Manual Inmunoserolog-Lab

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PROCEDIMIENTO OPERATIVO PRO-B.S.R.D.T-010

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INDICE
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CAPITULO I
1.-PRESENTACION DE LA ORGANIZACIÓN____________________________________5
1.1 MISION___________________________________________________________________7
1.2 VISION___________________________________________________________________7
1.3 POLITICA DE CALIDAD____________________________________________________7
1.4 OBJETIVOS DEL BANCO DE SANGRE REFERENCIA DEPARTAMENTAL
TARIJA.______________________________________________________________________8
2.-LEGISLACION APLICABLE_________________________________________________8
3. REVISION Y ACTUALIZACION_____________________________________________10
4. CONFIDENCIALIDAD______________________________________________________10
CAPITULO II__________________________________________________________________12
MANUAL DE INMUNOSEROLOGIA___________________________________________12
1.-INTRODUCCIÓN__________________________________________________________12
2.- OBJETIVO________________________________________________________________13
3.- ALCANCE________________________________________________________________13
4.- RESPONSABILIDAD_______________________________________________________13
5.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA__________________________________________13
BIBLIOGRAFIA______________________________________________________________13
INSERTOS__________________________________________________________________14
6.- DEFINICIONES___________________________________________________________14
7.- CONDICIONES DE SEGURIDAD____________________________________________15
8.- OPERACIONES PRELIMINARES___________________________________________16
9.- DESCRIPCION DEL AMBIENTE____________________________________________16
10.- EQUIPAMIENTO_________________________________________________________17
11.- LISTADO Y UBICACIÓN DEL MATERIAL DEL LABORATORIO_____________18
CAPITULO III
PROCEDIMIENTOS__________________________________________________________20
ELISA PARA HBsAg____________________________________________________________20
Prohibida la reproducción parcial o total de este documento sin autorización del B.S.R.D.T.
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1.- PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO_________________________________________20

2.- MUESTRA________________________________________________________________20
3.-MATERIALES E INSUMOS_________________________________________________21
4.- EQUIPOS_________________________________________________________________21
5.- DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO_____________________________________22
6 INTERPRETACION DE RESULTADOS_______________________________________22
CHAGAS ELISA________________________________________________________________24
2.- MUESTRA________________________________________________________________24
3.- MATERIALES E INSUMOS NECESARIOS___________________________________25
4.- EQUIPOS_________________________________________________________________25
5.- DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO_____________________________________26
6.- RESULTADO_____________________________________________________________27
ELISA PARA HIV Ag / Ab_______________________________________________________28
.2.- MUESTRA_______________________________________________________________29
3.- MATERIALES E INSUMOS_________________________________________________29
4.- EQUIPOS_________________________________________________________________30
5.- DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO_____________________________________30
6.-INTERPRETACION DE RESULTADOS______________________________________31
ELISA PARA HCV______________________________________________________________33
1.-PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO_________________________________________33
2.- MUESTRA________________________________________________________________33
3.- MATERIALES E INSUMOS NECESARIOS___________________________________34
4.- EQUIPOS_________________________________________________________________34
5.- PROCEDIMIENTO________________________________________________________34
6.- CÁLCULO E INTERPRETACIOIN DE RESULTADO__________________________36
TEST RPR SYPHILIS___________________________________________________________37
2.- MUESTRA________________________________________________________________37
3.- MATERIALES E INSUMOS________________________________________________37
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4.- EQUIPOS_________________________________________________________________38
5.- PROCEDIMIENTO________________________________________________________38
6.- CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS__________________________38
HAI CHAGAS__________________________________________________________________39
2.- MUESTRA________________________________________________________________39
3.- MATERIALES E INSUMOS________________________________________________40
4.- EQUIPOS_________________________________________________________________40
5.- PROCEDIMIENTO________________________________________________________41
6.- CÁLCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS__________________________41
CAPITULO IV
1.- DOCUMENTOS Y REGISTROS_____________________________________________43
2.- ANEXOS__________________________________________________________________43
ANEXO 1: ESQUEMA GENERAL DE REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS

SEROLÓGICAS DE ELISA PARA: HCV Y CHAGAS
SEROLÓGICAS DE ELISA PARA: ANEXO 3: HEPATITIS B ANTÍGENO DE
SUPERFÍCIE
SEROLÓGICAS DE ELISA PARA: HIV AG/ AC
ANEXO 5: LIBRO DE REGISTRO DE SEROLOGÍA REG – B.S.R.D.T.-015
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CAPITULO I
1.-PRESENTACION DE LA ORGANIZACIÓN
El Banco de Sangre Referencia Departamental Tarija (B.S.R.D.T.) es una organización

dedicada al propósito de brindar sangre y hemocomponentes seguros con la mayor
calidad posible, cuenta con autorización de funcionamiento SEDES-R.A. 04/09 del 7 de
enero de 2009 ,cumple las actividades establecidas en la legislación legal vigente y
como centro responsable de la provisión de Sangre Segura, cubre los requerimientos de
seis unidades transfusionales ubicadas en Bermejo (Hospital Virgen de Chaguaya),
Villamontes (Hospital Básico de Villamontes),Yacuiba (Hospital Rubén Zelaya) ,
Hospital San Juan de Dios (Entre Rios), Hospital San Juan de Dios de Tarija y Hospital
Obrero de la Caja Nacional de Salud en la ciudad de Tarija, además de contar con
convenios para la dotación de sangre y hemocomponentes a ocho instituciones de la
seguridad social : Caja de Salud de la Banca Privada ,Caja CORDES, Caja de Caminos,
COSSMIL, Seguro Social Universitario, Seguro de SETAR, Caja Petrolera de Salud ,
Prosalud y población en general.
El B.S.R.D.T. en cumplimiento con R.M. 0339del 25 de junio de 2002 es un centro
Público desconcentrado del Servicio Departamental de Salud con patrimonio propio,
autonomía administrativa, financiera, técnica y competencia de ámbito departamental,
se encuentra bajo la dependencia funcional del SEDES Tarija, entendiéndose como tal la
facultad de autorizar su funcionamiento y supervisar el cumplimiento de los objetivos y
resultados institucionales.
Inició su funcionamiento como Plan Piloto en fecha 15 de julio del 2004 en una
infraestructura que se caracterizaba por ser provisional e inadecuada, con equipamiento
insuficiente, antiguo y personal muy reducido, sin embargo pese a las limitaciones ,sus
actividades en el manejo de la sangre se realizaron de acuerdo a las exigencias del
Programa Nacional de Sangre. En sus inicios contó con un fondo rotatorio en reactivos e
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insumos dotado por la Alcaldía Municipal de la Provincia Cercado de Tarija con un

monto equivalente a 30 000 Bs. Desde el año 2005 a 2012 la Prefectura ahora
Gobernación del Departamento de Tarija destinó a través del Servicio Departamental de
Salud un techo presupuestario como apoyo para los gastos de funcionamiento de la
institución. El 26 de abril de 2012 mediante Resolución Administrativa Nº051/2012 del
Gobierno Autónomo Departamental de Tarija en el artículo primero se aprueba
modificaciones presupuestarias para la creación en el Banco de Sangre Referencia
Departamental Tarija de la Dirección Administrativa (DA) como Unidad Ejecutora (UE)
de recursos económicos destinados para el B.S.R.D.T. desde gobernación.
El 8 de enero de 2007 se inaugura el edificio construido con fondos donados por el

