Biología Molecular

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Biología Molecular

Biología molecular y celular de Lodish


SEMANA 2
Rama de biología que estudia procesos que se desarrollan en los seres vivos desde un punto de vista molecular
2 macromoléculas: ADN y Proteínas
Relación que existen entre el ADN y ARN, la síntesis proteica y metabolismo
Mutaciones que producen la variabilidad genética
Mediante:
Clonación molecular, reacción en cadena de polimerasa PCR (trata de hacer copias consecutivas de
secuencia de ADN de gen en especifico y se da por a reacción en cadena), electroforesis en gel (gracias a
esto se puede ver si todo el proceso esta bien).
Organismo modelo: Leyes de Mendel, escherichia coli, ratones, levadura

Todo inicia en las células / Cel permiten cambios en los genes por mutaciones / Generan nuevas proteínas
dándoles nuevas habilidades / Celulas varian dependiendo de su nicho /Ejemplo: lactococcus lacteus en
intestino

ARBOL FILOGENETICO
Dos momentos en especifico y de ahí salen las ramas (bacteria, archae, eukaryota) Comun de eucariontes y
archaebacterias y ultimo ancestro en común de todos los organismos extinguidos// Mitocondria y cloroplastos
(simbiosis porque tienen su propio ADN y pueden generar proteínas aparte de la célula)

MOLECULAS DE LA VIDA
Molec pequeñas (iones inorgánicos, agua y molec organicas) 80% del volumen celular y sustrato para
reacciones metabólicas
Molecula pequeña: es ATP (de Ácidos nucleicos), toda energía para procesos, transporte activo
Celulas nerviosas se comunican por moléculas de señalización
Adrenalina (solo se genera cuando hay estrés o algo)
MACROMOLECULAS (Polisacaridos, proteinas y acidos nucleicos)
PROTEINAS
Aminoácidos formados por carbono central unido a 4 grupos funcionales (grupo amino,
carboxilo, hidrogeno, y grupo R o variable)
20 aa= miles de proteínas 50.000 en seres vivos
Diferencia entre aa están dadas por los grupos R (gracias a este grupo se pueden obtener los 20
aa)
Diferentes combinaciones de aa hay diferentes proteínas y se dan gracias a diferentes procesos de
mutación
AA:
Hidrofilicos: Acido glutámico, arginina
Hidrofobicos: Fenilalanina, leucina
Cisteina: gracias a este se dan las diferentes proteínas. Formas con puentes disulfuro, y les
permite la aglomeración
Multifuncionales: Hormonas, parte estructural, enzimas, catalizan proteínas, ADN y ARN
(insulina, inmunoglobulina, hemoglobina)
Aa formados por síntesis por deshidratación: Se unen por enlaces peptídicos (covalente).
Nitrogeno de grupo amino de un aa se une al carbono del grupo carboxilo de otro aa
Peptidos: unión de aa
Estructura:
Primaria: secuencia de aa q forma proteinas. Codificada por genes. Como cadenita
Secundaria: mas de 20 aa. Enlaces por puentes de hidrogeno entre oxigeno terminal de aa
y hidrogeno de otro. Forman una hélice (Queratina, seda [forma lamina plegada, da
estructura y fuerza])
Terciaria: Tridimensional y compleja, enlaces disulfuro entre las cisteínas // No se
mantienen en hélices para mantenerse se pliegan // En citoplasma // AA hidrofilicos
(están en cara externa) e hidrofóbicos (van a estar hacia la cara interior) // Cisteina y
cisteína hacen el enlace // No son tan estables
Cuaternaria: 2 o mas péptidos que se mantienen por interacciones no covalentes como los
enlaces de hidrogeno // Hemoglobina tiene grupo hemo Fe, unido por puente de
hidrogeno
ACIDOS NUCLEICOS
Formados por cadenas largas de subunidades llamadas nucleótidos.
Nucleótido: azúcar de 5 carbonos (ribosa y desoxirribosa), grupo fosfato, base nitrogenada
Doble hélice // Semiconservativo (Hebra parental y hay una nueva)
Molec de herencia y transferencia de caracteres: ADN y ARN
5 bases nitrogenadas: Adenina (Purina), guanina (Purina), citosina (Pirimidina), uracilo (Pirimidina),
timina (Pirimidina) // A-T o U, C-G
Principales nucleótidos: ADN (desoxi, para crear prot) y ARN (ribosa, dirige sintesis de prot)
3 prima queda expuesta al final, 5 prima parte que queda expuesta
Nucleotidos se unen entre si por enlaces covalentes, unión entre grupo fosfato y azúcar
FABRICAR PROTEINAS:
Factores de Transcripción: Son proteínas de unión al ADN tipo las señales. controlan expresión
génico en diferentes tejidos y órganos. Todas las cel tienen todos los genes pero expresan unos o
otros dependiendo de su funcionalidad. // Activacion
Transcripción: (Copia de ADN a ARN) región codificante se copia a un ARN. Regulado por
polimerasa. ARNm del nucleo al citoplasma. ARN polimerasa que copia
Procesamiento: Pre ARNm y después a uno maduro porque la info que no se necesita se
sale
Traducción: Ribosoma (se origina en el nucléolo)(formado por 4 ARN + 50 prot) ensambla aa en
el orden q se informa el ARNm. Ribosoma se encarga de traducir. En CITOPLASMA. Sale a

