Clase 2

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Organización General

de la Célula
⚪ La CÉLULA es la unidad estructural y
funcional fundamental de los seres
vivos.
- No pueden ser separadas, ya que la
desestructuración implicaría
la muerte del individuo.
- Es la unidad funcional ya que cumplen con
todas las funciones Vitales esenciales de la
materia viva (respirar, alimentarse,
reproducirse, etc.)
- De la misma manera, el ÁTOMO es la
unidad fundamental de las estructuras
químicas
⚪ Los atributos más importantes de los seres
vivos son: Su capacidad de Autorregulación;
La Complejidad Creciente y el Alto grado
de Organización.

El funcionamiento del organismo es


resultado de la compleja interacción
de sus células y productos
❑ Características Básicas de
las Células:
• Las Células son Sistemas Complejos:
Las estructuras y organelas de las Células desempeñan
funciones específicas. Algunas Células son más
complejas que otras
• Las Células se reproducen:
Todas las Células han surgido de otra Célula, a través de
un proceso de división celular (Mitosis – Meiosis)
• Las Células Metabolizan:
Todas realizan una serie de reacciones bioquímicas, que
en conjunto reciben el nombre de Metabolismo.
(anabolismo + Catabolismo).
Se construye Materia y almacena Energía
(ANABOLISMO) o
Se degrada Materia y libera Energía (CATABOLISMO)
❑ Características Básicas
de las Células:
• Las Células mantienen un Equilibrio Interno:
El manteniomiento del equilibrio Interno se denomina
Homeostasis Esta capacidad de autoregulación le
permite controlar:
La hidratación – Condiciones nutricionales- Cambios en
la concentración de Iones – Temperatura.
• Irritabilidad:
Todas las Células poseen capacidad para responder a los
cambios que ocurren en el medio interno y externo.
Todas elaboran respuestas que les permiten adaptarse y
sobrevivir.
. Las Células Evolucionan:
Las adaptaciones que las células adquieren genéticamente
les permiten sobrevivir en el medio y tiempo geológico
en el cual existen.
Células Procariontes
● Membrana celular: protege la célula,
compuesta principalmente por
fosfolípidos y proteínas, y que regula el
flujo de sustancias dentro y fuera de la
célula.
● Pared celular: soporte y protección a la
célula, y se compone principalmente de
peptidoglicanos.
● Citoplasma: fluido viscoso. Contiene los
orgánulos celulares, como los ribosomas,
que son responsables de la síntesis de
proteínas, y otros componentes celulares
como los nucleoides, que son regiones
de ADN no encapsulados por una
membrana nuclear.
● Flagelos: estructuras filamentosas que
se extienden desde la superficie celular y
que les permiten moverse.
● Pili: adherencia a superficies o para unir
Ej:
Micoplasmas, células durante la reproducción.
bacterias
https://www.youtube.com/watch?v=nGa9O2VecEk
Ej; Clostridium y Bacillus
Forma de multiplicación

⚪ Generalmente se multiplican por Fisión


transversal binaria y luego se separan, pero en
algunas especies las células hijas pueden
permanecer unidas. Así se forman diplococo,
diplobacilos, estreptococos, o estreptobacilos.
⚪ Existe gran variedad de metodologías
para el estudio de la célula, sus
organismos y su funcionamiento, tanto
bioquímicos , biofísicos, microscopía y
otros.
MICROSCOPÍA

• El poder de resolución es la distancia mínima a la


que se pueden discriminar dos puntos; este límite
viene determinado por la longitud de onda de la
fuente de iluminación, por ejemplo, la luz visible.
• µm = micrómetro, micrón o micra (Unidad de
longitud equivalente a la milésima parte de un
milímetro, su nombre proviene del griego:
micrós)
• El microscopio óptico, que se sirve de la luz
visible para crear una imagen aumentada del
objeto.Tienen un límite máximo de resolución
de 0,2 µm;
● El ojo humano sólo puede discriminar dos
puntos separados por no más de 0,1 mm.
● Para estudiar las células se necesita el
poder de resolución del microscopio
óptico (0,2 micrones).
● 1 micrómetro: 0.001 milímetro.
Los microscopios ópticos
básicos, se componen de dos
sistemas de lentes: objetivo y Lente
ocular. El primero recoge la Ocular

luz que atraviesa el objeto,


mientras que el ocular es el que Lente
Objetivo
proyecta la imagen sobre la
retina; el aumento total que
permite un microscopio óptico Muestra
se calcula multiplicando la Haz de luz
magnificación (aumentos) que Lente
produce el objetivo por la que Condensador

produce el ocular. Estas lentes


pueden aumentar el objeto Fuente
de Luz
hasta 15X.
MICROSCOPIO ÓPTICO

Microscopio
óptico clásico
TIPOS DE MICROSCOPIOS
ÓPTICOS
⚪ MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES: Observación de
células vivas.
⚪ MICROSCOPIO DE INTERFERENCIA: Células y Tejidos
vivos.
⚪ MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO: Se emplea en el
estudio de partículas pequeñas y su principal aplicación en la
clínica médica es para la Sífilis.
⚪ MICROSCOPIO DE LUZ ULTRAVIOLETA: La formación de
la imágen se registra sobre una película fotográfica. Se utiliza
para la localización de Ácidos Nucleicos, dado que éstos
absorben los rayos U.V .
⚪ MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA: Se basa en el
comportamiento de ciertos componentes cuando son
observados con luz polarizada.
Material Isotrópico: la luz se propaga a través de él.
Material Anisotrópico: es BIRREFRINGENTE, dos índices de
refracción distintos, correspondientes a dos velocidades de
transmisión de la luz.
Observación al M.O.

Microorganismos presentes en una


gota de agua de charco. El M.O.
permite observarlos vivos.
Sacrcoptes scabei

Toxocari cati
Órgano: sangre, células sanguíneas.
Especie: humano (Homo sapiens; mamíferos).
Técnica: hematoxilina-eosina en frotis sanguíneo.
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA

El Microscopio Electrónico usa un haz de electrones que impactan


sobre el objeto que se desea observar, y lo refleja en una pantalla
fluorescente, obteniéndose imágenes más amplificadas que en un
microscopio óptico.

DE TRANSMISION (MET) DE BARRIDO (MEB)


-Imágenes planas de - Imágenes tridimensionales
estructuras celulares
- Células completas
-Permite observar hasta únicamente (limite de
macromoleculas resolución 10 nm)
MICROSCOPIOS

M.O. M.E.
MECANISMO Dispersión luz Dispersión de e-
UTILIZA Lentes Bobinas
electromagnéticas
AUMENTOS Hasta 1000 veces Un millón de veces
COLORACIÓN Sí No
FIJACIÓN Formol Glutaraldehído
INCLUSIÓN Parafina Resinas
CORTE Micrótomo Ultramicrótomo
COLORANTES Diversos Contrastantes
MONTAJE Porta y cubre de Grillas de metal o
vidrio plástico
23
Escherichia coli al microscopio
óptico

E. coli

Células intestinales

Células de
Escherichia coli,
bacteria habitante
del tracto intestinal.
Escherichia coli al microscopio
electrónico de transmisión
Escherichia coli al microscopio
electrónico de barrido
(scanner)
¿Cómo se prepara una muestra
para ser observada al
Microscopio?