PNUD ubicado en la calle Junín entre la Avenida Potosí y calle Ayacucho-Zona 14
viviendas- el cual fue diseñado y construido para el cumplimiento de requisitos y
actividades del Banco de Sangre establecidas en la legislación legal vigente de nuestro
país, donde actualmente presta sus servicios el B.S.R.D.T.
El acto de inauguración contó con la presencia de la Ministra de Salud y Deportes Dra.
Nila Heredia, el Licenciado Oscar Montes Barzón Honorable Alcalde Municipal de la
Ciudad de Tarija, la Dra. Sara Cuevas, Secretaria de Desarrollo Humano de la Prefectura
de Tarija, la Dra. Lourdes Ortiz representante del fondo nórdico, el Dr. Paúl Castellanos
Zamora Director del Servicio Departamental de Salud Tarija y el Dr. Ronald Garzón
Torrejón Director del Banco de Sangre Referencia Departamental Tarija.
Actualmente cuenta con todo el sistema de documentación implementado aspirando a la
certificación ISO 9001:2008, situación que aun no se pudo concretar por falta de
recursos financieros para cubrir los costos económicos de la auditoría externa.
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1.1 MISION
Nuestra misión es proporcionar sangre segura y oportuna a servicios de transfusión
y pacientes que así lo requieran como recurso terapéutico, al igual que proteger y
garantizar la seguridad del donante de sangre.
1.2 VISION
Ser reconocidos en cinco años como el Banco de Sangre de Referencia con mayor
calidad tecnológica, científica y humana en el sur del país, así mismo cubrir el
requerimiento de sangre de todo el departamento de Tarija, proporcionando sangre
segura y accesible, logrando crear una cultura de solidaridad gracias a la
participación masiva de donantes voluntarios en su totalidad.
1.3 POLITICA DE CALIDAD
El B.S.R.D.T. es una institución de bien social sin fines de lucro, comprometida

a brindar un servicio con calidad a donantes, proveer sangre, hemocomponentes
seguros, accesibles y oportunos a servicios de transfusión y pacientes que así lo
requieran, enmarcando sus actividades en la normativa legal vigente.
El B.S.R.D.T. promueve la donación voluntaria de sangre, la mejora continua
de sus procesos y el sistema de gestión de calidad, gracias al desempeño de
personal altamente calificado y comprometido con la organización y la satisfacción
de las necesidades de sus clientes.
Dra. Giovanna Martínez Flores

DIRECTORA B.S.R.D.T.
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1.4 OBJETIVOS DEL BANCO DE SANGRE REFERENCIA DEPARTAMENTAL

TARIJA.
El principal objetivo de la organización es la calidad en todos sus aspectos, orientada a la

distribución de sangre y hemocomponentes seguros a los servicios de transfusión, para que
estos puedan realizar una práctica transfusional segura.
El BSRDT, define los siguientes objetivos coherentes con la política de calidad:
 Planifica y promueve el incremento de la donación voluntaria de sangre.

 Planifica la cobertura del requerimiento de sangre de los servicios de transfusión,
seguros sociales y pacientes privados.
 Planifica y revisa continuamente los resultados de sus procesos.
 Realiza el control de calidad establecido para los hemocomponentes.
 Responde a los requisitos y sugerencias de los donantes y servicios de transfusión.
 Capacita y actualiza a sus recursos humanos.
 Implementa, mejora y actualiza nuevas técnicas en inmunohematología.
2.-LEGISLACION APLICABLE
 Constitución Política del Estado Plurinacional de Bolivia.
 D.S. 26237 Modificación del reglamento de responsabilidad por la
función pública.
 D.S. Nº 23318-A Reglamento de la responsabilidad por la función
pública.
 Ley 2341 Procedimiento Administrativo.
 Estatuto del Funcionario Público Ley 2027.
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 Ley Nº1178 de Administración y control gubernamental del 20 de

julio de 1990 y decretos supremos complementarios de los ocho
sistemas que lo componen.
 Ley Nº 1687 de Medicina Transfusional y Bancos de Sangre del 24
de marzo de 1996.
 D.S. Nº 24547 del 26 de marzo de 1997 Reglamentario a la Ley de
Medicina Transfusional y Bancos de Sangre.
 Ley 1716 de donación y transplante de órganos, tejidos y células del
5 de noviembre de 1996.
 Ley Nº 1737 del Medicamento del 17 de diciembre de 1996.
 D.S. Nº 24672 del 21 de julio de 1997 Reglamentario a la ley del
medicamento y regulaciones reglamentarias expresas.
 Ley 3131 del Ejercicio Profesional y Responsabilidad Médica del 8
de agosto de 2005.
 D.S. Nº 26874 Reglamento de las Prestaciones y Gestión del Seguro
Materno Infantil del Seguro Universal Materno Infantil 21 de
noviembre del 2002.
 D.S. Nº 26873 de 21-12-2002 Sistema Único de Suministros
S.N.U.S.
 R.M. 0029 Estándares de trabajo para Servicios de Sangre.
 R.M. Nº 0436 del 5 de agosto de 2002, de la naturaleza jurídica y
dependencia de los Bancos de Sangre Públicos.
 R.M. Nº 0345 del 26 de junio de 2002 de la creación del Programa
Nacional de Sangre.
 Resolución Administrativa SEDES Nº04/09 del 7 de enero de 2009.
 Reglamento General de Hospitales.
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 Resolución Ministerial Nº 0248 del 20 de mayo de 2003,

Reglamento de Administración y funcionamiento de los Bancos de
Sangre.
 R.M. 0795 del 23 de enero de 2006 de aprobación de los paquetes,
prestaciones y escala de costos SUMI.
 Estatutos y Reglamentos de los entes colegiados.
 Norma ISO 9001:2008 Requisitos.
 Otras aplicables a la organización.
3. REVISION Y ACTUALIZACION
El procedimiento Operativo estandarizado de Inmunoserologia, se encuentra sujeto

a actualizaciones o modificaciones que serán detalladas en la Hoja de
Actualizaciones (FOR-B.S.R.D.T-36) ubicada al inicio del documento.
Los cambios que se realicen en el documento se difundirán de manera oportuna
entre todos los destinatarios del documento.
4. CONFIDENCIALIDAD
El presente Documento al igual que todos los documentos del B.S.R.D.T. SON
CONFIDENCIALES, por lo que su difusión, reproducción parcial o total y más aun
la salida de la institución solo podrá ser autorizada por la Dirección del B.S.R.D.T.
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CAPITULO II
MANUAL DE INMUNOSEROLOGIA
1.-INTRODUCCIÓN
El control de la transmisión de las enfermedades infecciosas hemotransmisibles es un reto