FOSFOLIPIDOS
Cabeza soluble y cola insoluble // Presentes en membrana celular // Parecidos a aceites, pero en vez de
ácidos grasos tiene un grupo fosfato // Parte estructural en la membrana plasmática y en organelos
2 agg unidos a 1 glicerol unido a 1 grupo fosfato
Fosfato unido a glicerol por enlace fosfodiester
Membrana plasmática activas de las cel poseen una bicapa de fosfolípido
Entre fosfolípidos no hay unión, solo es como la idea de mantenerse juntos porq no son polares
Prot de transporte, integrales y glicoles

CELULAS PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS


PROCARIOTAS
ADN, no tiene membrana nuclear // Membrana externa, espacio periplasmarico, pared celular,
membrana interna, nucleoide // HAY RIBOSOMAS, PARED CELULAR, MEMBRANA
PLASMATICO, PLASMIDOS
No núcleo definido // Membrana de péptidoglucano
EUCARIOTAS
Orgánulos poseen membrana plasmática doble en núcleo, mitocondria y cloroplasto
Partes: Vacuola (concentraciones de sales y nutrientes), ribosoma (), lisosomas (), nucléolo (),
membrana plasmática (), RER (tiene los ribosomas, se forman proteínas de membrana), REL (Se
forma lipidos), AG (Se empaquetan todos), poros nucleares, peroxisomas, centriolos (sirve para
la formación del huso mitotico), citosol, mitocondria (respiración cel, 36-38 ATP), Núcleo
(dentro ADN disperso, para que se regule), flagelos (están afuera para moverse, formados de
proteinas)
Orgánulos mas grande: núcleo
Producción de ATP: mitocondria y cloroplastos (simbiosis) tienen propio ADN y codifican prot
Renovar materia obsoleta o reciclar: Lisosoma
Almacenan sales y nutrientes: Vacuolas
Degradación de los lípidos: peroxisomas
Proteinas fibrosas: citoesqueleto (microtubulos de tubulina, microfilamentos de actina y
filamentos intermedios de proteína baston)
Organelos presentan proteinas que lo ayudan a funcionar
ADN
Procariotas: único cromosoma circular
Reproductivo: fision binaria
Eucariota: muchos cromosomas lineales
Reproductivo: mitosis (fase S se da proceso de replicación de ADN y Fase M)
Fase G1 y G2: sintetiza ARNm y proteínas
Interfase crecimiento de celula
Células madre: Generan múltiples tipo de células
CICLO CELULAR
INTERFASE
Célula crece y copia de su ADN antes de pasar a la mitosis // Cromosomas en forma de cromatina
Fase G1: primera fase gap; la célula aumenta de tamaño y se copian los organelos
Fase S: fase de síntesis; la célula sintetiza una copia completa del ADN en su núcleo // Cromatidas hermanas //
Centrosoma se duplica
Fase G2: segunda fase gap; la célula crece más, fabrica proteína y organelos, y comienza a reorganizar su
contenido en preparación para la mitosis
MITOSIS
Célula separa su ADN en dos conjuntos, se divide y forma dos células nuevas
Profase: Temprana (huso mitótico comienza a formarse, cromosomas comienzan a condensarse, nucléolo
desaparece), tardia o prometafase (Envoltura nuclear se descompone y cromosomas condensados
completamente, centrosomas migran a los polos opuestos de la celula)
Metafase: Cromosomas se alinean en la placa metafísica, microtubulos salen de centrosoma y se unen a los
centrómeros de los cromosomas
Anafase: Centromero jala hacia un lado y el otro hacia otro, microtubolos cinetocoros jalan los cromosomas
hacia los polos separandolos
Telofase: Ya todo esta separado menos la membrana celular. Cromosomas comienzan a descondensarse, huso
desaparece, membrana nuclear y nucléolo reaparecen
Citocinesis: Proceso por el cual la membrana celular se separa completamente
ORGANISMOS MODELO
Para estudio de organismos multicelulares eucariotas se usan levadura
Debido a la conservación evolutiva de genes, proteinas, orgánulos y tipos celulares
Facilidad para el aislamiento de genes mutantes que codifican proteinas
Estudios del desarrollo en drosofilas (en donde se inhiben expresiones de genes. Asi es como se genero
información sobre los genes HOX que regulan la formación de todos los organismos)
SEMANA 3
FUNCIONES DE PROTEINAS
Proteínas estructurales: Cables guía que comunican células de tejidos.
Proteínas de andamiaje: Mantienen juntas a otras proteínas en disposiciones ordenadas para que
funcionen efectivamente.
Enzimas: Catalizan las reacciones químicas.
Proteínas de transporte: Permiten el flujo de iones y moléculas.
Proteínas reguladoras: Funcionan como interruptores al alterar las funciones de otras proteínas y
genes.
Proteínas motoras: responsables del movimiento de orgánulos, células y organismos completos.
Como despeñan las proteinas las diferentes funciones
-Las proteínas se unen a otras macromoléculas (ADN, moléculas pequeñas y iones), esto ejerce
influencia sobre su actividad según la complementariedad.
-Catálisis enzimática: El plegamiento de las proteínas ubica ciertos aminoácidos, grupos
carboxilo y amino en posiciones que faciliten este proceso de reconfiguración de enlaces
covalentes.
-Plegamiento de un canal o poro dentro de una membrana, permite el fluir de las moléculas y
iones.
Se quiere saber el proteoma (genoma, todos aminoácidos y prot presentes un una especie) total de las
diferentes especies // Es difícil porq el ser humano tienen 23000 genes con 100 tipos de modificaciones
proeticas que generan cientos de proteinas
JERARQUIA
-Las proteínas se pliega en una forma tridimensional estable por enlaces covalentes entre los
aminoácidos.
-La función deriva de la estructura tridimensional.
- E. tridimensional: Está determinada por la secuencia de aminoácidos y las interacciones no covalentes
de una proteína.
- Goethe, Haeckel, Thompson dijeron que las proteínas la forma hace la función y la forma es la función
ESTRUCTURA
Primaria
-Son polímeros constituidos a partir de 20 aminoácidos.
-Los aminoácidos están unidos a cadenas lineales no ramificadas, mediante enlaces amida
covalentes (enlace peptídico).
-La unión de aminoácidos se da por síntesis por deshidratación.
-Átomos repetidos de N amida, carbono α, C del carbonilo y oxígeno forman el esqueleto de la
molécula y se proyectan los grupos R que determinan las propiedades de las proteínas.
-Oligopéptidos o péptidos: Cadenas cortas (20-30) aminoácidos unidos.
-Polipéptidos: Cadenas largas (200-500).
-Proteínas: Polipéptidos de estructura tridimensional definida.
Ejemplo:
Titina: 35000 aminoácidos (no deja que el sarcómero se sobre extienda)
Proteinas: Titina: 35000 aa (la mas larga y trata de evitar la sobreextension al momento del
musculo)
SARCOMERO
Unidad funcional del musculo estriado
