocimiento la parte
superior de color amarillo el fondo se ve inferior) más de inferior
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amarillo pálido, debajo amarillo amplia que la aminoácidos presenta

oscuro. La de este tapón intenso y a otra, posee con la reacción tonalidad
presencia de hay una fase medida que se color amarillo xantoproteica. desde el
coloración liquida en la llega a la pálido fondo del
amarillo nos cual varia el parte superior mientras que tubo, color
indica positivo color de de la la fase de la amarillo
para el amarillo sustancia el parte superior claro, a
reconocimiento intenso a color presenta un medida que
de claro. Esta comienza a color esta sustancia
aminoácidos reacción es perder su característico se acerca a la
aromáticos positiva para intensidad y naranja. La división con
como tirosina, la presencia se va reacción la otra fase se
triptófano, y de haciendo cada xantoproteica hace total
fenilalanina. aminoácidos vez más es positiva transparente,
aromáticos pálido. Este cuando la fase que
como tirosina, color amarillo presenta esta sobre la
triptófano, y se debe a la coloración ya explicada
fenilalanina presencia de amarilla, es de aspecto
ya que su aminoácidos debido a que aceitoso con
coloración fue aromáticos la proteína un color
amarilla. como la contiene amarillo
tirosina, aminoácidos oscuro. La
fenilalanina y aromáticos presencia de
triptófano. como la coloración
tirosina, la amarillo nos
fenilalanina y indica
triptófano. positivo para
la presencia
de
aminoácidos
aromáticos
como la
tirosina,
triptófano,
fenilalanina.

Nota: Fuente: Autores.

Tabla 4

Análisis de los resultados de la reacción con acetato de plomo.

Muestra Huevo Puro Leche pura Glicina Tirosina

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Luego de la muestra Se logró una Se forma una De acuerdo a los

ser sometida a lo sustancia totalmente sustancia líquida pasos del
que indica el blanca, un poco muy clara de procedimiento, el
procedimiento, desnaturalizada, de tonalidad blanca, resultado blancuzco
obtenemos una aspecto líquido esta este color nos brinda turbio con aspecto
sustancia de color tonalidad nos dice la posibilidad de líquido, nos indica
blanco un poco que es negativo para deducir que es un resultado
Desnaturalizada, la reconocer negativo para negativo para
tonalidad blanca nos aminoácidos reconocimiento de identificación de
da una respuesta azufrados. aminoácidos aminoácidos
negativa para azufrados. azufrados
reconocimiento
aminoácidos
azufrados.
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8. Cuestionario

¿A qué se debe el nombre reactivo de Biuret?

El biuret es una molécula formada por dos de urea, caracterizada estructuralmente por la
presencia del enlace peptídico, Esta es la molécula más sencilla que reacciona con el catión
cúprico en medio alcalino. La reacción es común a todos los compuestos que tengan dos o más
enlaces peptídicos en la estructura. El reactivo de Biuret está formado por sulfato cúprico
pentahidratado (CuSO4.5H2O) en un medio fuertemente alcalino. (Delgado, 2008).
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9. Conclusión

Para la comprobación de aminoácidos con la ninhidrina, esta debe reaccionar rápidamente

con el grupo alfa-amino oxidándolo. En el aminoácido y la ninhidrina se forma una división
nucleófila, donde se ocasiona (deshidratación) eliminación de dos moléculas de H2O. Con la
presencia de calor, el compuesto que se forma se descarboxila, produciéndose dióxido de
carbono y da lugar a la imina correspondiente. Esta imina se hidroliza produciendo un anión
diceto aminado y un aldehído. El resultado formado reacciona con la ninhidrina que quedó en
exceso, esto produce un complejo de color azul-violeta. La presencia de un complejo rojizo
indica resultado negativo para la identificación de aminoácidos con ninhidrina.

La proteína a la que se le agrega reactivo de Biuret, da lugar a la tinción de color violeta, esto se
debe a la formación de un compuesto de coordinación entre los iones cúpricos y los pares de
electrones libres de los nitrógenos que forman parte de los enlaces peptídicos.

La reacción xantoproteica da como resultado color amarillo en la proteína, esto se presenta

en las proteínas que contienen aminoácidos aromáticos como la fenilalanina, la tirosina y el
triptófano. El resultado positivo además de dar coloración amarilla, presenta desnaturalización e
hidrólisis parcial. Todo esto es por la nitración del anillo aromático en posición orto.

Para resultado positivo en la reacción de acetato de plomo se da lugar a que los enlaces
peptídicos se hidrolicen. El hidróxido de sodio reacciona con el aminoácido correspondiente,
separando el azufre que este contiene. Se observó que al echar acetato de plomo, hubo cambio de
color a marrón, esto indica que hay presencia de sulfuro de plomo y aminoácidos azufrados como
la cisteína y metionina.
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10. Bibliografía

McGraw Hill, (1983). White et al Bioquímica. Recuperado de

http://accessmedicina.mhmedical.com/content.aspx?bookid=1960&sectionid=148094670

Cobo, R. M. (2012). Los aminoácidos. Aula virtual de Biología. Recuperado de

https://www.um.es/molecula/prot06.htm

Delgado, F. B. (2008). Identificación de aminoácidos y proteínas. Recuperado de

http://aprendeenlinea.udea.edu.co/lms/moodle/pluginfile.php/47386/mod_resource/content/0/Pra
ctica_experimental-_aa-proteinas-2008.pdf

Universidad de Bogotá Jorge Tadeo Lozano. (2016). Ciencias Básicas. Recuperado de

http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organica/guia_9_aminoaci
dos.pdf

Lobo, R. J. (2019).Univirtual UFPSO. Identificación de aminoácidos y proteínas. Recuperado de

https://uvirtual.ufpso.edu.co/pluginfile.php/35260/mod_resource/content/5/Lab.%20aminoacuido
s%20y%20proteinas.pdf
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11. Evidencias Fotográficas

11.1 Reacción de Ninhidrina

Imagen 2: Resultado de la reacción con Ninhidrina

Fuente: Autores

11.2 Reacción de Biuret

Imagen 3: Resultado de reacción con

Fuente: Autores
11.3 Reacción Xantoproteica
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Imagen 4: Resultado de la Reacción biuret

Fuente: Autores

11.4 Reacción con acetato de plomo

Imagen 5: Resultado de la reacción con acetato de plomo

Fuente: Autores