UNIVERSIDAD TÉCNOLOGICA DE MÉXICO

MATERIA

ESTRUCTURA DE LA MATERIA

PRÁCTICA 4.- SEPARACIÓN DE UNA MEZCLA HOMOGÉNEA

POR CROMATOGRAFÍA DE PAPEL

CATEDRÁTICO

GERARDO PEDRO DOMINGUEZ SANAGUSTIN

INTEGRANTES

ACOSTA GUERRERO MIRIAM FERNANDA

ARREDONDO SAAVERDRA JENIFER PAOLA
PERRUSQUÍA FUENTES ALONDRA
PIÑA ATANACIO ALICIA
SEGURA GONZÁLEZ PERLA NAZARET

MATRICULA

000000000
CARRERA

QUIMICO FARM. BIOLOGO

Santiago de Querétaro, Qro 07/11/2023

 DIAGRAMA DE GOWING
Pregunta Clave: ¿Cuál es el fundamento de la cromatografía?
La técnica cromatográfica esta basada en la separación de una mezcla de
sustancias mediante el reparto existente entre la fase móvil (liquido/gas)
y la fase estacionaria (líquida) mediante un sólido adecuado.
Dependiendo de las naturaleza de las fases, la cromatografía se divide en
diferentes tipos:
1. Solido—Líquido. Donde la fase estacionaria es un sólido y la
móvil un líquido
2. Líquido—Líquido. La fase estacionaria corresponde a un líquido
anclado a un soporte sólido. La fase móvil es un líquido
3. Líquido—Gas. La fase estacionaria es un líquido no volátil
impregnado en un sólido y la fase móvil corresponde a un gas
4. Sólido—Gas. La fase estacionaria es un sólido y la fase móvil un
gas
Su proceso implica colocar una muestra problema sobre una superficie
plana y de papel en la fase estacionaria, luego la punta inferior del papel
se introduce en una celda con un solvente, de modo que el solvente en la
dase móvil asciende por capilaridad, al ir ascendiendo el solvente a
través del papel con la muestra problema, este disolverá la muestra en sus
componentes y los revelará como mandas de diferentes tonalidades que
serán interpretados mediante el calculo de retención a razón de la
distancia que recorre la muestra desde la aplicación hacía la fase móvil.
Objetivo: Aplicar la técnica de separación cromatográfica en papel como
método de separación de una mezcla homogénea.
Procedimiento:
Caso Práctico 1. Separar compuestos de un extracto natural.
1. Triturar en el mortero 10 g de espinacas y obtener extracto con 15
ml de etanol.
 2. Repetir el punto 1, pero en lugar de etanol, utilizar agua destilada,
luego repetirlo nuevamente para acetona y para acetato de etilo. De
manera que se obtengan 4 extractos de espinaca, cada uno de
diferente tipo de solvente.
3. Filtrar el extracto con ayuda de un papel filtro de vidrio.
4. Adicionar 1 mL de extracto en los siguientes 6 tubos de ensayo
previamente rotulados.
5. Una vez que se obtengan los 6 tubos, colocar una tira de papel
filtro previamente cortada y marcada con una línea horizontal a la
altura de 1.5 cm
6. Observar cambios, posterior a esto retirar cada una de las tiras y
colocarlas en una caja de Petri para secarlas.
7. Calcular Rf para cada una de las muestras con los diferentes
solventes.
Tabla 1. Rotulación de tubos de ensayo con base en el tipo de solvente
Solvente
Agua destilada Etanol Acetona Acetato de Etilo
EA – 1 EC 2 H 6 O−1 EC 3 H 6 O−1 EC 4 H 2 O2−1
EA - 2 EC 2 H 6 O−2 EC 3 H 6 O−2 EC 4 H 2 O2−2