Microfilamentos organisdos
Como esta compuesto: Linea M (compuesta de miomecina que sujeta), en extremos hay el disco z (compuestos
por alfa activina), filamentos gruesos (miocina 2) sitio de unión para atp y actina, filamentos finos( compuestos
por actina g (sitio de unión para miocina) y f,tropomiosina (proteina que inhibe el sitio de unión para la cabeza
de miocina, impide contraccion), troponina (complejo proteico formado por subunidad t, i (inhibe sitio de
union), y c(subunidad fijadore de calcio))), proteinas que hay nebulina y titina (impedir que sarcomero se
sobreextienda)
Diferencia en color del musculo (rojiza y blanca con fibras alargadas) debido a la miocina que se queda con el
oxigeno porque son fibras con necesidad
Secundaria
-Elemento crucial para arquitectura de todo el resto de proteinas
-Estructuras estables de cadenas polipeptídicas unidas mediante puentes de H entre grupos amida
y carbonilo.
-Patrones repetitivos.
-Un polipéptido puede tener muchas estructuras secundarias en su formación.
-Hélices α: (sostienen las estructuras de las proteínas).
-Segmento polipeptídico plegado de forma espiralada. En donde el O del carbonilo de cada
enlace peptídico está ligado por un puente de H al átomo de hidrógeno de la amida del
aminoácido.
-Cada 3,6 aminoácidos se hace un giro del espiral.
-36 aminoácidos con 10 giros en su conformación.
-Hoja β: (sostienen las estructuras de las proteínas).
Hebras β unidas lateralmente.
-Hebra β
-Segmentos polipeptídicos extendidos (5 a 8 aminoácidos).
-Los puentes de H se forman entre las hebras β adyacentes y se orientan
perpendicularmente.
-Los grupos R emergen por arriba y por debajo.
-Dirección depende del enlace peptídico y pueden ser paralelas o antiparalelas.
-En las proteínas de membrana las hojas β se curvan y forman un poro hidrofílico,
por ahí fluyen iones y moléculas.
-Puentes de hidrogeno que se forma se dan pero en polipéptidos adyacentes, es decir
que se unen con otro polipéptido. Cadenas pueden ser paralelas(todas misma
conformación a-c-a-c) o antiparalelas (c-a-c-a) // Grupos alrededor son grupos R
porque se unen a diferentes prot y adquieren dif función
-Giro β: Estructuras cortas de aminoácidos en forma de U.
-Compuestos por 4 residuos de aminoácidos, se localizan en la superficie de una proteína
formando curvaturas pronunciadas que invierten la dirección de los polipéptidos al interior
de la proteína en 180 grados.
-Forma de U tienen puentes de hidrógeno entre sus residuos terminales, tienen glicina y
prolina que permiten esta estructura.
- 6 tipos de giros que terminan en Bucles.
-2 aa que permiten cambio de estructura geométrica que son glicina y piolina, gracias a esto
tienen forma de U (180 grados) que genera un cambio de posición que permite que se
empaqueten mas fácilmente y no ocupen tanto espacio
Terciaria: aquí ya hablamos de proteinas, antes no.
-Conformación global de la cadena polipeptídica o de todos sus aminoácidos.
-Se estabilizan por interacciones hidrofóbicas entre las cadenas laterales no polares y puentes de H
de las cadenas laterales polares y por los grupos amino y carboxilo del esqueleto.
-No está fija y recibe fluctuaciones, por eso no es estable.
-Puentes disulfuro de las cisteínas enlazan también de forma covalente.
-Proteínas globulares, fibrosa y integrales de la membrana.
-Enlaces no covalentes y covalentes permiten que se unan como bolas.
-No son estables quiere decir que no son fijas
-Prot Globulares: Son estructuras hidrosolubles plegadas de manera compacta, frecuentemente
esféricas tienen unas mezcla de estructuras secundarias.
Ejemplo: Mioglobulina. Proteina que se encuentra en fibras musculares. Transporta O a
musculos. Presentes en fibras tipo 1, son las lentas se encargan de metabolismo aerobico
Constituida por 153 aminoácidos, también tiene un grupo hemo que contiene hierro está en
el músculo esquelético y cardiaco.
-Prot fibrosas: Grandes, alargadas rígidas. Largas cadenas polipeptídicas que comprenden muchas
copias repetidas de secuencias aminoacídicas cortas. Por lo general son unidades globulares
repetidas.
Ejemplo: Colageno. Secretado por las células de tejido conjuntivo (fibroblastos) está en
piel y huesos. Da la estructura del tejido. En piel da forma y tensión // Varios tipos 1,2, 3,
4 dependiendo donde se encuentran
-Prot integrales de la membrana: Dentro de bicapa de fosfolípido // prot integral dentro de
membrana celular (ayudan a mantener omeostasis son las de canal y no requieren energia, la otra
es prot transportadora, glicoproteinas), en parte superior o parcialmente dentro son prot periféricas,
prot unida a lípidos son muy raras y no pueden interactuar con la cel
-Motivo estructural: combinación de 2 o mas estructuras secundarias formando a tridimensional,
desempeñan la misma función de diferentes proteinas.
Espiral enrolla: construida sobre la base de la hélice alfa. Presente en proteinas fibrosas y
factores de transcripción, se ensamblan en dimeros o trímeros
Cuaternaria
-Multiples polipeptidos se ensamblan en estructuras cuaternarias y complejos supra moleculares.
-Formadas por dos o más cadenas polipeptídicas.
-Las posiciones relativas de las subunidades multimericas son de cientos de miles de aa que
forman prote multimerica hay 3 def básicas:
-Homotrimeros: Hemaglutinina del virus de la influenza (formado por 3 subunidades
idénticas, unidas por enlaces no covalentes).
-Homomericas: Números diversos de subunidades idénticas.
-Heteromericas: Números diversos de subunidades distintas (Hemoglobina).
-Las subunidades monoméricas de estas proteínas no pueden actuar si no están ensambladas.
-El ensamble tiene una mayor eficacia en el acoplamiento metabólico.
Ejemplo: Sintasas de los ácidos grasos; Policetido sintasas rompe policetidos en bacterias
(eritromicina).
-Nivel mas alto: proteínas supramoleculares decenas o cientos de polipéptidos unidos a acidos
nucleicos
Ejemplo:
La cápside del genoma viral tienen estas proteínas.
Los Ases de filamentos del citoesqueleto que dan forma a la membrana
plasmática.
Máquinas transcripcionales (RNA polimerasa, factores de transcripción, proteínas
que se unen al promotor, helicasa y 50 componentes más), sintetizan ARNm.
Ribosomas: 4RNA más 50 proteínas.Ancestro en común es que siempre hay una
proteína ancestral que, dentro de los hongos, algas, bacterias y otros y después se
diversifico. Grupo hemo que tiene hierro dentro.

