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    Práctica de Laboratorio 3 Curva de Tolerancia A La Glucosa

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    Samanta Otapa
    Este documento describe el procedimiento para realizar una curva de tolerancia a la glucosa. Se le administra una sobrecarga de glucosa al paciente y se miden los niveles de glucosa en la sangre en ayunas y a los 30 minutos, 1 hora, 2 horas y 3 horas posteriores. Esto permite evaluar la capacidad del paciente para metabolizar la glucosa ingerida. El método enzimático colorimétrico se utiliza para medir los niveles de glucosa. Los resultados se expresan en mg/dL y se comparan con valores de referencia para diagnosticar posibles problemas

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    Este documento describe el procedimiento para realizar una curva de tolerancia a la glucosa. Se le administra una sobrecarga de glucosa al paciente y se miden los niveles de glucosa en la sangre en ayunas y a los 30 minutos, 1 hora, 2 horas y 3 horas posteriores. Esto permite evaluar la capacidad del paciente para metabolizar la glucosa ingerida. El método enzimático colorimétrico se utiliza para medir los niveles de glucosa. Los resultados se expresan en mg/dL y se comparan con valores de referencia para diagnosticar posibles problemas

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    Práctica de Laboratorio 3 Curva de Tolerancia a La Glucosa

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    Este documento describe el procedimiento para realizar una curva de tolerancia a la glucosa. Se le administra una sobrecarga de glucosa al paciente y se miden los niveles de glucosa en la sangre en ayunas y a los 30 minutos, 1 hora, 2 horas y 3 horas posteriores. Esto permite evaluar la capacidad del paciente para metabolizar la glucosa ingerida. El método enzimático colorimétrico se utiliza para medir los niveles de glucosa. Los resultados se expresan en mg/dL y se comparan con valores de referencia para diagnosticar posibles problemas

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    Este documento describe el procedimiento para realizar una curva de tolerancia a la glucosa. Se le administra una sobrecarga de glucosa al paciente y se miden los niveles de glucosa en la sangre en ayunas y a los 30 minutos, 1 hora, 2 horas y 3 horas posteriores. Esto permite evaluar la capacidad del paciente para metabolizar la glucosa ingerida. El método enzimático colorimétrico se utiliza para medir los niveles de glucosa. Los resultados se expresan en mg/dL y se comparan con valores de referencia para diagnosticar posibles problemas

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    Facultad de Bioanálisis, Veracruz.

    Manual de Procedimientos de
    laboratorio

    UNIVERSIDAD VERACRUZANA

    FACULTAD DE BIOANÁLISIS BOCA DEL RÍO – VERACRUZ

    QUÍMICA CLÍNICA

    BIOQUÍMICA METABÓLICA 36943

    REPORTE DE PRÁCTICA N° 3

    ROCIO BONIFACIO FELICIANO

    Bioquímica Metabólica 1
    Facultad de Bioanálisis, Veracruz. Manual de Procedimientos de
    laboratorio

    PRÁCTICA 3.
    Determinación de la curva de tolerancia a la glucosa.
    1.- INTRODUCCIÓN
    Se le llama curva de tolerancia a la glucosa cuando hay un ascenso glucémico el
    cual desciende lentamente hasta alcanzar el nivel inicial el cual es producido por la
    ingestión de alimentos. Los pacientes con diabetes leve o controlada por la dieta,
    pueden tener en ayunas niveles de glucosa sérica que están dentro de los límites
    normales sin embargo, no pueden producir suficiente insulina para metabolizar
    pronto los carbohidratos ingeridos, por lo que la concentración de glucosa en estos
    pacientes sube a niveles anormales y retarda el retorno al valor normal. Esto significa
    que el paciente tiene menor tolerancia para la glucosa.

    Con el objeto de definir clinicamente la diabetes los médicos suelen servirse de la


    prueba de tolerancia a la glucosa, la cual mide la respuesta del paciente a una
    sobrecarga de glucosa. Tal sobrecarga se ha estandarizado, tras la ingesta o la
    infusión venosa de glucosa, y posterior determinación de los valores séricos de ésta.

    2.-OBJETIVOS
    2.1. El alumno realizará la determinación de una curva de tolerancia a la glucosa en
    suero por método enzimático colorimétrico para realizar las mediciones de este
    metabolito.

    3.- PRINCIPIO Y METODOLOGÍA DE LA DETERMINACIÓN


    Este tipo de prueba mide el balance entre la velocidad de pasaje de la glucosa al
    fluido extracelular y su separación por la asimilación celular y la excreción urinaria si
    la hubiera. Se basa fundamentalmente en el nivel o pico elevado de glucosa y la falta
    de retorno a la normalidad alcanzado dos horas después de la ingesta respectiva y
    generalmente se acepta, sea mayor a 110mg/dL.
    El método por medio del cual se realiza la medición de este metabolito es
    el siguiente:
    La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de glucosa a ácido glucónico. El
    peróxido de hidrógeno (H2O2) producido se detecta mediante un aceptor
    cromogénico de oxígeno, fenol, 4-aminofenazona (4-AF), en presencia de la
    peroxidasa (POD):

    Β-Glucosa + O2 + H2O GOD Ácido glucónico + H2O

    H2O + Fenol + 4-AF POD Quinona + H2O

    Bioquímica Metabólica 2
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    laboratorio

    La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa


    presente en la muestra en ensayada.