Caso Práctico 2. Separación y detección de carbohidratos en jugo de

fruta
1. Triturar en el mortero 10 uvas, hasta obtener 10 ml de jugo
homogéneo
2. Centrifugar el 5 ml del jugo a 3000 rpm por 3 min
3. Tomar el sobrenadante con una pipeta Pasteur y atravesarlo a otro
tubo para centrifugar adicionando 3 ml de etanol con la finalidad
de precipitar proteínas y sales
4. Centrifugar a 3000 rpm durante 3 min
5. Tomar 2 tiras de papel previamente marcadas y colocar una gota de
la muestra en cada una
 6. Elaborar una solución al 1% de cada uno de los siguientes
carbohidratos: glucosa, fructosa, y sacarosa, para tomarlos como
estándar
7. Tomar 3 tiras de papel previamente marcadas y colocar una gota de
las soluciones de carbohidratos
8. Mezclar la muestra problema restante del punto 4 con la mezcla
realizada en el punto 6. Tomar una gota y colocarla en 3 tiras de
papel, identificados por solución
9. En 8 tubos de ensayo colocar 1 mL de una mezcla de butanol,
ácido acético y agua en una relación de 5:1:2
Colocar una tira por tubo, tapar y esperar a que el solvente ascienda por
la capilaridad.
Finalizada la separación de los componentes preparar las siguientes
soluciones:
 Solución 1. AgNO3 al 40 % (Para su uso, diluir 1 ml en 40 ml de
acetona)
 Solución 2. NaOH en etanol (Preparar 1 ml de NaOH al 1 M más
20 ml de etanol)
 Solución 3. Na3 S 2 O3 al 2.5 % en agua destilada
Realizar la inmersión para cada uno de los cromatogramas primero en la
solución 1, sacar y dejar escurrir
Lavar cada una de las tiras exhaustivamente con la solución 2 utilizando
la misma técnica de inmersión
Fijar la separación en cada una de las muestras con la solución 3, esto
para evitar que se desvanezcan las marchas y solubilizar el exceso de
óxido de plata.
Calcular Rf para cada una de las muestras con los diferentes solventes.
Conceptos Relacionados:
 Agua Destilada
Propiedades, esta limpia de electrolitos, sales minerales,
microorganismos. Su pH ronda 5,8. Es inolora, incolora e insípida.
 Etanol
A temperaturas normales es un líquido incoloro, con olor etéreo muy
penetrante y es inflamable. Con una temperatura de ebullición de 78.4 °C
 Acetona
Es un líquido incoloro con un distinto olor y sabor, se evapora fácilmente
en el aire, es inflamable y se disuelve en agua.
 Acetato de Etilo
Es un líquido incoloro con olor a frutas, inflamable, menos denso en el
agua y ligeramente miscible en ella, sus vapores son más densos que el
aire
 Tiosulfato de sodio
Tiene apariencia incoloro, inoloro, con un pH de 6.0 – 8.4, con una
densidad (agua=1) 1.00 g/ml
 Butanol
Liquido incoloro e inflamable con un olor rancio y dulce, desagradable a
alta concentración, con un punto de ebullición de 92.6 ° C a presión
atmosférica
 Ácido Acético
Es un líquido cristalino con olor peculiar, con propiedades corrosivas e
irritantes, es una sustancia higroscópica que absorbe el agua de diversas
fuentes
Caso Practico 1. Separar compuestos de un extracto natural
 Triturar en el mortero aproximadamente 10 g de espinacas y
obtener extracto con 15 mL de etanol aproximadamente
 Repetir la operación del punto 1, pero en lugar de etanol, utilizar
agua destilada, luego repetirlo nuevamente para acetona y para
acetato de etilo
 De manera que se obtengan 4 extractos de espinaca, cada uno con
diferente tipo de solvente
 Filtrar el extracto con ayuda del papel filtro y el filtro de vidrio
 Adicionar 1 mL de extracto en los siguientes 6 tubos de ensayo
rotulados previamente. Por ejemplo, a los tubos con EC2H6O – 1 y
EC2H6O – 2 adicionar 1 mL de extracto natural obtenido con
etanol como disolvente
 Una vez que se tengan los 6 tubos, colocar una tira de papel filtro
previamente cortada y marcada con una línea horizontal a la altura
de 1.5 cm
 Posterior a los cambios, retirar cada una de las tiras y colocarlas en
una caja Petri para secarlas
 Calcular Rf para cada una de las muestras con los diferentes
solventes
 Calcular Rf para cada una de las muestras con los diferentes
solventes
Caso práctico 2. Separación y detección de carbohidratos en jugo de fruta
 Triturar en el mortero 10 uvas, hasta obtener aproximadamente 10
mL de jugo homogéneo
 Centrifugar el 5 mL del jugo a 3000 rpm por 3 minutos
 Tomar el sobrenadante con una pipeta pasteur y trasvasarlo a otro
tubo para centrifuga adicionando 3 mL de etanol con la finalidad
de precipitar proteínas y sales
 Centrifugar a 3000 rpm durante 3 minutos
 Tomar 2 tiras de papel previamente marcadas y colocar una gota de
la muestra problema en cada una
 Elaborar una solución al 1% de cada uno de los siguientes
carbohidratos: glucosa, fructosa y sacarosa, para tomarlos como
estándar
 Tomar 3 tiras de papel previamente marcadas y colocar una gota de
las soluciones de carbohidratos, es decir, una tira por solución
 Mezclar la muestra problema restante del punto 4 con la mezcla
realizada en el punto 6. Tomar una gota y colocarla en 3 tiras de
papel, identificadas por solución
 En 8 tubos de ensayo colocar 1 mL de una mezcla de butanol,
ácido acético y agua en una relación de 5:1:2
 Colocar una tira por tubo, tapar y esperar a que el solvente
ascienda por capilaridad
 Finalizada la separación de los componentes, secar a temperatura
ambiente las tiras sobre una caja de Petri
 Para el revelado de los componentes, preparar las siguientes
soluciones:
Solución 1. AgNO3 al 40% (Para su uso, diluir 1 mL en 40 mL de
acetona)
Solución 2. NaOH en etanol (Preparar 1 mL de NaOH al 1 M más 20
mL de etanol
Solución 3: Na3S2O3 al 2.5% en agua destilada
 Realizar la inmersión de cada uno de los cromatogramas primero
en la solución 1, sacar y dejar escurrir
 Lavar cada una de las tiras exhaustivamente con la solución 2
utilizando la misma técnica de inmersión
 Fijar la separación en cada una de las muestras con la solución 3,
esto para evitar que se desvanezcan las marchas y solubilizar el
exceso de óxido de plata
 RESULTADOS

