III.

MATERIALES Y MÉTODOS:

MATERIALES:
 Porta objetos
 Laminilla
 Asa bacteriológica
 Microscopio
 Muestra de hongo (pan)
 Azul de Lactofenol

PROCEDIMIENTO:
 Primero extraemos un poco de la muestra con el asa bacteriológica y lo
transportamos al porta objetos.
 Después le añadimos de 1 a 2 gotas de azul de Lactofenol y tapamos la
muestra con la laminilla.
 Por último, llevamos la muestra al microscopio y observamos a 10 y
40x.
IV. REVISIÓN DE LITERATURA:

INTRODUCCIÓN A LOS HONGOS FILAMENTOSOS

La micología es la ciencia que estudia los hongos, estos organismos fueron
durante mucho tiempo considerados miembros del reino de las plantas.
Whitaker en 1969 propuso la clasificación de todos los organismos en cinco
reinos, distribuyendo a todos los de estructura celular eucariota en cuatro
reinos en función de criterios estructurales y nutricionales, los hongos por su
estructura multicelular y su nutrición heterótrofa y absortiva se agruparon en
el reino de los hongos, esta clasificación ha sido ampliamente aceptada.
Recientemente nuevas aproximaciones moleculares y filogenéticos al estudio
de los microorganismos, han puesto de manifiesto que la vida sobre la Tierra
se puede agrupar en tres categorías o dominios, de los cuales dos tienen
organización procariota (dominio Archaea y dominio Bacteria) y el tercero
agrupa a los organismos con estructura celular tipo eucariota (dominio
Eucaria), en este dominio los hongos son reconocidos como uno de los cinco
reinos eucariotas, hongos, animales, plantas, cromistas y protozoos
(Hawksworth, 1995).

ESTRUCTURA CELULAR
Los denominados micro hongos son microorganismos cuyas colonias en la
naturaleza son frecuentemente de dimensiones microscópicas y el estudio de
sus características, su fisiología y su ecología deben ser analizadas en detalle
con métodos microbiológicos aislándolos del resto de los organismos y
cultivándolos en cultivos puros.
En ambientes naturales, junto con las levaduras, están estrechamente
asociados con las bacterias y compiten con ellas por los nutrientes. Los
sencillos requerimientos para su cultivo convirtieron a algunas especies como
Neurospora crassa y Aspergillus nidulans en modelos para estudios en otras
ramas de la Ciencia como la Fisiología y la Genética.
Poseen organización celular eucariota y la característica más relevante es la
presencia de pared celular, constituida en un 80-90 % de polisacáridos
complejos, proteínas y glucoproteínas.
Entre los polisacáridos el elemento más representativo es la quitina, un
polímero de N-acetil-D-glucosamina. Constituye el elemento central o parte
interna configurando el esqueleto a modo de red de microfibrillas,
prácticamente presente en todos los grupos con excepción de los Oomicetos,
donde esta red micro fibrilar está formada por microfibrillas de celulosa.
Rodeando a este esqueleto se encuentra una capa de polisacáridos formando
una matriz cementante. Esta matriz presenta una gran diversidad en cuanto a
los azúcares y a los tipos de enlaces que la configuran, se pueden encontrar
homopolímeros, hetero polímeros o polisacáridos muy complejos. Dentro de
estos polisacáridos predominan los mánanos y glucanos, otros elementos
como lípidos, polifosfatos e iones completan la composición de la pared
celular. Tal es la complejidad de la pared que ha sido utilizada por algunos
autores en quimio taxonomía, llegando a establecer grupos basados en los
componentes mayoritarios de la pared como son la quitina y los glucanos.
Además de estos componentes de naturaleza polisacarídica, muchos hongos
filamentosos contienen en la pared pigmentos oscuros formados por polímeros
ramificados derivados de compuestos fenólicos, conocidos como melaninas. A
estos pigmentos se les han atribuido funciones de foto protección, resistencia a
la lisis enzimática e incluso también funciones estructurales.
La membrana citoplasmática de la mayoría de los hongos contiene ergosterol.
Este compuesto se utiliza como medida indirecta para valorar la biomasa
fúngica. Con este mismo fin se pueden utilizar también otros componentes
estructurales básicos de las células fúngicas, como es la valoración
colorimétrica de N-acetil glucosamina, monómero de la quitina.
La gran mayoría de los hongos son organismos pluricelulares y, como ocurre
en otros organismos, también aquí encontramos una división de funciones. El
organismo está configurado por unas estructuras tubulares, denominadas hifas,
cuya función es fundamentalmente la absorción de nutrientes; todo el conjunto
de hifas configura el micelio.
A su vez, el micelio puede ser:
 Aéreo: porque se extiende por encima del sustrato y normalmente es la
parte que soporta todas las estructuras reproductoras.
 Micelio vegetativo: constituido por una masa que penetra en los
diferentes sustratos como puede ser el suelo, un hospedador, restos de
madera o un medio de cultivo. Su función es obtener los nutrientes.

