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FISIOLOGÍA ANIMAL
LABORATORIO ENZIMAS: CATALASA Y LIPASA PANCREÁTICA
INTRODUCCIÓN
CATALASA: La catalasa en una enzima que cataliza la descomposición del peróxido de hidrogeno (H 2O2) en oxígeno y agua. 2H2O2 2 H 2O + O 2
El peróxido de hidrogeno es un residuo del metabolismo celular de muchos organismos vivos y tiene entre otras una función protectora contra microorganismos patógenos, principalmente anaerobios, pero dado su toxicidad debe transformarse rápidamente en compuestos menos peligrosos. Esta función la efectúa esta enzima que cataliza su descomposición en agua y oxígeno. El mecanismo completo de la catalasa se desconoce, aun así la reacción química se produce en dos etapas:
H2O2 + Fe (III)-E H2O + O = Fe (IV)-E
H2O2 + O = Fe (IV)-E H2O + Fe (III)-E + O2
Donde Fe-E representa el núcleo de hierro del grupo hemo unido a la enzima que actúa como co-factor.
La enzima se presenta en forma de homotetrámero y se localiza en los peroxisomas.
LIPASA PANCRÉTICA: Los lípidos suelen ingerirse como grandes masas de triacilgliceroles y son digeridos principalmente por el duodeno por la lipasa pancreática. Como muchas otras proteínas, la lipasa es hidrosoluble, pero sus sustratos no lo son. Por ello, solo en la superficie de una masa de lípido puede la enzima atacar las moléculas de grasa (triacilgliceroles) y convertirlos en ácidos grasos y monoacilglicerol. Por su parte, las sales biliares son detergentes que reducen la tensión superficial de las grasas, de manera que separan las grandes masas de lípido en gotas más pequeñas. Esto incrementa en gran medida el área superficial de grasa expuesta a la acción de la lipasa y, de este modo, eleva la rapidez de digestión de los lípidos.
A. CATALASA OBJETIVO GENERAL
Determinar de manera indirecta la presencia de la enzima catalasa en diferentes tejidos animales.
OBJETIVOS ESPECIFICOS
● Determinar el efecto de un catalizador inorgánico sobre el peróxido de hidrogeno.
● Verificar la presencia de catalasa en el tejido animal.
● Comparar la actividad de la catalasa en diferentes tejidos animales.
PROCEDIMIENTO
1. EFECTO DE UN CATALIZADOR INORGANICO SOBRE EL H2O2
Vierta 1 ml de peróxido de hidrogeno en un tubo de ensayo, ahora adicione 0,2 g de arena y agite. Luego coloque una astilla incandescente en la boca del tubo y anote las observaciones. En otro tubo de ensayo, vierta 1 ml de peróxido de hidrogeno, luego coloque 0,2 g de dióxido de manganeso (MnO 2) y agite. Coloque una astilla incandescente en la boca del tubo. Anote las observaciones.
2. ACTIVIDAD DE LA ENZIMA
Vierta 2 ml de peróxido de hidrogeno en un tubo de ensayo. Tome 2 g de hígado y dejarlo caer en el tubo. Agitar el tubo y después introduzca una astilla incandescente y observar la reacción.
3. ACTIVIDAD DE LA ENZIMA EN DIFERENTES TEJIDOS
Tome 2 g de cada tejido que se tenga de los tipos de animal. Para cada ensayo adicionar 2 ml de peróxido de hidrogeno. Tome la temperatura inicial (To) del líquido con el termómetro, introduzca el tejido en el tubo y registre la temperatura final (Tf) después de 30 segundos. Comparar los resultados obtenidos para cada tejido mediante la construcción de una gráfica.
