Clase 2 Replicación

Carrera de Obstetricia y Puericultura
Facultad de Medicina
Replicación Celular
Duplicación del Material Genético
AMA 113 !"#$%&'($)*&+(,,*-*$.(&&(,

Biología 1 Ilse Valderrama Heller
Prof. Lorena Villarroel Jiménez, Biología Celular
Ilse Valderrama Heller
Messelson y Stahl (1958) demostraron que la
hipótesis semiconservativa era la correcta,
además de congruente con el modelo de la doble
hélice de Watson y Crick
Replicación Semiconservativa
La duplicación del ADN se produce de acuerdo con las siguientes
características:
Semiconservativa
Bidireccional
Punto de Origen de la Replicación
En virus y bacterias hay un único punto de inicio de la replicación, mientras
que en eucariotas hay varios

VARIOS SITIO DE ORIGEN , HORQUILLAS DE REPLICACIÓN
EUCARIONTES
1 solo sitio Ori
Girasas: desenrollan o desespiralizan el ADN

Helicasas: separan las dos hebras del ADN
Proteínas SSB: mantienen separadas las hebras

La horquilla de replicación
Inicio de la síntesis de DNA
• En la horquilla de replicación, la doble hélice de DNA se desenrolla formándose una pequeña
región de cadena sencilla, por la acción de proteínas específicas llamadas helicasas.
• Región de cadena sencilla generada está asociada a la “proteína que se une a cadena
sencilla” (SSB) que estabiliza el DNA de cadena sencilla, impidiendo la formación de
puentes de hidrógeno intracatenarios.
Cadena avanzada, cadena retrasada y síntesis de
nuevas cadenas de DNA
Cadena que crece desde 5’-

fosfato al 3’-hidroxilo, llamada
cadena líder, la síntesis de DNA
se produce continuamente
porque siempre existe un 3’-OH al
que añadir un nuevo nucleótido.
Cadena retardada, la síntesis de

DNA ocurre discontinuamente.
Cadena retardada debe

sintetizarse primero un pequeño
iniciador de RNA (11 bases)
para suministrar el extremo 3’-OH
libre llamado cebador.
Superenrollamiento del DNA
ü En procariotas existe una enzima llamada DNA girasa o topoisomerasa II.
ü Superenrollamiento negativo en un DNA circular por acción de la

topoisomerasa II, que produce cortes en la doble cadena.
Superenrollamiento del DNA
ü En eucariotas y procariotas existe una enzima llamada topoisomerasa I, que

elimina el superenrollamiento positivo y negativo.
ü Superenrollamiento necesario para empaquetar el DNA dentro de la célula.
ü Relajación necesario para la replicación del DNA.

ü Un procariota típico, tiene un
único cromosoma que contiene
todos los genes de la célula.
ü DNA circular
ü En eucariotas, tienen múltiples

cromosomas formando su
genoma.
ü DNA lineal
Moldes y enzimas
Replicación
Semiconservativa
Sentido de avance 5'à3‘: por adición

de desoxirribonucleótidos-monofosfato
(dNMP)
Semidiscontinua: una hebra se replica

de forma continua y la complementaria
de modo discontinuo (fragmentos de
Okazaki)
Primer o cebador: la iniciación de la

síntesis de cada hebra y de cada
fragmento requiere de un cebador o
primer (ARN)

Proteínas SSB
Se unen a las hebras ADN,
estabilizándolas (manteniéndolas
separadas) mientras tiene lugar la
replicación. Actúan conjuntamente con
las helicasas
Nucleasas
Rompen los enlaces fosfodiéster entre
nucleótidos, dando lugar a un 'punto
de origen' o inicio de replicación
Ligasas
Unen fragmentos adyacentes
mediente enlaces fosfodiéster
SÍNTESIS HEBRA
Girasa
CONTINUA o
desespiraliza el ADN
CONDUCTORA
Este hebra de ADN se
Helicasa SSB
utiliza como molde
separan las dos Proteínas separación Primasa sintetiza un ARN cebador para
hebras del ADN
que pueda actuar la ADN pol III
ADN pol III, en añade dNTP al cebador y,
luego continua la polimerización
por sí sola, siguiendo el principio de
complementariedad de bases
ADN pol I, actúa como exonucleasa
(elimina cebador) y como
polimerasa rellenando el espacio
con nuevos dNTP
ADN pol II repara las roturas que pueden
producirse
DNA polimerasas
Actividad polimerasa 5’ a 3’ (polimerización)
Actividad exonucleasa3’ a 5’ (autocorrección o
lectura de prueba )
SÍNTESIS HEBRA
RETARDADA O
DISCONTINUA
Esta cadena de ADN
sirve de molde de la
'hebra retardada'
Varias primasas sintetizan
diversos primer
ADN pol III alarga los fragmentos
de cebador incorporando dNTP en
sentido 5‘ a 3'
ADN pol I vuelve a actuar como

exonucleasa y como Los
polimerasa fragmentos
ADN pol II repara las posibles de Okazaki
roturas poseen entre
1000-2000
ADN ligasa une los fragmentos
dNTP
independientes para construir
una cadena sin Ilse Valderrama Heller
discontinuidades
Fragmentos de Okazaki
ü Cada corto fragmento de DNA sintetizado por la DNA polimerasa III en la cadena retardada se
denomina fragmento de Okazaki y tiene una longitud de unas 1000 bases. Cada uno debe
iniciarse individualmente.
ü Por el contrario, la cadena líder se inicia sólo una vez, al comienzo.
ü Deben iniciarse dos cadenas líderes, cada una en una dirección.
ü Después de sintetizarse el cebador, la primasa es reemplazada por la DNA polimerasa III, la

cual añade los desoxirribonucleótidos hasta que se encuentre con el DNA sintetizado
previamente.
Ligazón de dos fragmentos en la cadena retardada
a. la DNA polimerasa III está sintetizando DNA en la

dirección 5’ a 3’ hacia el cebador de RNA de un
fragmento sintetizado previamente en la cadena
retardada.
b. Al llegar a este fragmento, la DNA polimerasa

