⑩ Descarboxilación Oxidativa del Piruvato y Ciclo de Krebs

En las células eucariotas la descarboxilación oxidativa del piruvato y el

ciclo de Krebs tienen lugar en la Mitocondria, a diferencia de la vía
glicolítica que tiene lugar en el citosol.

Mitocondria
- Membrana externa relativamente permeable a muchos
compuestos a través de canales o poros llamados porinas
- Membrana interna bastante impermeable, solo permite pasar
determinadas moléculas muy pequeñas e hidrofóbicas → Necesitamos
transportadores.

El Piruvato se genera en el citosol, y para poder ingresar a la mitocondria

tenemos que utilizar un transportador de piruvato. El transporte se da de
forma de antiporte con iones OH​-​.

En la descarboxilación oxidativa ocurren varios procesos en

simultáneo.

El piruvato sufre una descarboxilación (se libera 1 molécula de

CO​2​) y se oxida el grupo ceto a ácido. De forma simultánea se va
a conjugar con un grupo tiol del Acetil CoA para formar un
enlace tioéster, de alta energía.

Para poder llevar a cabo el proceso, el complejo enzimático Piruvato Deshidrogenasa lo cataliza. El
complejo contiene las enzimas E1, E2 y E3 que participan directamente en esta reacción y otras dos
enzimas que participan en la regulación de este proceso. Este complejo va a necesitar de 5 cofactores
que también participan en esta reacción: NAD​+​ que se reduce a NADH, la coenzimaA, la TPP, el lipoato y
el FAD. Se libera NADH, una molécula capaz de transportar electrones que los terminará transportando
a la cadena respiratoria. La energía liberada en esta reacción se va a terminar acumulando en enlaces
de alta energía y en los electrones que va a transportar el NADH.

Cofactores​ ​→ Moléculas que la enzima necesita para poder cumplir su función. Sus precursores en
general son vitaminas, moléculas orgánicas pequeñas que las debemos ingerir por los alimentos ya
que no las podemos sintetizar.

Nicotinamida​ → Su precursor es niacina (vitamina B3). Este cofactor va a

participar en reacciones de oxido reducción, por que el NAD+ es capaz
de aceptar un ion hidruro y reducirse a NADH.
Tiamina Pirofosfato (TPP)​ → Sirve como cofactor fundamentalmente en la
reacción de unión del piruvato y en la descarboxilación. Es cofactor de la
enzima E1 del complejo piruvato deshidrogenasa.

FAD​ → Su vitamina precursora es la riboflavina (vitamina B2). También

participa en reacciones de oxido reducción. El FAD es capaz de aceptar 2H​+​ y
2 electrones, reduciéndose así a FADH​2​. Primero acepta un electrón por lo
que se convierte en radical, y luego acepta el segundo electrón.

Acetil CoA​ → En la imagen está lo que abreviamos

como Coenzima A. De toda la molécula, lo que nos
interesa es el grupo tiol, que va a poder condensarse
con grupos acilo y activarlas, como pasa con el Acetil
CoA, y las va a poder transferir a otras moléculas.

Acido Lipoico/Lipoato​ → Se una a la enzima E2 a través de un

residuo de lisina. Tiene la característica de formar un puente
disulfuro en el brazo, que se puede reducir a dos grupos tiol y
a su vez volver a oxidarse por lo que va a poder participar en
reacciones de oxidorreducción, pero además es capaz de
formar tioésteres y participar en reacciones de trans
acetilación.

Complejo Piruvato Deshidrogenasa.

Está compuesto por distintas enzimas:

- E1 → Piruvato deshidrogenasa, la que le da el nombre
al complejo y le brinda la especificidad del sustrato.
- E2 → Dihidropoli transacetilasa
- E3 → Dihidropoli deshidrogenasa
+
- Dos enzimas que participan en la regulación (vistas al
final)
 Esquema de la enzima E2.

Dominios:
- Dominio lipoilo que dependiendo del organismo
cambia la cantidad de dominios lipoilo.
- Dominio de unión involucrado en la unión de las
otras enzimas (la enzima E2 hace de bisagra entre las
otras dos).
- Dominio acil transferasa, es la función de E2.

Descarboxilación oxidativa

Primer paso:​ Catalizada por la piruvato

deshidrogenasa (E1). Uno de los carbonos de
la TPP ataca al grupo carbonilo del piruvato,
se produce un rearreglo de manera tal que se
libera una molécula de CO2 y la TPP queda
unida en forma de grupo hidroxietilo al
piruvato.

Segundo paso:​ Reacción redox en la que se

oxida el grupo hidroxietilo a un grupo ácido y
se reduce el puente disulfuro del brazo de
lipoamida. Simultáneamente se produce la
formación del tioéster entre el acetato que se
formó y uno de los brazos de la lipoamida, formando un grupo tioéster.

