Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Universidad del Perú. Decana de América

Facultad de Farmacia y Bioquímica

Escuela Profesional Farmacia y Bioquímica

Departamento de Microbiología y Parasitología Básica y Aplicada
Asignatura: Microbiología General

COCOS GRAM POSITIVOS

Dr. Julio Reynaldo Ruiz Quiroz

[email protected]

Lima, 30 de octubre 2023

INTRODUCCIÓN
• COCOS GRAM +: Comprende tres familias según el
Bergey’s Manual: Micrococaceae, Streptococaceae y
Peptococaceae. Siendo de mayor interés clínico los
géneros Staphylococcus y Streptococcus (de la
primera y segunda familia respectivamente).

– Staphylococcus Catalasa positivos y agrupados

en racimos.

– Streptococcus Catalasa negativos y agrupados

en cadenas.
 STAPHYLOCOCCUS
Género Staphylococcus: Concepto y caracteres generales
• En el Manual de Bergey: Pertenece a la familia Micrococaceae
(junto con los géneros Micrococcus, Stomacoccus y Planococcus
de menor interés clínico).

• Género Staphylococcus:
– Cocos G (+), inmóviles, aerobios y anaerobios facultativos,
no formadores de esporas.
– Agrupación en racimo.
– Catalasa positivos
– Fermentan azúcares
– Forman parte de la microbiota normal de la piel y mucosas.
– Participan en procesos infecciosos (heridas, intoxicaciones
alimentarias, etc)
 STAPHYLOCOCCUS
Género Staphylococcus: especies más importantes

• S. aureus (estafilococo dorado): La más patógena.

– Pigmento no difusible de color amarillo.
– Produce coagulasa
– Fermenta el manitol
– Antígenos en su pared: Polisacárido A y Proteína A

• S. epidermidis y S. saprophyticus:
– Son oportunistas (presentes en el medio ambiente, piel y
mucosas)
– No producen toxinas ni pigmento amarillo.
– Coagulasa negativo y manitol negativo.
STAPHYLOCOCCUS Género Staphylococcus
 S. aureus. Acción patógena e interés clínico:
STAPHYLOCOCCUS Antígenos, toxinas y enzimas

MSCRAMM ("microbial surface components recognizing adhesive matrix molecules") Acta Biochim Pol. 2012;59(2):171-84.
Cna, collagen-binding adhesin; FnbB, fibronectin binding protein B;
FnbA, fibronectin binding protein A; FbpA, fibronectin binding protein;
CflA, clumping factor A; EbpS, elastin binding protein.
 STAPHYLOCOCCUS
S. aureus. Acción patógena e interés clínico:
Antígenos, toxinas y enzimas

• ANTÍGENOS DE SUPERFICIE (PARED):

– Polisacárido A y Proteína A: Presentan
propiedades antifagocitarias e inducen a
la liberación de factores quimiotácticos
que intervienen en la formación de
estructuras piógenas (características de las
lesiones por Staphylococcus).
 STAPHYLOCOCCUS
S. aureus - Hemolisinas
 STAPHYLOCOCCUS S. aureus. Acción patógena e interés clínico:
Antígenos, toxinas y enzimas

Factores de
virulencia de
Staphylococcus
aureus

Clin Infect Dis. 2012;54(4):560-7.

 Principales
factores de
virulencia
implicados en
las infecciones
de la piel y los
tejidos blandos
(IPTB) de S.
aureus y
algunos de sus
mecanismos
asociados

skin-and-soft-tissue infections (SSTIs)

Linz MS, Mattappallil A, Finkel D, Parker D. Clinical Impact of Staphylococcus aureus Skin and Soft Tissue Infections. Antibiotics (Basel). 2023 Mar 11;12(3):557. doi: 10.3390/antibiotics12030557.
 Alfa-hemolisina y ADAM 10
La α-hemolisina, una toxina formadora de poros producida por
Staphylococcus aureus.
▪ Se ha descubierto que se une a una metaloproteinasa del
huésped, llamada ADAM 10
▪ ADAM 10 dispara el clivaje de E-cadherina, permitiendo la ruptura
de las uniones célula-célula
Inoshima, I. et al. Nature Med. 2011; 17(10):1310-14