no sólo para quienes desarrollan sus actividades en el campo de la medicina transfusional,
sino también para quienes se encuentran comprometidos en la salud pública de nuestro
Departamento y País.
De acuerdo a la Ley de Medicina transfusional y Bancos de Sangre Nº 1687 promulgada el
26 de Marzo de 1996 que regula el uso y aprovisionamiento de Sangre, componentes y
derivados. Los Bancos de Sangre deberán realizar a toda unidad de Sangre donada el
Tamizáje serológico para infecciones transmisibles por vía transfusional, como son
Hepatitis B de superficie, Hepatitis C, Infección por VIH, Hepatitis Bcuore, Sífilis,
Enfermedad de Chagas y Malaria en las zonas endémicas.
Las Técnicas comúnmente empleadas son de Tipo Indirecto, o sea no aíslan ni identifican
al microorganismo causante de la infección, si no demuestran la respuesta inmunológica del
huésped frente a estas infecciones. La técnica recomendada para el control serológico en
Bancos de Sangre es la de ELISA.
Toda Muestra con resultado Reactivo deberá confirmarse por duplicado empleando la
misma muestra estudio y otra muestra, obtenida de la tubuladura de la unidad de Sangre
Extraída, y si alguna de estas es igualmente reactiva deberá ser confirmada por los
Laboratorios de Referencia a través de pruebas de confirmación.
El presente manual de procedimientos en inmunoserología para el Bancos de Sangre se
constituye en una herramienta que permitirá orientar al personal, sobre las técnicas y
procedimientos adecuados que permitan garantizar la confiabilidad de los resultados,
uniformizando los criterios para su interpretación y validación.
Todos los esfuerzos para disminuir esta forma de transmisión serán infructuosos si no se
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asume el compromiso de actualizar y fortalecer los procesos de Tamizáje

inmunoserológicos en el Bancos de Sangre por parte del nivel operativo y gerencial; así
como de implementar en éste servicio en un Programa de Control de Calidad Interno.
2.- OBJETIVO
Realizar el Tamizáje serológico con pruebas de HIV; Hepatitis B ; Hepatitis B cuore;

hepatitis C, chagas y Sífilis siguiendo procedimientos Técnicos Estandarizados que
permitan además uniformizar criterios para la interpretación y Validación de Resultados.
Garantizando de esta manera un mínimo de riesgo de transmisión de enfermedades por esta
vía.
3.- ALCANCE
Esta área contempla trabajar con muestras o sueros de donantes que hicieron efectiva su
donación, llamadas también muestras pilotos, en las cuales deben incluirse sueros de
control interno.
4.- RESPONSABILIDAD
La responsabilidad de esta área cae en el BIOQUIMICO encargado del laboratorio de

INMUNOSEROLOGIA O BIOQUIMICO que trabaja en el BANCO DE SANGRE.
5.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA

BIBLIOGRAFIA
 Ballester JM, Franco EM, Kranwinkel R, Linares J, Marin Lopez A, Millar A,

Moraes de Souza H, Peña TC, Cruz JR. Estándares de trabajo para Bancos de
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Sangre. Serie 7 Medicamentos esenciales y Tecnología (Eds.) Organización

Mundial de la Salud. Segunda Versión.1999, pp 26 – 27.
 H. Rodríguez Mayado. El Banco de Sangre y la Medicina Transfusional. Editorial
Médica Panamericana 2004.
 Ministerio de Salud y Deportes, Programa Nacional de Sangre, Organización
Panamericana de la Salud. Estándares de Trabajo para Servicios de Sangre, Bolivia
2004.
 Asociacion Americana de Medicina Transfusional y Banco de Sangre, Manual
técnico, Buenos Aires, 2003.
 Alejandro B. Miroli, Hemoterapia, Buenos Aires, 1985.
 Organizacion Mundial de la Salud, Sangre y Hemocomponentes Seguros,
Ginebra,1996.
 Ministerio de Salud y Deportes Transfusion de Sangre Hemocomponentes y
Hemoderivados Bolivia 2004.
 Libros de Registro del Banco de Sangre Dptal. Tarija.
INSERTOS
 Técnicas ELISA de los Reactivos de BIOMERIEUX para :

 Hepatitis B Antígeno de Superfície
 Virus de la Inmunodeficiencia Humana Antigeno / Anticuerpo
 INSERTO DIALAB Hepatitis C
 Técnica ELISA de Reactivo de WIENER LAB. Para: Chaga test
 Syphilis RPR DIALAB

6.- DEFINICIONES
Muestra.- suero del donante

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Código.- Sigla o numeración que recibe el donante.

Kit.- Los reactivos utilizados para las diferentes determinaciones.
I.S G.- Inmunoserología (gavetas)
I.S.V.- Inmunoserología (Vitrinas)
Tips.- Puntas de plástico para micro pipetas.
Cut off.- Punto de corte
Elisa.- Ensayo inmunoenzimático.
Conjugado.- Anti inmunoglobulinas humanas conjugadas con peroxidasa.
Revelador A. Peroxido de hidrogeno/ en buffer citrato.
Revelador B.- Tetrametil bencidina (TMB)/ en ácido clorhídrico.
Diluyente de Muestra.- Albúmina bovina en solución fisiológica tamponada con buffer
fosfato.
Buffer de Lavado Concentrado.- Cloruro de Sodio en buffer fosfatos y tensioactivo no
activo.
7.- CONDICIONES DE SEGURIDAD
El BIOQUIMICO encargado del área de inmunoserología debe cumplir con todas normas
de bioseguridad establecidas por la OMS y la institución.
El mismo deberá tener mucho cuidado en manipuleo de los diferentes reactivos que se
emplean en esta ÁREA (INMUNOSEROLOGIA), para tal efecto el personal encargado
deberá contar a parte del uniforme de transito y mandil con:
- Batas de protección - Gorros

- Gafas protectoras - Barbijo
- Doble guantes de látex
El área debe contar con el material necesario para realizar la respectiva in activación de los
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desechos antes de eliminarlos como ser:
- Tachos para decontaminación del material infeccioso.

- Envases para la eliminación de desechos contaminados.
- Papel para la protección de los mesones.
- Solución para la decontaminación (lavandina 0,5 %).
El Bioquímico encargado del área deberá eliminar correctamente los residuos comunes e
infecciosos.
Mas información remitirse al manual de Bioseguridad.
8.- OPERACIONES PRELIMINARES
Antes de empezar a procesar las diferentes muestras el bioquímico encargado deberá tener
en cuenta.
La existencia de todas las muestras a procesar.
Todas las muestras deberán estar correctamente identificadas.

Verificar la calidad y el volumen las muestra.
9.- DESCRIPCION DEL AMBIENTE
El ambiente del área de Inmunoserología es un ambiente comodo y confortable, se

encuentra debidamente señalizado e identificado. Cuenta con todos los insumos,
suministros materiales y recursos para lograr la conformidad de los requisitos del producto,
del servicio y la satisfacción del cliente interno.
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10.- EQUIPAMIENTO
El laboratorio de Inmunoserología cuenta con el siguiente equipamineto.
- 2 Macrocentrifugas
- 1 Estufa de Incubación
- 1 Rotador de Placas
- 1 Lector de Elisa
- 1 Heladera de Reactivos
El manual de Operación se encuentra en la Gaveta 21 con el rotulo MANUALES DE