Tercer paso: C
​ atalizada por la dihidrolipoil transacetilasa (E2). Trans acetilación, se transfiere el grupo
acetato del brazo del lipoato a la molécula de CoA (que tiene un grupo tiol en el extremo) liberando la
molécula de Acetil CoA.

La lipoamida queda en su forma reducida, por lo cual las siguientes dos reacciones son para volver a oxidarla,
es decir, regenerar el enlace disulfuro entre los dos sulfuros.

Cuarto paso: C​ atalizada por la dihidropoli deshidrogenasa (E3), ocurre la oxidación de los tioles y se reduce
una molécula de FAD a FADH2.
Quinto paso​: FADH​2​ se vuelve a oxidar a FAD con la reducción simultánea de NAD+ a NADH, que es quien se
libera en el proceso.
Una vez que generamos el Acetil CoA, ¿cómo continúa el proceso de respiración celular?

CICLO DE KREBS

• Es una vía cíclica! Empieza con la condensación de un

Acetil CoA con una molécula de oxalacetato, se dan unas
series de oxidaciones y se vuelve a generar el
oxalacetato.
• En todo el proceso oxidativo se produce la oxidación de
Acetil CoA a 2 moleculas de CO​2​.
• Ocurren reacciones redox donde se liberan
equivalentes de reducción como el NADH y el FADH2 y
además se produce una molécula de GTP.
• Almacenamos energía en las moléculas transportadoras
de electrones que luego los usan para la síntesis de ATP.

Reacción N° 1
• Se produce la síntesis de Citrato a partir de la condensación de una
molécula de Acetil CoA y una de oxalacetato.
• El grupo metilo del acetil coA ataca al carbono del oxalacetato,
liberándose una molécula de coA y citrato.
• Esta reacción es IRREVERSIBLE y tiene un ΔG’ negativo, es decir, es
exergónica.

Reaccion N° 2
• El Citrato se isomeriza a isocitrato, donde se transfiere un grupo hidroxilo
a otro carbono. Es muy difícil oxidar un alcohol terciario sin romper el
enlace carbono-carbono, por lo cual el grupo se transfiere para que pase a
ser alcohol secundario y se de la oxidación.
• Primero se produce un intermediario deshidratando el citrato, y luego se
vuelve a hidratar y se da la transferencia del OH generando el isocitrato.
• Reacción REVERSIBLE.

Reaccion N° 3
• Primera reacción de descarboxilación,
IRREVERSIBLE → Punto de regulación!
• Se libera una molécula de CO​2​, se
descarboxila el isocitrato para obtener el
𝛼-cetoglutarato. Pasamos de una molécula
de 6C a una de 5C.
• Descarboxilación oxidativa → Se produce
una reducción de una molécula de NAD+ a NADH, generando primero el grupo ceto con posterior rearreglo
para la descarboxilación y otro rearreglo para obtener el 𝛼-cetoglutarato.
Reaccion N° 4
• Segunda descarboxilación, en este caso del cetoglutarato al
Succinil-CoA.
• Se libera otra molécula de NADH.

• El complejo -cetoglutarato deshidrogenasa funciona en forma muy similar

al complejo piruvato deshidrogenasa → La reacción es análoga a la
descarboxilación del piruvato, ya que un 𝛼-cetoácido se descarboxila, se
oxida el grupo ceto y se acopla simultáneamente a una coenzima para
formar un tioeter.

Reaccion N° 5
• Se produce la hidrólisis de la coA y el succinil CoA se convierte en
Succinato.
• Esta reacción permite la condensación de un grupo fosfato con un GDP
para obtener un GTP → ​FOSFORILACIÓN A NIVEL DE SUSTRATO​. La energía
que se libera en la hidrólisis del enlace tioéster (de alta energía) se
utiliza para sintetizar una molécula de GTP a partir de GDP y fosfato.

Son energeticamente equivalentes! Se pueden interconvertir

sin problema.

Últimas tres reacciones: Regeneración del oxalacetato a partir de succinato.

Reaccion N° 6
• Succinato se oxida a fumarato, catalizado por la enzima succinato
deshidrogenasa que tiene como grupo prostético una molécula de
FAD que es quien acepta los electrones y se reduce a FADH​2​.
• Esta enzima esta asociada a membrana, no está en el citosol.
• Volvemos a liberar una molécula que es capaz de transportar
electrones.

Reaccion N° 7

• La molécula de fumarato se hidrata, a través de un estado de transición forma

el L-Malato, una molecula de 4 carbonos.
Reaccion N° 8

• La molécula de L-Malato se oxida, regenerando la molécula de

Oxalacetato, catalizada por la malato deshidrogenasa. En el proceso, se
reduce una molécula de NAD+ a NADH.

