LIBROAMPAVE CONASAVERSIONFINAL Captulo3

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Figueroa-Castillo, J.A., Jasso-Villazul, C.,

Liébano-Hernández, E., Martínez-Labat, P.,
Rodríguez-Vivas, R.I. Zárate-Ramos, J.J. (2....
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Roger Ivan Rodriguez Vivas

Universidad Autónoma de Yucatán
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Técnicas para el diagnóstico de parásitos con importancia en salud pública y veterinaria
Capítulo 3
EXAMEN COPROPARASITOSCÓPICO
Dr. Juan Antonio Figueroa Castillo1

M. en C. Carlos Jasso Villazul2
M. en C. Enrique Liébano Hernández3
Dr. Pablo Martínez Labat4
Dr. Roger Iván Rodríguez Vivas5
Dr. Juan José Zárate Ramos6
1
Departamento de Parasitología. Facultad de Medicina Veterinaria y
Zootecnia. Universidad Nacional Autónoma de México. 2Centro Nacional de
Servicios de Constatación en Salud Animal. SAGARPA. 3CENID-Parasitología
Veterinaria /INIFAP. Jiutepec, Morelos. 4Facultad de Estudios Superiores,
Cuautitlán. Universidad Nacional Autónoma de México. 5Laboratorio de
Parasitología. Campus de Ciencias Biológicas y Agropecuaria. Facultad de
Medicina Veterinaria y Zootecnia. Universidad Autónoma de Yucatán.
6
Laboratorio de Parasitología. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia.
Universidad Autónoma de Nuevo León.
CONTENIDO
3.1. Introducción
3.2. Examen macroscópico
3.3. Examen microscópico
3.3.1. Técnica directa
3.3.2. Técnica de flotación
3.3.3. Técnica de Faust
3.3.4. Técnica de sedimentación (sedimentación múltiple, cualitativa)
3.3.5. Técnica de Graham
3.3.6. Técnica de McMaster
3.3.7. Técnica coproparasitoscópica en cama de pollo
3.3.8. Técnica de Kinyoun
3.3.9. Técnica de migración larvaria o Baermann
3.3.10. Técnica de cultivo larvario
3.4. Técnicas para el diagnóstico de larvas infectantes de nematodos
gastrointestinales.
3.4.1. Técnica para la limpieza de larvas infectantes de nematodos
gastrointestinales por gradientes de densidad con sacarosa
3.4.2. Identificación de larvas infectantes de estrongilidos de rumiantes
3.4.3. Características morfológicas de las larvas infectantes de rumiantes
~ 78 ~
3.1. INTRODUCCIÓN
Junto con las heces salen del hospedador ooquistes, quistes, huevos, larvas e incluso
especímenes adultos de parásitos que se localizan en el tracto digestivo, respiratorio o
en el hígado. Por esta razón las heces son una gran fuente de información sobre los
endoparásitos que alberga un hospedador (Thienpont et al., 1979; Soulsby, 1987;
Sánchez, 2010).
El examen coproparasitoscópico consiste en la observación macro y microscópica de

las materias fecales en busca de parásitos. Las técnicas que sólo revelan la presencia
de parásitos son las llamadas técnicas cualitativas y las que denotan la intensidad y las
consideraciones clínicas de la infección son las llamadas técnicas cuantitativas; ambas
son estudios microscópicos de laboratorio. Las características deseadas de un método
coproparasitoscópico son polivalencia, sensibilidad, fácil ejecución y resultados
confiables. La polivalencia está dada por la capacidad de revelar la presencia de un
mayor número de elementos parasitarios como son: huevos, ooquistes de protozoarios,
larvas de nematodos, segmentos grávidos de cestodos, nematodos adultos, etc. Los
diversos métodos poseen diferente grado de capacidad polivalente determinada por el
nivel de densidad de la solución utilizada que permite hacer flotar a las estructuras
parasitarias. Un método rutinario es aquel que permite realizar el mayor número de
análisis en el menor tiempo posible (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Para su interpretación se deben considerar los factores que determinan la variación en

la cantidad de ooquistes y/o huevos eliminados, tales como: diferencias en la
prolificidad de las especies, ritmo en la ovoposición, número de hembras, consistencia
de las heces, la distribución de los parásitos en las heces, entre otros factores. Se debe
tener en cuenta que las técnicas coproparasitoscópicas están enfocadas a la detección
de parásitos en el periodo patente. Por los motivos anteriores, los resultados negativos
(cuando no se observan estructuras parasitarias), no son concluyentes y se recomienda
hacer más pruebas (ver antecedentes de la técnica de Faust) (Anónimo, 1971;
Thienpont et al., 1979; Hendrix y Robinson, 2006; Bowman, 2011).
Los huevos de los nematodos continúan desarrollándose durante el transporte de las

muestras, por lo que se recomienda examinarlas lo más frescas posible o refrigerarlas.
Las muestras colectadas directamente del suelo y que estuvieron en contacto con
tierra, agua o pasto pueden contener nematodos de vida libre o de las plantas o huevos
de ácaros (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Para un correcto diagnóstico de las parasitosis gastrointestinales que afectan a los

animales es necesario realizar estudios clínicos de los pacientes o poblaciones
animales, así el estudio de las condiciones epidemiológicas imperante en una región.
Esto debe ir acompañado de un diagnóstico de laboratorio apropiado que permita
identificar los parásitos gastrointestinales que afectan a los animales. En este capítulo
se presentan las principales técnicas de diagnóstico de parásitos en heces para apoyar
~ 79 ~
al profesionista en la toma de decisiones para los programas de prevención y control de

enfermedades parasitaria en los animales.
3.2. EXAMEN MACROSCÓPICO
Fundamento
El examen macroscópico de las heces puede revelar en algunos casos la presencia de

parásitos adultos (nematodos, trematodos, proglótidos de cestodos, etc.) que son
expulsados en las heces de los animales. Además es necesario reportar las
características de las heces tales como la consistencia (suave, diarreica, dura), color,
presencia de sangre (semidigerida, estrías), moco y el tiempo de haber tomada las
heces (Hendrix y Robinson, 2006).
En el examen macroscópico se recomienda separar parásitos o fragmentos de estos, ya

sea de las heces o del contenido del tracto gastrointestinal. Es de utilidad para la
detección de proglótidos de Dipylidium caninum y Taenia spp. en perros y gatos, y del
género Moniezia en rumiantes, así como como de larvas de Gasterophilus en équidos
(Besné et al., 2006).
Material y equipo
 Caja de Petri o charola de fondo obscuro.

 Solución salina fisiológica.
 Cuchara, espátula, aguja de disección o pinceles.
 Lupa (preferible con luz).
Procedimiento
 Diluir una porción de heces en solución salina fisiológica en un vaso o recipiente.
 Colocar una porción de heces diluidas, en una caja de Petri o charola con fondo
obscuro.
 Examinar a ojo desnudo o con el auxilio de una lupa. Dispersar las heces con
ayuda de una espátula o aguja de disección.
 Separar los parásitos con una aguja de disección o un pincel.
 Colocar otra porción de muestra y examinar. Repetir hasta terminar la muestra.
En la Figura 3.1 se muestra una representación gráfica del examen macroscópico

directo.
Interpretación
Es un procedimiento auxiliar, no se recomienda como prueba de diagnóstico única, los

hallazgos negativos no son concluyentes pero los resultados positivos son tan válidos
como los obtenidos con las técnicas de concentración más eficaces (Rodríguez-Vivas y
Cob-Galera, 2005).
~ 80 ~
Factores que pueden alterar los resultados
Los elementos parasitarios obtenidos por este medio, nunca se deben identificar de
visu. Si se hiciera, se puede perder información o inducir a errores de diagnóstico. La
identificación debe realizarse una vez aclarados, teñidos o montados, según el caso
(Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Figura 3.1. Examen macroscópico directo, 1) Colocar una muestra de heces en una
charola de fondo obscuro o las heces diluidas en agua o solución salina fisiológica, 2)
Agregar agua, 3) Dispersar las heces, 4) Colectar los parásitos e identificarlos en el
microscopio.
3.3. EXAMEN MICROSCÓPICO

El examen microscópico es fundamental en coprología, para cubrir mayor diversidad de
formas parasitarias es recomendable hacerlo en dos etapas complementarias: examen
microscópico directo y examen microscópico con alguna técnica de concentración
(Besné et al., 2006; Hendrix y Robinson, 2006).
3.3.1. Técnica directa
Fundamento
El frotis directo obtenido por disolución de una partícula muy pequeña de heces en una
gota de solución salina fisiológica o lugol, constituye una técnica sencilla y rápida de
~ 81 ~
examen. El uso de la solución salina fisiológica en vez del agua evita la lisis de
trofozoitos de protozoos muy lábiles a los cambios osmóticos (Bowman, 2011).
El frotis tiene ciertas ventajas diagnósticas sobre otras técnicas y estas son: a) la
flotación en soluciones hipertónicas tiende a deformar las larvas, dificultando así la
diferenciación de infecciones causadas por el orden Strongyloides y vermes
pulmonares, y b) el frotis puede poner de manifiesto formas de protozoarios y duelas,
así como ciertos huevos de cestodos que pueden pasar inadvertidos con las técnicas
de concentración. Los frotis directos de materia fecal permiten observar la movilidad de
amebas, flagelados como los géneros Giardia, Hexamita, Chilomastix, así como de
Trichomonas muris, larvas de nematodos, etc. (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005;
Hendrix y Robinson, 2006).
La técnica directa tiene desventajas tales como (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005;