EQUIPOS
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11.- LISTADO Y UBICACIÓN DEL MATERIAL DEL LABORATORIO
2.1.b VITRINAS
2,1.a. GAVETAS
I.S.V A 1 .- Agua Destilada
I.S.V.A 2 .- Papel Absorbente
I.S.G 1 .- Libros de serología I.S.V.B 1 .- Cristalizadores
I.S. G2.- Calculadora I.S.V.B 2 .- Vaso de precipitado
Engrampadora I.S.V.C 1 .- Pipetas de vidrio ( 10 ml)
Tijera I.S.V.C 2.- Matras de 10 – 100 ml
Reloj de Alarma I.S.V.D 1.- Pizetas.
I.S. G3 .- Tubos de ensayo I.S.V.D 2.- Lavandina.
Tips
Pipetas de transferencia
Ependor
I.S. G4.- Pipetas 10 – 100 ul, 20 – 200 ul, pipeta
multicanal 300 ul.
I.S. G5 .- Gradillas
I.S. G6 .- Guantes de látex, gorros, barbijos, gafas
protectoras
I.S G7 .- Gradillas de plástico
I.S. G8 .- Tips
I.S. G9.- kardex
I.S. G10. - Libro o fólder de Seroteca.
I.S. G11.- Hojas de ruta del donante.
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CAPITULO III
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PROCEDIMIENTOS
ELISA PARA HBsAg
1.- PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO
Hepanostika HBsAg Ultra es un método ELISA basado en un principio “ sándwich

“ .Finalizado el análisis , el desarrollo de color indica la presencia de AgHBs, mientras que
la ausencia de color o el desarrollo de un color claro, sugieren la ausencia de AgHBs.
Específicamente, los pocillos de tiras microelisa están revestidos de anti-HBs
(monoclonales humanos y murinos). El diluyente de de la muestra y las muestras analíticas
o los controles adecuados se incuban en los pocillos microelisa. Posteriormente se añade el
conjunto (ovino) anti-HBs marcado con peroxidasa del rábano picante y se continua la
incubación . Si Hay presencia del AgHBs, se forma un complejo anticuerpo en fase sólida /
AgHBs/ anticuerpo marcado con la enzima. Tras el lavado y la incubación con el sustrato
TMB (tetramentilbencidina) aparece un color azul. La reacción enzimática se detiene
mediante la adición de una solución de ácido sulfúrico, que hace el color cambie a amarillo.
Cuando el AgHBs está presente en la muestra, se desarrolla un color intenso. Sin embargo,
si la muestra no contiene AgHBs no aparece coloración o ésta es muy débil tras la adición
del sustrato.
Dentro de ciertos límites, la cantidad de AgHBs presente la muestra es proporcional a la
intensidad de color.
2.- MUESTRA
La muestra a emplear es suero de los donantes que hicieron efectiva se donación.
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3.-MATERIALES E INSUMOS
MATERIALES UBICACION
- Micro pipeta de 10 a 200ul - I.S. 4

- Micropipeta multicanal de300ul - I.S.4
- Cristalizadores) - I.S 3
- Tips desechables para micro pipetas - I.S 2
- Reloj alarma - I.S. V.A2
- Papel Absorvente - I.S 3
- Pipetas de transferência o pipetas de - I.S.3
10ml - Meson del laboratoro
- Lector ELISA. - Mesón del laboratorio
- Estufa de temperatura regulable a 37°C. - I.S.3
- Vial(es) vidrio para el sustrato TMB
INSUMOS - I.S V 1
- Agua destilada.
- Solución desinfectante - I.S V D2
- Acido Sulfúrico
4.- EQUIPOS
Los equipos a emplear en este procedimiento son:
Macrocentrifuga
Estufa de incubación
Lector de Elisa
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5.- DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
1.- Preparar el portatiras con la cantidad necesaria de tiras microelisa.

2.- Pipetear 25 ul de diluyente de la muestra en los pocillos asignados.
3.- Pipetear 100 ul de muestra o control (no diluidos) en los pocillos asignados.
Incluir tres controles negativos y un control positivo en cada portatiras.
Pipetear los controles después de la muestras.
4.- Incubar a 37º C durante 60 minutos ± 5 minutos.
5.- Pipetear 50 ul de solución de conjugado en cada pocillo.
6.- Incubar a 37º C durante 60 minutos ± 5 minutos.
7.- Lavar y poner en remojo cada pocillo seis veces con tampón fosfato.
8 .- Pipetear 100ul de sustrato TMB en cada pocillo.
9.- Incubar las tiras entre 15 y 30 ºC durante 30 minutos ± 2 minutos en la oscuridad.
10.- Parar la Reacción añadiendo 100 ul de ácido sulfúrico 1 mol/ l a cada pocillo
11.- Leer las placas a 450 nm y 620 a 700 nm como referencia (Doble longitud de onda).
6 INTERPRETACION DE RESULTADOS
CALCULO DE RESULTADO
Calculo del valor del punto de corte o cutoff:
Valor del punto de corte = NCx + 0,040
Una muestra es reactiva si la absorbancia de la muestra es ≥ al valor del punto de corte
Una muestra es no reactiva si la absorbancia de la muestra es < al valor del punto de corte.
VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS

Una prueba es valida si menos de la mitad del número de cada uno de controles ha sido
eliminado y CNx < 0.100 y CP – CNx ≥ 0.800.
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INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Resultado Negativo
Un resultado no reactivo indica que la muestra analizada bien no contiene AgHBs o bien
contiene AgHBs a concentraciones inferiores a los límites de detección de hepanostika
AgHBs ultra.
Resultado Positivo
Un resultado reactivo indica que la muestra analizada contiene AgHBs o que contiene un
factor de reacción inespecífico.
RANGO
Las muestras que inicialmente muestren un resultado reactivo deben volver a comprobarse
por duplicado, una empleando la muestra usada y otra que se extrae de la tubuladura de la
bolsa extraída. Si la muestra es reactiva en una o ambas pruebas, deben realizarse pruebas
adicionales, incluidas pruebas de confirmación, antes de considerar positiva una muestra
para el AgHBs
Las muestras inicialmente reactivas que en pruebas duplicadas posteriores resulten no
reactivas deberán considerarse no reactivas. Los resultados reactivos que en la prueba
repetida no son reactivos podrían aparecer por uno de los siguientes problemas técnicos:
- Contagio de una muestra altamente reactiva debido a la contaminación del equipo o de las
puntas de la pipeta.
- Contaminación del sustrato con iones de metal.
- Contaminación cruzada por vapor o gotas de reactivo.
- Aspiración o lavado incorrecto en el procedimiento de lavado.
- Errores de lectura, por ejemplo, debido a gotas de líquido debajo del pocillo o burbujas de
aire en el pocillo.
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CHAGAS ELISA
La muestra se diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antígeno. Si la

misma contiene los anticuerpos específicos, estos formaran un complejo con los antígenos
y permanecerán unidos al soporte.
La fracción no unida se elimina por lavado tras lo que se agregan anticuerpos anti-
inmunoglobulina humana conjugados con peroxidasa.
Si se produjo la reacción en la primera etapa del proceso, se unira al conjugado. En los
casos en que se haya unido al conjugado habrá aparición de color celeste. La reacción se
detiene con acido sulfúrico, con lo que el color celeste vira a amarillo.
2.- MUESTRA
3.- MATERIALES E INSUMOS NECESARIOS
MATERIALES INSUMOS
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- Micropipeta de 10 a 200ul - I.S. 4

- Micropipeta multicanal de300ul - I.S 4
- Cristalizadores - I.S V B 1
- Tips desechables para micro pipetas - I.S.3
- Reloj alarma - I.S 2
- Papel Absorvente - I.S V. A 2
- Pipetas de transferencia o pipetas de - I.S 3
10ml
- Lector ELISA. - Meson del laboratorio
- Estufa de temperatura regulable a 37°C.
INSUMOS
-17 Agua destilada. - I.S V.A 1
- Solución desinfectante - I.S V D 2
4.- EQUIPOS
Los equipos a emplear en este procedimiento son :

Macrocentrifuga
Lector de Elisa
1. Antes de comenzar el ensayo, permita que los reactivos alcancen temperatura ambiente.
2. La solución de lavado o Buffer de lavado para usar se debe diluir 1 parte de Buffer de
lavado concentrado + 4 partes de agua destilada.
5.- DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
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1. Los reactivos deben alcanzar la temperatura ambiente.