Estequiometría del ciclo de Krebs

• Partimos de una molécula de Acetil CoA.

• Tenemos 4 reacciones de oxidación acopladas a
la liberación de NADH o FADH2.
• Fosforilación a nivel de sustrato que libera una
molécula de ATP o GTP.

• El ciclo del ácido cítrico, es una vía

metabólica que se denomina ANFIBÓLICA,
porque puede ser también considerada
anabólica.
Los intermediarios del ciclo pueden ser
utilizados para alimentar rutas anabólicas, por
ejemplo:
- Los 𝛼-cetoácidos, mediante reacciones
de transaminación pueden convertirse en
glutamato o aspartato que pueden ser
utilizados para sintesis de aminoacidos o
bases.
- El oxalacetato puede convertirse en
piruvato e ingresar en la vía gluconeogénica
con el objetivo de obtener glucosa.

• El ciclo del ácido cítrico es como el centro de

todo el metabolismo!! → Por esto es que el organismo tiene mecanismos para reponer los intermediarios de
la vía en caso de que sean escasos.

Reacciones Anapleróticas

• Reacciones que permiten reponer intermediarios del

Ciclo del Ácido Cítrico.
• La más importante es la de la imagen: la
carboxilación del piruvato a expensas de la hidrólisis
de ATP. Catalizada por la piruvato carboxilasa, una
enzima mitocondrial.
• Las reacciones de transaminación en que participan los aminoácidos podrían llegar a considerarse como
anapleróticas aunque no se clasifican como tales.
 Regulación

• La descarboxilación del piruvato va a tener regulación alostérica y

covalente.
- Alostérica: Inhibida por productos de la vía como el ATP o el
NADH (que van a ser indicativos que tengo energía suficiente), por
gran cantidad de acetil-CoA ó ácidos grasos (indicativos de que
tengo suficiente combustible). Activada por AMP y el NAD+
(indicadores de bajo nivel energético).
- Covalente​: Cuando nombramos al complejo piruvato
deshidrogenasa dijimos que tenía enzimas E1, E2, E3 y otras dos
enzimas que están involucradas en la regulación. Estas son la
piruvato deshidrogenasa quinasa (fosforila) y fosfoprotein quinasa.
Cuando la piruvato deshidrogenasa quinasa fosforila a la enzima E1,
ésta pasa a su forma inactiva. Para volver a activarla la fosfoprotein
fosfatasa hidroliza el fosfato. ↓

• A su vez, la piruvato deshidrogenasa quinasa está

activada alostéricamente por ATP. Es decir que
cuando hay un alto nivel energético, el ATP inhibe
al complejo piruvato descarboxilasa y también
inhibe a una de sus enzimas, lo que inactiva al
complejo aún más.

• El ciclo del ácido cítrico en general va a estar

regulado en las reacciones que son​ irreversibles​ como eran la síntesis de citrato y la descarboxilación
oxidativa del isocitrato y del 𝛼-cetoglutarato.
Esta regulada por estas tres formas:
- Disponibilidad de sustratos​ → Si no tengo oxalacetato ni Acetil-CoA, el ciclo va a estar
enlentecido.
- Inhibición por acumulación de productos​ → La citrato sintasa se inhibe por NADH, por Succinil
CoA, citrato o ATP. Algo similar pasa con la isocitrato deshidrogenasa y la 𝛼-cetoglutarato
deshidrogenasa; todas se inhiben por productos o intermediarios de la vía.
- Retroinhibición de los primeras enzimas del ciclo

Resumiendo…
• El complejo piruvato deshidrogenasa cataliza la descarboxilación oxidativa del piruvato liberando Acetil-CoA
y conservando parte de la energía de oxidación como NADH.
• El ciclo del ácido cítrico, a diferencia de otros, es una vía cíclica y central del metabolismo.
• El ciclo del ácido cítrico es una vía anfibólica (puede tener función catabólica o anabólica).
• Permite la oxidación a CO​2​ de compuestos provenientes de la degradación de glúcidos, grasas y proteínas. La
energía se conserva temporalmente en las moléculas transportadoras de electrones NADH y FADH​2​.
• Los intermediarios del ciclo del ácido cítrico pueden ser utilizados para reacciones biosintéticas.
• Los intermediarios del ciclo del ácido cítrico derivados hacia otras rutas se reponen mediante las reacciones
anapleróticas.
• La velocidad global del ciclo del ácido cítrico está controlada por la velocidad de conversión del piruvato en
acetil-CoA y por flujo a través de la citrato sintasa, isocitrato deshidrogenasa y 𝛼-cetoglutarato
deshidrogenasa.
• Los productos finales ATP y NADH, son inhibidores mientras que los sustratos NAD+ y ADP son estimuladores.