BANDA DE ADHESIÓN O ZONULA ADHERENS

 STAPHYLOCOCCUS
Un modelo del ciclo de crecimiento de la biopelícula

Phenolsoluble modulins (PSMs), Polysaccharide Intercellular Adhesion (PIA)

Peng Q, Tang X, Dong W, Sun N, Yuan W. A Review of Biofilm Formation of Staphylococcus aureus and Its Regulation Mechanism. Antibiotics (Basel). 2022 Dec 22;12(1):12. doi: 10.3390/antibiotics12010012.
 Desarrollo de biopelícula estafilocócica

Desarrollo de biopelícula
de Staphylococcus
aureus en dispositivos
médicos
(tornillo ortopédico de titanio)

Tuon FF, Suss PH, Telles JP, Dantas LR, Borges NH, Ribeiro VST. Antimicrobial Treatment of Staphylococcus aureus Biofilms. Antibiotics (Basel). 2023 Jan 4;12(1):87. doi: 10.3390/antibiotics12010087.
 STAPHYLOCOCCUS
S. aureus. Acción patógena e interés clínico:
• S. aureus puede estar presente en la microbiota normal en piel y
mucosa nasal.

• La patogenicidad depende de la mayor o menor presencia de los

factores de virulencia (antígenos, toxinas y enzimas), pudiendo afectar:
– Piel y mucosas: Forúnculos, infecciones de heridas y quemaduras,
procesos inflamatorios, supurativos y piógenos, etc.
– De forma generalizada: Trombos intravenosos (por la coagulasa),
septicemia, artritis, endocarditis, pleuritis, etc. en individuos
debilitados.
– Aparato digestivo: Cuadros de gastroenteritis por intoxicación
alimentaria debido a la enterotoxina producida cuando crece sobre
alimentos (sobre todo en cremas ricas en hidratos de carbono).
• No presenta fiebre (intoxicación, no infección)
• Sí nauseas, vómitos y diarreas durante 1 a 2 días.
• Se transmite por manipuladores portadores sanos.
 ENFERMEDADES
ESTAFILOCÓSICAS

Tuon FF, Suss PH, Telles JP, Dantas LR, Borges NH, Ribeiro VST. Antimicrobial Treatment of Staphylococcus aureus Biofilms. Antibiotics (Basel). 2023 Jan 4;12(1):87. doi: 10.3390/antibiotics12010087.
 Patógeno responsable de la tasa de mortalidad estandarizada por edad más
alta por 100 000 habitantes

Tătaru AM, Canciu A, Tertiș M, Cristea C, Cernat A. Staphylococcus aureus - Review on potential targets for sensors development. Bioelectrochemistry. 2023 Oct;153:108492. doi: 10.1016/j.bioelechem.2023.108492.
Resistencia antimicrobiana de Staphylococcus aureus en Perú

Cabrejos-Hirashima L, et al.. Frequency of community-acquired methicilin-resistant Staphylococcus aureus in a tertiary care hospital in Peru. Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2021 Apr-Jun;38(2):313-317.
Cronología de la introducción de antibióticos (arriba) y posterior aparición de resistencia en
Staphylococcus aureus

Abreviaturas: PRSA: S. aureus resistente a la penicilina ; MRSA: S. aureus resistente a meticilina ; VISA: S. aureus intermedio con vancomicina ; Q/DRSA: S.
aureus resistente a quinupristina/dalfopristina ; LRSA: S. aureus resistente a linezolid ; VRSA: S. aureus resistente a vancomicina ; DRSA: S. aureus resistente a
daptomicina ; CRSA: S. aureus resistente a ceftarolina .
Li G, Walker MJ, De Oliveira DMP. Vancomycin Resistance in Enterococcus and Staphylococcus aureus. Microorganisms. 2022 Dec 21;11(1):24. doi: 10.3390/microorganisms11010024.
 Los mecanismos de los sensibilizadores antibacterianos contra MRSA