Las células que forman las hifas están separadas entre sí, en la mayoría de los
casos, por tabiques o septos, que normalmente están perforados. Entre los
septos de los diferentes grupos de hongos filamentosos hay diferencias
interesantes. Así, por ejemplo, en los Ascomicetos el septo es relativamente
simple con un único poro central, en algunas especies de tamaño bastante
grande de tal forma que permite el paso de orgánulos incluso del núcleo. En
otros casos las perforaciones son pequeñas y abundantes y no permiten el paso
de orgánulos como el núcleo o las mitocondrias, pero sí se establece una
continuidad entre los compartimentos de las hifas. El septo más complejo lo
presentan algunos Basidiomicetos y se denomina dolíporo. En muchas
ocasiones cuando una célula de una hifa sufre algún daño, estos poros son
sellados para evitar que el resto del organismo se vea afectado.
En el caso de los hongos pertenecientes a los Zigomicetos, se presentan hifas
que carecen de septos entre las células, salvo cuando se tienen que delimitar
las estructuras reproductoras. Estas hifas, no septadas, se denominan
cenocíticas.
Cuando el micelio fúngico se reproduce, una pequeña porción se diferencia de
forma asexual o mediante un proceso sexual. Las estructuras reproductoras
poseen generalmente un gran valor taxonómico ya que presentan una gran
diversidad en tamaños, formas, ornamentación y colores. En algunos
organismos se forman estructuras macroscópicas complejas.

INTERÉS DE LOS HONGOS FILAMENTOSOS

Los hongos, además de ser objetos básicos de interés para el conocimiento y la
investigación, desempeñan un papel fundamental en la naturaleza participando
activamente en el ciclo del carbono y contribuyendo a reciclar la materia
orgánica. La mayoría de los hongos son saprófitos y obtienen sus nutrientes a
partir de organismos muertos. Constituyen el principal grupo de organismos
responsables del reciclaje de la materia viva y esta actividad es esencial para
la continuación de la vida sobre la tierra.
La función más destacable es que son considerados organismos
fundamentalmente degradadores.
El interés en estos organismos es múltiple. En algunas áreas destacan especies
que tienen una gran importancia en la industria agroalimentaria con
importantes repercusiones económicas, por ejemplo:
 En la producción de quesos como el camembert y el roquefort
destacando las especies de Penicillium camembert o P. roquefort.

 En la producción de bebidas fermentadas como el sake o la salsa de soja

obtenidos a partir de cultivos de Aspergillus oryzae y A. soya.

 También destacan en la industria farmacéutica por su interés para la

producción de enzimas como celulasas, amilasas, peroxidasas y
proteasas, ácidos orgánicos como el ácido cítrico utilizado en alimentos
y como sustituto de polifosfatos en detergentes. La especie más
importante utilizada es Aspergillus Níger.

 También los hongos son explotados para la producción de proteínas

para consumo humano como el “quorn”, a partir de micelio de
Fusarium graminearum, con casi un 50% del peso seco de naturaleza
proteica y una extremada versatilidad para transformarse en sucedáneos
de una gran variedad de alimentos como carne de ternera, pollo,
pescado, galletas o formando parte de sopas (Rennenberg, 2008).
La biomasa fúngica presenta numerosas ventajas como alimento por su
alto contenido proteico y porque contiene, prácticamente, todos los
aminoácidos esenciales para el hombre y los animales. Las paredes de
quitina suponen una fuente de fibra y presentan bajo contenido en
 grasas. Otra característica sumamente importante es la ausencia de
colesterol.

 Otro aspecto que merece ser destacado en la industria agroalimentaria

es la implicación de los hongos en la alteración de los alimentos y las
materias primas.
Estas alteraciones van desde la producción de podredumbres,
fundamentalmente por organismos fitopatógenos durante el cultivo (la
precosecha) o durante el almacenamiento (postcosecha), hasta la
producción de compuestos tóxicos como las micotoxinas, producidas
por hongos toxico génicos que contaminan las materias primas y
alimentos y producen estos metabolitos secundarios si las condiciones
para su síntesis son favorables.
El consumo de estos alimentos o sus derivados produce intoxicaciones
en el hombre y en los animales, conocidas como mico toxicosis.