Plegamiento de proteínas
-Enlaces peptídicos planos limitan las formas en las que pueden plegarse las proteínas.
-El enlace peptídico entre el grupo amino y grupo carboxilo se comparan con un doble enlace y
los limitan a un solo plano.
-La secuencia del aminoácido determina su plegamiento
-Estado Nativo: Sus conformaciones únicas o similares están relacionadas y le dan mayor
estabilidad. Es como que se limitan y son parecidas a los ancestros
-Esta info surgio por procesos de desnaturalización
-Desnaturalizacion: se desarman las proteinas por acción de temperatura, ph o exposición a urea.
// a partir de esto se puede hacer pcr
-Proteinas se pueden replegar por su conformación quimica dentro de la celula, pero aparte de
esto tienen chaperonas (que revisan q prot tengan su estructura nativa y si no cumple la modifica
y si no se puede hacer esto la destruye, si no la puede destruir se acumulan dentro de cel se
generan problemas como párkinson, alzheimer) //
SEMANA 4
ENZIMAS Y CATALISIS ENZIMATICAS
Energonicas: necesitan energía (fotosíntesis)
Exergonicas: producen energía

Union de las proteinas y catálisis enzimática


Unión de ligandos esta detrás de las funciones de las proteinas. Union de ligandos a proteinas.
Ligando: molecula a la cual se une una proteína
Propiedades que caracterizan el modo en el que se une al ligando// Unión de esto depende
Especificidad : Capacidad para unirse a una molecula.
Afinidad: Fuerza de unión (constante de disociación, Kd // si esto es mas fuerte mas débil
es la afinidad)
Depende mucho de Complementariedad molecular: Propiedades químicas complementarias entre
el ligando y el sitio de unión. (pequeños cambios que no dejan que se una)
Ejemplo: ligando: antígeno-anticuerpo
Se generan diferentes anticuerpo (enzimas q están en torrente sanguineo) en respuesta a los
antígenos // anticuerpo se une al epitopo que es el lugar especifico donde se unen, que es
estructura a la que se une el anticuerpo// se forma el complejo antígeno-anticuerpo //
tambien depende de CDR que son regiones determinadoras de la complejidad, determinan
especificidad de anticuerpo a antígeno en especifico
Anticuerpo son parecios a Y y tienen cadenas livianas y pesadas todas mediante estrucutras
secundarias mendiante enlaces disulfuro, y a los costados tiene los CDR
Enzimas: Catalizadores eficientes y especificas
Enzimas son proteínas globulares que catalizan las reacciones químicas/rompen o forman enlaces
covalentes
Sustrato: Ligando de las enzimas.
Cada enzima cataliza una reacción química única o un conjunto de reacciones íntimamente
relacionadas. // Hay enzimas que actúan en una reacción química sola o conjunto de reacciones
íntimamente reaccionadas (multiple: glucolisis)
Dependiendo actúan en Intracelular, extracelularmente o incluso fuera del organismo
Ejemplos: sis digestico y sangre, toxinas de serpientes
Enzimas aumentan la velocidad de una reacción sin afectar su grado (cambio de energía libre
entre los reactantes y los productos)
Disminuyen energía de activación y estado de transición disminuye y acción se hace mas rápida
Bajan la energía del estado de transición y energía de activación
En la celula las enzimas funcionan en un ambiente acuoso 37 C, 1 atmosfera de presión, ph 6.5-
7.5 dependiendo de en donde esta ()
Reacciones catalizadas 106 – 1012 veces mas rapidas que reacciones no catalizadas
Complejo enzima-sustrato // ESTRUCTURADAS
Sitio activo: aa de una enzima q determinan su especificidad y poder catalítico forman un
surco en la superficie. se divide en 2:
Sitio de unión al sustrato: reconoce y se une a los sustratos
Sitio catalítico: Lleva a cabo la reacción química cuando el sustrato se ha unido.
En algunas enzimas estos dos sitios se superponen y en otros son estructuralmente
distintos.
Habitualmente solo uno o unos pocos sustratos pueden encajar con precisión en un sitio
de unión.
MODELOS DEL COMPLEJO
Modelo Llave-Cerradura (Fischer, 1894): Los sustratos se unen a las enzimas del modo
que una llave encaja en una cerradura // enzima ya tiene la estructura del sitio activa del
sustrato que viene y solo entra y ya // esta es la que mas encaja