Bowman, 2011):
 Sólo se puede examinarse una pequeña porción de heces.
 Es efectiva sólo donde la concentración de huevos es alta.
 Frecuentemente es difícil identificar los huevos ya que están parcialmente
cubiertos por detritus, y
 No pueden obtenerse resultados cuantitativos.
Material y equipo
 Microscopio óptico.
 Solución salina fisiológica.
 Lugol.
 Aplicadores.
 Cubreobjetos.
Procedimiento
 Sobre un portaobjetos colocar separadamente, una gota de solución salina
fisiológica y otra de lugol.
 Con un aplicador de madera, depositar una muestra de 1-2 mg de heces (del
tamaño de un grano de arroz) y mezclarla con la solución salina fisiológica.
 Con el mismo aplicador retirar las fibras y otros fragmentos gruesos.
 Colocar un cubreobjetos.
 Efectuar la misma operación con la gota de lugol.
 Observar al microscopio con los objetivos de 10X y 40X.
En la Figura 3.2 se muestra una representación gráfica examen microscópico directo.
Interpretación
Los hallazgos negativos no son concluyentes pero los resultados positivos son tan
válidos como los obtenidos con las técnicas más eficaces de concentración (Hendrix y
Robinson, 2006).
~ 82 ~
Como la suspensión resultante debe ser lo suficientemente fina para leer a través de la
misma tan sólo pueden examinarse partículas pequeñas de heces, siendo este el
principal inconveniente de la técnica (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Recomendaciones
En pequeñas especies, se pueden realizar frotis con las heces adheridas al termómetro
rectal. El uso de cubreobjetos mejora la visualización y ayuda a evitar que ensucie la
lente de los objetivos del microscopio (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Figura 3.2. Examen microscópico directo. 1) En un portaobjetos colocar una gota de

solución salina fisiológica y una de lugol, 2) Colocar una pequeña muestra de heces en
cada gota, retirar el material grueso y observar en el microscopio.
3.3.2. Técnica de flotación
Fundamento
Existen variantes de esta técnica; sin embargo, todas se fundamentan en que los
huevos u ooquistes de una gran diversidad de parásitos flotan en una solución más
densa que el agua, mientras que los detritus sedimentan. También se conocen como
técnicas de concentración o enriquecimiento y permiten desenmascarar infecciones
leves (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Debido a que muchos de los huevos y ooquistes suelen tener una densidad entre 1.050
y 1.150, se utilizan soluciones con densidades relativas de 1.200 a 1.300 (la del agua
destilada es de 1.000 a 4ºC) (Hendrix y Robinson, 2006).
Las soluciones saturadas más usadas en la práctica veterinaria son: sal común
(densidad de 1.120 a 1.200), Sulfato de Zinc al 33% (densidad de 1.180 a 1.200),
~ 83 ~
sulfato de magnesio al 35% (densidad de 1.220 a 1.280) y solución saturada de azúcar

(densidad de 1.200), solución de Sheather o sobresaturada de azúcar (densidad de
1.300), nitrato sódico (densidad de 1.200 a 1.360). El rango de densidad depende de la
cantidad de soluto y la temperatura (Hendrix y Robinson, 2006; Flynn, 2007).
Los huevos de trematodos son generalmente más pesados y requieren soluciones

como la de yoduro mercurato de potasio con densidad de 1.440; sin embargo, por ser
muy tóxica y corrosiva, ha caído en desuso (Sánchez, 2010).
Los laboratoristas tienen preferencias personales en la selección de la solución

saturada a utilizar, la recomendación es verificar la densidad cada cierto tiempo,
mediante el uso de un densímetro (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Esta técnica se recomienda para todas las especies domésticas. Se pueden observar
huevos de nematodos (Figuras 3.3., 3.4. y 3.5), ooquistes de protozoarios y huevos de
cestodos (excepto Dipylidium caninum) (Figura 3.6).
Figura 3.3. Huevos de nematodos obtenidos por flotación. 1) Toxocara cati, 2)

Toxascaris leonina, 3) Parascaris equorum,4) Ascaris suum, 5) Heterakis gallinarum, 6)
Ascaridia galli.
~ 84 ~
Figura 3.4. Huevos de nematodos, obtenidos por la técnica de Flotación. 1)

Ancylostoma caninum, 2) Nematodirus y estrongilido de borrego, 3) Estrongilidos de
caballo, 4) Dictyocaulus arnfieldi, 5) Strongyloides westerii.
~ 85 ~
Figura 3.5. Huevos de nematodos, obtenidos por la técnica de Flotación. 1) Capillaria

spp., 2) Trichuris spp., 3) Spirocerca lupi, 4) Mammomonogamus spp., 5)
Macracanthorrynchus hirudinaceus (Acantocephala), 6) Linguatula serrata
(Pentastomida).
~ 86 ~
Figura 3.6. Huevos de cestodos obtenidos por la técnica de Flotación. 1) Hymenolepis

nana, 2) Raillietina spp., 3) variantes del huevo de Moniezia spp., 4) Anoplocephala
spp., 5) Taenia spp.
~ 87 ~
Material y equipo
 Microscopio óptico.
 Mortero.
 Cuchara.
 Dos vasos de plástico o vidrio.
 Solución de flotación.
 Colador.
 Mechero.
 Asa metálica.
 Portaobjetos.
Procedimiento
 Homogenizar la muestra. Si las heces son de ovino, caprino o conejo, macerarlas
en un mortero y después homogeneizarlas.
 Por medio de una cuchara depositar aproximadamente 5 g de materia fecal
dentro de uno de los vasos.
 Añadir 1 ml de la solución saturada de azúcar hasta obtener una pasta.
 Agitar constantemente y añadir de 60 a 100 ml de solución saturada hasta formar
una solución homogénea.
 Pasar esta suspensión por un colador colocándola en un segundo vaso para que
quede libre de partículas gruesas.
 Dejar reposar de 15 a 20 minutos.
 Después de este tiempo, con el asa tomar tres gotas de la superficie de la
suspensión y colocarlas en un portaobjetos. Antes de colectar la muestra, el asa
debe pasarse por una flama para asegurarse que no lleva algún huevo u
ooquiste.
 Observar al microscopio con el objetivo de 10X. Enfocar la superficie de las
gotas.
Interpretación
Los resultados negativos no son concluyentes. Se recomienda realizar una serie de tres
exámenes con muestras de tres días consecutivos para incrementar la sensibilidad de la
prueba (ver antecedentes de la técnica de Faust). Los resultados positivos evidencian la
presencia de parásitos en periodo patente.
La densidad de la solución de flotación es un factor crítico en esta prueba, por lo que debe
verificarse periódicamente. En soluciones que no alcanzan la densidad las formas
parasitarias tardan más tiempo en flotar o nunca lo hacen. Cuando se sobresatura una
~ 88 ~
solución de flotación, se cristaliza en un par de minutos y en menos tiempo si se coloca un

cubreobjetos.
En la Figura 3.7 se muestra una representación gráfica de la técnica de flotación.
Figura 3.7. Técnica de flotación. 1) Colocar una muestra de heces en un vaso, 2)

Agregar un par de mililitros de solución saturada. 3) Revolver hasta formar una pasta,
4) Agregar de 60 a 100 ml de solución saturada, 5) Revolver y colar a otro vaso, 6)
Esperar de 15 a 20 minutos, 7) Flamear el asa, 8) Colectar con el asa tres muestras de
la superficie, y 9) colocar las gotas en un portaobjetos y observar en el microscopio
compuesto.
Es importante respetar el tiempo de reposo para permitir que los huevos floten y se
concentren en la superficie de la mezcla de heces y solución saturada; sin embargo,
mientras mayor tiempo transcurra, flotarán más detritus y después de algunas horas los
huevos se deforman o rompen.
~ 89 ~
Al momento de colectar la muestra del vaso, el asa debe tocar levemente la superficie del
líquido, que es donde se concentran las formas parasitarias. Cuando no se homogeneiza
perfectamente la muestra con la solución de flotación los huevos u ooquistes quedan
atrapados entre los detritus (O´Grady y Slocombe, 1980).
Recomendaciones
Para incrementar la sensibilidad de la técnica, se puede pasar la suspensión de materia

fecal a través de un colador y un embudo a dos tubos de centrífuga, centrifugándolos
durante dos o tres minutos a 650 g.
Es preferible la solución de Sheather para concentrar los ooquistes del género

Cryptosporidium.
La solución de azúcar tarda más tiempo en cristalizarse, pero requiere de la adición de

formol o fenol como conservadores.
3.3.3. Técnica de Faust
Fundamento
Esta técnica fue desarrollada por el distinguido parasitólogo el Dr. Ernest Carroll Faust y
sus colaboradores en 1938 en virtud de que los procedimientos disponibles en aquella
época provocaban una destrucción muy elevada de estructuras parasitarias,
particularmente de los quistes. La combinación del procedimiento y los reactivos
empleados permitió seleccionar al menos 13 variantes probadas, el sistema con los
mejores resultados en cuanto a capacidad para detección y preservación estructural de
la mayoría de los quistes y huevos que comúnmente se presentaban en las heces
humanas. Se complementó el planteamiento al usar un esquema de procesamiento de
tres muestras seriadas que permitió detectar hasta el 96% de los individuos
parasitados. Durante un lapso muy prolongado el uso de esta técnica se enfocó a
laboratorios de diagnóstico en humanos y hace relativamente poco tiempo ha sido
adoptada en el procesamiento de muestras fecales de perros y gatos debido a que
aumenta la probabilidad de detección del protozoario Giardia lamblia (Figura 3.8),
aunque también pueden detectarse huevos de cestodo y nematodo (no permite detectar
huevos de trematodo) y su uso puede extenderse a muestras de todas las especies
domésticas (Faust et al., 1938; Martínez y Morales, 1995).
En esta técnica se emplea una solución de alta densidad la cual permite que las
estructuras parasitarias con menor peso específico tiendan a flotar manteniendo su
estructura normal, el proceso se acelera al centrifugarse la muestra separando de una
forma muy satisfactoria los elementos residuales en las heces, eliminando muchos de
los desechos y ofreciendo un aspecto muy limpio que facilita la observación de las
~ 90 ~
estructuras quísticas (Figura 3.8. y 3.9). Además el uso de lugol permite un marcado
contraste entre estructuras parasitarias (captan bien el colorante) y artefactos
(Thienpont et al., 1979).
Figura 3.8. Giardia spp. 1) Quistes sin teñir, 2) Quistes teñidos con lugol, 3) Trofozoito
teñido con lugol.
Figura 3.9. Cryptosporidium obtenidos por la técnica de Faust de un perro con diarrea.
1) Quistes sin teñir, 2) Quistes teñidos con la técnica de Kinyoun, 3) Detalle del ooquiste
de Cryptosporidium a 100X.
Material y equipo
 Tubos de centrífuga cónicos con capacidad para 15 ml (15x150 mm) (pueden