Por último, no podemos dejar de destacar los antibióticos, que marcaron el

principio de una nueva era de lucha contra las enfermedades infecciosas.
Antibióticos, como las penicilinas producidas inicialmente por Penicillium
notatum y Penicillium chrysogenum y las cefalosporinas producidas por
especies de Cephalosporium.
Otro aspecto que se debe destacar es su papel como patógenos de vegetales.
Los hongos filamentosos son responsables de las enfermedades vegetales más
graves e importantes. Algunas especies son capaces de producir estructuras
muy especializadas para iniciar la colonización y en la mayoría de los casos
una gran cantidad y diversidad de enzimas (celulasas, pectinasas, xilanasas,
etc.) para romper y colonizar las estructuras vegetales. Muchos producen
también toxinas que se comportan, junto con las enzimas, como importantes
factores de virulencia.
Finalmente, también pueden comportarse como patógenos de animales y del
hombre. Pueden producir:
  Alergias por inhalación de esporas (rinitis, asma, alveolitis).

 Intoxicaciones por la ingestión de alimentos contaminados con

micotoxinas

 Micosis, cuya importancia puede ir desde infecciones superficiales por

afectar a tejidos como la piel o las uñas, convertirse en infecciones
subcutáneas que se inician en la piel y se difunden a tejidos subcutáneos
o transformarse en infecciones sistémicas por vía linfática y en estos
casos pueden afectar a cualquier órgano.

Muchas especies normalmente saprófitas pueden verse implicadas en

micosis oportunistas, especialmente en pacientes
inmunocomprometidos, que pueden tener consecuencias fatales.

Se sugiere el trabajo con aislamientos de diferentes géneros ampliamente

distribuidos, como Penicillium, Aspergillus y Rhizopus, que tienen interés
como contaminantes habituales o como productores de compuestos con
aplicaciones en diferentes industrias.

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Rhizopus stolonifer, es un hongo representante de la División Zygomicotina y
del Orden Mucorales, es uno de los miembros más comunes con una
distribución mundial y se conoce como el moho negro del pan.
Estos hongos se caracterizan por presentar un micelio vegetativo bien
desarrollado formando colonias algodonosas sobre la superficie de los
sustratos. Este micelio inicialmente no presenta septos y es multinucleado;
posteriormente aparecen los tabiques para delimitar las estructuras
reproductoras. Esta especie presenta, como elemento característico,
abundantes rizoides ramificados.
Durante su ciclo de vida presentan dos fases:
 La fase sexual que culmina con la formación de la zigospora de color
marrón oscuro, pared gruesa e irregular
 La fase asexual que conduce a la formación de esporangiosporas,
esporas inmóviles formadas en el interior de una especie de saco
denominado esporangio. La mayoría de los esporangios están
originados en ramas o pedúnculos especializados y producen varias
esporangiosporas por esporangio.

En algunas especies la base del esporangióforo se proyecta en el interior del

esporangio, formando un engrosamiento a modo de vesícula hialina, columela,
que se utiliza como criterio taxonómico.
Los esporangióforos presentan una gran cantidad de respuestas sensoriales;
dentro de ellas podemos señalar el fototropismo positivo, que puede
observarse fácilmente en cultivos en placa Petri.
Algunos miembros, además de esporangiosporas, producen otro tipo de espora
de reproducción asexual, clamidosporas, mediante la transformación de una
célula vegetativa.
Estas esporas presentan paredes gruesas y pueden formarse en los extremos de
las hifas o estar intercaladas a lo largo de ellas. Parece que están vinculadas a
fenómenos de supervivencia en condiciones de falta de nutrientes,
permaneciendo sobre los restos vegetales o el suelo hasta que las condiciones
sean las apropiadas, Sin embargo, a las esporangiosporas se les atribuye una
relación con la dispersión y colonización de nuevos nichos.
Las especies de este grupo son muy frecuentes y se aíslan fácilmente del
suelo, aire o estiércol. Es característico su crecimiento extremadamente
rápido, tanto en medios de cultivo como sobre sustratos naturales, lo que
supone una ventaja importante para competir en el suelo. Es tan patente que,
en algunas ocasiones, para realizar estudios de contaminación fúngica, se
requiere utilizar medios de cultivo que desfavorecen el crecimiento de estas
especies.
Los miembros de esta división están presentes sobre una gran diversidad de
sustratos y hay representantes saprófitos y parásitos de una gran variedad de
hospedadores.
Algunas especies causan enfermedades en el hombre y en los animales,
concretamente como patógenos del hombre se les considera oportunistas
produciendo mucormicosis por inhalación, ingestión o inoculación, que son
relevantes especialmente en pacientes inmunodeprimidos.
Algunas especies tienen interés como fitopatógenos, concretamente R.
stolonifer produce podredumbres en frutos de muchos vegetales alcanzando
pérdidas significativas por alteraciones en el período de postcosecha.
Finalmente, algunas especies estrechamente relacionadas con este hongos
tienen interés en el campo de la biotecnología: Rhizopus arrhizus se utiliza
para acortar el proceso de síntesis de cortisona; la síntesis de ácido fumárico
es un proceso realizado por una especie de este género Rhizopus nigricans; y
algunos alimentos orientales, como el tofu y la proteína de soja fermentada, se
obtienen con especies de otros hongos de este grupo, como Mucor sufu.