I reemplaza a la III.
c. La DNA polimerasa continúa sintetizando DNA a

la vez que elimina el cebador de RNA del
fragmento previo.
d. La DNA ligasa reemplaza a la DNA polimerasa

I cuando el cebador ha sido eliminado.
e. La DNA ligasa sella el hueco y liga los

dos fragmentos (enlace fosfodiéster).
El replisoma
• Procariotas, existe un único sitio en el cromosoma en el que se inicia la síntesis de DNA,
denominado origen de replicación.
• El origen de replicación consiste en una secuencia específica de 300 pares de bases que
es reconocida por proteínas específicas de la iniciación.
• El sitio de replicación, denominado horquilla de replicación, en general es bidireccional.
En eucariotas y procariotas:
• Replicación es semiconservativa.
• Adición de nucleótidos por DNA polimerasa.
• Eucariotas, tiene muchos orígenes de replicación.
Fidelidad de la replicación del DNA: corrección de
errores
ü Errores en la
replicación del DNA
producen mutaciones.
ü Las velocidades de
mutación en los
organismos vivos son
muy bajas, entre 10-8 y
10-11 por par de bases
insertados.
Actividad correctora de la DNA polimerasa III por medio de la actividad exonucleasa 3’ a 5’.
(a) Una base introducida erróneamente en el extremo causa la parada momentánea de la

polimerasa.
(b)Está es la señal para que la actividad correctora elimine la base incorrecta
(c)Se incorpore la base correcta por la actividad polimerasa.

Terminación de la replicación
• Ciertas secuencias de DNA y proteínas específicas están implicadas en detener las
horquillas de replicación y permitir la terminación del proceso.
• Cuando la replicación de la molécula circular se completa, las dos moléculas circulares

quedan enlazadas como los eslabones de una cadena, estas pueden ser
desenganchadas por una topoisomerasa.
• En eucariotas el núcleo se divide tras la duplicación del número de cromosomas según

un proceso denominado mitosis, el cual produce dos células hijas, cada una con un
conjunto completo de cromosomas.
• En procariotas pueden existir proteínas que se unan a secuencias específicas de DNA y

ayuden a tirar de los cromosomas hacia células hijas.
Enzimas Replicación
•ADN pol I •Primasas (ARN polimerasas
•Corta el ARN cebador dependientes de ADN)
• Repara errores de la síntesis –Sintetizan el ARN cebador usando
del ADN como molde una hebra de AND
• Rellena con
desoxirribonucleótidos el •Girasas (topoisomerasas)actúan
espacio resultante al desenrollando el ADN y evitando el
eliminarse el ARN cebador sobreenrrollamiento
•ADN pol II
•Repara pequeñas roturas en •Hhelicasas
las hebras del ADN –Rompe los puentes de hidrogeno y
(corrigiendo estos errores) separa las dos hebras del ADN, para
•ADN pol III que cada una actúe de molde
•Interviene directamente en la
polimerización del ADN,
(seleccionando el dN
adecuado)

REPARACIÓN DNA

BIBLIOGRAFIA
Recomendada por cada Unidad
Ø Alberts y cols. “Biología de la Célula”. Edit. Omega 4º Edición, España. 2002

Ø Alberts y cols. “Biología Molecular de la Célula”. Edit. Omega 3º Edición, España. 1996
Capítulo 6: Replicación, reparación y recombinación del DNA.Páginas: 198-217

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Cadena que crece desde 5’-

Cadena retardada, la síntesis de

Cadena retardada debe

ü En procariotas existe una enzima llamada DNA girasa o topoisomerasa II.

ü Superenrollamiento negativo en un DNA circular por acción de la

ü En eucariotas y procariotas existe una enzima llamada topoisomerasa I, que

ü Superenrollamiento necesario para empaquetar el DNA dentro de la célula.

ü Relajación necesario para la replicación del DNA.

ü En eucariotas, tienen múltiples

Sentido de avance 5'à3‘: por adición

Semidiscontinua: una hebra se replica

Primer o cebador: la iniciación de la

Ilse Valderrama Heller

ADN pol I vuelve a actuar como

ü Por el contrario, la cadena líder se inicia sólo una vez, al comienzo.

ü Deben iniciarse dos cadenas líderes, cada una en una dirección.

ü Después de sintetizarse el cebador, la primasa es reemplazada por la DNA polimerasa III, la

a. la DNA polimerasa III está sintetizando DNA en la

b. Al llegar a este fragmento, la DNA polimerasa

c. La DNA polimerasa continúa sintetizando DNA a

d. La DNA ligasa reemplaza a la DNA polimerasa

e. La DNA ligasa sella el hueco y liga los

(a) Una base introducida erróneamente en el extremo causa la parada momentánea de la

(c)Se incorpore la base correcta por la actividad polimerasa.

• Cuando la replicación de la molécula circular se completa, las dos moléculas circulares

• En eucariotas el núcleo se divide tras la duplicación del número de cromosomas según

• En procariotas pueden existir proteínas que se unan a secuencias específicas de DNA y

Ilse Valderrama Heller

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Ø Alberts y cols. “Biología de la Célula”. Edit. Omega 4º Edición, España. 2002

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