Modelo de ajuste inducido (Koshland,1958): El centro activo de la enzima adapta su
forma en presencia del sustrato // sitio activo se modifica en base al sustrato
MECANISMOS DE REACCION DE UNA ENZIMA
Moléculas de sustrato (S) se unen a un número fijo y limitado de sitios en la enzima (E).
El complejo ES es un paso intermedio en la conversión irreversible del sustrato al
producto (P)
Complejo enzima-sustrato: Reaccion es reversible, si pasa y ya se genera el producto ya no es
reversible
MULTIPLE
Muchos complejos enzima sustrato que se da concomitantemente
Conversión de sustratos a productos- reacciones químicas multiples individuales
Diferentes enzimas en conjunto funcionen para una misma reacción: Esto es
importante porque hay menos gasto energético y por ende mas velocidad
VELOCIDAD DE LA REACCION Y CONSTATNE MICHAELIS (Km)
Velocidad de formación de producto (P) a partir de un sustato(S) esta dada por la
ecuación de michaelis-mente, esto va a variar dependiendo de la cantidad de enzima y
efectividad de enzima
Brinda datos donde una enzima es especifica para sustrato y cumple con la idea de llave
cerradura

-Km: medida de la afinidad de una enzima por su sustrato.


-Menor Km+ efectiva la enzima, - cantidad de sustrato necesario.
-Velocidad de reacción varían entre las enzimas
-Número de recambio: Número máximo de moléculas de sustrato convertidas a producto -
en un S.A de una enzima por seg.
-Si son muy lentas producen 1 a menos de una molec por segundo // Enzimas
lentas
-Si son muy rápidas puede producir 6x10 // Anhidrasa carbonica
EFECTOS DE LAS CONCENTRACIONES DE ENZIMA SUSTRATO
-Velocidad de reacción enzimática es proporcional a la concentración del sustrato a bajas
concentraciones
-A altas concentraciones de sustrato la reacción alcanza una velocidad máxima y se
independiza de la concentración de sustrato
-La velocidad máxima es directamente proporcional a la cantidad de enzima presente
-Células regulan la velocidad de las reacciones mediante regulación enzimática
Ejemplo: PROTEASA DE SERINA (hace referencia a lo que pasa cuando se añade un
péptido para ser roto)
Tripsinas, quimiotripsina, elastasa, trombina
EFECTO DEL PH Y LA TEMPERATURA
Sensibilidad al pH: cambio en la ionización de los grupos catalíticos que participan en la
unión al sustrato.
Cada enzima tiene mecanismo catalítico diferente:
Proteasas pancreáticas: pH 8
Del estomago: pH 1
Pepsina: pH 4,5
Temperatura: Cada enzima tiene una temperatura optima de acción
Enzimas duplican la velocidad de reacción cuando se aumenta hasta 10 C
Se desnaturaliza a temperatura elevadas
Mejor temperatura es 37 C
REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA
Apoenzimas (cuando no hay ni cofactor o coenzima/ inactiva) y holoenzimas (cuando no
hay ni cofactor o coenzima/ activada)
COFACTOR: pequeña molécula no polipeptidica termoestable o iones // hierro, zinc,
cobre, manganeso // se unen al sitio activo, fundamente en el mecanismo de acción, se
utilizan y se botan
COENZIMAS: grupos prostéticos orgánicos que se unen de manera permanente o
temporal a las enzimas, se modifican químicamente durante la reacción. //NAD, FAD,
grupo hemo, vitaminas del complejo B
INHIBICION ENZIMATICA: REVERSIBLE
-Competitiva: se une directamente al sitio de unión de las enzimas. Compiten
directamente con la capacidad de los sustratos
-No competitiva o alosterica: se unen a la enzima en un sitio diferente al sitio
activo o al sitio alosterico. Cambian la conformación del sitio activo de la enzima
-Acompetitiva: el inhibidor se une al complejo enzima sustrato, no se menciona
porq aparece otro alosterico y que cuando sustrato entra no deja que salga //
aumenta la afinidad del sustrato
INHIBICION ENZIMATICA: IRREVERSIBLE
-Modifican una enzima con uniones de tipo covalente con restos de aa de su
molecula// se una ultima sección de aa de la enzima y se unen por enlace covalente
y enzima deja de funcionar no puede ser reutilizada
-El inhibidor inactiva la enzima y se impiden posteriores uniones.
-Se precisa una nueva síntesis enzimática
RUTAS METABOLICAS
-Enzimas trabajan en serie, formando vías enzimáticas, de forma que el producto
de una enzima es el sustrato de lo siguiente.