2. Diluya la solución de lavado 1+4 con solución leco.
3. Ponga en el soporte los pocillos correspondientes al número de muestras a analizar.
Incluya dos pocillos para el control positivo y tres para el control negativo un blanco, un
control interno y los desconocidos.
4. Agregue a cada pocillo 200 µlL de diluyente de muestra.
5. Agregue 10 µL de cada muestra o control positivo, negativo, control interno y un
blanco.
6. Selle la placa con el autoadhesivo provisto, para impedir la evaporación de los reactivos,
e incube por 30 minutos a 37°
7. Lave la placa agregando a cada pocillo 250 µL de solución de
lavado diluida por 6 veces.
8 Agregar 1 gota o 50 µL de conjugado a cada pocillo.
9. Lave nuevamente por 6 veces con la solución de lavado.
10. Agregar 1 gota del revelador A y una gota del revelador B a cada pocillo en caso de
usar micropipeta agregar 50 ul de cada uno e incube la placa en oscuridad durante 30
minutos a temperatura ambiente.
11. Detenga la reacción agregando 1 gota o 50 µL de Solución de Detención a cada
pocillo.
12. Leer las placas a 450 nm en el Lector de ELISA.
6.- RESULTADO
Calculo del valor del punto de corte:

Valor del punto de corte = CN+ 0.200
a.- VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS
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La corrida se considera valida si se cumplen simultáneamente las siguientes conclusiones:

a.-) Las lecturas de al menos 2 de los 3 controles Negativos corregidas contra el blanco de
Reactivos deben ser menores o iguales a 0.150 D.O.
b.-) La lectura media de los controles Positivos corregida debe ser mayor o igual a 0.600
D.O.
Si una o ambas condiciones no se cumple, repetir la corrida.
- Para ambos casos recordar que las lecturas obtenidad dependen de la sensibilidad del
aparato empleado.
b.- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.

Muestras No Reactivas: Se consideran aquellas con absorvancias menores al limite inferior
de la zona de Indeterminación.
Muestras Reactivas: Se consideran aquellas con absorvancias mayores al límite superior de
la zona de indeterminación.
Muestras Indeterminadas: Se consideran aquellas con absorvancias que caen dentro de laa
zona de indeterminación. Estas muestras deben ser enzayadas nuevamente.
RANGO
Todas las muestras dudosas o positivas, deben repetirse en duplicado. Las muestras
repetidamente reactivas pueden ser confirmadas por técnicas tales como: IFI, Westerm
Blot, Xenodiagnóstico o PCR.
ELISA PARA HIV Ag / Ab
Vironostika HIV Ag / Ab es un ELISA basado en un principio “sándwich” de un solo

paso. Una mezcla de antígenos VIH y anticuerpos VIH unida a peroxidasa de rábano
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picante (HRP) actúa como conjugado, mientras que la tetrametilbencidina (TMB) y el

peroxido actúan como sustrato.
Una vez terminada la prueba, la coloración indica la presencia de anticuerpos VIH o de
antigenos VIH, mientras que una coloración débil o la ausencia de coloración indica que no
se detectan anticuerpos o antigenos de VIH.
En concreto, los pocillos microelisa están recubiertos con VIH-1 gp160, péptido VIH-1
ANT70d, péptido VIH-2 env (aminoácidos 592-603) y anti-VIH-1 p24. .
Cada pocillo de microelisa contiene una esfera de conjugado marcado con HRP de la
misma mezcla de anticuerpos /antígenos VIH. El disolvente de la muestra, que se añade
previamente a los pocillos, disuelve la esfera de conjugado. La muestra a analizar o un
control adecuado con anticuerpos o antígenos VIH se incuba en los pocillos microelisa. Si
se detectan anticuerpos VIH-1 y/o VIH-2 en la muestra se forma un complejo antígeno de
fase solida/ ant-VIH/ antigeno enzimaticamente marcado. Si se detecta antigeno VIH-1 en
la muestra se forma un complejo anticuerpo de fase solída/antigeno VIH/anticuerpo
enzimaticamente marcado.
Después del procedimiento de lavado y de incubación con sustrato TMB, se desarrolla una
determinada coloración que se vuelve amarilla cuando la reacción se detiene con ácido
sulfurico. Si la muestra presenta anti-VHI, anti VIH-2, anti VIH -1 grupo 0 y /o antigeno
VIH se observara una coloración intensa. Sin embargo, cuando la muestra no tiene anti-
VHI ni antigeno VIH, se formara una coloración suave o ninguna coloración después de la
adición del sustrato.
.2.- MUESTRA
La muestra a emplear es suero de los donantes que hicieron efectiva se donación
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3.- MATERIALES E INSUMOS
MATERIALES INSUMOS
- Micropipeta de 10 a 200ul - I.S 4

- Micropipeta multicanal de300ul - I.S 4
- Cristalizadores - I.S V. B 1
- Tips desechables para micro pipetas - I.S. 3
- Reloj alarma - I.S. 2
- Papel Absorvente - I.S 3
- Pipetas de transferencia o pipetas de - I.S.3
10ml
- Lector ELISA.
- Vial(es) vidrio para el sustrato TMB
(I.S.G3)
INSUMOS
- Agua destilada. (I.S.V.A 1)
- Solución desinfectante
( I.S.V.D2)
- Acido Sulfúrico
4.- EQUIPOS

Macrocentrifuga
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Lector de Elisa
5.- DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO
Preparación del reactivo