    4.- LISTA DE REQUERIMIENTOS

    4.1 REACTIVOS
    NUM. NOMBRE DEL REACTIVO CONC. CANTIDAD
    1 Reactivo para glucosa oxidasa 3 ml.
    2 Estándar de glucosa 100mg/dl 10µl
    3 Agua destilada 100ml

    4.2 MATERIAL

    NUM. NOMBRE DEL MATERIAL CANTIDAD


    1 Tubos de ensaye de 12 x 75mm 8
    2 Celda para espectrofotómetro 5
    3 Guantes 2
    4 Papel higiénico El necesario
    5 Pipeta automática de 1000µl 1
    6 Pipeta automática de 10µl 1
    7 Puntas para pipeta 5

    4.3.- EQUIPO

    NUM. NOMBRE DEL EQUIPO


    1 Baño maría a 37ºC
    2 Espectrofotómetro
    3 Centrífuga

    4.4. - MUESTRA BIOLÓGICA.


    Suero

    Bioquímica Metabólica 3
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    5.- TÉCNICA O PROCEDIMIENTO

    5.1 Desarrollo de la técnica


    5.1.1. Efectuar la toma de sangre en ayunas al paciente en estudio.
    5.1.2. Inmediatamente suministrar la carga de glucosa de 1.75 g/kg de peso
    (aproximadamente 75 g) que deberá ingerir en cinco minutos y empezar a
    contar el tiempo al inicio de la ingesta.
    5.1.3. A los treinta minutos, se tomará la segunda muestra de sangre, y se
    continuará la tercera a la hora, una cuarta muestra a las 2 horas y la quinta
    muestra a las 3 horas.
    5.1.4. Centrifugar las muestras a 3500 r.p.m. durante 10 minutos y separar el suero y
    colocarlo en un tubo de ensaye de 12 x 75 limpio, seco e identificado con el
    número de muestra.
    5.1.5. Rotula siete tubos de ensaye de 12 x 75 mm de la siguiente manera: Blanco,
    Patrón y Muestra basal, muestra a los treinta minutos, 60, 120 y 180 min. En
    cada tubo agregar lo siguiente:

    Blanco Patrón Muestra


    Reactivo (ml) 1 1 1
    Patrón (µl) ----- 10 -----
    Muestra (µl) ----- ----- 10

    5.1.6. Mezclar e incubar 10 minutos a 37ºC en baño maría.


    5.1.7. Ajustar el espectrofotómetro a 505nm.
    5.1.8. Vaciar el contenido de cada tubo en una celda limpia y seca.
    5.1.9. Leer la absorbacia (A) del patrón y la muestra, frente a Blanco de reactivo.
    El color es estable como mínimo durante 30 minutos.

    5.2.- REPORTE DE RESULTADOS

    Bioquímica Metabólica 4
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    5.2.1. Cálculo de resultados.


    (A) Muestra/(A) Patrón x 100(Concentración del patrón) =mg/dL de glucosa
    en la muestra.

    Mesa 2

    30 min 180 min

    0.364 x 100= 120 mg/dl 0.201 x 100= 66 mg/dl


    0.303 0.303

    Ayuno: 75 mg/dl
    30 min: 111 mg/dl
    1 hr: 102 mg/dl
    2 hr: 68 mg/dl
    3 hr: 72 mg/dl

    Bioquímica Metabólica 5
    Facultad de Bioanálisis, Veracruz. Manual de Procedimientos de
    laboratorio

    Chart Title
    200

    180

    160

    140

    120
    Glucosa mg/dl

    Valores Y
    100 normoglumia
    hiperglicemia
    hipoglucemia
    80

    60

    40

    20

    0
    0 20 40 60 80 100 120 140 160 180 200

    Tiempo

    5.2.2. Reporte de resultados


    El resultado se expresa en mg/dL, y el tipo de muestra procesada, así como
    los valores de referencia del equipo de glucosa utilizado.

    6.- CONFIABILIDAD ANALÍTICA.


    Mantener calibradas las pipetas automáticas, así como pipetear correctamente los
    reactivos y la muestra problema.
    Identificar correctamente los tubos de las muestras.

    Bioquímica Metabólica 6
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    7.- GARANTIA DE CALIDAD (CONTROL DE CALIDAD)

    Evitar la utilización de reactivos caducados.


    Tomar las muestras en el tiempo indicado.
    Calibrar correctamente el espectrofotómetro.
    Verificar que la temperatura del baño maría sea la correcta.

    8.- PRACTICABILIDAD

    8.1. El analista debe ser un alumno de Química Clínica supervisado por el docente o
    el técnico académico o bien un Químico Clínico, Químico Fármaco biólogo ó
    Quimicobiólogo Parasitólogo con entrenamiento supervisado.

    9.- BIBLIOGRAFÍA

    9.1. Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1ª e. Frankfurt: TH-Books


    Verlagsgesellschaft; 1998. 131-137.

    9.2. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic samples. 1 ed. Darmstadt:
    GIT Verlag; 2001; 30-31.

    9.3. Sacks DB, Bruns DE, Goldstein DE, Mac Laren NK. Guidelines and
    recommendations for laboratory analysis in the diagnosis and management of
    diabetes mellitus. Clin Chem 2002; 48: 436-472.

    9.4. Peña A, Arroyo A, Gómez A, Tapia R. Bioquímica.2ª ed. Limusa. México.


    2006. 424pp.

    9.5. Champe P, Harvey R. Bioquímica. 4ª ed. Lippincott. USA. 2007.520pp.

    Bioquímica Metabólica 7
    Facultad de Bioanálisis, Veracruz. Manual de Procedimientos de
    laboratorio

    Bioquímica Metabólica 8

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