-Las enzimas que participan en un proceso metabólico común (ejm. Glucólisis), se


ubican en el mismo compartimiento (citosol, membrana u orgánulo)
-Acoplamiento metabólico: Polipéptidos con diferentes act. Catalíticas se agrupan
unos cerca de otros
Se unen complejos de enzima que han comenzado a formar andamios y es que
siempre van juntas, o en proceso de formación se modifican tanto que salen juntas
completamente.
-En algunos casos las enzimas se han fusionado genéticamente para formar una
enzima única multidominio
NOMENCLATURA DE LAS ENZIMAS
NUMERICA

FUNCIONAL
Oxidorreductasas: Catalizan reacciones de oxido-reducción al adicionar o
sustraer hidrógenos o electrones
Subclases: deshidrogenasas, oxidasas, oxigenasas, reductasas,
peroxidasas, catalasas, hidroxilasas
Transferasas: Catalizan reacciones en las que hay una transferencia de
grupos de una molécula a otra.
Subclases: transaminasas, fosforiltransferasa, transcarboxilasas,
transmetilasas, trasaldolasas, trasquetolasas
Hidrolasas: Catalizan reacciones en las que se produce la ruptura de
enlaces por la adición de agua.
Subclases: esterasas, glucosidasas, fosfatasas, tiolasas, fosfolipasas,
amidasas, desaminasas, ribonucleasas, peptidasas, lipasas.
Liasas: Catalizan reacciones de eliminación no hidrolítica para romper un
doble enlace.
Subclases: descarboxilasas, hidratasas, deshidratasas, liasas,
aldolasas y sintasas
Isomerasas: Catalizan reacciones en las que hay un reordenamiento
molecular.
Subclases: isomerasas, racemasas, epimerasas y mutasas
Ligasas: Catalizan la formación de un enlace entre dos moléculas de
sustrato. La energía para estas reacciones es aportada por la hidrólisis de un
nucleotido trifosfato.
Subclases: sintetasas, carboxilasas.
SISTEMATICA
NOMBRE DEL SUSTRATO + TIPO DE REACCIÓN DE LAS
ENZIMAS +ASA
Ejemplo: Citocromo oxidasa // ADN polimerasa