Muestra Agua destilada Etanol Acetona Acetato de etilio

EA EC2H6O EC3H6O EC4H2O2
Tiempo en el que 5 min 3 seg 1 min 30 seg
se empezó a
observar
cambios
Rf=DM/DS 3.5/7=0.5 3.2/7=0.457 5/7=0.714 7.5/7.5 = 1

Imagen

Principios:
 ¿Cómo sucede el fenómeno? O ¿Cómo funciona?
El fenómeno sucede en la separación de los componentes mediante
la cromatografía, estos se distribuyen en dos fases:
Fase estacionaria por el cual la materia permanece en la columna de
papel reteniendo algún componente de muestra el cual posee una
gran superficie y un solido que sirve como soporte.
Y fase móvil el cual funciona como portador de la mezcla, que
sobrepasa la fase estacionaria y la tira de papel.

Conclusión:
¿Para qué se utiliza la cromatografía en papel?
La cromatografía en papel se utiliza para separar y analizar los componentes de una
muestra. En esta técnica, los compuestos de la muestra se desplazan a diferentes
velocidades debido a sus interacciones con el papel y el analizador utilizado. La
cromatografía en papel es ampliamente utilizada en diversos campos, como la química, la
bioquímica y la ciencia de los alimentos, para identificar y cuantificar los componentes de
una mezcla.
¿Cuáles fueron las fases móviles y estacionarias en cada uno de los experimentos?
En el caso de la cromatografía en papel, la fase estacionaria es el papel cromatográfico,
donde se aplica la muestra. La fase móvil es el disolvente adecuado, como el etanol o el
agua, que se utiliza para eliminar los componentes de la muestra a medida que asciende por
el papel.
¿Para qué se calcula el Rf?
El factor de retención (Rf) se utiliza para medir el movimiento de los compuestos a lo largo
del papel cromatográfico. Se calcula dividiendo la distancia recorrida por un componente
por la distancia total recorrida por el cartucho. El valor de Rf siempre está entre cero y uno
y se utiliza para identificar y comparar los componentes de una muestra en cromatografía
en papel.
¿Existe otra técnica para identificar carbohidratos en especies frutales?
Sí, existen varias técnicas para identificar carbohidratos en especies frutales. Algunos
métodos químicos incluyen la Prueba de Benedict, la Prueba de Barfoed, la Prueba de
Seliwanoff, la Prueba de Molisch y la Prueba de Yodo. También se pueden utilizar métodos
físicos como la Rotación Óptica, el Punto de Fusión y la Solubilidad. Además, se pueden
emplear métodos de identificación colorimétricos y métodos enzimáticos para la
identificación de carbohidratos en especies frutales.
¿Cuántos métodos de separación fueron aplicados?
En el experimento mencionado, solo se aplicó la separación por cromatografía en papel. No
se mencionan otros métodos de separación.
Indica en donde fueron aplicados los métodos de separación de sustancias.
En el caso de la cromatografía en papel, la separación se lleva a cabo colocando una
muestra problema sobre una superficie plana de papel cromatográfico (fase estacionaria).
Luego, la punta inferior del papel se introduce en una celda con un disolvente (fase móvil)
para que el disolvente ascienda por capilaridad. A medida que el atomizador aumenta a
través del papel con la muestra, los componentes de la muestra se disuelven en el
atomizador y se revelan como manchas de diferentes colores o tonalidades.