utilizarse otros tubos de 13x100 mm).
 Gradilla.
 Varilla de vidrio de 3 mm de diámetro.
 Colador de plástico o metal.
 Recipientes de plástico o vidrio (vasos de 250 ml).
 Cuchara.
~ 91 ~
 Portaobjetos.
 Cubreobjetos (se recomienda emplear de 18x18 mm).
 Asa de alambre terminada en círculo con diámetro de 5 a 8 mm formando un
ángulo recto con el resto del alambre modificado para su uso en el
laboratorio de Parasitología (se usan asas bacteriológicas de tugsteno que
se modifican).
 Centrífuga clínica.
 Microscopio compuesto.
 Mechero de Bunsen.
 Solución saturada de Sulfato de Zinc al 33% con una densidad de 1.180.
 Lugol parasitológico
 Agua destilada o corriente.
Procedimiento
 Colocar aproximadamente 5 g de materia fecal en un vaso, disolverla en 50 ml
de agua destilada y homogeneizarla hasta suspenderla perfectamente.
 Colar a un segundo recipiente y depositar la suspensión en el tubo de centrifuga
(llenar hasta un centímetro del borde del tubo) y proceder a centrifugar a 650 g
por 2 minutos.
 Decantar el sobrenadante y resuspender nuevamente con agua destilada (esto
puede hacerse por medio de una varilla de vidrío, por agitación manual o
mecánica) y volver a centrifugar tirando el sobrenadante, repitiendo el proceso
hasta que el sobrenadante quede transparente, generalmente se requiere de 3 a
4 centrifugaciones.
 Una vez aclarado el sobrenadante resuspender (esto puede hacerse por medio
de una varilla de vidrío, por agitación manual o mecánica) la pastilla de
sedimento con la solución saturada de Sulfato Zinc centrifugando nuevamente a
650 g por 2 minutos.
 Retirar el tubo de la centrifuga y depositarlo en la gradilla y a continuación se
pueden seguir hasta tres opciones para obtener el material que flota:
o Con el asa de alambre (previamente flameada), tomar de la superficie del
líquido tres gotas del material flotante y depositarlas separadas sobre un
portaobjetos para hacer la observación directamente al microscopio (para la
revisión en esta opción debe considerarse la convexidad que presenta la
gota de líquido en una superficie plana debiendo adaptar el enfoque de la
misma al plano de la superficie a observar).
o Por medio del asa de alambre (previamente flameada),tomar una gota de
sobrenadante directamente de la superficie que debe depositarse en un
portaobjetos, sobre esta gota debe depositarse una gota de lugol
parasitológico y homogeneizarlas, sobre esta se deposita un cubreobjetos de
16 x 16 mm que permite que la muestra se extienda para poder realizar la
observación.
o Transcurrido el tiempo de centrifugación adicionar al tubo solución saturada
de Sulfato de Zinc hasta llenarlo y formar un menisco en la superficie. Dejar
~ 92 ~
reposar el tubo por un lapso de 10 minutos y colocar sobre el menisco un

cubreobjetos de tal manera que la totalidad de la superficie líquida del
menisco haga contacto, retirarlo y colocarlo sobre un portaobjetos en el que
previamente se ha depositado una gota de lugol y observar al microscopio.
 El material obtenido debe revisarse en su totalidad para detectar las estructuras
parasitarias empleando el objetivo de 10X y en caso de observar estructuras
sugerentes pasar a 40X para mejorar la observación, la revisión de la muestra se
hace llevando una secuencia de zig-zag hasta cubrir la totalidad de la muestra.
En la Figura 3.10 se muestra una representación gráfica de la técnica de Faust.
Interpretación
Esta es una prueba de tipo cualitativo por lo cual en los resultados simplemente se
reporta el estadio y nombre correcto de los organismos observados, en caso contrario
será negativo, como se ha señalado previamente se recomienda tomar muestras del
paciente de tres distintos días o de distintas evacuaciones para aumentar la
probabilidad de detección de parásitos. De la experiencia obtenida en humanos se
desprende que cuando se analizan series de tres diferentes muestras secuenciales la
probabilidad de detección aumenta hasta un 86% y el esquema es recomendable
cuando se procesan las muestras de caninos y felinos (Faust et al., 1938; Martínez y
Morales, 1995).
El más frecuente es que la densidad de la solución se encuentre por debajo de 1.180.

Que erróneamente se hagan las primeras centrifugaciones con la solución saturada
eliminando por completo las estructuras que pueden flotar con esa densidad.
Recomendaciones
 En general el uso de esta técnica manejando la densidad de 1.180 en la solución

saturada reduce el número de huevos de nematodos detectados comparada con la
técnica convencional de flotación (aunque debe considerarse que es una prueba
cualitativa, no cuantitativa por lo que los criterios no van a variar, esto en especial
con huevos de ascáridos y estrongilidos).
 En este caso se puede usar material desechable según sea el caso, pero cuando
se va a trabajar con muestras de forma rutinaria es recomendable comprar vasos
de material plástico de paredes gruesas que pueden durar años y son fáciles de
limpiar y difícilmente se rompen.
 Se recomienda el empleo de tubos de centrifuga de poliestireno que resultan muy
resistentes para el trabajo cotidiano y procesamiento de grandes volúmenes de
muestras o bien sustituirlos por tubos Vacutainer® anchos los cuales permiten
procesar un volumen mayor de muestra incrementando la posibilidad de detectar
estructuras parasitarias y que resultan de bajo costo.
~ 93 ~
Figura 3.4. Técnica de Faust. 1) Depositar una muestra de heces en un vaso, 2)

Agregar agua, 3) Disolver las heces, 4) Colar a otro vaso, 5) Depositar la dilución en un
tubo cónico, 6) Centrifugar, 7) Decantar, 8) Resuspender el botón con agua, 9)
Centrifugar, 10) Repetir los pasos decantar- resuspender- centrifugar hasta que el
sobrenadante este claro, 11) Resuspender el botón con Sulfato de Zinc, 12) Centrifugar,
13) Colectar una muestra de la superficie y depositarla en un portaobjetos o 14) Llenar
el tubo con Sulfato de Zinc hasta formar un menisco convexo y colocar un cubreobjetos
dejar reposar, 15) Retirar cuidadosamente el cubreobjetos y colocarlo en un
portaobjetos. Observar en el microscopio.
~ 94 ~
 Es preciso analizar la condición del lugol que se emplea para contrastar y colorear
las estructuras parasitarias ya que con el tiempo se va aclarando, otorgando una
coloración cada vez más pálida a las muestras a revisar (el contenido de los
goteros conteniendo este colorante debe cambiarse cada tres a cuatro meses).
 La prueba puede ser apta para la detección de huevos de trematodo cuando la
densidad se incrementa a 1.250 e incluso algunas personas la han convertido en
semicuantitativa usando cantidades definidas de heces diluidas en volúmenes
conocidos de solución.
 Si se llegan a procesar muestras formalinizadas es preciso elevar la densidad de la
solución a 1.200.
 Deben evitarse desaceleraciones bruscas o una detención repentina de la
centrífuga en la última fase, ya que eso puede hacer que las estructuras
parasitarias sufran sedimentación y no sean detectadas con facilidad.
 Si se opta por el uso del asa de alambre para recuperar materiales debe
aumentarse su diámetro para captar una mayor cantidad de sobrenadante (7-8 mm
de diámetro).
 Una vez procesada la muestra en la solución saturada de Sulfato de Zinc es
necesario realizar la revisión en un plazo no mayor de una hora ya que tanto los
quistes de protozoario como los huevos de nematodo tienden a colapsarse y
cambiar su morfología.
 No es factible la detección de trofozoitos de protozoarios o larvas de nematodos en
este procedimiento.
 Algunos autores recomiendan que partiendo del hecho de haber eliminado una
gran cantidad de material que regularmente obstaculiza la visión es preciso revisar
también el sedimento obtenido en los tubos lo cual permite observar aquellas
estructuras que han sedimentado (resulta poco práctico cuando se van a revisar
una gran cantidad de muestras).
 Algunos laboratorios asignan valores de cuantificación de acuerdo con la cantidad
de estructuras encontradas por campo microscópico (1 a 4 +, 4 a 8 ++, 9 a 13 +++,
14 o más ++++) aunque debe considerarse que la densidad de estructuras
parasitarias puede variar por influencia de muchos factores, especialmente en el
caso de las estructuras quísticas.
3.3.4. Técnica de sedimentación (sedimentación múltiple, cualitativa)
Fundamento
La técnica coproparasitoscópica de Sedimentación es una técnica cualitativa para
determinar la presencia de huevos de trematodos presentes en la materia fecal. El
principio de esta técnica es el de concentrar los huevos de trematodos a partir de una
muestra de heces y se basa en la diferencia del peso específico del líquido empleado
(agua) y el peso de los huevos de estos parásitos, los cuales tienden a concentrarse en
el fondo del recipiente. Es recomendable su utilización para la detección de huevos de
~ 95 ~
Fasciola hepatica y paramfistomidos: P. cervi, Cotylophoron spp., Calycophoron spp. y

ocasionalmente Dicrocoelium dendriticum, así como Paragonimus en perros y
Macracanthorrhynchus en cerdos (Figura 3.11) (Flores et al., 1986; FAO, 1994;
Sánchez, 2010).
Figura 3.11. Huevos de helmintos obtenidos por la técnica de sedimentación. A) Huevo

de Fasciola hepatica (amarillo) y paranfistomido (incoloro) observados con el lente de
4X, 2) Huevo de Fasciola hepatica (amarillo) y paranfistomido (incoloro) observados con
el lente de 4X.
Material y equipo
 Bolsas de plástico.
 Caja de Petri.
 Coladera de malla fina.
 Cuchara.
 Marcador de tinta indeleble.
 Cinta adherible.
 Mortero.
 Piseta.
 Recipientes de boca ancha con volumen de 100 a 250 ml o vaso de precipitado
de 250 ml.
 Varilla de vidrio o aplicador de madera.
 Agua de la llave.
 Balanza granataria.
 Refrigerador.
~ 96 ~
Procedimiento
 Homogeneizar 5 g de materia fecal. En el caso de ovinos, debe macerarse la
muestra.
 Marcar el vaso de precipitado con la identificación de la muestra.
 Colocar en el frasco 5 g de heces, agregando agua suficiente para disolverla,
mezclándola hasta lograr una muestra homogénea.
 Colar con una malla fina o un tamiz para colar la muestra, al pasarla a otro frasco
o vaso de precipitado, para eliminar los fragmentos de forraje de gran tamaño.
 Agregar agua de la llave al contenido colado hasta el cuello del frasco o del vaso.
 Dejar reposar 5 minutos, decantar y volver a resuspender el sedimento con agua
de la llave, este paso se repite las veces necesarias hasta que el sobrenadante
este claro.
 Decantar y pasar el sedimento a una caja Petri.
 Colocar la caja Petri en un microscopio compuesto para observar su contenido
con el objetivo de menor aumento 10X, revisar cuidadosamente en zigzag,
analizando todo el sedimento, la diferenciación de los huevos se lleva a cabo en
relación a sus características morfológicas.
 Para poder diferenciar los huevos de Fasciola hepatica o los de
Paramphistomum spp. debe considerarse la morfología de los huevos de
Fasciola hepatica, ya que estos son de un color amarillo dorado característico,
diferente al de Paramphistomum spp., que son de color blanco plateado.
En la Figura 3.12 se muestra una descripción gráfica de la técnica de sedimentación.
Interpretación
El resultado positivo es cuando se detecta la presencia de huevos de trematodos en el

sedimento de la muestra problema, reportándose en la columna correspondiente al
parásito identificado como positivo.
El resultado negativo es cuando no hay presencia de huevos de trematodos en la

muestra de sedimento.
 Cuando el tiempo de reposo es menor, se corre el riesgo de desechar los huevos

al momento de decantar, lo mismo ocurre si se agita mucho el sedimento al
decantar.
 Demasiado detritus pueden ocultar los huevos.
Recomendaciones
 El agua tibia favorece la sedimentación de los huevos.