Li X, Cai Y, Xia Q, Liao Y, Qin R. Antibacterial sensitizers from natural plants: A powerful weapon against methicillin-resistant Staphylococcus aureus. Front Pharmacol. 2023 Feb 24;14:1118793. doi: 10.3389/fphar.2023.1118793.
 STAPHYLOCOCCUS
S. epidermidis “patógeno accidental”

✓ Estafilococo coagulasa negativo

✓ Comensales de piel y mucosas

✓ Infecciones en pacientes hospitalizados inmunodeprimidos o con

algún tipo de dispositivo (catéteres, válvulas cardíacas, prótesis…).

✓ Sepsis en el recién nacido.

✓ Contaminantes en los hemocultivos
✓ Prevención de las infecciones asociadas a catéteres:
▪ Asepsia durante la inserción y manipulación
▪ Vigilancia y seguimiento
▪ Retirar la vía siempre que se observen signos de infección
 STAPHYLOCOCCUS
S. epidermidis “patógeno accidental”
STAPHYLOCOCCUS S. epidermidis “patógeno accidental”
Adhesión de Staphylococcus epidermidis y
formación de biopelículas

Nat Rev Microbiol. 2023 Feb;21(2):97-111. doi: 10.1038/s41579-022-00780-3.

 STAPHYLOCOCCUS
Diagnóstico bacteriológico de Staphylococcus
• Toma de muestra con torunda estéril
(heridas y lesiones superficiales) o por
punción.
• Tinción de Gram de la muestra
• Aislamiento: Medio Chapman, AMS
Medio selectivo y diferencial: • Cultivo puro en agar Sangre
• Medio Manitol Salado:
– NaCl: Selectivo para Staphylococcus spp. • Pruebas bioquímicas:
(por su carácter halófilo)
– Coagulasa
– Manitol: Fermentación ⇒ Diferencial para S.
aureus (manitol +). – Fermentación de glucosa en medio O/F
– Tras obtener cultivo puro ⇒ Resiembra en – Catalasa y gelatinasa
Agar Sangre para ver posible hemólisis y
morfología y color de las colonias. – Sensibilidad a la novobiocina
 STAPHYLOCOCCUS
Caracteres Bioquímicos de Staphylococcus
• Cocos G+ y catalasa +
• Oxidasa negativos
• Fermentan muchos azúcares (glucosa,
sacarosa, fructosa, etc.) con producción de
ácidos.
• Indol (–)
• Gelatinasa (+)
• Reducen NO3 a NO2
• No poseen fibrinolisinas (excepto
excepciones)
• Coagulasa – (salvo S. aureus)
• Colonias grandes aplanadas y lisas con alfa y
beta hemólisis en agar sangre o agar
chocolate
 STAPHYLOCOCCUS
Diagnóstico bacteriológico de Staphylococcus

Identificación presuntiva
Micrococcus
-
Cocos G +
Prueba de Hugh-Leifson
Catalasa +
+

Familia Micrococcaceae Staphylococcus

Identificación presuntiva de distintas especies del género Staphylococcus

S. aureus S. saprophyticus S. epidermidis

Fermentación de manitol + - -
Coagulasa + - -
Sensibilidad Novobiacina + - +
 INVESTIGACIÓN DE Staphylococcus aureus
Medio Morfología
Microorganismo Gram
selectivo UFC
Vogel Cocos (+) Negras rodeadas de
Johnson con racimos Halo amarillo

Staphylococcus Manitol Cocos (+) Colonias amarillas con

Salado con racimos zonas amarillas
aureus
Baird Cocos (+) Negro, brillante, rodeado
Incubación:
Parker con racimos de zonas transparentes
35-37 ºC X 24 h
de 2 a 5 mm

Prueba de la coagulasa

S. aureus
 STREPTOCOCCUS

• Cocos Gram (+)