POLLO VACA
TEJIDO TO Tf ∆T TO Tf ∆T
Hígado
Corazón
Riñón
Músculo
B. LIPASA PANCREATICA
OBJETIVOS
● Comprobar la actividad enzimática de la lipasa pancreática
● Determinar la importancia de la bilis en la degradación de las grasas
● Comprar la degradación de lípidos de origen animal y vegetal
● Identificar la presencia de pigmentos biliares
PROCEDIMIENTOS
1. Acción de la lipasa pancreática sobre la leche
Tome tres tubos de ensayo y proceda de la siguiente manera:
TUBO SUSTRATO ROJO FENOL NaOH BILIS PANCREATINA
1 2 ml de leche 5 gotas 8-10 gotas 0,5 ml
2 2 ml de leche 5 gotas 8-10 gotas 1 ml
3 2 ml de leche 5 gotas 8-10 gotas 0,5 ml 1ml
Agitar cada tubo y colocarlos en baño maría a una temperatura de 35-40°C.
Tome los tiempos de cambios de coloración. ¿Cuál de los tubos de ensayo podría considerarse como tubo control? ¿La presencia de las sales biliares acerera la reacción de la lipasa pancreática? Explique. ¿Se produce la digestión de la grasa si las sales biliares no están presentes? ¿Qué clase de ácido produce la acción enzimática sobre la grasa? ¿Qué clase de moléculas además de ácido, esperaría encontrar en esta etapa? ¿Se puede observar en el experimento?
2. Degradación de aceites de origen animal y vegetal por la lipasa pancreática.
Tome tres tubos de ensayo y proceda de la siguiente manera:
TUBO SUSTRATO INDICADOR ENZIMA BILIS
1 2 ml de Aceite de cerdo 5 gotas de rojo de 1 ml de 0,5 ml
fenol pancreatina
2 2 ml de Aceite de pollo 5 gotas de rojo de 1 ml de 0,5 ml
fenol pancreatina
3 2 ml de Aceite de oliva 5 gotas de rojo de 1 ml de 0,5 ml
fenol pancreatina
Agite bien cada tubo, inmediatamente lleve cada tubo a baño maría a una temperatura de 35-40°C. Tome el tiempo en el cual se forma la emulsión en cada tubo y compare los resultados. Identifique las capas que se forma y diga cuál de los productos de la degradación de lípidos es más denso.
3. Identificación de pigmentos biliares. Prueba de G´Melin.
En un tubo de ensayo deposite 0,5 ml de agua destilada, 0,5 ml de bilis (evitar que las soluciones entre en contacto con las paredes del tubo), 1 ml de ácido nítrico (este debe resbalar lentamente por las paredes del tubo). Observe los resultados, registre el color y sucesión de bandas que se obtienen.
CUESTIONARIO
CATALASA
1. Que son los peroxisomas y cuál es su función?
2. El peróxido de hidrogeno se emplea mucho como material de curación, cuando se aplica en una herida siempre hay un ligero burbujeo. Explicar porque se presenta? 3. Como se puede decir que la enzima catalasa está presente en un tejido o no? 4. Como influye la temperatura en la función de la catalasa? 5. Según la experiencia, que gas se libera en la reacción del peróxido de hidrogeno con la enzima catalasa? 6. Puede el peróxido de hidrogeno ser descompuesto por otros catalizadores diferentes de los que se encuentran en los tejidos vivos? Explique. 7. Como evita la catalasa la destrucción de las células?
LIPASA
1. ¿Qué es la bilis y cuáles son sus funciones?
2. Haga un diagrama del sistema biliar e indique la fisiología del mismo. 3. Cuál es la importancia de la vesícula? 4. ¿Puede un animal vivir sin su vesícula biliar? Justifique su respuesta. 5. Diga cual es la importancia del hígado dentro del sistema biliar 6. Que sucede cuando hay altas tasas de bilirrubina en la sangre? ¿A qué se debe eso? 7. Que sustancias componen las sales biliares?
BIBLIOGRAFÍA RANDALL, David J., et al. Eckert animal physiology. Macmillan, 2002 VILLE, Claude A., et al. Biología. Editorial Océano, 1996