 Utilizar solución jabonosa al 1% en lugar de agua, favorece la eliminación de
detritus.
~ 97 ~
Figura 3.12. Descripción gráfica de la técnica de sedimentación. 1) Homogeneizar la

muestra en su misma bolsa, 2) Pesar 5 g de muestra, 3) Agregar agua para disolver la
muestra en forma homogénea, 4) Pasar la muestra por un colador para eliminar el
forraje grande y recibirlo en otro vaso de precipitado, 5) Dejar reposar la muestra por al
menos 5 minutos, 6) Decantar la muestra y volver a llenarla con agua de la llave
cuantas veces sea necesario, 7) Pasar el sedimento a una caja de Petri, 8) Revisar la
muestra en el microscopio compuesto con el objetivo 10X.
~ 98 ~
3.3.5. Técnica de Graham
Fundamento
Esta técnica se basa en que las hembras de los oxiuros salen a través del esfínter anal
del hospedero para depositar sus huevos. La ovoposición va acompañada de una
substancia gelatinosa que mantiene pegados los huevos a la región perianal. Los
proglótidos de algunos cestodos como el género Dipylidium se separan del estróbilo y
salen por el esfínter anal, las contracciones y elongaciones que realiza el proglótido
para moverse expulsan una gran cantidad de bolsas ovígeras que se quedan pegadas
alrededor del ano, algunos proglótidos quedan atrapados en el pelo de la región
perianal.
Se recomienda para la detección de oxiuros (Oxyuris en équidos, Passalurus en

conejos, Skjrabinema en ovejas y cabras, Shyphacia en ratas y ratones), y Dipylidium
en perros y gatos (Figura 3.13) (Besné et al., 2006).
Figura 3.13. Huevos obtenidos por la técnica de Graham. 1) Paquetes ovígeros de

Dipylidium caninum y detalle de los embriones, 2) Skrjabinema ovis, 3) Syphacia spp.,
4) Oxyuris equi.
~ 99 ~
Material y equipo
 Cinta adhesiva transparente.

 Abatelenguas.
 Portaobjetos.
Procedimiento
 Pegar alrededor de un extremo del abatelenguas, la cinta transparente con la

parte adhesiva hacia fuera.
 Sujetar con los dedos índice y pulgar el abatelenguas y colocarlos en la región
perianal haciendo presión a uno y otro lado.
 Separar cuidadosamente la cinta del abatelenguas y pegarla sobre el
portaobjetos para observar en el microscopio compuesto con el objetivo seco
débil (10X).
En la Figura 3.14 se muestra una descripción gráfica de la técnica de Graham.
Interpretación
Se considera positivo si se observa al menos un huevo, bolsa ovígera o proglótidos.

 Que no se haga suficiente presión al pegar la cinta adhesiva en la región
perianal.
Recomendaciones
 En caballos es frecuente observar las manchas blanquecinas que dejan las

ovoposiciones de Oxyuris equi en la región perianal, de ahí se toma la muestra.
 La mayoría de los huevos o bolsas ovígeras se quedan pegadas a la cinta
adhesiva en la primera vez que se toma la muestra. Para una segunda toma
utilice una porción de cinta nueva, ya que si pega y despega la misma cinta en
varias partes de la región perianal se corre el riesgo de que se despeguen los
elementos parasitarios.
 En lugar del abatelenguas se pueden utilizar los dedos.
~ 100 ~
Figura 3.14. Técnica de Graham. 1) Colocar la cinta transparente con el adhesivo, 2)

Detalle de la región perianal de un gato, la cinta adhesiva debe pegarse en la zona de
la elipse. Las flechas señalan proglótidos, 3) Se retira la cinta con la impronta y se pega
en un portaobjetos, 4) Recortar los extremos sobrantes de la cinta y observar en el
microscopio compuesto.
3.3.6. Técnica de McMaster
Fundamento
La técnica coproparasitoscópica de McMaster es una técnica cuantitativa para

determinar la eliminación de huevos de helmintos u ooquistes de protozoarios
presentes en la materia fecal.
El principio de esta técnica de diagnóstico se basa en la utilización de una solución

saturada, generalmente elaborada con cloruro de sodio, aunque pueden utilizarse otras
~ 101 ~
soluciones saturadas, las cuales por su densidad, permiten que los huevos de
helmintos y ooquistes de protozoarios (formas parásitas) presentes en la materia fecal,
floten y puedan ser observados y contabilizados en una cámara de McMaster, para
determinar su cantidad por gramo de heces. En el caso de la mayoría de los detritos, se
van al fondo, evitando así su interferencia en la observación y contabilidad de ooquistes
o huevos.
La base matemática de esta técnica cuantitativa, es que una muestra de 2 g de heces

se diluye en solución saturada en un volumen de 28 ml en una probeta, los cuales
permiten el desplazamiento de la suspensión en un volumen total de 30 ml. Esta
muestra es homogeinizada para depositar mediante un gotero, en una cámara de
McMaster, la cual cuenta con dos compartimentos, cada uno de los cuales mide un cm2,
con una altura de 0.15 cm, dando una suma total de los dos compartimentos de 0.30 ml
que corresponden al 100%, por lo que la cantidad de huevos u ooquistes
contabilizados, se multiplican por 100 y se divide entre dos puesto que se utilizaron 2 g
de heces, expresándose el resultados, como el número de ooquistes o huevos de
helmintos por gramo de heces (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005).
Algunas cámaras de McMaster cuentan con dos o tres compartimentos los cuales
deben medir 1 cm2, con una abertura de 0.15 cm. Según el fabricante de la cámara se
puede encontrar que algunas tienen dividido el compartimento en seis a diez canales
que permitirán realizar el conteo de huevos u ooquistes. Esta técnica puede ser
aplicada en el laboratorio o a nivel de campo (Hendrix y Robinson, 2006; Sánchez,
2010).
Material y equipo
 Bala magnética.
 Cámara de McMaster.
 Cuchara.
 Densímetro de 1:100 a 1:200.
 Frasco de 30 ml con tapa de plástico (Frasco de McMaster) o probeta de 30 ml
con tapa.
 Gasa.
 Gotero o pipeta Pasteur.
 Matraz de vidrio de 4 000 ml.
 Solución saturada de Cloruro de Sodio.
 Balanza granataria.
 Refrigerador.
 Contadores de 1 y 5 teclas.
 Platina con agitador.
~ 102 ~
Procedimiento
 Identificar el frasco y la cámara de McMaster que se utilizarán, con misma
identificación de la muestra.
 Homogenizar la muestra que se va a procesar, dentro de la bolsa de plástico o
guante de palpación, donde se resguarda.
 Pesar en una balanza o en un frasco de 30 ml (frasco de McMaster o probeta de
30 ml con tapa), por medio del desplazamiento del líquido (equivalente
aproximadamente a 2 ml), 2 g de la muestra fecal problema.
 Agregar solución salina saturada de Cloruro de Sodio hasta la marca de 30 ml
indicada en el frasco. También puede medirse el volumen de 28 ml de solución
salina fisiológica mediante una pipeta.
 Agitar la muestra hasta que se disuelva completamente y después de abrir la
tapa, colocar una gasa en la boca de la probeta antes de introducir el gotero,
para evitar los residuos vegetales.
 Inmediatamente con el gotero, tomar un volumen suficiente para llenar el espacio
de lectura de la cámara de McMaster, evitando la formación de burbujas, en sus
dos compartimentos.
 Dejar reposar de 1 a 2 minutos para que floten las formas parasitarias.
 Observar al microscopio con el objetivo de menor aumento 10X enfocando los
canales marcados en la parte inferior del cubreobjetos de la cámara.
 Mediante la observación directa:
o Primero se realiza el diagnóstico diferencial identificando los géneros de
parásitos en relación a las características morfológicas que presentan los
huevos y ooquistes, apoyándose en la bibliografía de referencia.
o Realizar el conteo de huevos y ooquistes de parásitos en los canales (6 a 10
según el fabricante) de la cámara, auxiliado con un contador manual.
En la Figura 3.15 se presenta una descripción gráfica de la técnica de McMaster.
NOTA. La manipulación de la cámara debe ser rápida para evitar que se deshidrate la
muestra e impida su lectura.
Interpretación
 El número de huevos no es necesariamente indicativo del número de gusanos
presentes en el tracto gastrointestinal.
 Los huevos son producidos solamente por gusanos hembras, adultas, fértiles (o
hermafroditas) y por tanto, podrán estar ausentes en infecciones con parásitos
inmaduros o de un solo sexo.
 La producción diaria de huevos por hembras fértiles está influenciada por
factores fisiológicos del hospedero, por ejemplo, hay un aumento cuando hay
estrés o durante la lactación, o puede disminuir cuando hay una buena
inmunidad del hospedador.
 La quimioterapia también puede afectar la producción de huevo, como cuando se
aplican corticosteroides, en cuyo caso hay un incremento o cuando se aplican
~ 103 ~
dosis sub-letales de antihelmínticos, en el que se presenta una disminución en la

eliminación de huevos.
 Algunos alimentos y piensos pueden tener un efecto similar, por ejemplo, forrajes
ricos en taninos, tienden a presentar un decremento.
 La concentración de huevos también puede estar influenciada por el volumen
diario de heces, producido por el hospedador, la tasa de pasaje de la ingesta a
través del intestino y la distribución de los huevos en la masa fecal.
Figura 3.15. Descripción gráfica de la técnica de McMaster, 1) Homogeneizar la

muestra, 2) Pesar 2 g de muestra, 3) Agregar 28 ml de solución salina saturada o hasta
la marca de 30 ml, 4) Agitar la muestra hasta disolverla completamente, 5) Colocar una
gasa en la boca de la probeta y tomar un volumen suficiente para llenar una cámara, 6)
Llenar la cámara McMaster evitando las burbujas y dejarla reposar, 7) Enfocar los
canales con el objetivo 10X y contabilizar los ooquistes o huevos.
 Algunos tipos de huevos son más pesados que otros y podrían no flotar, en
soluciones de baja gravedad específica, por ejemplo los huevos de Fasciola
hepatica.
 Algunos huevos de diferentes especies de helmintos son indistinguibles
(particularmente trichostrongilidos). Esto complica la interpretación clínica debido
a que algunos géneros de parásitos, por ejemplo Haemonchus, producen mucho
más huevos por día que otras, por ejemplo, Ostertagia.
~ 104 ~
 En referencia a la interpretación diagnóstica sobre la cantidad de ooquistes de

protozoarios o huevos de helmintos que pueden encontrarse en las heces,
mediante esta técnica, puede considerarse la información contenida en el
Cuadro 3.1.
Cuadro 3.1. Interpretación diagnóstica y posibles daños ocasionados las diferentes
especies de helmintos o protozoarios identificados en muestras fecales.
Detección de ooquistes o huevos (por gramo de No. de

Pérdi- Pérdi-
heces) parásitos
das de das en
Parásito identificado que
carne litros de
provocan
Leve Ligera Moderada Grave (Kg) leche
daño
Criptosporidium spp. < 300 301 - 1000 1001 - 5000 >10000 Sin datos --- ---
Eimeria spp. < 300 301 - 1000 1001 - 5000 > 5000 Desde 300 --- ---
Dictyocaulus spp. 1 - 100 101 - 200 200 – 300 < 300 Desde 10 -- --
Fasciola hepatica 1-5 5 - 10 11 – 20 > 20 Desde 1 3 - 10 1-7
Paramphistomum spp. 1 - 100 101 - 1000 1001 - 5000 > 5000 Desde 200 1–2 1-3
Moniezia spp. 1 - 100 101 – 900 901 - 5000 > 5000 Desde 1 40-50 --
Thysanosoma actinoides 1 – 100 101 – 900 901 - 5000 > 5000 Desde 5 -- --
Haemonchus spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 100 10-20 2-5
Ostertagia spp. < 100 101 - 300 301 – 2000 > 2000 500 10-25 2-7
Trichostrongylus spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 2,000 5 - 70 ---
Mecistocirrus spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 500 --- 2-4
Bunostomum spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 50 -- 2-5
Cooperia spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 200 --- --
Toxocara spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 20 -- --
Strongyloides spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 200 -- --
Nematodirus spp. < 100 101 – 300 301 – 2000 > 2000 50 --- ---
Oesophagostomum spp. < 100 101 - 300 301 – 2000 > 2000 25 25-50 1-5
Trichuris spp. < 100 101 - 300 301 – 2000 > 2000 50 10-20 --
~ 105 ~
3.3.7. Técnica coproparasitoscópica en cama de pollo
Antecedentes
La técnica coproparasitoscópica en cama de pollo es una técnica cuantitativa para

cuantificar los ooquistes de protozoarios del género Eimeria presentes en el material de
cama, en pollos alojados en condiciones en piso (Long y Rowell, 1975).
La técnica de cama es un método cuantitativo mediante la dilución, centrifugación y

flotación, determinando el número de ooquistes por gramo de cama; de acuerdo a las
características morfológicas de las especies de Eimeria, presente en el material de
cama, así como el porcentaje de esporulación de los ooquistes presentes.
Esta técnica permite identificar los factores de riesgo presentes durante la crianza de
pollos en condiciones en piso, al contabilizar los ooquistes presentes en su fase
infectiva o de esporulación, así como los no esporulados (Long y Rowell, 1975; Long,
1982; Donal et al., 2007).
Material y equipo
 Aplicadores.
 Cámara de McMaster.
 Coladera.
 Cuchara.
 Goteros.
 Gradilla.
 Marcador de tinta indeleble.
 Recipientes de boca ancha con un volumen de 120 a 150 ml.
 Tubos de ensaye de 15 ml.
 Vaso de precipitado de 4,000 ml.
 Agua de la llave.
 Solución saturada de cloruro de sodio.
 Agitador Vortex.
 Báscula digital.
 Centrífuga.
 Contadores de 1 y 5 teclas.
 Refrigerador.
~ 106 ~
Toma de muestra
Para la toma de muestra, en la caseta, se puede utilizar métodos de cinco puntos, es

decir, tomar las muestras de las esquinas de la caseta y del centro; otro método es el
de tomar en cinco o seis punto en zigzag; también puede utilizarse el método de línea
recta, eligiendo cinco o seis puntos a lo largo de la caseta. Estos puntos deben ser al
azar.
Procedimiento
 Pesar 10 g de muestra de cama e identificar el frasco en donde se coloca.

 Agregar a la muestra de cama, 100 ml de agua, dejarla reposar en refrigeración a
una temperatura de 2 a 9°C durante la noche.
 Homogeneizar perfectamente la muestra y colarla con una malla fina.
 Mezclar bien y vaciar 15 ml de la muestra colada en un tubo de centrifuga.
 Centrifugar durante 10 minutos de 700 a 900 g.
 Eliminar el sobrenadante, resuspender el sedimento con solución saturada de
cloruro de sodio, agitando perfectamente con el agitador Vortex, hasta los 15 ml
del tubo.
 Con un gotero llenar la cámara de McMaster, dejando reposar 2 minutos.
 Contar en el microscopio, los ooquistes presentes en la cámara de McMaster con
el objetivo 10X.
 Multiplicar el número de ooquistes por el factor 67 (estimado de las cantidades
de muestra manejada [100X100/15X1/10]) (Long, 1982).
En la Figura 3.16 se muestra una representación gráfica de la técnica

coproparasitoscópica en cama de pollo.
Interpretación
El resultado positivo corresponde a la suma de ooquistes de coccidia presentes en

todos los espacios de recuento de la cámara de McMaster, multiplicando por el factor
67 y es expresado como el número de ooquistes por gramo de cama.
El resultado negativo es cuando no existe la presencia de ooquistes en los

compartimentos de la cámara y es expresado como cero.
~ 107 ~
Figura 3.16. Representación gráfica de la técnica coproparasitoscópica en cama de

pollo. 1) Homogeinización de la muestra, 2) Pesar 10 g de muestra de material de
cama, 3) Agregar 100 ml de agua a la muestra de cama y dejarla reposar durante la
noche, a una temperatura de 2 a 9°C, 4) Colar la muestra al pasarla a otro vaso de
precipitado, 5) Pasar el líquido filtrado a un tubo de centrifuga de 15 ml, 6) Centrifugar el
contenido del tubo (de 2 500 a 3 500 rpm), 7) Homogeinizar la muestra, 8) Con el
contenido, llenar la cámara de McMaster, 9) Contar los ooquistes de la muestra con el
lente 10X del microscopio compuesto.
~ 108 ~
3.3.8. Técnica de Kinyoun
Fundamento
Esta técnica se derivó de la desarrollada por los médicos alemanes Franz Ziehl y
Friedrich Neelsen y se empleó en el proceso de coloración específica de las bacterias
alcohol-ácido resistentes que se caracterizan porque sus paredes celulares contienen
ácidos grasos (ácidos micólicos) de cadena larga (con 50 a 90 átomos de carbono) que
les confieren la propiedad de resistir a la decoloración con el alcohol ácido después de
emplear colorantes básicos, de lo cual se deriva la denominación de bacterias alcohol-
ácido resistentes (la técnica fue enfocada al género Mycobacterium). El procedimiento
original incluía el calentamiento de la preparación que permitía fundir las ceras de la
pared bacteriana permitiendo que el colorante pasara y al enfriarse la muestra quedara
atrapado y no le fuera posible salir de la bacteria manifestándose la coloración roja
característica en estos organismos.
A partir de esa técnica se desarrollaron una serie de variantes que permitieron colorear
otro tipo de agentes infecciosos y es el caso de la tinción de Kinyoun la cual difiere por
la ausencia de calentamiento de la muestra en proceso, este aspecto ha sido aplicado
en el caso de las fases ooquísticas de diferentes géneros de coccidios como:
Cryptosporidium, Cyclospora y su extensión a Sarcocystis e Isospora, aunque en
Parasitología Veterinaria principalmente se enfoca al primer género, inicialmente este
procedimiento se usó para confirmación en muestras de heces de humano (debido a
que en individuos con inmunodeficiencia resulta muy común este tipo de infecciones) y
en aquellas muestras en las que hay dudas, esta coloración permite confirmar la
presencia de cuatro esporozoitos en el interior de los ooquistes, que en el caso de
Cryptosporidium parvum. Los ooquistes de este protozoario son pequeños y miden de
4 a 6 μm y no son fácilmente visibles cuando el observador no tiene experiencia.
Gradualmente la técnica de Kinyoun se ha adaptado para su uso en animales que son
afectados por diferentes especies de Cryptosporidium (Figura 3.17). También tiene una
aplicación para hacer monitoreo en la contaminación de aguas residuales.
Figura 3.17. Quistes de Cyclospora cayetanensis, 1) sin teñir, 2) teñidos con la técnica
de Kinyoun. 100X, 3) Ooquiste de Eimeria leuckarti.
~ 109 ~
La efectividad de esta técnica una vez estandarizada alcanza el 100 % de detección de

ooquistes en las muestras y puede compararse con la obtenida con técnicas
inmunológicas como la inmunofluorescencia (Bernal et al., 1998; Ash et al., 2007;
Arrendó et al., 2008).
Material y equipo
 Portaobjetos.
 Metanol absoluto.
 Mechero Bunsen o platina para calentamiento (opcionales).
 Carbol-fucsina (fucsina fenicada).
 Alcohol-Ácido (dos posibles variantes).
 Solución de verde de malaquita o de azul de metileno.
 Aceite de inmersión.
 Microscopio óptico con micrómetro.
Procedimiento
 Depositar aproximadamente 25 μl de suspensión de heces sospechosas en el
centro del portaobjetos y hacer una extensión del material.
 Dejar secar a temperatura ambiente, fijar con metanol por 3 minutos y dejar
secar.
 Cubrir con carbol-fucsina durante 5 minutos enjuagar hasta que el agua salga
transparente.
 Lavar con el alcohol-ácido (ácido clorhídrico al 3% en alcohol al 95%) y enjuagar
hasta que el agua quede clara (el alcohol puede ser sustituido por una solución
de Ácido Sulfúrico al 1% en alcohol al 95% que resulta menos enérgico como
decolorante resultando muy útil cuando los organismos son muy susceptibles a la
acción del ácido).
 Cubrir las preparaciones con verde de malaquita por 1 minuto; lavar con agua de
la llave y dejar secar.
 Secar al aire y observar al microscopio con el objetivo de 100X. Las estructuras
ooquísticas en caso de estar presentes se observan de color rojo púrpura en un
fondo azul o verde dependiendo del colorante de contraste que se use.
En la Figura 3.18 se muestra una representación gráfica de la técnica de Kinyoun.
Interpretación
La muestra se considera positiva si se observa por lo menos un ooquiste. Debido a la
poca cantidad de muestra examinada los resultados negativos no son concluyentes y
se sugiere repetir la prueba.
En ocasiones se desprende el extendido de heces, para evitarlo se desengrasan los

portaobjetos antes de utilizarlos Para mejorar la adherencia de la extensión los
~ 110 ~
portaobjetos pueden ser tratados previamente con una pequeña gota de albumina
formando una capa fina (Ramírez et al., 2010).
Figura 3.18. Técnica de Kinyoun. 1) Diluir las heces con solución salina fisiológica, 2)
Revolver con un palillo y con la muestra impregnada en el palillo, realizar un círculo
sobre un portaobjetos, 3) Impregnar el palillo nuevamente con heces y realizar otro
círculo. Repetir hasta realizar 6 a 8 círculos, 4) Dejar secar y fijar con alcohol metílico,
5) Agregar Fucsina fenicada hasta cubrir las improntas, 6) Enjuagar, 7) Agregar alcohol-
ácido hasta que se destiña la impronta, 8) Enjuagar, 9) Cubrir las improntas con azul de
metileno y dejar actuar, 10) Enjuagar, 11) Secar, 12) Enfocar a 100X y medir los
ooquistes.
Recomendaciones
 El verde de malaquita puede ser sustituido aplicando una solución de azul de
metileno por 1-3 minutos y enjuagar suavemente hasta que el agua quede clara.
~ 111 ~
 En algunos laboratorios se fija el frotis de heces por calentamiento suave