Tiras microelisa:
Atemperar el envase a temperatura ambiente (15 º a 30ºC) antes de abrirlo para evitar la
Condensación en las tiras microelisa. Tras la apertura las tiras son estables durante 8
semanas a temperatura de 2 y 8 ºC, siempre que se conserve en el envase de plástico y se
mantenga serrado con la pinza y la varilla que se suministra.
Tampón Fosfato:
Verificar si el tampón fosfato concentrado presenta cristales salinos. Los mismos deben
disolverse calentando la solución a 37ºC hasta que los cristales hayan desaparecido.
Diluir el tampón de lavado concentrado a 1: 25 con agua destilada o desionizada.
Sustrato TMB
Preparar el sustrato TMB, mezclar la cantidad necesaria de solución TMB en un tubo de
vidrio a partes iguales con solución de peroxido de urea de acuerdo con la cantidad de
pocillos a utilizar.
Cantidad de pocillos Solución TMB + Solución de peroxido de urea
1-16 1ml + 1ml
17-32 2ml + 2ml
33-48 3ml + 3ml
65-80 5ml + 5ml
81-96 6ml + 6ml
PROCEDIMIENTO
1.- Preparar el porta tiras con la cantidad necesaria de tiras microelisa. Quitar el precinto de
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las tiras.
2.- Pipetear 100ul de diluyente de muestras en todos los pocillos, incluyendo los pocillos de
control.
3.- Pipetear 50 ul de muestra en los pocillos asignados. Incluir tres controles negativos y
dos controles positivo de VIH -1 y VIH – 2 , un control interno positivo y un blanco.
Pipetear siempre los controles después de las muestras.
4.- Incubar las tiras a 37ºC durante 60 ± 5 minutos.
5 .- Lavar 6 veces con tampón fosfato.
6.- Pipetear 100 ul de sustrato TMB en cada pocillo no mezclar ni agitar.
7.- Incubar las tiras entre 15 a 30 ºC durante 30 ±2 minutos.
8.- Detener la reacción añadiendo 100 ul de Acido sulfúrico a cada uno de los pocillos.
6.-INTERPRETACION DE RESULTADOS
CALCULO DE RESULTADOS
Calculo de valor del punto de corte:
Punto de corte = CNx + 0.100
VALIDACIÓN DE LA CORRIDA
La corrida es válida si cumple las siguientes condiciones:
1 quedan más de la mitad de los controles negativos:
2 El control positivo 1 menos la media del control ≥ 0.400
3 El control positivo 2 menos la media del control negativo ≥ 0.400
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Resultado Negativo:
- Un resultado no reactivo indica que la muestra analizada no contiene anticuerpos anti
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HIV-1, anti HIV-2 ni anti HIV-1 grupo O.

Las muestras obtenidas inicialmente como reactivas deberán ser analizadas nuevamente por
duplicado.
Solo si las muestras resultan de nuevo reactivas en una o ambas pruebas deberán ser
consideradas como reactivas a anticuerpos anti HIV-1,anti HIV-2 ni anti HIV-1 grupo O.
Resultado Positivo:
- Un resultado reactivo indica que la muestra analizada contiene anticuerpos contiene
anticuerpos anti HIV-1, anti HIV-2 ni anti HIV-1 grupo O o que tiene un factor de reacción
inespecífico.
RANGO
Las muestras obtenidas inicialmente como reactivas deberán ser analizadas nuevamente por
duplicado.
Solo si las muestras resultan de nuevo reactivas en una o ambas pruebas deberán ser
consideradas como reactivas a anticuerpos anti HIV-1,anti HIV-2 ni anti HIV-1 grupo O.
Las muestras inicialmente reactivas que resultan no reactivas en la repetición de la prueba
por duplicado, deben ser consideradas como no reactivas.
ELISA PARA HCV
1.-PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO
Es un método indirecto de ELISA que emplea una Fase sólida para la detección de
Anticuerpos de HCV en un set de incubación.
Las policubetas de polietileno están recubiertas por antígenos recombinantes
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inmunoreactivos que corresponden a la región de la membrana estructural de HCV.

El diluyente de de la muestra y las muestras analíticas o los controles adecuados se incuban
en los pocillos microelisa. Posteriormente se añade el conjunto (rábano) anti-Humano
anticuerpo Ig G (anti- Ig G) marcado con peroxidasa HRP del rábano picante y se continua
la incubación . Si Hay presencia del AgHCV, se forma un complejo anticuerpo en fase
sólida / AgHCV/ anticuerpo marcado con la enzima. Tras el lavado y la incubación con el
sustrato TMB (tetrametilbencidina) y peroxido de urea se esta en presencia del
inmunocomplejo antígeno – anticuerpo – anti-IgG (HRP), la hidrólisis del cromógeno con
el conjugado produce un color azul. La reacción enzimática se detiene mediante la adición
de una solución de ácido sulfúrico, que hace el color cambie a amarillo.
Cuando el AgHCV está presente en la muestra, se desarrolla un color intenso. Sin embargo,
si la muestra no contiene AgHCV no aparece coloración o ésta es muy débil tras la adición
del sustrato.
Dentro de ciertos límites, la cantidad de AgHCV presente la muestra es proporcional a la
intensidad de color.
2.- MUESTRA
3.- MATERIALES E INSUMOS NECESARIOS
- Micro pipeta de 10 a 200ul ( I.S.G.4)

- Micropipeta multicanal de300ul .(I.S.G4)
- Cristalizadores (I.S.V. B1)
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- Tips desechables para micro pipetas (I.S.G.3).

- Reloj alarma (I.S.G.3)
- Papel Absorbente (I.S.G.2 )
- Pipetas de transferencia o pipetas de ( I.S.V.A.2)
10ml - Lector ELISA. ( I.S.G.3)
INSUMOS
- Agua destilada. (I.S.V.A 1) .
- Solución desinfectante ( I.S.V.D2)
4.- EQUIPOS

Macrocentrifuga
Lector de Elisa
5.- PROCEDIMIENTO
1. Atemperar los reactivos a temperatura ambiente, observar que la solución de lavado no

presente cristales. Luego realizar la dilución 1/ 20, es decir 1 ml de solución de lavado
con 20 ml de agua destilada.
2. Poner los pocillos a utilizar en la gradilla de acuerdo al número de muestras con que se
cuente y el número de controles que se empleen. Generalmente se emplea 3 controles
negativos, 2 controles positivos 1 blanco y 1 Control Interno.
3. Colocar 100ul de DILUYENTE DE MUESTRAS a los pocillos excepto al blanco.
4. Adicionar 10 ul de suero Control Positivo, Control Negativo, y las muestras.
5. Selle la placa con el autoadhesivo provisto, para impedir la evaporación de los reactivos
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.Incubar por el tiempo de 30 minutos en estufa de 37 C o temperatura ambiente que no

este por debajo de 25 C ni arriba de 30 C. En la oscuridad
6. Saque el adhesivo y lave la placa. Para esto elimine el contenido y agregue a cada
pocillo 250 ul de solución de lavado diluida. Elimine la solución y repita esta operación
6 veces más.
7. Luego de cada lavado seque el remanente de líquido de los pocillos con papel
absorbente.
8. Agregue 100 ul de HRP- Conjugado en todos los pocillos excepto el blanco.
9. Sellar la placa con el adhesivo provisto, e incubarlo durante 30 minutos a 37º C
10. Retire el adhesivo y lave la placa. Para esto elimine el contenido y agregue a cada
pocillo 250 µL de solución de lavado diluida. Elimine la solución y repita esta
Operación 6 veces más.
11. Luego de cada lavado seque el remanente de líquido de los pocillos con papel
absorbente.
Agregar la solución de color, 50 ul de solución A y 50 ul de solución B a todos los
pocillos incluyendo el blanco, incubar a 37 C por el lapso de 15 minutos. La reacción
enzimática la solución d cromógenos y el HRP – Conjugado produce una coloración
azul en los controles positivo e incoloro en los negativos.
12. Solución de Stop, agregar 50 ul de solución de ácido sulfúrico a cada pocillo los
controles positivos viran a amarillo.
Leer la reacción en el espectrofotómetro a 450 nm . La reacción es estable durante 15
minutos por lo cual debe leerse lo mas rápido posible.
6.- CÁLCULO E INTERPRETACIOIN DE RESULTADO
-VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS

Para que la prueba sea considerada valida debe cumplirse lo siguiente:
a.-) La absorbancia del Blanco debe ser menor o igual a 0.08 a 450
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b.-) La Densidad Óptica de los controles Positivos debe ser menor o igual a 0.800 a 450/
360nm.
c.-) La Densidad Óptica de los controles Negativos debe ser menor a 0.100 a 450nm.
.RESULTADOS.-
Para el calculo del Cut - off : ( C.O.) = Nc + 0,12
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS.-

Interpretación de los resultados:
1.- Resultados Negativos: Los sueros cuya absorbancia estén por debajo del Cut – off se
evalúan como negativos, indicando que no hay presencia de anticuerpos HCV, por lo que el
donante no esta infectado con HCV. S/ C.O. < 1
2.-Resultados Positivos: Los sueros cuya absorbancia estén por encima del Cut – off se
consideran como Reactivos indicando la presencia de Anticuerpos contra el HCV.
TEST RPR SYPHILIS
La SYPHILIS RPR TEST es una prueba de aglutinación no – treponémica que se usa para
detectar y cuantificar anticuerpos reagínicos. La presencia de estos anticuerpos
corresponden a un diagnostico presuntivo de sífilis.
El antígeno usado en este análisis es una modificación del antígeno VDRL el cual contiene
micropartículas de cabón para aumentar la diferencia visual entre un resultado positivo y
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uno negativo. Si una muestra contiene anticuerpos anti-reagínicos, se observa una

floculacion de las partículas antígeno-carbón. En muestras no reactivas, la suspensión
muestra-antígeno tiene apariencia homogénea
2.- MUESTRA
La muestra a emplear es suero de los donantes que hicieron efectiva se donación
MATERIALES INSUMOS
- Varillas de plástico - Solución de lavandina
- Tarjetas desechables - Lámpara de luz blanca
- Frasco dosificador - Solución fisiológica
- Pipetas 10 – 100 ul
- Tips
4.- EQUIPOS
Macrocentrifuga
Rotador de placas
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5.- PROCEDIMIENTO
1.- Llevar el reactivo y las muestras a temperatura ambiente.

2.- Colocar en la parte superior de la tarjeta 50 ul de suero y en la parte inferior dispensar
25 ul de solución fisiológica y 25 ul de suero (dilución ½).
3.- Mezclar muy bien y sacar por succión la suspensión del antígeno directamente con la
aguja colocada en el frasco dispensador.
4.- Colocar el antígeno sobre las muestras.
5.- Esparcir el fluido con las varillas de plástico sobre la superficie total de las áreas.
6.- Inclinar la tarjeta de atrás hacia adelante lentamente por 8 minutos o colocar en agitador
rotatorio automático a 100 rpm por 8 minutos.
6.- CÁLCULO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Inmediatamente después de los 8 minutos de rotación leer los resultados

microscópicamente a la luz directa.
Un resultado Reactivo se indica por floculacion gruesa en el centro y la periferia del círculo
de la prueba. Los reactivos muy débiles se indican por la presencia de pequeñas
aglutinaciones alrededor o al borde del círculo de la prueba.
La dilución que presenta la aglutinación macroscópica indica el titulo de la muestra.
Un resultado Negativo: (No Reactivo ) muestra una suspensión de apariencia Homogénea
sin aglutinaciones visibles.
HAI CHAGAS
HAI CHAGAS POLYCHACO consiste en una suspensión estabilizada de hematíes de
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carnero sensibilizados con antígeno de trypanosoma cruzi, los cuales se aglutinan en

presencia de diluciones de sueros humanos o de animales que contengan anticuerpos
específicos.
Los anticuerpos específicos contra tripanosoma cruzi, presumiblemente presentes en el
suero en estudio, aglutinan al antígeno fijado sobre la superficie de los glóbulos rojos,
estabilizados, los cuales sedimentan formando un manto en el fondo del pocillo de la micro
placa.
En los sueros de muchas personas no parasitadas se encuentran globulinas capaces de
aglutinar inespecíficamente partículas antigénicas de diferente origen, incluyendo hematíes
sensibilizados o no. Estas globulinas, a las que pertenecen, entre otras, los anticuerpos
inespecíficos o heterófilos, la proteína C reactiva, etc. , están presentes con títulos bajos en
una proporción significativa de la población , pudiendo aumentar durante el embarazo y en
numerosos procesos infecciosos o inflamatorios.
La heterofilia es detectada estudiando cada suero en la dilución ½ y ¼ con hematíes no
sensibilizados.
2.- MUESTRA
La muestra a emplear es suero de los donantes que hicieron efectiva su donación.
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- Pipetas 5 – 50 ul I.S.4
- Frasco color caramelo ( Dilución) Heladera de reactivos
- Tips I.S.3
- Pipetas de 1- 5 ml I.S.3
- Policubetas I.S.5
- Espejo para lectura o fondo blanco

- INSUMOS
- Solución de lavandina
4.- EQUIPOS
Placas para microcubeta
5.- PROCEDIMIENTO
Atemperar los reactivos a temperatura ambiente, los Hematíes no sensibilizados y el

Antígeno deben ser agitados intensamente antes de ser usados.
Antes de empezar cada kit debe incluirse juntamente con las muestras dos controles
Positivos y dos Controles Negativos para verificar la reproductividad del ensayo, la
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estabilidad de los reactivos y llamar la atención sobre posibles errores en la técnica.

1.- Preparar el diluyente de muestras (50 ul de solución proteica con 1 ml del diluyente de
muestras).
2.- Colocar 30 ul del diluyente de muestra en el primer pocillo y 25 ul en segundo pocillo.
3.- Agregar 10 ul de muestra o suero a analizar en el primer pocillo.
4.- Homogenizar y transferir 25 ul desde el primer pocillo al segundo y de este
despreciarlo o eliminarlo.
5.- Agregar 25 ul de Hematíes no sencibizantes al primer pocillo
6.- Agregar 25 ul del Antígeno al segundo pocillo.
7.- Agitar manualmente los pocillos durante 30 segundos.
8.- Dejar la poli cubeta en reposo en estufa de incubación durante 30 - 45 minutos y leer.
6.- CÁLCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS
El titulo del suero será la inversa de la dilución que da lugar a un manto que ocupe 50 % o
mas del pocillo es considerado como Positivo.
El titulo 1/8 por su máxima sensibilidad es el ideal en el descarte de sangre para
transfusiones por lo que cuando presenta un manto que ocupa el 50% o más es considerado
como POSITIVO.
En una prueba con dilución 1/ 8 presenta un punto en el centro y hay ausencia de manto es
considerado como NEGATIVO.
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CAPITULO IV
1.- DOCUMENTOS Y REGISTROS
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Como producto de la realización del proceso el laboratorio de Inmunoserología cuenta con

los siguientes documentos y registros:
- Manual de Inmunoserología
- Libro de Inmunoserología
- Hoja de Interacción de Procesos FOR.B.S.R.D.T.-27
- Libros de Registro de lecturas de Elisa
- Sistema Informatico SIICOBS
2.- ANEXOS
ANEXO 1: Esquema General de realización de las Técnicas serológicas de ELISA para:

,HCV Y CHAGAS
ANEXO 2: Esquema general de realización de las Técnicas serológicas de ELISA para :
ANEXO 3: Hepatitis B Antígeno de superfície
ANEXO 4: Esquema general de realización de las Técnicas Serológicas de ELISA para:
HIV Ag/ Ac
ANEXO 5: Libro de Registro de Serología REG – B.S.R.D.T.-015
ELABORADO POR: REVISADO POR: APROBADO POR:
JEFATURA DE JEFATURA DE
PUESTO DIRECCION B.S.R.D.T
LABORATORIO CALIDAD
FECHA 18 Agosto 2012 14 Septiembre 2012 15 Octubre 2012
NOMBRE Y FIRMA DRA. JUANA COLQUE DRA. ROCÍO NAVARRO DRA. GIONANNA
LL. R. MARTÍNEZ F.
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ANEXO 1
ESQUEMA GENERAL DE REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS SEROLÓGICAS DE
ELISA PARA: HCV Y CHAGAS
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Policubetas con
Diluyentes de muestra
200 ul Chagas y 100ul
HCV
Agregar Muestras Piloto 10 ul Chagas 10ul HCV

y Controles
Incubar durante 30 minutos en oscuridad

HCV. Y CH ,
Lavar con Solucion de Lavado 6 Veces
Agregar 100 ul de HRP Conjugado HCV

y 1 gota paraChagas
Incubar 30 minutos en oscuridad
Lavar con Solucion de Lavado 6 Veces
Agregar 50 ul Sol.A y 50ul Sol B para HCV y

1 gota de A y B para Chagas ,
Incubar en oscuridad 30 Min para

HCV Y CHAGAS
Agregar 50 ul de Stop o ácido Sulfúrico

AAAAAA
A
Leer en Lector de
Elisa y registrar las
lacturas .libros SIICOBS
ANEXO 2
ESQUEMA GENERAL DE REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS SEROLÓGICAS
DE ELISA PARA : HEPATITIS B ANTÍGENO DE SUPERFÍCIE
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Policubetas con Diluyente de

muestra. 25 ul
Agregar Muestras Piloto y Controles

100ul
Incubar durante 60 minutos en

oscuridad
Agregar 50 ul de sol. conjugada
Incubar a 37ºC durante 60 minutos
Lavar 6 veces con sol. de lavado
Agregar 100 ul de TMB
Incubar durante 15 - 30 minutos
Detener la reaccion con 100 ul de ácido

sulfurico
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ANEXO 3
KARDEX DE REACTIVOS INMUNOSEROLOGIA
RESULTADO
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3.0
ESTANDARIZADO
INMUNOSEROLOGIA
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15-Octubre-2012
NOMBRE DEL PRODUCTO…..................................CÓDIGO…..............................

UBICACIÓN…........................
Fecha Entradas Salidas Ajustes Saldo No de Recibido Encargado Fecha No de Código
( +/ - ) Boleta de Vto. Lote
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3.0
ESTANDARIZADO
INMUNOSEROLOGIA
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15-Octubre-2012
ANEXO 4
LIBRO DE REGISTRO DE SEROLOGIA REG-B.S.R.D.T. -015
COD Nº CODIGO HAI ELISA ELISA ELISA ELISA
FECHA DON EXT CHAGAS CHAGAS HIV HCV AgHBs RPR OBS
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3.0
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INMUNOSEROLOGIA
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15-Octubre-2012
ANEXO 5
ESQUEMA GENERAL DE REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS SEROLÓGICAS
DE ELISA PARA: HIV AG/ AC
Policubetas con perlas

de De conjugado
agregar
100ul de diluyente
Agregar Muestras Piloto y Controles
50ul
Incubar durante 60 minutos

oscurida
en
d
Lavar 6 veces con sol. De lavado
Agregar 100 ul de TMB
Incubar en oscuridaad 30
minutos
Detener la reaccion con 100 ul de ácido

sulfurico
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PROCEDIMIENTO OPERATIVO PRO-B.S.R.D.T-010

1.- PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO_________________________________________20

ANEXO 1: ESQUEMA GENERAL DE REALIZACIÓN DE LAS TÉCNICAS

El Banco de Sangre Referencia Departamental Tarija (B.S.R.D.T.) es una organización

insumos dotado por la Alcaldía Municipal de la Provincia Cercado de Tarija con un

El 8 de enero de 2007 se inaugura el edificio construido con fondos donados por el

1.3 POLITICA DE CALIDAD

El B.S.R.D.T. es una institución de bien social sin fines de lucro, comprometida

Dra. Giovanna Martínez Flores

1.4 OBJETIVOS DEL BANCO DE SANGRE REFERENCIA DEPARTAMENTAL

El principal objetivo de la organización es la calidad en todos sus aspectos, orientada a la

El BSRDT, define los siguientes objetivos coherentes con la política de calidad:

 Planifica y promueve el incremento de la donación voluntaria de sangre.

 Ley Nº1178 de Administración y control gubernamental del 20 de

 Resolución Ministerial Nº 0248 del 20 de mayo de 2003,

El procedimiento Operativo estandarizado de Inmunoserologia, se encuentra sujeto

El control de la transmisión de las enfermedades infecciosas hemotransmisibles es un reto

asume el compromiso de actualizar y fortalecer los procesos de Tamizáje

Realizar el Tamizáje serológico con pruebas de HIV; Hepatitis B ; Hepatitis B cuore;

La responsabilidad de esta área cae en el BIOQUIMICO encargado del laboratorio de

5.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA

 Ballester JM, Franco EM, Kranwinkel R, Linares J, Marin Lopez A, Millar A,

Sangre. Serie 7 Medicamentos esenciales y Tecnología (Eds.) Organización

 Técnicas ELISA de los Reactivos de BIOMERIEUX para :

Muestra.- suero del donante

Código.- Sigla o numeración que recibe el donante.

7.- CONDICIONES DE SEGURIDAD

- Batas de protección - Gorros

desechos antes de eliminarlos como ser:

- Tachos para decontaminación del material infeccioso.

8.- OPERACIONES PRELIMINARES

Todas las muestras deberán estar correctamente identificadas.

9.- DESCRIPCION DEL AMBIENTE

El ambiente del área de Inmunoserología es un ambiente comodo y confortable, se

El laboratorio de Inmunoserología cuenta con el siguiente equipamineto.

El manual de Operación se encuentra en la Gaveta 21 con el rotulo MANUALES DE

11.- LISTADO Y UBICACIÓN DEL MATERIAL DEL LABORATORIO

ELISA PARA HBsAg

1.- PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO

Hepanostika HBsAg Ultra es un método ELISA basado en un principio “ sándwich

La muestra a emplear es suero de los donantes que hicieron efectiva se donación.

- Micro pipeta de 10 a 200ul - I.S. 4

Los equipos a emplear en este procedimiento son:

5.- DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO

1.- Preparar el portatiras con la cantidad necesaria de tiras microelisa.

VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

1.- PRINCIPIO DEL PROCEDIMIENTO

La muestra se diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antígeno. Si la

La muestra a emplear es suero de los donantes que hicieron efectiva se donación.

3.- MATERIALES E INSUMOS NECESARIOS

- Micropipeta de 10 a 200ul - I.S. 4

Los equipos a emplear en este procedimiento son :

5.- DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO

1. Los reactivos deben alcanzar la temperatura ambiente.

Calculo del valor del punto de corte:

a.- VALIDACIÓN DE LOS RESULTADOS

La corrida se considera valida si se cumplen simultáneamente las siguientes conclusiones: