Temario

VIROLOGÍA

DR. RENÉ ARREDONDO HERNÁNDEZ

 Generalidades de Virología
Departamento de Microbiología y Parasitología
Facultad de Medicina

DR. René Arredondo Hernández

 1. Antecedentes de la Virología
-Importancia de las infecciones virales, como problema de salud
-Antecedentes históricos
2. Organización molecular del virión
-Composición química: ácidos nucleicos, proteínas (estructurales y no estructurales), glicoproteínas y lípidos
-Estructura: cápside, nucleocápside, envoltura
-Tipos de simetría: icosaédrica, helicoidal, compleja
-Organización de los genomas virales
Temario 3. Naturaleza viral
-Dependencia de la célula
4. Clasificación y nomenclatura de los virus
-Clasificación del Comité Internacional de Taxonomía
-Clasificación por criterios clínicos
5. Métodos de diagnóstico
-Métodos inmunoquímicos (ELISA, RIA, Inmunofluorescencia, Hemaglutinación,
inhibición de la hemaglutinación, Westernblot, Inmunohistoquímica)
-Métodos moleculares; (PCR, RT-PCR, Hibridación Southern, Hibridación)
-Cultivo de los virus
-Aislamiento de los virus en cultivos celulares
-Microscopía electrónica
 1. Antecedentes
Los virus pueden afectar a todos los seres vivos
• Las infecciones virales en los países desarrollados son la causa más común de
enfermedades agudas que no requieren hospitalización

• En los países en desarrollo, las enfermedades virales causan un número importante

en la mortalidad e incapacidades permanentes, especialmente entre los niños

• Las enfermedades virales emergentes tales como aquellas

debidas al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), virus del
ébola y hantavirus, aparecen regularmente

• Son causa de epidemias severas en el hombre y/o en los

animales ocasionando graves problemas de salud pública,
además de que proponen un tratamiento más grande y menos
controlado
 Historia
01 03
En 1899 ”El agente
infeccioso se incorpora al En 1954 Lograron replicar el
protoplasma de la célula virus de la polio en cultivo
huésped“
Se denomina virus Martinus W. Beijerinck Ender , Weller & Robbins

Dmitri Ivanovski Wendell M. Stanley

02 04
En 1892 se investiga sobre la enfermedad
del mosaico del tabaco y se demostró que la
En 1946 consigue cristalizar el virus del
enfermedad se transmite por un filtrado mosaico tabaco, con la aparición del ME
libre de bacterias y no podía ser observado logra observarlo e identifica al virus
bajo el microscopio ni cultivado en medios como un complejo de proteínas y ácidos
artificiales nucleicos

Historia de la Virología https://www.timetoast.com/timelines/historia-de-la-virologia-c898de39-ac14-445c-8511-3cee435e036d

 Los virus carecen de los sistemas enzimáticos
¿Qué son los virus? productores de energía necesarios para la
síntesis de ácidos nucleicos y de proteínas,
Etimológicamente, virus significa veneno en latín las cuales indispensables para el crecimiento y replicación
poseen siguientes características:

• Pequeño tamaño, 20 a 50 nm
• Parásitos genéticos intracelulares obligados
• Poseer (casi siempre) un solo tipo de ácido nucleico en la
partícula viral completa o virión, una estructura elemental y
un mecanismo complejo de replicación

Tamaño
Los virus utilizan una medida llamada
nanómetro (nm), que equivale a 10!" metros
 Composición
Los virus poseen un solo tipo de ácido nucleico ya sea DNA o RNA, los ácidos nucleicos constituyen el Nucleoide, y
asociado a proteínas se designa como core viral

Capsómero subunidad La partícula viral

proteica de la cápside, completa con su
que se encuentran en la capacidad infectante
superficie de los virus intacta se denomina
desnudos, pueden tener virión
forma esferoidal o de
prisma
Algunas familias de virus
poseen otra estructura,
Cápside: cubierta de composición
proteica, que protege el lipoproteica llamada
core envoltura
 Organización Molecular
Monocatenario Cadena + ó -

ADN Bicatenario Cadena + y -

(Desoxirribovirus)
Lineal

Circular
ÁCIDOS NUCLEICOS
Sentido + (ARNm)
ARN (Ribovirus) Sentido -
Doble cadena
Doble Polaridad (+ / -) Ambisentido
Segmentado en trozos
(codifica uno o más genes)
 Organización Molecular
Capsómeros Cápside Protección del core
Superficie
Peplómeros (Glicoproteínas que son Hemaglutinina
Estructurales proyecciones de la envoltura) Neuraminidasa
Internas
Cápside interna
Fx: Protección del genoma
Afinidad para la penetración
en la célula hospedera
Proteínas
Capacidad antigénica
(Potentes inmunógenos) Son proteínas que se asocian
a la estructura viral, cuya
función es ayudar a la Ej. la Polimerasa de los
No estructurales replicación (estas se Poliovirus
sintetizan en fases
tempranas)
 Estructura
Cápside Envoltura
De origen
Estructura rígida capaz de soportar
celular, ya que
condiciones ambientales adversas Glicoproteínas
se adquieren
de las
Procápside Lípidos
membranas de
Forma inmadura la célula
hospedera
Los virus con cápsides desnudas son
muy resistentes
• Solo puede mantenerse en soluciones acuosas (húmedos-se
transmiten en fluidos)
Transmisión fecal-oral • Se altera fácilmente mediante la desecación, las condiciones
ácidas, detergentes y disolventes (éter)
 Tipos de simetría
La simetría es la forma que adopta un
cuerpo en el espacio.
En los virus está dada por la estructura de su
nucleocápside y puede ser de cuatro tipos Icosaédrica /Cúbica

Helicoidal

Compleja
Binaria
 Naturaleza Viral
Los virus son macromoléculas inertes en el medio externo y agentes activos dentro
de la célula, donde comandan el genoma del huésped en su beneficio. En esto reside
su individualidad

Debido a que el virus debe crecer dentro de la célula huésped, ambos (virus y célula
huésped) deben verse juntos en cualquier consideración de patogénesis, epidemiología,
defensas del huésped o tratamiento

Ejemplo: los rinovirus requieren una

La asociación bilateral entre el virus temperatura que no sobrepase los 34℃;
y su huésped impone condiciones este requerimiento restringe su crecimiento
específicas para la patogénesis a sólo aquellas células que se encuentran en
la capa externa fría de la mucosa nasal
• El conocimiento de los mecanismos patogénicos por los cuales
los virus entran, se reproducen y existen en el cuerpo es crítico
para un diagnóstico y un tratamiento correcto de la enfermedad
y para la prevención de su desarrollo en el medio
• El tratamiento efectivo con anticuerpos que contienen
inmunoglobulinas requiere que se conozca cuando un virus es
susceptible al anticuerpo (por ejemplo, durante una viremia) y
cuándo los virus llegan a los órganos blancos donde los
anticuerpos son menos efectivos

• Muchas vacunas exitosas se han basado en el conocimiento de

la patogénesis y la defensa inmune. Consideraciones
comparables gobiernan el tratamiento con el interferón
 Clasificación y Nomenclatura
El nombre de los virus obedece a distintas consideraciones. Algunas veces Por el vector
se debe a la enfermedad que ellos producen, por ejemplo; el virus polio (Arbovirus) por
se llama así porque produce la poliomielitis Artrópodos

También puede deberse al nombre de los descubridores como el virus

del Epstein-Barr o a características estructurales de los mismos como los
coronavirus

Algunos poseen un nombre derivado del lugar donde se los halló por
primera vez, tal es el caso del virus Coxsackie o Norwalk
 Clasificación

Piconavirus Pico “Pequeño”; rn <<ácido ribonucleico>>

Togavirus Toga del griego “Túnica” (referencia a la cubierta membranosa del virus)

Retrovirus Retro “inverso” (Referente a la síntesis de ADN, a partir del RNA)

Adenovirus (Vegetaciones Adenoideas)

Reovirus (Respiratorio, entérico, huérfano, del inglés orphan) fueron descubiertos

antes de asociarlo a una enfermedad específica
Clasificación ICTV
Universal
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 Métodos diagnósticos
MÉTODOS DIRECTOS

Son aquellos que detectan:

• El virus como agente infeccioso (aislamiento viral por medio de cultivo)
• La presencia de antígenos virales (técnicas inmunológicas)
• Inmunofluorescencia (IF)
• Enzimoinmunoanálisis (EIA)
• Test de Aglutinación
• La presencia de ácidos nucleicos virales (PCR, entre otros)
• El virus como partícula viral (microscopía electrónica)

MÉTODOS INDIRECTOS

Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o celular) por parte del
huésped: detección de anticuerpos específicos antivirales por técnicas inmunológicas
(EIA,WB, serología etc.). Producción de anticuerpos in vitro. (IgG e IgM)
 Cultivo Viral

La replicación y propagación del virus requieren células

vivas ya sean provenientes de animales de experimentación,
huevos embrionarios o células cultivadas in vitro

Cultivo primario

Líneas celulares
Diploides

Líneas celulares
Heteroploides o
Continuas
 1 er cultivo in vitro.
Las células se cultivan
en monocapa
(fibroblastos o células
epiteliales)
Son aquellas que crecen en pasajes sucesivos hasta aproximadamente 50
subcultivos y que conservan por lo menos en un 75% el cariotipo
correspondiente a la especie de que provienen

Para considerar que se ha logrado

establecer una línea continua, esta
debe de haber sido subcultivada
por lo menos 70 veces
 No es una técnica de
Microscopía Electrónica laboratorio estándar
en la clínica
• Mediante el microscopio electrónico es posible
observar la morfología de los viriones presentes en
muestras clínicas
• La limitación del método además del costo del microscopio, es que
necesita de una alta concentración de viriones (aproximadamente 109
partículas virales/ml, dependiendo del virus) presentes en la muestra,
por ello es poco sensible
• Se pueden utilizar técnicas que aumenten la visualización ( inmunoelectromicroscopía), que
consiste en el agregado de anticuerpos específicos antivirales y la formación de agregados de
partículas que son más fácilmente visibles que las partículas solas
 Hemaglutinación
Si se hace reaccionar un virus con capacidad
hemaglutinante con su anticuerpo específico,
Inhibición de la Hemaglutinación esta anulara su capacidad de hemaglutinación
• Hay virus que durante su multiplicación
intracelular, expresan en la membrana de la célula
huésped elementos estructurales virales llamados
hemaglutininas, glicoproteínas capaces de unirse a
receptores específicos en la membrana de glóbulos
rojos de diferentes especies animales

• Si se agregan glóbulos rojos a un cultivo inoculado,

se puede poner en evidencia la infección de esas
células a través de la unión de los glóbulos rojos a
la superficie celular
 Detección de Antígenos – Técnicas Inmunológicas
Pueden utilizarse tanto para la detección de antígenos (métodos directos), como de anticuerpos
(métodos indirectos)
Se utiliza un anticuerpo específico antiviral
La detección de antígenos virales se realizan mediante una reacción (por lo general IgG)
antígeno-anticuerpo, que puede ser puesta en evidencia mediante
marcadores tales como Fluorocromos, enzimas o radioisótopos Radioinmunoensayo (RIA): uso de isótopo
radioactivo 125I o 131I

Inmunofluorescencia: uso de
Fluorocromos como isotiocianato de
fluoresceína, rodamina, rojo Texas
La reacción Ag-Ac se visualiza con un
microscopio con luz UV
Enzimoinmunoanalisis (EIA) y Ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA)
uso de enzimas como peroxidasa, fosfatasa alcalina o biotina-avidina
Se basan habitualmente en la captura del antígeno por anticuerpos específicos unidos a una fase sólida, en
general el pocillo de una microplaca o una pequeña esfera de plástico

El antígeno viral presente en la muestra clínica se combina

con el anticuerpo fijado a la fase sólida y el antígeno viral se
detecta mediante la adición de otro anticuerpo específico
conjugado a una enzima
Lectura Visual por el
espectrofotómetro
La enzima conjugada suele ser peroxidasa o fosfatasa alcalina. El
substrato para esas enzimas varía. En la reacción con la peroxidasa
el substrato es un peróxido capaz de oxidar un compuesto químico
incoloro que en su forma oxidada tiene un color característico
 Westernblot
La técnica de WB se basa en la separación electroforética de proteínas virales que son posteriormente
inmovilizadas en papel de nitrocelulosa con el objeto de determinar la presencia de anticuerpos
específicos contra cada una de esas proteínas

La técnica es muy similar a un

EIA, menos sensible pero más
específica que ésta

Son particularmente útiles para el

diagnóstico del HIV

A: presencia de ciertos Ags (indeterminado)

B: presencia de múltiples Ags (positivo)
C: ausencia de Ag (negativo)
 Hibridación y
Amplificación

Métodos Moleculares
Detectan a los virus mediante el reconocimiento de secuencias
específicas del genoma ARN o ADN

Sondas de Ácidos Nucleicos: Actualmente es posible

extraer secuencias específicas de un fragmento de ADN por
medio de las endonucleasas de restricción. Luego estas
secuencias extraídas, se pueden desnaturalizar y marcar ya
sea con una enzima o con un isótopo radioactivo. A estas
cadenas marcadas y que tienen una secuencia conocida se
llaman sondas de ácidos nucleicos
 Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR):
Amplificación de secuencias específicas del DNA.
Se basa en la utilización de secuencias cortas de
nucleótidos sintéticos llamados primers o
cebadores, que se hibridan de forma especifica
con cada una de las cadenas de DNA ,
previamente desnaturalizadas, llamadas moldes
o templados
Al final se consiguen miles de copias de DNA del
fragmento de DNA limitado por los "primers "
Los fragmentos de DNA así obtenidos se pueden
identificar por varias técnicas
 Serología
La seroconversión es el aumento del título de anticuerpos cuatro veces o más observado en dos muestras pareadas de
suero. La primera muestra se obtendrá en el período agudo de la enfermedad y la segunda, 15 a 21 días después de la
primera, en el período de convalecencia

Es útil para establecer el diagnóstico retrospectivo, pero no para el diagnóstico temprano de una infección, puesto que
debemos esperar al período de convalecencia para obtener la segunda muestra del suero

IgM es de utilidad para hacer diagnóstico de

infección reciente en una sola muestra de suero
extraída en el período agudo de la enfermedad

IgG en una sola muestra se utiliza como

técnica de tamizaje
Bibliografía