SEMANA 6
ARN Y CROMOSOMAS
ARN
Acido ribonuncleico
Formado por cadenas de ribonucleotidos, normalmente son lineales y monocatenarios (solo tienen
1 helice)
Esta presente en procariotas y eucariotas y en VIRUS (solo puede replicarse cuando esta en
huesped, por lo que no es considerado como organismo vivo) solo hay el ARN
Se encarga de los pasos intermedios entre la info almacenada en el adn y la síntesis proteica
Liga el adn con la sintesis proteica. Esta es la principal importancia del ARN.
ESTRUCTURA
Monosacarido de cinco carbonos (pentosa) llamada B-D-RIBOFURANOSA
Grupo fosfato.
Una base nitrogenada // adenina (a), citosina (c), guanina (g), uracilo (u)
Base nitrogenada en carbono dos y grupo fosfato siempre en carbono 5 esto permite los enlaces
disulfuro
PRIMARIA
Secuencia lineal de nucleótidos en la molécula de arn // Estructura secundaria, terciaria son
consecuencia de esta estructura // Tiene información funcional y puede traducirse para
sintetizar proteínas (en el caso del arn m).
Mas sencilla, ejemplo es el ARN mensajero // por enlaces fosfodiester // estructuracion
minima que forma la secundaria y terciaria // tiene region codificante y catalitica (que
sucede en el ribosoma, adiciona aa)
SECUNDARIA
El arn se pliega como resultado de la presencia de regiones cortas con apareamiento de
bases // es un concepto topológico y no debe ser confundido con algún tipo de estructura
bidimensional // la estructura secundaria puede ser descrita a partir de motivos estructurales
Se forman motivos estructurales formados por apareamiento de bases nitrogenadas, y ahí
se forman pliegues // Ejemplo: ARN de transferencia // No hablamos de estructura
tridimensional solo son caracteristicas
Motivos estructurales:
Bucles
Bucles en horquilla
Bucles múltiples
Pseudonudos.
TERCIARIA
Las regiones con bases apareadas forman hélices como motivo estructural terciario //
presenta la presencia de un grupo hidroxil en posición 2' de la ribosa, que causa que las
dobles hélices de arn adopten una conformación a.
SE DA POR enlaces entre los motivos estrcuturales, lo que permite esta formacion es
GRUPO HIDROXILO que se genera en la posicion 2 de la ribosa
Muchos arn contienen, además de los nucleótidos habituales, nucleótidos modificados, que se
originan por transformación de los nucleótidos // Tambien hay modificaciones en los nucleotidos
y dependiendo se dan calsificaciones de todas las clasificaciones
CLASES DE ARN
ARN IMPLICADOS EN LA SINTESIS DE PROTEINAS (las que mas nos interesan)
ARN MENSAJERO
Es una molécula de cadena simple que se sintetiza usando como molde una de las
hebras del adn de un gen.
Su función es transmitir la información contenida en ese gen al citoplasma
Hebra de adn se habre viene una y copia de adn a arn
ARN TRANSFERENCIA
Una pequeña molécula de arn que contiene una región de trinucleótidos denominada
“anticodón”, que es complementaria a un triplete del arnm y una región donde se
une un aminoácido // cada codón del arnm, formado por tres nucleótidos, es
reconocido por un arnt concreto que va acompañado de un aminoácido.
ARN mensajero sale e ingresa al ribosoma y tiene secuencia de nucleotidos que son
captados por ARN de mensajer // compuesto por tripletes de nucleotidos // tienen
capacidad de coger el nucleotido, se pega uno y va haciendo la cadena // Los que
cargan aminoacidos y les van dejando// ANTICODON se pega a region
complementaria de ARN mensajero
ARN RIBOSOMAL
Abundante de toda la célula //arnr + proteinas forma los ribosomas // los orgánulos
encargados de leer la secuencia del arnm para llevar a cabo el proceso de traducción
y la síntesis proteica.
4 ARN unidos a proteinas // Esto forma ribosoma // Es el mas abundandte
REGULAN LA EXPRESION GENICA (solo tener nocion)
Se encargan de regular expresion genica dentro de todos los procesos
ARN DE INTERFERENCIA: ayudo a entender lo de organismos modelos, y se pudo ver
q tan importante es un gen
MICRO-ARN: Funcion es que bloquena el proceso de traduccion
ARN INTERFERENTE PEQUEÑO: desactivan diferentes genes
ARN ASOCIADO A PIWI:
ARN ANTISENTIDO: complementario al ARNm, es no codificante
ARN LARGO NO CODIFICANTE:
RIBOSWITCH: Adicionan ciertos nucleotidos y tienen capacidad de activar o desactivar
sintesis proteica dentro de ARNm, por lo general estan al incion
CON ACTIVIDAD CATALITICA
En genera los tres estan en el ribosoma y se encargan de deterner la traduccion
RIBOZIMAS:
ESPLECIOSOMAS: rompen los exones que no tienen actividad, en el proceso
llamado splicing
MITOCONDRIAL
Presente en mitocondrias y nos ayuda a entender el proceso de simbiosis, tiene propio adn
por lo q puede hacer su propia proteina
La mitocondrias tienen su propio aparato de síntesis proteica, que incluye arnr (en los
ribosomas), arnt y arnm.
DE GENOMA
Virus tienen arn como molec principal que tiene toda la info para sintesis de
proteinas
Los virus arn carecen por completo de adn y su genoma está formado por arn, el
cual codifica las proteínas del virus.
CROMOSOMAS
ESTRUCTURA
Todos los organismos eucariotas tienen mecanismos especiales que empaquetan su adn en
cromosomas // cromo = color y soma = cuerpo // c. Eucariotas el adn se encuentra formando
la cromatina en interfase // cromatina = adn + proteinas histonas y no histonas // cromatina
forma nucleosomas // la estructura del cromosoma varía durante el ciclo celular.
Todos org tienen, y necesitan manera de condensar info. Procariotas 1 cromosoma circular
// Eucariota 2 o mas cromosomas con toda la info genetica
Constituido de cromatina que es ADN+ proteinas histonas y no histonas
Estructura mas pequen1a de cromatina es nucleosoma // Cromatina tiene diferentes
nombres hasta llegar a crom metafasico // Nucleosoma es ADN unido a prot
Hebra de ADN (adn unido a proteinas) – cuando se empaqueta se forman nucleosomas
(histonas forman enrollamientos)- unino de nucleosomas son llamados solenoide de 30 nm
– cromosoma como tal que esta extendido – cromosoma que esta dentro de interfase.
condensado – cromosma de metafase
HISTONAS
Proteínas ricas en residuos de lisina y arginina, que muestran una elevada
conservación evolutiva y que interaccionan con el adn formando una subunidad que
se repite a lo largo de la cromatina (nucleosoma).
Los principales tipos: h1, h2a, h2b, h3 y h4
Las 5 se unen y forman el octamero de histonas que son las que se unen al DN y
forman como rollitos // dimero-trimero-octamero // Da casi dos vueltas que son
alrededor de 140 pares de bases
NUCLEOSOMA
Subunidad esférica o globular // formados por 200 pares de bases de adn // core: es
octámero constituido por dos subunidades de las histonas h2a, h2b, h3 y h4, dodne
se enrollan 140 pb en dos vueltas // linker: 60pb que unen nucleosomas.
HAY DOS PARTES: core y linker
histonas se unen y forman octameron, dan las vueltas y la parte del core que rodea
las histonas son 140 pares de bases y el libker es el ADN que no tiene proteinas y
es como que une diferentes nucleosomas
ESTRUCTURA DE LOS CROMOSOMAS
Importancia de centromero: en proceso de division celular, es justo ahí donde microtubulos
se unen, y dentro hay una pequeña seccion llamada cinetocoro. Para que se separe quien
jala? Cinetocoro jala y rompe las proteinas y forma solo tubulina que regresa a formar parte
del citoesqueleto.
Centromero: Es una región estrecha del cromosoma que lo divide en brazo corto y brazo
largo // En ella se unen las cromátides hermanas
Stelites: Se trata de unas zonas redondeadas unidas al resto del cromosoma por una
constricción secundaria de longitud variable.
Telomeros: Son unas estructuras especializadas que cubren los extremos de cromosomas
eucarióticos a modo de “capuchones”. Están formados por ADN y proteínas.

