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DECOLORANTE PARA ZIEHL NEELSEN:

SOLUCIÓN DE ALCOHOL ÁCIDO
Equipos para coloración de bacilos ácido-alcohol resistentes en
muestras clínicas y/o a partir de cultivos microbianos. ALCOHOL ETÍLICO 95% 97 ML

ÁCIDO CLORHÍDRICO 3 ML

La propiedad que presentan algunas bacterias de resistir la decolo-

ración con ácidos fuertes, después de ser coloreadas con solución AZUL DE METILENO PARA ZIEHL NEELSEN:
de fucsina caliente, permite reunirlas bajo la denominación general AZUL DE METILENO 0.3 G
de bacterias “ácidoresistentes” o “ácido-alcohol resistentes”. AGUA PURIFICADA 100 ML
La ácido-alcohol resistencia es la capacidad de incorporar cier-
tos colorantes y retenerlos después de someterlos a la acción de
ácidos y alcohol, y está determinada por la presencia en la pared Producto listo para usar.
celular de los ácidos micólicos, que son ácidos grasos de cadenas
olecular (60 a 70 átomos de carbono).
Las micobacterias son bacilos ácido-alcohol resistentes, cortos y • Fucsina para Ziehl Neelsen: Carbolfucsina, solución rojiza.
ligeramente curvos. • Decolorante para Ziehl Neelsen: solución de alcohol ácido, solu-
El género Mycobacterium, incluido en esta cl ren- ción incolora.
de especies patógenas para el hombre y los animales y especies • Azul de Metileno para Ziehl Neelsen, solución azulada.

El grado de “ácido-alcohol resistencia” es variable entre las es-

pecies de este género y está relacionado muchas veces con las A 10-35 ºC, protegido de la luz
condiciones culturales, no pudiendo utilizarse esta diferencia para
distinguirlas entre sí.
Los bacilos “ácido-alcohol resistentes” (BAAR) se observan de Para obtener una excelente coloración de Ziehl Neelsen no basta el
color rojo al ser coloreados con los colorantes para Ziehl Neelsen, equipo para Ziehl Neelsen Britania. Es menester, como en toda otra
mientras que otros gérmenes y células toman distintos tonos de determinación de laboratorio, seguir estrictamente las indicaciones
azul debido al azul de metileno que se utiliza como colorante de para lograr el máximo rendimiento del producto.
contraste. El material a estudiar debe extenderse y diseminarse, utilizando
La coloración de Ziehl Neelsen constituye una técnica sencilla, rápi- ansa, sobre la super cie de portaobjetos delgados y nuevos,
da y económica, de baja sensibilidad, pero una valiosa herramienta previamente desengrasados. La existencia de cualquier anfractuo-
para detectar los casos de tuberculosis pulmonar. sidad o rayadura en el vidrio podrá ser causa de confusión en la
observación.

Ziehl Neelsen Equipo Los pasos son los siguientes:

Código B1446182 Preparación del extendido:
• Fucsina para Ziehl Neelsen: Carbolfucsina, envase x 100 ml. Es conveniente efectuar un examen directo y del homogeneizado.
• Decolorante para Ziehl Neelsen: solución de alcohol ácido, enva- Para la homogenización se añade un volumen equivalente de NaOH
se x 100 ml. 4% al material en estudio. Se coloca en la estufa a 37 C durante
• Azul de Metileno para Ziehl Neelsen, envase por 100 ml. 15 a 30 minutos y se centrifuga a 3000 r.p.m. durante 20 minutos.
Se vuelca el sobrenadante y se realiza el extendido del centrifugado
FUCSINA PARA ZIEHL NEELSEN: con ansa.
CARBOLFUCSINA: SOLUCIÓN DE FUCSINA FENICADA

FUCSINA BÁSICA 0.3 G Secado del extendido:

ALCOHOL ETÍLICO 95% 10 ML Colocar el portaobjetos en posición horizontal dentro de la estufa de
SOLUCIÓN ACUOSA DE FENOL AL 5% 90 ML cultivos o sobre la corriente de aire caliente de un mechero.

