Clase 2
Clase 2
Clase 2
de la Célula
⚪ La CÉLULA es la unidad estructural y
funcional fundamental de los seres
vivos.
- No pueden ser separadas, ya que la
desestructuración implicaría
la muerte del individuo.
- Es la unidad funcional ya que cumplen con
todas las funciones Vitales esenciales de la
materia viva (respirar, alimentarse,
reproducirse, etc.)
- De la misma manera, el ÁTOMO es la
unidad fundamental de las estructuras
químicas
⚪ Los atributos más importantes de los seres
vivos son: Su capacidad de Autorregulación;
La Complejidad Creciente y el Alto grado
de Organización.
Microscopio
óptico clásico
TIPOS DE MICROSCOPIOS
ÓPTICOS
⚪ MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES: Observación de
células vivas.
⚪ MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA: Células y Tejidos
vivos.
⚪ MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO: Se emplea en el
estudio de partículas pequeñas y su principal aplicación en la
clínica médica es para la Sífilis.
⚪ MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA: La formación de
la imágen se registra sobre una película fotográfica. Se utiliza
para la localización de Ácidos Nucleicos, dado que éstos
absorben los rayos U.V .
⚪ MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA: Se basa en el
comportamiento de ciertos componentes cuando son
observados con luz polarizada.
Material Isotrópico: la luz se propaga a través de él.
Material Anisotrópico: es BIRREFRINGENTE, dos índices de
refracción distintos, correspondientes a dos velocidades de
transmisión de la luz.
Observación al M.O.
Toxocari cati
Órgano: sangre, células sanguíneas.
Especie: humano (Homo sapiens; mamíferos).
Técnica: hematoxilina-eosina en frotis sanguíneo.
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
M.O. M.E.
MECANISMO Dispersión luz Dispersión de e-
UTILIZA Lentes Bobinas
electromagnéticas
AUMENTOS Hasta 1000 veces Un millón de veces
COLORACIÓN Sí No
FIJACIÓN Formol Glutaraldehído
INCLUSIÓN Parafina Resinas
CORTE Micrótomo Ultramicrótomo
COLORANTES Diversos Contrastantes
MONTAJE Porta y cubre de Grillas de metal o
vidrio plástico
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Escherichia coli al microscopio
óptico
E. coli
Células intestinales
Células de
Escherichia coli,
bacteria habitante
del tracto intestinal.
Escherichia coli al microscopio
electrónico de transmisión
Escherichia coli al microscopio
electrónico de barrido
(scanner)
¿Cómo se prepara una muestra
para ser observada al
Microscopio?
❑ La observación de un material al
microscopio óptico común, requiere
de una preparación , cuya técnica se
conoce como Técnica Histológica
que consta de los siguientes pasos:
TÉCNICA HISTOLÓGICA
• Obtención de la muestra.
• Fijación: Impide la autodegradación enzimática de las
células-(químicos: Formol- alcohol etílico 100%- A.
Metílico; físicos: desecación- calor seco, frío o congelación).
• Deshidratación: (Pasajes sucesivos en alcoholes de
concentración creciente).
• Aclaración: (Impregnar la muestra con solvente soluble en
parafina: xileno, tolueno o benceno).
• Inclusión: (En parafina o celoidina previamente calentada.
Al solidificarse da sostén para el corte. Se denomina TACO)
• Corte: (Se utiliza un micrótomo, obteniendo una
superficie muy delgada).
• Rehidratación: (Se retira la parafina con xilol y se lava con
alcoholes de concentración decreciente
• Coloración: (La más común Hematoxilina-Eosina, tiñe
citoplasma rosa y núcleo azul).
• Montaje: (Colocación del corte en un portaobjetos + cubre).
❑ Preparación del material para
observación al microscopio
electrónico de transmisión (MET):
⚪ Fijación: (Con paraformaldehído, tetróxido
de Osmio o glutaraldehído, en solución
acuosa de ph neutro. Luego se lava con
tetróxido de ósmio una hora, que se une a las
lipoproteínas de las membranas celulares.
Esto se denomina coloración o contrastado).
⚪ Deshidratación: (Con alcohol o acetona).
⚪ Inclusión: ( en resinas tipo epoxi).
Corte: (Con un Ultramicrótomo. Permite
cortes de 20 a 100 nm de espesor).
⚪ Montaje: (En pequeñas grillas de cobre).
⚪ Contrastado: (Se impregna con acetato de
uranilo, citrato de plomo u otras sustancias.)
FIGURA: MICRÓTOMO
CORTE CON
MICRÓTOMO
❑ La observación de un material al
microscopio electrónico de Barrido
(MEB), requiere de la siguiente
preparación :
Preparación del material para
observar al MEB:
• Consiste en la homogenización o
destrucción de las uniones celulares por
diferentes procedimientos, mecánicos o
químicos, separando las fracciones
subcelulares según su masa, superficie y
peso específico.(se separan las organelas).
• Se obtiene un extracto celular soluble y espeso
denominado «Homogenato» , que luego se
somete a Centrifugación (por gradiente de
densidad) y Centrifugación Diferencial
⚪ Cuanto más chico es el tamaño de la partícula,
mayor debe ser la fuerza centrífuga para que
sedimente: