TEMA 5: INSTRUMENTACIÓN DE BIORREACTORES.

El objetivo de un proceso biotecnológico es:

 Producir un producto (bien social o comercial que tenga un valor o que podamos vender),
 Que el proceso se lleve a cabo de forma productiva, sea eficiente, es decir, se obtenga
elevada productividad.
 Que el producto sea reproducible, que tenga cierta calidad.

Lo que necesitamos para alcanzar estos objetivos es tener unas condiciones de operación
adecuadas (óptimas). Para ello:
I. ¿Cómo empezamos? En primer lugar, se necesita conocimiento de las condiciones
óptimas de operación.
II. ¿Y después? Tras conocer las condiciones óptimas de la operación, tenemos que utilizar
las variables de operación óptima: caudales de alimento de sustrato, de aire, de líquido
refrigerante o calefactor; velocidad de agitación… vamos a utilizar las condiciones óptimas
que van a hacer que el proceso funcione bien.
III. ¿Eso es suficiente? ¿Nos fiamos de que el proceso se comporta como habíamos
predicho? Esto NO es suficiente. Habrá que medir los valores de las variables que sea
posible para comprobar que estamos utilizando las condiciones de operación deseadas, y
así ver si nuestro proceso se está comportando como nosotros estamos diciendo, si el
microorganismo está generando a la velocidad que hemos dicho…
IV. ¿Cómo medimos? con la instrumentación del proceso. Toda esa instrumentación es de
distintos tipos, hay alguna que podemos medir de forma instantánea, habrá medidas que
sí permitan tener información en línea y otras que no y tenemos que ver que podemos
medir y que nos podemos permitir medir. Normalmente no vamos a poder medir todas las
variables, pero si midiendo algunas variables comprobamos que va bien todo, nos vale con
esas.
V. ¿Eso es suficiente? Ya conocemos los valores de algunas variables del proceso. Si el
proceso es reproducible y va bien midiendo unas cuantas variables, con los valores de esas
cuantas variables será suficiente. Por ejemplo, conocemos la temperatura, velocidad de
crecimiento, cuanto sustrato se consumen, cuanto producto se genera…

No podemos empezar a hacer cambios sin más en el proceso, lo lógico es utilizar un sistema de
control del proceso, que modifica las variables del proceso utilizando distintos tipos de
métodos matemáticos más sencillos o más avanzado, que pueden ser adaptativos, se adaptan
a lo que han medido; y otros predictivos, que van prediciendo cómo se va a comportar el
proceso y modifican las variables.

Por ejemplo, estos procesos van a mandar una señal para aumentar ligeramente el caudal que
calienta el reactor. Lo que hace es mandar la señal, vuelve a medir, amortigua la respuesta
hasta que se llega al valor deseado, no es automático.
Por lo que con la instrumentación medimos los valores de las variables (observa el proceso) y
con el sistema de control calcula cuanto tenemos que modificar de una variable para que otros
parámetros cambien.
Así, el objetivo del sistema de instrumentación y control es mantener al mínimo la diferencia
entre el valor medido y el valor deseado de cada variable (valor deseado = valor de consigna
o set point, el que nosotros decimos que tiene que ser). Cuanto mejor sea la instrumentación y
el control, más fácil llegaremos a esa mínima diferencia.

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 ¿Podemos utilizar un sistema de control sin instrumentos de medida? ¡¡¡NO!!!, si no
estamos midiendo lo que está pasando, aunque el sistema de control puede predecir cómo
puede ser las variables, el proceso se puede descontrolar. Siempre necesitamos
instrumentos de medida de las variables.
 ¿Podemos utilizar instrumentos de medida que no generen una señal eléctrica que se
pueda comunicar con el sistema de control? ¡¡¡NO!!! Tenemos que utilizar instrumentos
que genere señal eléctrica que se comunique con el sistema de control, ya que para
comunicarse con el sistema de control se necesita algo que genere señal eléctrica. No
obstante, se pueden utilizar a modo de monitorización para que alguien esté presente y
controle el proceso; pero no a modo de control.
 ¿Podemos utilizar instrumentos de medida que conlleven un elevado tiempo de respuesta
(horas o días)? ¡¡¡NO!!!, porque no vamos a tener un tiempo de respuesta adecuado para
nuestro sistema de control. Tenemos que basar el control en medidas que podemos hacer
de manera automática o en línea. Podemos utilizar los equipos, pero a modo de
información o comprobación, pero no a efectos de control del proceso. El sistema de
control está diseñado para responder rápidamente y evitar que las condiciones del reactor
varíen mucho.

El valor esperado u óptimo de una variable se

denomina valor de consigna o set point.

En este esquema se representa el sistema de

instrumentación y control en el que, por ejemplo,
el valor deseado puede ser de temperatura,
oxigeno, caudal…
1. La instrumentación lo que hace es observar el
proceso (mide los valores de las variables, de
las que se pueda), si se puede tener tiempos de
respuesta corta mejor.
2. Si la variable que se ha medido es diferente del valor de consigna el controlador actúa. El
equipo de instrumentación comunica la información al sistema de control.
3. Este sistema de control compara el valor medido con el valor de consigna.
4. Si estos valores son los mismos el sistema de control no tiene que actuar, pero si los
valores son diferentes el controlador tendrá que actuar sobre el proceso, (se controlan 3 o 4
variables)
5. El sistema de control ordena cambios en las condiciones de operación en función de la
información recibida, el sistema de control sabe sobre que parámetro tiene que actuar.
6. Se producen cambios y vuelve a empezar el ciclo.

En resumen: El objetivo final de un proceso biotecnológico debe ser conseguir la máxima

productividad de este, la optimización del biorreactor y del microorganismo implicado en el
proceso, y la obtención del producto final lo más reproducible posible. Para conseguir este
objetivo es fundamental un alto grado de conocimiento del proceso biotecnológico, y ello se
obtiene con la medida, en el menor tiempo posible, del mayor número de variables del
sistema.

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La INSTRUMENTACIÓN de los bioprocesos se utiliza para adquirir esta información. Va a existir
una gran diversidad de bioprocesos, y por ello las técnicas de adquisición de información o
medida pueden ser muy variadas.

Habrá procesos biotecnológicos en los que no sea posible conocer en línea algunas variables
importantes del mismo. En esos casos es cuando se aplican algoritmos matemáticos
denominados sensores lógicos. Estos sensores lógicos, como no puedo medir en tiempo real, a
partir del modelo matemático de descripción del proceso y la medida de alguna variable,
permiten estimar las variables restantes. Esto lo comparamos con el valor, si es el bueno lo
seguimos utilizando y si es el malo recalibramos. Por tanto, los sensores biológicos son
algoritmos matemáticos en los que introducimos la ecuación de diseño de nuestro proceso, lo
que nos permite predecir y tener en cuenta lo que se mide y ver si es bueno o no. Gracias a la
combinación de instrumentación y sensores lógicos podemos predecir las variables del
proceso.

Siempre que sea posible es importante que las técnicas de adquisición de medidas cumplan
una serie de requisitos:
a) Los primeros requisitos se pueden aplicar a cualquier proceso químico y físico
1. Mayor simplicidad posible, que las técnicas que usemos para el control no sean
complicadas.
2. Determinación de la magnitud de la variable en el menor tiempo posible (con el
objetivo de usarla en el control del proceso).
3. La automatización del proceso.
4. La economía del equipo, es decir, adquirir los procesos que podamos comprar.

b) Los últimos requisitos son particulares de un proceso biotecnológico

5. La no alteración del proceso biotecnológico, por ejemplo, la viscosidad.
6. y dentro de la anterior, vencer las necesidades de esterilidad requeridas.

Los instrumentos de medida que se emplean in situ en los vorreactores deben adaptarse a las
características de los bioprocesos:
 Las sondas de instrumentación tienen que poder resistir procesos de esterilización
(normalmente 1,2 atm; 121 ºC), hay que esterilizarla y tiene que seguir calibrada. Tiene
que ser sondas compatibles con esterilización.
 Tienen que poder ser utilizadas en medios de turbidez elevada (microorganismos en
suspensión).
 Deben ser insensibles a la adsorción de proteínas y al crecimiento celular sobre ellas, o
bien estar protegidas para evitar estos fenómenos. Tiene que estar preparados para evitar
que se adhieran los microorganismos o si no lo evitan que los sensores sigan midiendo
bien. Hay que conseguir no detener el proceso, por ejemplo, en los reactores en continuo.
 Estabilidad, por ejemplo, respecto a la pérdida de actividad enzimática. Si el proceso va a
parar cada 6 meses tenemos que prever un sensor que resista durante todo este tiempo.
No podemos poner un biosensor que tengamos que cambiar la membrana cada 3 días.
Tenemos que poner un sensor que resista mucho tiempo.

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  Especificidad respecto al parámetro que se desea medir. Si queremos medir tres proteínas
y no distingue entre dos, pues no lo vamos a usar, buscaremos otro.
 Detección de bajas concentraciones de los analitos (a veces < 0,001 mmol/l) (sensibilidad)
 Reproducibilidad o repetitividad del análisis (posibilidad de recalibración)
 Tiempos de respuesta cortos, si utilizamos las medidas en el proceso de control, pues la
respuesta tiene que ser lo más corto posible.
 Facilidad para transmitir y procesar la señal de medida. Serán señales eléctricas.

*CLASIFICACIÓN DE LOS INSTRUMENTOS DE MEDIDA:

Una primera clasificación de la manera de realizar la medida de una magnitud en un proceso
biotecnológico es en función de cómo y dónde se realiza la medida:

Medidas en discontinuo (Off-line):

Implica la toma de muestra, la muestra la llevamos al laboratorio, posteriormente hacemos
tratamiento y el análisis fuera del reactor. Se utilizan métodos químicos y microbiológicos
tradicionales que conllevan generalmente elevados tiempos de respuesta (horas o días), por lo
que NO se usa en el proceso de control.
Por ejemplo, podemos medir la cantidad
de biomasa por peso seco. Si no nos
interesa conocer la concentración de
biomasa, ésta nos molesta (separación
de biomasa en el equipo de toma de
muestra).

Medidas en línea (On-line):

La instrumentación analítica se encuentra fuera del biorreactor, es instrumentación analítica no
demasiado compleja y requiere equipo de toma de muestras que proporciona una corriente
con biomasa (si se quiere analizar su concentración o características celulares) o sin biomasa (si
se quieren analizar sustratos y/o productos). Este equipo de toma de muestra tiene una tubería
o conducción que saca la muestra y se conecta con el equipo que se vaya a medir.
Dispone de un equipo de análisis automático
que proporciona la medida en un periodo de
tiempo corto (pocos minutos). Por lo que las
magnitudes medidas pueden utilizarse en el
control del proceso. A su vez, el sistema de
control, en función de las medidas tomadas,
actuará sobre las variables del proceso
(velocidad de agitación, caudal de aire…)

Medidas in-situ (In-line):

El sensor analítico se encuentra en el interior del biorreactor (normalmente miden parámetros
físico-químicos) en contacto con el medio de cultivo y es importante que los sensores no
tengan problemas con el crecimiento de microorganismos en su superficie.

Cuando hacemos medida in situ evitamos

problema de retardo o representatividad de la

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muestra. No obstante, la disponibilidad de estos tipos de sensores se limita principalmente a
características fisicoquímicas de procesos y no son aplicables al análisis de sustratos y
productos.
EJEMPLO: Instrumentación de un biorreactor.
En este reactor tenemos una serie de instrumentos colocados en el biorreactor. Cuenta con un
equipo de toma de muestras y ahí una serie de analizadores.

Tenemos el agitador, difusor de aire, medio de cultivo y

tenemos distintas medidas: sonda de oxígeno disuelto, sonda
de temperatura, sonda de pH, mediadores de caudal másicos,
medido de presión, detector de es una, agitación, salida de
gases. En la toma de muestra tenemos un equipo de análisis
de biomasa y distintos equipos para analizar sustratos y
producto.

Las variables en discontinuo son: análisis de biomasa

(absorbancia o turbidez), y análisis de sustratos y productos,
análisis por inyección de flujo, medidores de caudal. Las
variables en línea son: análisis de gases que abandona el
biorreactor. Las variables in-situ: Tª, pH, concentración de
oxígeno disuelto, detección de espuma, sensor de nivel (altura
del volumen del líquido), agitación y presión.

En la práctica de fermentación alcohólica con Sacharomyces cerevisiae (prácticas de

Ingeniería Bioquímica) ¿cómo se realizó la medida de las siguientes variables?
- Concentración de O2 disuelto (in situ, se consume muy rápido).
- Concentración de biomasa (discontinuo, tomamos la muestra la filtrábamos, estufa y
resultado).
- Concentración de glúcidos (discontinuo, se toma la muestra, se diluía, añadimos el
reactivo y método de absorbancia).
- pH (en discontinuo).
- Temperatura (in situ)
- Turbidez y absorbancia: discontinuo.

¿Se utilizó un sistema de toma de muestras directo o indirecto? Cuando

hacemos medida en línea necesitamos un equipo que toma la muestra
para la forma automática.

*EQUIPOS DE TOMA DE MUESTRA:

El paso previo para la aplicación de muchas técnicas de medida es disponer de una muestra en
línea, libre o no de biomasa, para ser analizada fuera del biorreactor.

El equipo de toma de muestras debe transportar la mezcla a analizar hasta el sensor y

mantener las condiciones de esterilidad.

En los procesos con células inmovilizadas o en las medidas en las que la biomasa no interfiera
en el análisis la toma de muestras es sencilla, aunque debe tenerse en cuenta la continuación

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de la actividad biológica del microorganismo, lo que puede causar fuentes de error
importantes, o problemas de adsorción y crecimiento del microorganismo sobre el equipo
analítico.

Es importante que la cantidad de muestra que tomemos no sea demasiado grande, ya que una
parte del proceso se puede devolver al proceso, pero no siempre, por lo que el volumen de
muestra que circula fuera del biorreactor debe ser inferior al 10 % del volumen total para evitar
interferencias en el proceso.

Los equipos de toma de muestras se clasifican en:

 Directos: la corriente que proviene del biorreactor contiene biomasa y partículas
insolubles.
Generalmente se utiliza una bomba peristáltica (como la que usamos en prácticas para
sacar caldo de cultivo del fermentador) conectada a un tubo de conducción de diámetro
lo más pequeño posible (volumen muerto el mínimo posible.
Normalmente la corriente no se recircula al reactor.
La muestra obtenida suele utilizarse para determinar parámetros relacionados con la
biomasa (biomasa total, actividad metabólica, etc).
 Indirectos: la corriente que proviene del biorreactor está libre de biomasa. Su objetivo es
obtener una muestra libre de biomasa y partículas en suspensión que puedan interferir en
el análisis posterior, ya que son equipos más sofisticados y se basan en tecnologías de
membranas (microfiltración, ultrafiltración, diálisis).

Pueden utilizarse equipos de toma de muestra:

 In-situ: deben resistir procesos de esterilización por calor. Su principal inconveniente
es la posible colmatación de la membrana o la retención selectiva de alguno de los
componentes del medio sobre la membrana. En este caso, no es posible sustituir la
membrana sin detener la operación del reactor.
El equipo se introduce dentro del reactor y comienza a succionar el líquido, que
atraviesa la membrana quedando la biomasa en la parte exterior, recogiendo así el
líquido sin biomasa.
Con este líquido se pueden medir diversos parámetros mediante equipos de análisis
en línea.