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 ZIEHL NEELSEN
EQUIPO

Fijado del extendido: la decoloración. También el contracolorante puede di ultar la

olo sobre la llama. Esto visualización de los BAAR.
se efectúa pasando 3 veces el lado del portaobjeto que no tiene la • Algunos fármacos utilizados en el tratamiento de la tuberculosis,
preparación sobre la llama del mechero para que la misma adquiera hacen perder la ácido-resistencia de los bacilos, observándose
esta característica de las cepas sensibles a la isoniazida y a la alfa
etiltioisonicotinamida (ethionamida).
Coloración
• Colocar un pequeño trozo de papel de itro un poco más largo
que el tamaño del preparado sobre el portaobjeto. Importante: el Equipo y material de laboratorio, microorganismos para control de
ene que estar por encima del extendido. calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según
• Cubrir el extendido con Fucsina para Ziehl Neelsen (carbolfucsi- requerimiento.
na). Flamear por debajo del portaobjeto hasta el desprendimiento
de vapores blancos (evitar que se produzca la ebullición por exceso
de calor). Dejar enfriar 5 minutos y re • Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
desprendimiento de vapores blancos. Dejar enfriar 5 minutos. • No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o
Cuando esté frio, mediante el uso de pinzas, quitar y descartar el dañado.
• No utilizar el producto si existen signos de contaminación o dete-
• Lavar con agua corriente. rioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
• Cubrir con decolorante para Ziehl Neelsen. Dejar 2 minutos. • Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
Realizar sucesivos lavados hasta que no se desprenda más colo- • Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y
rante (aproximadamente 2 minutos; en el caso de preparados más manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
gruesos, puede requerirse mayor tiempo). establecidas por el laboratorio. Evitar la formación de aerosoles y
• Lavar con agua corriente trabajar con recipientes cerrados.
• Cubrir con Azul de Metileno para Ziehl Neelsen. Dejar 30 segundos. • Las características del producto pueden alterarse si no se con-
• Lavar con agua corriente durante 30 segundos. serva apropiadamente.
• Secar el extendido. • Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo según reglamentaciones vigentes.

Cubrir el extendido con una gota de aceite de inmersión y observar

al microscopio óptico, con aumento 1000X. • 1957. Manual of Microbiological Methods, Society of American
Observar al microscopio no menos de 100 campos. Bacteriologists.
Los “bacilos ácido-alcohol resistentes” (BAAR) aparecen de color • 1985. Manual of clinical Microbiology., 4 Ed, American Society
rojo sobre un fondo azul claro, mientras que otros gérmenes o for Microbiology, Washington, D. C.
células toman distintas tonalidades de azul. • Isenbert (ed.). 1992. Clinical microbiology procedures handbook,
vol. 1. American Society for Microbiology, Washington, D. C.

Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.

MICROORGANISMOS COLOR
Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS H37R ATCC 25177 ROJO

STAPHYLOCOCCUS AUREUS ATCC 25923 AZUL

ESCHERICHIA COLI ATCC 25922 AZUL

PM-1292-43
Dir. Técnico: Bioq. Alejandro Rossi

• La coloración de Ziehl Neelsen no reemplaza el cultivo de

micobacterias.
• Algunos microorganismos además de las micobacterias pueden
presentar distintos grados de ácido resistencia. Tal es el caso de
Rhodococcus spp., Nocardia spp.
• Las micobacterias de rápido crecimiento pueden diferir en su
capacidad de retener los colorantes.
06/2023 - REV.09 - 31603

• La decoloración de los extendidos tiene que ser apropiada. Los

microorganismos que son realmente ácido alcohol resistentes,
retienen la carbolfucsina.
• No preparar extendidos demasiado gruesos ya que puede afectar

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