(empleando un mechero o platina caliente).
 El mantenimiento de las muestras en formol puede afectar la afinidad tintorial de
los ooquistes.
 El grado de tinción puede sufrir fluctuaciones con las diferentes muestras que se
procesan.
 Algunas levaduras y esporas bacterianas pueden adquirir la coloración rojiza
tenue pero habrá que tomar en cuenta que presentan dimensiones mucho más
reducidas
 Las extensiones de material deben ser delgadas para favorecer la observación.
 Es recomendable que la muestra se concentre (por sedimentación) para facilitar
la observación.
 Es frecuente que las heces de los animales con criptosporidiosis presenten un
exceso de moco por lo que pueden ser tratadas con 10 gotas de Hidróxido de
Potasio al 10% para eliminarlo, facilitando la liberación y tinción de los ooquistes.
 Infecciones muy ligeras de Cryptosporidium pueden pasar desapercibidas por lo
cual es preciso hacer una concentración de la muestra por sedimentación.
 Filtrar los colorantes al menos una vez al mes.
 Hacer control a los colorantes con muestras positivas de referencia que pueden
ser mantenidas en Dicromato de Potasio al 2.5% en refrigeración a 4°C.
3.3.9. Técnica de migración larvaria o Baermann
Fundamento
Muchos de los nematodos pulmonares tienen huevos larvados que se rompen en el

tracto respiratorio o durante su paso por el tracto digestivo y liberan a la larva de primer
estadio (L1). La técnica de Baermann tiene como principio aprovechar el higrotropismo y
termotropismo positivo de las L1 y la gravedad; lo que permite que las larvas migren de
las heces hacia el agua tibia, desciendan y se concentren en el fondo del embudo por
efecto de la gravedad.
Se recomienda para la detección de Dictyocaulus viviparus en bovinos, D. filaria,

Muellerius capillaris y Protostrongylus rufescens en pequeños rumiantes y D. arnfieldi
en equinos.
No es recomendable para el diagnóstico de Metastrongylus en el cerdo debido a que

generalmente la L1 no eclosiona del huevo hasta que es consumida por el hospedador
intermediario (Baermann, 1917; Besné et al., 2006).
Material y equipo
 Aparato de Baermann.
o Soporte universal.
o Embudo.
~ 112 ~
o Manguera de hule látex conectada al embudo.

o Pinzas Mörh.
o Colador.
 Gasa o servitoalla.
 Cuchara.
 Agua corriente.
 Vidrio de reloj o caja de Petri.
 Portaobjetos y cubreobjetos.
 Pipeta Pasteur.
 Lugol.
 Microscopio estereoscópico.
Procedimiento
 Armar el aparato de Baermann.
 Envolver 3-5 g de heces con una gasa o servitoalla y colocarla sobre la coladera.
 Agregar agua tibia por las paredes del embudo hasta que cubra la mitad de la
muestra, dejar reposar durante 8 a 12 h.
 Obtener en un vidrio de reloj 2-3 ml del contenido aflojando la pinza Möhr y
observar en el microscopio estereoscópico.
 Extraer con la pipeta Pasteur las larvas y depositarlas en un portaobjetos, se
agrega una gota de lugol para su fijación y colocar un cubreobjetos.
 Observar en el microscopio compuesto con el objetivo (10X y 40X). La
identificación es de acuerdo a sus características morfológicas.
En la Figura 3.10 se muestra una representación gráfica de la técnica de Baermann o

migración larvaria.

 Si la muestra no tiene contacto con el agua, las larvas no podrán migrar.
 Si las muestras no son frescas o no estuvieron en refrigeración, se corre el riego
de que las larvas continúen su desarrollo, dificultando su identificación debido
que las claves fueron hechas para L1 (Figura 3.19).
Recomendaciones
 Aunque las larvas empiezan a migrar a los pocos minutos de iniciada la prueba,
a las ocho horas la mayoría de las larvas ya se encuentran en el fondo del
aparato de Baermann.
 El agua tibia acelera la migración de las larvas.
 Se puede agregar el lugol a los mililitros colectados del aparato de Baermann.
Esto teñirá y fijará a las larvas haciendo más fácil su localización y captura.
 La identificación de larvas de Muellerius capillaris requiere de su observación a
40X (Figura 3.20).
~ 113 ~
Figura 3.19. Técnica de Baermann o migración larvaria. 1) Armar el aparato de

Baermann, 2) Agregar agua hasta un par de centímetros antes del borde del embudo, 3)
Colocar una muestra de heces (10 g aproximadamente) en una gasa o servilleta de
papel, 4) Colocar el envoltorio sobre una coladera y ponerla en el embudo. El agua
debe tocar la muestra, 5) Dejar reposar 8 a 12 h, 6) Abrir la pinza y colectar 3 ó 4 ml del
líquido, 7) Agregar una gota de lugol y observar en el microscopio estereoscópico, 8)
Colectar las larvas teñidas con una pipeta Pasteur, colocarlas en un portaobjetos e
identificarlas en el microscopio compuesto.
~ 114 ~
Figura 3.20. Larvas de primer estadio obtenidas por la técnica de migración larvaria. 1)
Dictyocaulus filaria, 2) Muellerius capillaris teñida con carmín.
3.3.10. Técnica de cultivo larvario
Fundamento
Debido a que muchos de los huevos de los nematodos gastrointestinales estrongilidos

de rumiantes y équidos son muy parecidos, difícilmente se puede determinar el género
del parásito. Cuando se requiere identificar el género de estos nematodos es necesario
obtener las larvas de tercer estadio, las cuales se pueden distinguir por su tamaño,
forma, número de células intestinales, estructuras del extremo anterior y posterior, entre
otras características (Van Wyk et al., 2003; Liébano, 2010, 2011).
El cultivo larvario o coprocultivo, se basa en proporcionar a los huevos, humedad,

temperatura y oxigenación de manera artificial, para que puedan desarrollarse hasta
larva de tercer estadio (L3), tal y como lo hacen en el suelo en condiciones naturales. Se
han diseñado diversos métodos y variantes de cultivos fecales, la que a continuación se
describe permite concentrar las larvas y se pueden utilizar recipientes más grandes
cuando se necesitan miles de larvas (Liébano, 2010, 2011).
Esta técnica es ampliamente recomendable en rumiantes. Su utilidad en équidos es

limitada, debido a que no existen claves para la identificación de todos los géneros
larvarios.
Material y equipo
 Recipiente.
 Sustrato, puede ser serrín estéril o limpio, hule espuma u otro.
 Cuchara.
 Agua.
 Estufa de cultivo (opcional en climas cálidos).
 Vidrio de reloj o caja de Petri.
 Portaobjetos y cubreobjetos.
~ 115 ~
 Pipeta Pasteur.
 Lugol.
 Microscopio estereoscópico.
 Microscopio compuesto con escala micrométrica.
Procedimiento
 En el recipiente colocar aproximadamente 10 g de materia fecal positiva a
nematodos gastrointestinales.
 Agregar una cantidad similar de sustrato, adicionar unas gotas de agua y mezclar
con la ayuda de una cuchara, agregar pequeñas cantidades de agua hasta que
el contenido del vaso se observe con suficiente húmeda (no excederse de agua).
 Identificar el cultivo, la fecha de entrada fecha de entrada y fecha de salida del
coprocultivo. Se mete a la estufa de cultivo a una temperatura de 27°C durante
10 a 12 días, el tiempo suficiente para que los huevos de los nematodos se
desarrollen hasta L3. Se debe revisar diariamente la humedad en el interior del
recipiente y mover el contenido con una cuchara para oxigenar el cultivo.
 Después de 10 ó 12 días, sacar el cultivo y todo el contenido se coloca en uno o
varios Baermann, dejar reposar por 8 h, posteriormente se quita la pinza Möhr y
se obtiene el líquido en un vidrio de reloj. Observar las larvas en el microscopio
estereoscópico.
 Extraer con la pipeta Pasteur las larvas y depositarlas en un portaobjetos, se
agrega una gota de lugol para su fijación y colocar un cubreobjetos.
 Observar en el microscopio compuesto con el objetivo (10X y 40X). La
identificación es de acuerdo a sus características morfológicas. Ver el apartado
de identificación de larvas más adelante.
NOTA. Transcurrido el tiempo estimado de cultivo, se recomienda verificar el estado de

desarrollo de las larvas antes de sacar todo el cultivo. Deslizar un par de mililitros de
agua sobre una de las paredes del recipiente y girarlo sobre su propio eje en dos o tres
ocasiones. Este paso debe hacerse lenta y cuidadosamente para que el agua
humedezca completamente toda la pared del frasco. Con cuidado inclinar el recipiente
para obtener el líquido en una caja de Petri. Si las larvas han alcanzado el tercer
estadio se procederá a concentrarlas en el aparato de Baermann, de lo contrario se
continuará el cultivo.
Interpretación
Se identifican 100 larvas y la frecuencia de géneros se expresa en porcentaje.