 On-line: La toma de muestra está dentro pero el equipo de separación (membrana de

microfiltración, ultrafiltración, diálisis) se encuentra fuera del biorreactor (en línea).
La membrana es tubular, el permeado y lo que es soluble atraviesa la membrana,
tenemos una corriente y la biomasa se obtiene en un concentrado de biomasa que se

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 vuelve a recircular al interior del reactor, y lo que no se filtra se envía al equipo de
análisis.

Pueden esterilizarse mediante métodos químicos, y en caso de colmatación es

posible sustituir la membrana sin detener la operación del bioproceso.
El inconveniente de este tipo de equipo se encuentra en la posible rotura de la
conducción o de contaminación externa.

*SENSORES DE PARÁMETROS FÍSICOS Y QUÍMICOS:

La instrumentación asociada a un biorreactor se basa mayoritariamente en la medida de
propiedades físicas y químicas del medio. No obstante, la mayoría de las veces es difícil
encontrar una relación directa entre el cambio de alguna de estas propiedades y las
propiedades y actividades biológicas.

Sensores de parámetros físicos:

Los principales parámetros físicos que tienen influencia en el comportamiento celular y que
están disponibles para su monitorización en línea son los siguientes. Es necesario que estos
produzcan una señal eléctrica y que se pueda conectar al sistema de control para la
monitorización.

TEMPERATURA:
Este es un parámetro de regulación importante para controlar la temperatura óptima de los
microorganismos en el funcionamiento de los procesos biotecnológicos, ya que son muy
sensibles a la temperatura; y también para procesos auxiliares como la esterilización, si
esterilizamos en discontinuo tenemos que saber si hemos alcanzado el grado de esterilización.

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Además, los balances de energía proporcionan información adicional sobre el estado de la
reacción.

Se utilizan fundamentalmente los

termopares (son los más usados), los
termómetros de resistencia (RTD en sus
siglas en inglés) y los termistores.

Las medidas se basan es que los metales y los semiconductores con que están construidos
tiene distinta resistencia o conectividad en función de temperatura, y estos cambios en la
resistencia dan señal eléctrica que se comunica con el controlador.

Siempre se utiliza para el control del proceso porque su medida es instantánea.

PRESIÓN:
La importancia de su medida radica en el hecho de que una variación de presión afecta a la
solubilidad en el medio de cultivo de los gases presentes (por ejemplo, O2 y CO2) y de ciertas
sustancias volátiles (por ejemplo, etanol). Una pequeña sobrepresión en el biorreactor
contribuye a favorecer las condiciones de esterilidad de este. Además, puede ser indicativo de
problemas de saturación de filtros de salida. Por lo tanto, vamos a tener que conseguir valores
de presión constates.

Cuando la medida de presión se realiza en la zona no estéril los manómetros Bourdon son los
más utilizados, cuyo mecanismo es un tubo agarrado a un extremo y cuando aumenta la
presión el tubo se intenta estirar para que la aguja se mueva, dando una señal eléctrica que se
comunica con el ordenador para controlarlo. Cuando se requieren condiciones de esterilidad
se utilizan los transductores de presión protegidos por diafragmas. Se basan en el uso de un
diafragma que hace que no se contamine nada de la zona donde se está midiendo la presión.

VELOCIDAD DE AGITACIÓN:
Este parámetro normalmente se mide fuera de la zona de esterilización mediante sensores
ópticos o magnéticos, o tacómetros si se trata de equipos grandes. Determinan las
revoluciones por minuto del agitador.

DETECTORES DE ESPUMA:
La formación de espuma puede llegar a ser un problema grave, ya que puede llegar a taponar
la salida de los gases, sobre todo en los sistemas con aporte externo de gases (aire, O2).
Se detecta mediante una sonda que al entrar en contacto con la espuma varía su
conductividad.

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Para evitar la espuma puede ser mecánico o químico:
- Los antiespumantes mecánicos acoplados al eje del agitador aseguran la eliminación de
espuma, pero consumen una cantidad importante de energía.
- Los antiespumantes químicos (derivados de la silicona o polialcoholes) pueden adicionarse
de forma automática. Estos pueden afectar el medio fermentativo ya que disminuyen el K La
(y por tanto el aporte de oxígeno disuelto).

MEDIDORES DE CAUDAL:
Para la medida de caudales de gases los más utilizados son los medidores de área variable tipo
rotámetro. Tiene una especie de flotador con un determinado peso y dependiendo del caudal
nos marcará el caudal, tienen que estar calibrados para una presión y temperatura
determinada, son específicos. Además, tienen el problema de no ofrecer señal eléctrica de
salida.

Si se quieren realizar balances de materia los más indicados son los medidores de caudal
térmicos (másicos). Estos tienen señal eléctrica de salida y su medida es independiente de la
presión y la temperatura. Están especialmente diseñados y calibrados de fábrica para un gas, si
quieres utilizarlo para otro gas tienes que volver a calibrarlo. Tienen una resistencia térmica y
dependiendo del gas que pasa se enfría más o menos.
La principal ventaja es que nos permite hacer balances de materia con el que podemos ver lo
que ocurre dentro del reactor.

Para la medida de caudales de líquidos no son recomendables medidores que realicen la

medida in-situ (como rotámetros), y se utilizan comúnmente medidores magnéticos, por
pesada, bombas de desplazamiento positivo o bombas peristálticas.

INDICADOR DE NIVEL:
Los medidores de nivel (que pueden ser de distintos tipos) indican la altura de líquido (y por
tanto el volumen) en el biorreactor. La medida se realiza in-situ y se transmite al sistema de
control.

Tenemos sensores de nivel, que mandan una señal eléctrica al sistema de control e indica si
existe una variación importante en el líquido del reactor.
A parte de los sistemas eléctricos, tenemos que los tanques por fuera tienen un monitor visual.

VISCOSIDAD DEL MEDIO:

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Es útil conocer la variación de las propiedades reológicas (viscosidad) de los medios de cultivo
dado que afectan a las velocidades de transferencia de materia y de calor, a la potencia
necesaria para la agitación, etc.

La medida de la viscosidad se realiza fuera del biorreactor (off-line), y para ello se utilizan
distintos tipos de viscosímetros (rotacionales, de cono y placa, de rodete, etc.).

Cuando el control de la viscosidad del producto es de gran importancia se emplean sondas que
permiten medidas en línea.

Sensores de parámetros químicos:

pH:
La determinación de pH se realiza in situ, mediante un sensor cuya medida se basa en el valor
de potencial eléctrico que pasa a través de una membrana. La calibración debe realizarse antes
del proceso de esterilización.

Estos sensores tienen un tiempo de vida limitado en función del número de esterilizaciones
que se realizan y el medio de fermentación.
Los problemas habituales surgen por la deposición de componentes del medio (por ejemplo,
proteínas) sobre la membrana, lo que causa retardos en la respuesta, o la no calibración del
sensor. Por ello, intentaremos poner una sonda que esté preparada para esto y que permita la
medida en medios turbios y crecimiento de microorganismos en su superficie.

CO2 DISUELTO:
El CO2 es uno de los productos finales de la oxidación completa de los sustratos por parte de los
microorganismos, y su nivel de concentración puede afectar al metabolismo celular, por ello es
un parámetro interesante de conocer.

Existen sensores que basan su medida en la medida del pH (siguiendo la reacción de equilibrio
de disolución del ácido carbónico), y también sensores selectivos a la concentración de CO 2
disuelto.

OXÍGENO DISUELTO:
Las sondas de medida de O2 disuelto (OD) se basan en reacciones electroquímicas.
Consisten básicamente en una carcasa metálica que contiene dos electrodos y un electrolito
adecuado. Para separar los electrodos y los electrolitos del medio de fermentación, el sensor
está cubierto por una membrana permeable al oxígeno.

Esto produce una corriente que puede ser traducida como concentración de oxígeno.

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Habitualmente se recurre al uso de sondas de tipo polarográficas y galvánicas. Las sondas
antiguas es que la membrana se estropea muy frecuentemente.
 Sondas polarográficas suelen ser más rápidas y tener una vida útil más larga, aunque
también son más caras.
 Sondas ópticas de medida de OD por luminiscencia (LDO), que evitan el uso de electrolito
y membrana. Las sondas de oxígeno se basan en medidas de luminiscencia. En el extremo
podemos observar que tiene una serie de luces por el funcionamiento de la sonda.

Independientemente del tipo de sonda, el tiempo de respuesta de la sonda es la clave para

poder utilizar esta instrumentación en medidas dinámicas de determinación del KLa,
necesitamos una sonda que permita medir con un determinado tiempo razonable.

Su principal misión es actuar como medida de OD in-situ en el lazo de control, es decir, saber
cuánto oxígeno disuelto tenemos en el biorreactor; con el objetivo de mantener un valor de
consigna de oxígeno disuelto en los microorganismos, realizando actuación sobre el sistema de
agitación, de aireación o ambos.

ANÁLISIS DE LOS GASES DE LA SALIDA:

El gas que abandona el biorreactor contiene diversos gases, dependiendo del tipo de reacción.
Los componentes más comúnmente analizados en los gases de salida son CO2 y O2.

En especial el CO2 es indicativo de la actividad fermentativa del microorganismo, y por eso es

uno de los parámetros más útiles y ampliamente utilizados en la monitorización y control
biorreactores, puesto que no hay CO2 en la corriente de entrada.

Además, la diferencia del contenido de O2 en las corrientes de entrada y salida es igual a la

cantidad de oxígeno transferido al sistema.

Debido a su fiabilidad y relativo bajo coste los analizadores más utilizados en el campo
industrial son:
 Analizador de infrarrojo para CO2.
 Analizadores de tipo paramagnético para O2.

Recientemente está tomando importancia la espectrometría de masas, dado que empieza a

ser utilizada en procesos industriales como detector de cualquier especie química (con masa
molecular < 500). Esta técnica proporciona la posibilidad de analizar otros componentes
volátiles del medio de cultivo, puede operar durante largos periodos de tiempo y está
totalmente automatizado. No obstante, su precio es entre 5 y 10 veces superior al de los
analizadores convencionales.

En el apartado 5 del tema se estudiará más en detalle esta técnica (espectrometría de masas)
para la medida de la velocidad de consumo de O2 (OUR) y de producción de CO2 (CER).

ANÁLISIS DE LOS GASES DE SALIDA DE FERMENTACIÓN:

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Una de las aplicaciones más importantes de la espectrometría de masas en los procesos
fermentativos es el análisis de los gases de salida en fermentadores.

Lo que vamos a estudiar es que hacemos con la información del análisis de los gases de la
salida del fermentador. En estos gases de salida va a haber específicamente gases que van a dar
mucha información sobre qué está pasando dentro del proceso y se pueden usar los sensores
lógicos y también meterlos dentro de los lazos del control del proceso para ver si se necesita
airear más.

FALTAN COSAS.

Reservados todos los derechos. No se permite la explotación económica ni la transformación de esta obra. Queda permitida la impresión en su totalidad.
Esquema del acondicionamiento de la línea de gases desde la salida del biorreactor hasta la
entrada al espectrómetro de masas.
El aire que cogemos de la atmósfera primero se filtra y luego, ediante un espectrómetro masico
nos permite medial y calcular el caudal de aire que está entrando en el biorreactor.
El caudal de aire nos permite hacer balances de materia.
El aire circular, a través de ciclos de esterilización, una vez que ya haya cumplido su función de
aportar la concentración de oxígeno, el gas sale del biorreactor.
Un controlador de presión……

Un condensador evita que las gotas de liquido del gas pueda entrar al apartao??? Esto hace
que no lleguen al espectrómetro de masas gotas de líquido y espuma.
El espectrómetro de masas hace el análisis comparando y luego nos da la señal al ordenador.
La señal se convierte en una fracción de moles de gases.

La señal eléctrica que se mide se filtrará y dará lugar a poder estimar la concentración de los
gases.
Nos permite estimar la velocidad de crecimiento de la biomasa, solo con medidas de los gases.

FALTAN COSAS.

El espectrómetro de masas convierte su señal en una fracción molar de cada componente. El

gas que sale del reactor tiene como componente mayoritario el nitrogoeno que es inerte. De
forma que es el mayoritario tanto a la entrada como a la salida. La concentración de nitrógeno
nos ayuda a hacer los balances.

OUR y CER.

COPIAR LO QUE FALTA.

A veces cuesta ver el consumod e oxigeno, por l que la medidad e producción de CO2 nos da
mas información.

Si analizamos los gases de salida, veremos que el CO2 tiene practicaente la concentración igual
a la entrada y a la salida. Tenemos que tener en cuenta el nitrógeno por ser el mayoritario
tanto a la entrada como a la salida.

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No es de todo inerte, puesto que para la ocmbustion se necesita, pero hace falta tener
temperaturas extremas.

Lo que ocurre con el nitrógeno es que sabemos que no reacciona en el reactor, de forma que la
cantidad que entra ha de sr igual a la que sale.
Si o traducimos en el balance de materia, la cantidad por unidad de tiempo se expresa con el
caudal de aire a la entrada por su fracción molar igualado al caudal de la salida por su fracción.
Podemos despejar el caudal de salida, evitándonos un caudalímetro.

Con respecto al resto de gases, por ejemplo, el oxígeno, en este caso tenemos que tener la
cantidad de oxigeno que se está consumiendo va a ser igual a la cantidad de oxigen o que entra
menos a la que sale.

En cambio, con la velocidad de producción de CO2, la que vamos a observar es la que se ha

formado, es decir, la cantidad que entra menos la que sale.

La otra relación existente, una vez que sepamos CER y OUR es el RQ.

Estas expresiones son solo validas cuando se mantenga el estado estacionario, si no hay
acumulación ni gas ni liquido en el reactor, la acumulación de gas y líquidos son despreciables y
la variaciones en el pH no son significativas. Si hay variación de pH se está modificando la
concentración de CO2.

Existen diferentes estrategias que nos permiten sacar más partido a las concentraciones de
estos gases, como unos algoritmos matemáticos llamados sensores lógicos que nos permiten,
por ejemplo, estimar la cantidad de biomasa en el reactor a partir de la CER. Existen más
avanzados y comerciales, pero si conocemos el proceso podemos programar uno.

ANÁLISIS DE SUSTRATO, PRODUTOS Y BIOMASA.

ANÁLISIS DE BIOMASA Y CARACTERISTICAS CELULARES.
En los procesos biotecnológicos el caldo de fermetnación puede presentar una gran variedad
de compuestos, y por ello los equipos analíticos que se pueden copplar para la detección de
estas sustancias son muy variadas.
Los equipos más utilizados en los procesos biotecnológicos para el análisis de sustratos,
productos y biomasa son:
CUADRO.

En los procesos biotecnológicos el análisis de sustratos y producitos indica el estado y

velocidad dde las reacciones que tienen lugar.
- La determinación de las concentraciones de carbohidratos (sustratos) es importante ya
que representan la fuente de carbono de los microorganismos.
- En cuanto a las proteínas se moitoriza la cantidad gloavl en el caldo de fermetnación, lo
que informa sobre el material celular, enziams, etx.
- La principal desventaja de los métodos convencionales de análisis para la determinación
e estos componentes son los elevados tiempos de repuesta que puedan variar de 2 a 24
horas, lo cual no permitiría un control efectivo del proceso.
- Otros sistemas…..

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