❑ La observación de un material al
microscopio óptico común, requiere
de una preparación , cuya técnica se
conoce como Técnica Histológica
que consta de los siguientes pasos:
TÉCNICA HISTOLÓGICA
• Obtención de la muestra.
• Fijación: Impide la autodegradación enzimática de las
células-(químicos: Formol- alcohol etílico 100%- A.
Metílico; físicos: desecación- calor seco, frío o congelación).
• Deshidratación: (Pasajes sucesivos en alcoholes de
concentración creciente).
• Aclaración: (Impregnar la muestra con solvente soluble en
parafina: xileno, tolueno o benceno).
• Inclusión: (En parafina o celoidina previamente calentada.
Al solidificarse da sostén para el corte. Se denomina TACO)
• Corte: (Se utiliza un micrótomo, obteniendo una
superficie muy delgada).
• Rehidratación: (Se retira la parafina con xilol y se lava con
alcoholes de concentración decreciente
• Coloración: (La más común Hematoxilina-Eosina, tiñe
citoplasma rosa y núcleo azul).
• Montaje: (Colocación del corte en un portaobjetos + cubre).
❑ Preparación del material para
observación al microscopio
electrónico de transmisión (MET):
⚪ Fijación: (Con paraformaldehído, tetróxido
de Osmio o glutaraldehído, en solución
acuosa de ph neutro. Luego se lava con
tetróxido de ósmio una hora, que se une a las
lipoproteínas de las membranas celulares.
Esto se denomina coloración o contrastado).
⚪ Deshidratación: (Con alcohol o acetona).
⚪ Inclusión: ( en resinas tipo epoxi).
Corte: (Con un Ultramicrótomo. Permite
cortes de 20 a 100 nm de espesor).
⚪ Montaje: (En pequeñas grillas de cobre).
⚪ Contrastado: (Se impregna con acetato de
uranilo, citrato de plomo u otras sustancias.)
FIGURA: MICRÓTOMO
CORTE CON
MICRÓTOMO
❑ La observación de un material al
microscopio electrónico de Barrido
(MEB), requiere de la siguiente
preparación :
Preparación del material para
observar al MEB:

⚪ Fijación: (Se lava con solución Buffer y se


fija igual que el MET).
⚪ Deshidratación: (Con alcohol o acetona).
⚪ Se depositan Sales de plata u oro, para
lograr el efecto tridimensional
⚪ Inclusión: ( en resinas tipo epoxi).
⚪ Corte: (Con un Ultramicrótomo. Permite
cortes de 20 a 100 nm de espesor).
⚪ Montaje: (En pequeñas grillas de cobre).
Métodos de Cultivo en Laboratorio
❑ El cultivo celular es uno de los
métodos más empleados para
estudiar las células vivas.
⚪ Cultivo Primario: Se obtiene directamente
tejidos animales o vegetales en condiciones
asépticas, se tratan con tripsina para generar
una suspensión de células libres, que se
cultivan en cápsula de Petri con medio de
cultivo adecuado.
⚪ Cultivo Secundario: Se obtiene mediante el
tratamiento con tripsina de un cultivo primario,
en otra cápsula de Petri.
⚫ Cultivo de Líneas Establecidas: Sobreviven más
tiempo que las células normales y necesitan
menor concentración de suero sanguíneo. Muy
utilizadas en el estudio del cáncer: Ej: Células
HeLa; Células L y 3T3 de embriones de ratas;
Células BHK de riñón de hámster recién nacido;
celulas CHO de ovario de hámster adulto.
Fraccionamiento Celular
• El fraccionamiento Celular sirve para aislar
los distintos componentes de la célula.
Mediante este proceso se consigue separar
conjuntos homogéneos a partir de una
población heterogénea de células.

• Consiste en la homogenización o
destrucción de las uniones celulares por
diferentes procedimientos, mecánicos o
químicos, separando las fracciones
subcelulares según su masa, superficie y
peso específico.(se separan las organelas).
• Se obtiene un extracto celular soluble y espeso
denominado «Homogenato» , que luego se
somete a Centrifugación (por gradiente de
densidad) y Centrifugación Diferencial
⚪ Cuanto más chico es el tamaño de la partícula,
mayor debe ser la fuerza centrífuga para que
sedimente:

- A velocidad baja: Núcleos y células rotas


- A Mayor velocidad: Mitocondrias
- A Alta velocidad y período largo: Ribosomas

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