• Anaerobios facultativos
• Agrupación en cadenas
• Catalasa (–)
• Oxidasa (–)
• Fermentan la glucosa (producción de ácidos)
• Solo algunas especies son patógenas.
• Muchas especies son saprófitas de la
microbiota normal y patógenas oportunistas.
 STREPTOCOCCUS
Clasificación de Streptococcus
• Se clasifican en función de:
– Tipo de hemólisis.
– Clasificación de Lancefield: Por los
caracteres antigénicos del
carbohidrato C de su pared
(polisacárido).
– Comportamiento antigénico frente a
diversas pruebas serológicas de
aglutinación pasiva,
inmunofluorescencia, etc.
 STREPTOCOCCUS
Clasificación de Streptococcus
Especies asignados a los diferentes grupos del género
Streptococcus basados en el análisis del ARNr 16S.
 STREPTOCOCCUS
Tipo de hemólisis en placas de agar sangre
• γ-hemolítico: No hemólisis
gamma

• α-hemolítico: Tipo viridans (de verde). Hemólisis

parcial: Decoloración pardo-verdosa.
– Ej.: S. pneumoniae
• β-hemolítico: Hemólisis total⇒ Halos de
transparencia grandes alrededor de las colonias.

beta

alfa
 STREPTOCOCCUS
Clasificación de Lancefield
• Se designan por letras de la A a la V en función de las
diferentes características antigénicas que puede
presentar el carbohidrato C de su pared.
• Existen Streptococcus que no tienen carbohidrato C, por
lo que no pueden clasificarse en estos grupos.
• El grupo más importante en patología humana es el A.
• Presentan diferentes factores de virulencia además del
carbohidrato A:
– Proteína M en su pared.
Rebeca Lancefield – En las cápsula: Ácido hialurónico con características
(1895 – 1981)
antifagocitarias (Grs. A y C) y un carbohidrato
asociado infecciones respiratorias y nerviosas (S.
pneumoniae)
 STREPTOCOCCUS
Streptococcus. Clasificación
por pruebas serológicas
+ hemólisis + pruebas bioquímicas

• Streptococcus β-hemolíticos de los grupos

A,B,C,G y F.
• Streptococcus del grupo D de Lancefield
enterococo y Streptococcus del grupo D de
Lancefield no enterococo.
• Streptococcus tipo viridans.
 STREPTOCOCCUS
Acción patógena e interés Clínico

Streptococcus del grupo A

(S. pyogenes)

• β-hemolíticos
• Patógenos (suponen el 90% de las
infecciones estreptocócicas).
• Se encuentra en la mucosa nasal y
faríngea de los enfermos y también
en portadores sanos.
 STREPTOCOCCUS
Acción patógena e interés Clínico
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)
Efecto patógeno por factores de virulencia:
• ANTÍGENOS:
– Polisacárido C: ⇒ Características de grupo.
– Proteína M: Facilita adherencia y protección frente a fagocitosis.
• TOXINAS:
– Hemolisinas: Estreptolisina O y Estreptolisina S (Antigénica y afecta también a leucocitos)
– Toxina eritrogénica (⇒Exantema de la escarlatina)
• ENZIMAS:
– Estreptoquinasas: ⇒Lisis de fibrina (rotura de coágulos).
– Desoxiribonucleasa estreptocócica (4 grupos antigénicos A, B, C, y D): Despolimeriza el
ADN
– Hialuronidasas: Hidroliza el ácido hialurónico del tej. conectivo.
– Proteinasa estreptocócica: Actúa sobre el tejido conectivo ⇒ ayuda a la difusión. ⇒
Procesos inflamatorios y necrosis.
STREPTOCOCCUS Acción patógena e interés Clínico
Streptococcus del grupo
A (S. pyogenes)
STREPTOCOCCUS Acción patógena e interés Clínico

Streptococcus
del grupo A
(S. pyogenes)
STREPTOCOCCUS SUPERFICIAL

Acción
patógena
e interés SECUELAS

Clínico

Streptococcus INVASIVA

del grupo A
(S. pyogenes)

Brouwer S, et al. Pathogenesis, epidemiology and control of Group A Streptococcus infection. Nat Rev Microbiol. 2023 Jul;21(7):431-447. doi: 10.1038/s41579-023-00865-7.
 STREPTOCOCCUS
Acción patógena e interés Clínico
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)