 La humedad es indispensable para el metabolismo de las formas parasitarias
principalmente para mantener hidratada la cubierta externa de los huevos y la
cutícula de las larvas. El nivel óptimo de humedad relativa es de 80 a 90 %.
~ 116 ~
 El tiempo de incubación depende de la especie de nematodo y la temperatura,

en general es suficiente de 10 a 12 días a 27°C. Si se realiza a temperatura
ambiente (20°C), el tiempo de incubación se puede prolongar hasta 20 días, para
el género Nematodirus debido a las variaciones de temperatura entre el día y la
noche. Si se incrementa la temperatura a 30°C el tiempo de incubación se
reduce a 5 días en el caso de Haemonchus contortus.
 El sustrato facilita la aireación del cultivo y la oxigenación de los huevos y larvas.
Los requerimientos de oxígeno son altos para las mudas, pero bajos para las
larvas infectantes. Revolver el cultivo tiene dos objetivos: proveer oxígeno y
disminuir el crecimiento de hongos.
 Las heces tienen un pH óptimo para el desarrollo larvario que va de 6.5 a 7.5,
ambientes ácidos impiden el desarrollo.
 Se recomienda que la colecta de heces se realice de manera directa por
extracción rectal; procurando no tomar muestras del suelo, para evitar la
contaminación con larvas de vida libre (Anónimo, 1971; Liébano, 2004, 2010,
2011; Karki, 2008).
3.4. TÉCNICAS PARA EL DIAGNÓSTICO DE LARVAS INFECTANTES

DE NEMATODOS GASTROINTESTINALES
3.4.1. Técnica para la limpieza de larvas infectantes de nematodos

gastrointestinales por gradientes de densidad con sacarosa
Fundamento
Cuando se concentran las larvas en el aparato de Baermann van acompañadas de

detritus que podrían interferir en algunos experimentos. Para eliminar las impurezas se
puede filtrar la suspensión de larvas a través de papel limpia lentes, si se requiere
mayor limpieza se puede utilizar un gradiente de sacarosa (Liébano, 2010).
Material y equipo
 Tubos de plástico de 50 ml.
 Tubos de ensaye de 15 ml.
 Pipeta Pasteur.
 Balanza.
 Centrifuga clínica.
 Solución de sacarosa al 40%.
 Refrigerador.
Procedimiento
 El material resultante de la técnica de filtración se transfiere a tubos de plástico
de 50 ml y se deja reposar en el refrigerador a 4 ºC por una hora, con la finalidad
de eliminar el sobrenadante, junto con algunas partículas en suspensión.
~ 117 ~
 Depositar con mucho cuidado 1 ó 2 ml de la suspensión de larvas en dos tubos

de 15 ml que contienen 9 ml de sacarosa al 40%.
 Centrifugar a 1000g rpm durante 5 min. Este proceso, permitirá que la mayor
cantidad de contaminantes y residuos provenientes de los cultivos fecales
sedimenten y las larvas se concentre en la superficie formando un anillo
blanquecino.
 Colectar las larvas con la pipeta Pasteur y transferirlas a un par de tubos con 10
ml de agua destilada.
 Centrifugar a 1000 rpm durante 3 minutos. Las larvas sedimentarán.
 Desechar el sobrenadante y agregar más agua destilada. Centrifugar
nuevamente. Repetir este proceso de lavado para eliminar la sacarosa y evitar
un desequilibrio osmótico y muerte de las larvas. Generalmente con tres lavados
es suficiente.
3.4.2. Identificación de larvas infectantes de estrongilidos de rumiantes
Fundamento
Es importante distinguir las larvas o nematodos del suelo (que no son parásitos) de las
larvas de nematodos parásitos (Figura 3.21). Los fitonematodos o nematodos del suelo
se distinguen por que los machos presentan espículas y a las hembras se les ven
huevos en el útero.
Figura 3.21. Estructura típica de una larva de un nematodo gastrointestinal. La vaina es

una cubierta que cubre a la larva y la protege del medio ambiente: CL: Cola de la larva
o parte interna que va desde el ano hasta al final de la larva (no de la vaina), PD:
Porción Distal es la distancia que separa el extremo de la cola de la larva del final de la
cola de la vaina, CV: Cola de la Vaina es la porción de la Vaina desde el ano hasta el
extremo posterior de la Vaina (Según el género existen diferentes longitudes y formas:
cónicas, afiladas, etc.) CV=CL+PD, LT: Longitud Total es la distancia que va desde el
extremo anterior al extremo posterior de la vaina, CI: Células Intestinales pueden ser de
diferentes formas y el número varía según el género.
~ 118 ~
Las larvas L1 y L2 de los nematodos parásitos son muy parecidas, tienen esófago
rabditiforme, y la boca abierta lo cual les permite alimentarse. Estos estadios carecen
de vaina y contienen gránulos alimenticios. La L3 tiene una vaina por lo tanto ya no se
alimentan, su sobrevivencia depende de sus reservas alimenticias y las condiciones
ambientales, el esófago es filariforme, presenta células a lo largo de su intestino las
cuales varían en forma, triangulares, hexagonales y pentagonales así como en número
de 8, 16, 24, y 32; dependiendo del género y especie que se trate (Niec, 1968; Liébano,
2011; Bowman, 2004) (Figura 3.22 y 3.23).
Figura 3.22. Diferentes estadios de Haemonchus contortus. 1) Larva 1. a.-ausencia de

vaina, b.- contenido granular a lo largo de su celoma, 2) Larva 2 c.-formación de
células, d-esófago rabditiforme, e.-cavidad oral, 3) Larva 3 f.-esófago filariforme, g.-
células a lo largo de su celoma, h.-vaina que envuelve a la larva, i.- punta de la cola de
la vaina.
Figura 3.23. Nematodos obtenidos en el cultivo larvario. 1) Larva 3 del nematodo

parásito Mecistocirrus digitatus, 2) Fitonematodo.
~ 119 ~
Material y equipo
 Larvas.
 Lugol.
 Portaobjetos.
 Cubreobjetos.
 Pipeta Pasteur.
 Microscopio compuesto con micrómetro ocular.
Procedimiento
 Agregar una o dos gotas de lugol a una fracción de la suspensión de larvas.
 Con la pipeta Pasteur depositar varias larvas entre porta y cubreobjetos y se
observan al microscopio compuesto a 10X y posteriormente a 40X.
 Identificar cada una de las larvas hasta llegar a 100.
La clasificación de los diferentes géneros de larvas infectantes de nematodos

gatrointestinales, de acuerdo a lo largo de la cola de la vaina larva (Niec, 1968; Liébano,
2011), formando así tres grupos:
El largo de cola de la vaina permite separar las larvas en tres grupos:

a) Larvas con cola de vaina corta: Trichostrongylus axei, T. colubriformis, T. vitrinus,
Teladorsagia/Ostertagia circumcincta y T. ostertagi,
b) Larvas con cola mediana: Haemonchus contortus, H. placei, Cooperia oncophora,
C. punctata y otras especies, Mecistocirrus digitatus, y
C) Larvas con cola de vaina larga: Nematodirus spathiger, N. battus, N. fillicolis,
helvetianus, Oesophagostomum radiatum, O. venulosum y Chabertia ovina.
Además de los grupos mencionados, se considera por separado a las L3 de

Strongyloides papillosus y Bunostomum spp., por ser las más pequeñas en longitud.
Las siguientes medidas son de utilidad para lograr la plena identificación:

 Longitud total: de la cavidad bucal a la punta de la cola de la vaina.
 Longitud del cuerpo de la larva: de la cavidad bucal a la punta de la cola de larva.
 Longitud del esófago: de la cavidad bucal al comienzo del intestino.
 Longitud de la cola de la larva: del ano a la punta de la cola de la larva.
 Longitud de la cola de la vaina: del ano a la punta de la cola de la vaina.
 Ancho del cuerpo de la larva, medición tomada al inicio del intestino.
3.4.3. Características morfológicas de las larvas infectantes de rumiantes
En la Figura 3.24 se muestra una representación de las características morfológicas de

la extremidad anterior, media y posterior de los diferentes géneros de larvas (L3) de
nematodos gastrointestinales de rumiantes.
~ 120 ~
Figura 3.24. Características morfológicas de la extremidad anterior, media y posterior

de los diferentes géneros de larvas (L3) de nematodos gastrointestinales de rumiantes.
A) Strongyloides spp., B) Bunostomum spp., C) Trichostrongylus spp., D) Teladorsagia
spp., E) Cooperia spp., F) Mecistocirrus digitatus, G) Haemonchus spp., H) Chabertia
ovina, I) Oesophagostomum spp., J) Nematodirus spp.
Larva infectante de Strongyloides papillosus. Esta larva se desenvuelve de acuerdo

a las condiciones de la naturaleza, si las condiciones principalmente de temperatura y
humedad son adversas, esta permanece en forma de vida libre. Sin embargo, cuando
las condiciones son favorables las larvas desarrollan para infectar a los rumiantes.
Existen varios géneros que afectan a diversas especies: S. papillosus: ovinos, caprinos,
bovinos, búfalos y conejos; S. ramsoni: cerdos; S. stercolaris: hombre, antropoides,
~ 121 ~
perro y gatos; S. westeri: caballo, asno; S. fuelleborni: hombre y primates; S. rati: ratas;
y S. avium: aves (Organización Panamericana de la Salud, 2003).
Larva infectante de Bunostomum trigonocephalum. Es la larva más pequeña de

todas las larvas de este grupo. Su cubierta está provista de una vaina protectora. Las
larvas de este género además de penetrar por vía oral lo hacen por la piel. Existen
varios géneros: B. trigonocephalum: ovinos y caprinos. B. phlebotomum: bovinos. La
extremidad anterior es redondeada, la cavidad bucal es pequeña y tiene forma de cono
o embudo con engrosamiento. El intestino está bordeado por dieciséis células
intestinales, las cuales miden 33 x 6 , pocas veces bien diferenciadas, con su
respectivo núcleo y primordium genital, el cual ésta situado de 240 a 295  del extremo
anterior de la larva. En la extremidad posterior, la punta de la cola de la larva es obtusa
y mide de 55 a 68  de largo, además la cola de la vaina larval se proyecta a una
distancia de 85 a 150  del extremo de la larva (Mehlnorn, 2001).
Larva infectante de Trichostrongylus colubriformis. Es una larva robusta, provista

de vaina de tamaño pequeño que pertenece al grupo de colas cortas (Niec, 1968). La
extremidad anterior es redondeada y presenta una cavidad bucal. El intestino está
bordeado por 16 células intestinales de forma rectangular o triangular. En la extremidad
posterior, la punta de la cola de la larva acaba en diferentes formas o tubérculos,
dependiendo de la especie de que se trate. La cola de la vaina es corta, cónica y aguda
(Niec, 1968).
Larva infectante de Teladorsagia circumcincta. Es una larva delgada, provista de

vaina de tamaño pequeño y de cola corta. Existen varios géneros: O. ostertagi: bovinos.
O. circumcincta: ovinos y caprinos. O. trifurcata: ovinos y caprinos. En una observación
más detallada, la extremidad anterior es redondeada con cavidad presente, el intestino
es bordeado por 16 células intestinales de forma triangular. En la extremidad posterior,
la punta de la cola de la larva es redondeada con pequeña incisión en la parte ventral
de la larva. La cola de la vaina larval es alargada, puntiaguda con una desviación
característica. Las formas pre-parasíticas de éste género, resisten más las
temperaturas bajas que la mayor parte de los otros géneros de la familia, por lo que las
parasitosis por Ostertagia predominan en zonas frías. En temperaturas de 22-24°C se
desarrollan las larvas infectantes en seis días (Liébano, 2011).
Larva infectante de Cooperia curticei. Es una larva delgada, provista de vaina,