PROCESOS INFECCIOSOS:
• Localizadas en piel (escarlatina) o mucosas
(anginas, sinusitis, etc.)
• Localizadas en vísceras (endocarditis,
meningitis…)
• Infecciones generalizadas (sepsis)
 STREPTOCOCCUS
Acción patógena e interés Clínico
Streptococcus del grupo A (S. pyogenes)

Los cuadros más frecuentes son de ANGINAS o

FARINGITIS
• Pueden dar lugar a complicaciones:
– Supuradas: Otitis, sinusitis, meningitis, etc.
– No supuradas:
• Glomerulonefritis
• Fiebres reumáticas (x infecciones no
tratadas) afectando a articulaciones e
incluso al corazón.
 Mecanismos de resistencia a los antibióticos GAS

Brouwer S, et al. Pathogenesis, epidemiology and control of Group A Streptococcus infection. Nat Rev Microbiol. 2023 Jul;21(7):431-447. doi: 10.1038/s41579-023-00865-7.
 STREPTOCOCCUS
Streptococcus del grupo B

• Solo una especie: S. agalactiae

• Saprófito
• Localización: Rinofaringe, aparato urogenital e intestinal.
• Patógeno oportunista: En tracto respiratorio, mucosas, piel, etc. y
meningitis e infecciones pulmonares en neonatos contagiados a partir
de la vagina de la madre.
• β-Hemolíticos (la mayoría).
• Descomponen el hipurato sódico
 STREPTOCOCCUS Causan
Sepsis neonatal
Factores de virulencia del Streptococcus del grupo B Neumonía
Meningitis

El polisacárido de la cápsula ha sido identificado como un importante factor de virulencia

ABC, ATP-binding cassette; FBP54, fibronectin-binding protein 54; FbsA, fibrinogen-binding protein from S. agalactiae; Lmb, laminin-binding protein.
 STREPTOCOCCUS
Acción patógena e interés Clínico en
Streptococcus del grupo D

• α- y γ-Hemolíticos.
• Resisten a bien agentes externos y antibióticos
• Enterococos (E. faecalis y E. faecium): Saprófitos del intestino.
– Crecen bien en medios ricos en NaCl (6,5%)
– Utilizan la esculina
• No enterococos (S. bobis y S. equinus) afectan a vacas y caballos.
• Los enterococos se encuentra en la microbiota intestinal normal y la infección
a menudo procede de contaminación fecal.
• Son una causa importante de infecciones del tracto urinario (mucho menos
común que E. coli) y también infecciones oportunistas (incluyendo infección
intra-abdominal, septicemia y endocarditis).
 STREPTOCOCCUS
Acción patógena e interés Clínico en
Streptococcus de los grupos:
• Grupo C, G, F y E :
– β-Hemolíticos
– Sensible a agentes externos
– Saprófito de rinofaringe (G, F y E también vías genitales e intestino).
– Pocas veces patógenos oportunistas (en vías urinarias, heridas, etc.)

• Grupos H (S. sanguis) y K (S. salivarius):

– Saprófitos de la rinofaringe.
– No patógenos
– α- y γ-Hemolíticos (cuando lo son)

• Grupo N (S. thermophilus, S. lactis, etc):

– Estreptococos lácticos (industria): Fermentadores de lactosa
– No patógenos
– No hemolíticos
 STREPTOCOCCUS
Acción patógena e interés Clínico en
Streptococcus de los grupos:
• Grupo viridans:
– α- y γ-Hemolíticos
– Saprófitos de orofaringe, mucosa bucal y placa dental.
– Patógeno oportunista:
• Caries dental
• Endocarditis y complicaciones de valvulopatías tras la
extracción de un diente (si pasan a la sangre).
• Streptococcus pneumoniae (neumococo):
– Diplococos
– No crecen en medios de bilis-esculina.
– Sáprofitos en la flora normal del aparato respiratorio.
– Patógenos en neumonías o en procesos piógenos e inflamatorios como meningitis,
sinusitis, otitis, etc.
– Son patógenos si presentan cápsula con un polisacárido que facilita la invasión.
También proteína M y polisacárido C se relacionan con la virulencia.
STREPTOCOCCUS