pertenece al grupo de cola mediana la extremidad anterior es redondeada, su cavidad
bucal tiene forma de pera o globular. Existen varios géneros: C. curticei: ovinos y
caprinos, C. oncophora: bovinos, C. punctata: bovinos, C. pectinata: bovinos. La
cavidad bucal comienza en la faringe y posee una cinta fibrinosa, al observarse al
microscopio con un objetivo de mayor aumento, se ven dos puntos refringentes o una
línea, detalle morfológico característico para éste género. Posee 16 células, en la
extremidad posterior, la punta de la cola de la larva es obtusa, redondeada. La cola de
la vaina larval es ligeramente ondulada. Las fases preparasíticas de este género son las
menos resistentes a las temperaturas bajas y a la desecación, por lo que muy pocas
~ 122 ~
sobreviven después del invierno en los días templados. En el cultivo las larvas
infectantes a temperatura de 22-24 ºC se forman en 7 días. La baja temperatura
ambiental y la falta de lluvias, provocan un decremento en la infección por Cooperia
spp., pudiendo sobrevivir sobre las pasturas los estados libres de éste parásito durante
el invierno, aunque puede haber un incremento de la infección en animales susceptibles
durante el invierno. En Australia se ha establecido que las larvas infectantes de
Cooperia spp. persisten viables sobre la pastura por 24 semanas durante el verano y el
otoño, que es cuando hay mayor precipitación pluvial (Rosenberg, 1975).
Larva infectante de Mecistocirrus digitatus. Existe poca información de la clave de

identificación larvaria de esta especie (Fernando, 1965; García y Mejía, 1984). Es una
larva delgada, provista de vaina, pertenece al grupo de vaina corta. En una observación
más detallada la extremidad anterior es redondeada, su esófago es filariforme. Presenta
en la extremidad anterior dos estructuras en forma arriñonada, situadas paralelamente y
de color café obscuro. Es evidente la presencia de estriaciones cuticulares más
marcadas en la región cervical, se observan también 16 células intestinales de forma
pentagonal provistas de un gran núcleo, así como posibles gránulos alimenticios de
gran tamaño y de aspecto transparente dentro del intestino. En la extremidad posterior,
la punta de la cola de la larva acaba en forma redondeada y la cola de la vaina es corta,
cónica aguda.
Larva infectante de Haemonchus contortus. La larva de este género requiere de una

temperatura más elevada que las de Ostertagia spp., para llegar a su fase de L3. H.
contortus se puede encontrar en: ovinos y caprinos. H. similis: rumiantes. H. placei:
bovinos, H. longistipes: ovinos, cabras y camellos. Todas las especies del género
Haemonchus son hematófagos. Es una larva delgada, provista de vaina de tamaño
medio y de cola mediana. En una observación más detallada, la extremidad anterior es
redondeada, su cavidad bucal es de forma globular y el esófago es filariforme. El
intestino está bordeado por 16 células intestinales con su respectivo núcleo y un
primodium genital, siendo las primeras células cortas y triangulares y las últimas
alargadas y de forma más pentagonal. La primera célula es pequeña e irregular y la
última no se encuentra alineada a sus células contigua si no que termina en forma
individual. En la extremidad posterior, la punta de la cola de la larva acaba en forma
cónica y la cola de la vaina, se va adelgazando hasta finalizar en punta fina, además
presenta una torcedura o fractura inmediatamente después de la terminación de la
punta de la larva, asemejando a una bayoneta (Urquhart, 2001, Liébano, 2011).
Larva infectante de Chabertia ovina. Esta larva pertenece a la familia

trichostrongyloidea. Es una larva provista de vaina delgada, es de tamaño grande,
morfológicamente es muy parecida a la de Oesophagostomum. El intestino está
bordeada de 28 a 32 células de forma rectangular. Pertenece al grupo de larvas de
cola grande. En una observación más detallada, en la extremidad anterior, la cavidad
bucal entra al esófago a través de una armadura esofágica, la punta de la cola de la
larva es roma, siendo la cola de la vaina muy delgada en su extremo posterior. La
~ 123 ~
resistencia de los huevos principalmente a la desecación e influencias externas, es

grande (Niec, 1968).
Larva infectante de Oesophagostomum columbianum. Es una larva bastante ancha,

provista de una vaina gruesa y floja que forma ondulaciones muy visibles. Existen varios
géneros: O. columbianum: ovinos, caprinos y camellos; O. venulosum: ovinos y
caprinos; y O. radiatum: bovinos y búfalo. Es una larva bastante ancha, provista de una
vaina gruesa y floja que forma ondulaciones muy visibles. Pertenece al grupo de las
llamadas cola grande, la extremidad anterior es redondeada, su cavidad bucal recta, de
paredes engrosadas y el esófago filariforme en el estado infectante o L3. El intestino
está bordeado por una cantidad de células intestinales características para cada
especie, que pueden ser de 16, 24 ó 32. En la extremidad posterior, la punta de la cola
de la larva termina en forma cónica y la cola de la vaina se va adelgazando hasta
finalizar en una punta fina, en forma de látigo. Esta larvas se cultiva a temperaturas de
22 a 24°C en 7-8 días, son poco resistentes al calor y a la acción de la luz solar. En
cuanto a su efecto sobre el hospedero, las larvas infectivas se refugian en la pared
Intestinal, formándose en el hospedador nódulos del tamaño de una abeja, conocidos
como granulomas, estos impiden el funcionamiento del intestino alternando con la
absorción de líquidos, el resultado es una diarrea negra y mal oliente. La supervivencia
de las larvas en el suelo húmedo es de 3 meses, siendo la temperatura óptima para su
desarrollo de 30°C. Los huevos no resisten la desecación, pero en cambio cada hembra
adulta puede poner alrededor de 12,000 huevos al día. La supervivencia de las L3
requiere de una humedad de 100% (Soulsby, 1987; Van Wyk et al., 2003).
Larva infectante de Nematodirus spathiger. Las especies de éste género poseen

resistencia a los cambios climáticos extremos mayor al resto de los trichostrongylidos.
Existen varios géneros: N. fillicolis: ovinos y caprinos; N. spathiger: ovinos y caprinos; y
N. battus: bovinos: ovinos y camellos. Su capacidad de sobrevivir bajo condiciones de
congelamiento es muy grande; también soportan la desecación durante varios meses.
Este género se desarrolla entre 24 y 48°C. Es una larva robusta, provista de vaina de
tamaño grande, la extremidad anterior es redondeada, la cavidad bucal está en forma
de tubo recto y el esófago es filariforme. El intestino está bordeado por 8 grandes
células bien delimitadas por un material denso y granular; con su respectivo núcleo. En
la extremidad posterior, la punta de la cola de la larva es característica para cada
especie. La cola de la vaina larval es bastante larga en forma de látigo. El género
Nematodirus puede resistir uno o dos años en las praderas. El género Nematodirus se
diferencia en que la larva L1, no abandona el huevo formándose la L3 infectante en 15 a
30 días según especie a temperatura de 24-28°C. La humedad de los pastos reduce su
existencia pero puede soportar la congelación (Johnstone, 1998).
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Figueroa-Castillo, J.A., Jasso-Villazul, C.,

Book · June 2015

Roger Ivan Rodriguez Vivas

Novel approaches to control endo- and ecto-parasites View project

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Dr. Juan Antonio Figueroa Castillo1

El examen coproparasitoscópico consiste en la observación macro y microscópica de

Para su interpretación se deben considerar los factores que determinan la variación en

Los huevos de los nematodos continúan desarrollándose durante el transporte de las

Para un correcto diagnóstico de las parasitosis gastrointestinales que afectan a los

al profesionista en la toma de decisiones para los programas de prevención y control de

3.2. EXAMEN MACROSCÓPICO

El examen macroscópico de las heces puede revelar en algunos casos la presencia de

En el examen macroscópico se recomienda separar parásitos o fragmentos de estos, ya

 Caja de Petri o charola de fondo obscuro.

En la Figura 3.1 se muestra una representación gráfica del examen macroscópico

Es un procedimiento auxiliar, no se recomienda como prueba de diagnóstico única, los

Factores que pueden alterar los resultados

3.3. EXAMEN MICROSCÓPICO

3.3.1. Técnica directa

La técnica directa tiene desventajas tales como (Rodríguez-Vivas y Cob-Galera, 2005;

En la Figura 3.2 se muestra una representación gráfica examen microscópico directo.

Factores que pueden alterar los resultados

Figura 3.2. Examen microscópico directo. 1) En un portaobjetos colocar una gota de

3.3.2. Técnica de flotación

sulfato de magnesio al 35% (densidad de 1.220 a 1.280) y solución saturada de azúcar

Los huevos de trematodos son generalmente más pesados y requieren soluciones

Los laboratoristas tienen preferencias personales en la selección de la solución

Figura 3.3. Huevos de nematodos obtenidos por flotación. 1) Toxocara cati, 2)

Figura 3.4. Huevos de nematodos, obtenidos por la técnica de Flotación. 1)

Figura 3.5. Huevos de nematodos, obtenidos por la técnica de Flotación. 1) Capillaria

Figura 3.6. Huevos de cestodos obtenidos por la técnica de Flotación. 1) Hymenolepis

Factores que pueden alterar los resultados

solución de flotación, se cristaliza en un par de minutos y en menos tiempo si se coloca un

En la Figura 3.7 se muestra una representación gráfica de la técnica de flotación.

Figura 3.7. Técnica de flotación. 1) Colocar una muestra de heces en un vaso, 2)

Para incrementar la sensibilidad de la técnica, se puede pasar la suspensión de materia

Es preferible la solución de Sheather para concentrar los ooquistes del género

La solución de azúcar tarda más tiempo en cristalizarse, pero requiere de la adición de

3.3.3. Técnica de Faust

 Tubos de centrífuga cónicos con capacidad para 15 ml (15x150 mm) (pueden

reposar el tubo por un lapso de 10 minutos y colocar sobre el menisco un

En la Figura 3.10 se muestra una representación gráfica de la técnica de Faust.

Factores que pueden alterar los resultados

El más frecuente es que la densidad de la solución se encuentre por debajo de 1.180.

 En general el uso de esta técnica manejando la densidad de 1.180 en la solución

Figura 3.4. Técnica de Faust. 1) Depositar una muestra de heces en un vaso, 2)

3.3.4. Técnica de sedimentación (sedimentación múltiple, cualitativa)

Fasciola hepatica y paramfistomidos: P. cervi, Cotylophoron spp., Calycophoron spp. y

Figura 3.11. Huevos de helmintos obtenidos por la técnica de sedimentación. A) Huevo

En la Figura 3.12 se muestra una descripción gráfica de la técnica de sedimentación.

El resultado positivo es cuando se detecta la presencia de huevos de trematodos en el

El resultado negativo es cuando no hay presencia de huevos de trematodos en la

Factores que pueden alterar los resultados

 Cuando el tiempo de reposo es menor, se corre el riesgo de desechar los huevos

 El agua tibia favorece la sedimentación de los huevos.

Figura 3.12. Descripción gráfica de la técnica de sedimentación. 1) Homogeneizar la

3.3.5. Técnica de Graham