Acción patógena
e interés Clínico
en
Streptococcus de
los grupos:
 STREPTOCOCCUS
Factores de virulencia de Streptococcus pneumoniae

Causan
Neumonía
Meningitis

Factores de virulencia importantes para los neumococos incluyen la cápsula, proteínas que se unen a la colina y
una hemolisina (pneumolisina)
ABC, ATP-binding cassette; EndoS, endoglycosidase S; FBP54, fibronectin-binding protein 54; FbsA, fibrinogen-binding protein from S. agalactiae; Lmb, laminin-
binding protein; Mac, Mac1-like protein; MHC, major histocompatibility complex; PavA, pneumococcal adhesion and virulence A; PFBP, pyogenes fibronectin-
binding protein; PsaA, pneumococcal surface antigen A; Psp, pneumococcal surface protein; SAG, salivary agglutinin glycoprotein; Sfb, streptococcal fibronectin-
binding protein; SIC, streptococcal inhibitor of complement; TCR, T-cell receptor; WapA, wall-associated protein A.
 STREPTOCOCCUS

Figure 2 | Pneumococcal virulence factors.

Streptococcus pneumoniae virulence is multi-faceted. Important pneumococcal virulence factors include: the capsule; the cell wall; choline-
binding proteins; pneumococcal surface proteins A and C (PspA and PspC); the LPXTG-anchored neuraminidase proteins; hyaluronate
lyase (Hyl); pneumococcal adhesion and virulence A (PavA); enolase (Eno); pneumolysin; autolysin A (LytA); and the metal-binding proteins
pneumococcal surface antigen A (PsaA), pneumococcal iron acquisition A (PiaA) and pneumococcal iron uptake A (PiuA).
STREPTOCOCCUS
 STREPTOCOCCUS
Factores de virulencia de Streptococcus mutans

Principal
agente
causal
de la
caries
dental

El principal factor de virulencia es la producción de ácido como parte

de la biopelícula bacteriana que constituye la placa dental.
 Diagrama esquemático del efecto antibiopelícula de compuestos naturales

Kamarehei F, Mehdiabadi M, Naderi F. Antibacterial effects of natural compounds on biofilm formation of Streptococcus mutans. Clin Exp Dent Res. 2022 Dec;8(6):1426-1433. doi: 10.1002/cre2.673.
Kamarehei F, Mehdiabadi M, Naderi F. Antibacterial effects of natural compounds on biofilm formation of Streptococcus mutans. Clin Exp Dent Res. 2022 Dec;8(6):1426-1433. doi: 10.1002/cre2.673.
 Identificación de Cocos G+

Reacción de CAMP (Christie, Atkins, Munch-Petersen)

con estreptococos del grupo B. Los estreptococos del grupo B producen
una proteína difusible y termoestable (factor CAMP) que aumenta la β-
hemólisis de Staphylococcus aureus.
 STREPTOCOCCUS
Aislamiento y Caracteres Bioquímicos
PRUEBAS BIOQUÍMICAS:
• Catalasa (–)
• Hemólisis en Agar sangre
• Sensibilidad a la optoquina (S. pneumoniae)
• Sensibilidad a la bacitracina (Gr. A: +).
• Hidrólisis del hipurato (Gr. B: +).
• Crecimiento en Bilis Esculina
• Crecimiento en medios al 6,5% de NaCl
(D enterococo:+)
• Grupos antigénicos de Lancefield para los distintos tipos de sustancia
C: Por métodos inmunológicos.
• Pruebas serológicas: Buscan anticuerpos en el suero del paciente:
– ASLO (Antiestreptolisina O)
– ASK (antiestreptoquinasas)
– ASH (antihialuronidasas)
– DNAasa, etc.
Identificación de Streptococcus por grupos
GRACIAS