Procariota: Cromosoma compuesto por una molécula de ADN covalentemente cerrada


(circular), sin proteínas histonas y ubicada en una región de la célula conocida
como nucleoide.
Eucariota: Dos o más cromosomas por cada célula, estos se ubican en el interior del núcleo
y son estructuras más complejas que
el cromosoma bacteriano.
CLASIFICACION EN BASE A POSICION DE CENTROMERO
Metacentrico Centrómero en el centro.
Submetacentrico: Centrómero pocó desviado del centro.
Acocentricos: Centrómero muý desviado del centro.
Telocentricos: Centrómero en los extremos de la estructura.
CLASIFICACION SEGÚN SU FUNCION
AUTOSOMICOS: Participan del control de la herencia de todas las características
de un ser vivo, a excepción de la determinación del sexo. Los humanos, por ejemplo,
tienen 22 pares de cromosomas autosómicos. generan todo el resto
SEXUALES: Determinan el sexo, pues portan la información necesaria para el
desarrollo de muchas de las características sexuales de las hembras y de los machos
que permiten la existencia de la reproducción// generan sxo
SEMANA 7 (25/sep/23)
CONTROL TRANSCRIPCIONAL DE LA EXPRESION GENICA
Diferentes celulas forman diferentes tejidos por lo que hay diferentes expresiones genicas dependiendo
del tejido

Todos los organismos creados a partir de células procariotas y eucariotas tienen formas de regular la
expresión génica.// La regulación génica es la forma como una célula controla qué genes, de los muchos
genes en su genoma, se "enciendan o apaguen". // O. Unicelulares procariotas: R.G: Permite ajustes de su
maquinaria enzimática y componentes estructurales en respuesta a sus cambios nutricionales y al
ambiente.
Todos los organismos tienen la capcidad de regular la expresion genica // La misma es necesaria porque
todas las celulas tienen el mismo adn y todas tienen la info para estructurar cualquier parte del cuerpo, por
lo q esta se da para activar o inactivar celulas en tal y tal seccion // toda la info no es necesario en todas
partes
En caso de org procariotas unicelulares la reg genica controla la maquinaria enzimatica y componentes
estructurales // todo depende de condiciones del ambiente, en caso de que algo de esto cambie su
regulacion genica tambien cambia

O. Multucelulares eucariotas: R.G.: Permite la constitucion de órganos. Organos formados por diferentes
tipos de células // Todos provienen de una sola célula diploide y se formaron a partir de multiplicación y
diferenciación celular.
Pero para obtener un organismo "funcional" no es suficiente que sus células se diferencien, sino que
también hace falta que estas respondan de manera adecuada al ambiente.
Para esto, es necesario que la expresión de cada uno de los genes esté perfectamente regulada.
En caso de org multicelulares eucariotas, la misma expresa presencia de organos formados por diferetnes
tipos de cel, que depende de la diferenciacion y multiplicacion de las celulas. La diferenciacion se da por
la expresion de ciertos genes en ciertos momentos.
Para que org sea funcional necesita el ambiente, para que estructuracion sea funcional y nos permita
adaptarnos.

Ejemplo del alcohol


En higado debe ser eliminado el alcohol por lo q el nucleo de cel debe hacer sintsis proteica de alcohol
deshidrogenasa, esto solo ocurre en el higado, por lo que se activa la sintesis proteica y se produce la
enzima (enzimas)
En neuronas se produce neurtransmisor que nos permite sentir (neurotransmisores)

Cuando la expresión génica se trunca abruptamente, se alteran las propiedades celulares, produciendo:
Cáncer, Paladar hendido, Tetralogía de Fallot.
Si regulacion se restringe demasiado rapido genera problemas, como deformaciones, esta idea puede ser
del cancer, paladar hendido, tetralogia de fallot

Como deciden las celulas cuales genes activar


Información del interior de la célula: Proteínas que heredó de su célula madre, si su ADN está
dañado y cuánto ATP tiene.
Información del exterior de la célula: Señales químicas de otras células, señales mecánicas de la
matriz extracelular y niveles de nutrientes.
Depende de señales quimicas cuando es info del exterior, que se dan en el liquido extracelular
Tambien depende de si cel madre tenai modificacion en el genoma o proteoma, y si hay una
modificacion no van a poder producir proteinas adecuadas por lo que generarn problmeas
EJEMPLOS
Para q se de division y crecimiento celular necesita de factroes de crecimineto generados
por cel ya presentes y estos llegan a membrana plasmatica y se unen por proceso de
endocitos, que se unen a receptores que son proteinas o alguna otra cosa que genera
hormonas, estos se unen a factores de crecimiento y entran a nucleo y se llaman factores de
transcripcion que son proteinas que se unen a genes que promuevne division y crecimiento
y comienza el proceso de sintesis proteica

Los factores de transcripción(F.T):


Proteínas que se unen al ADN y controlan la transcripción de los genes. Pueden activar o
reprimir la expresión génica dependiendo de las señales celulares // Represores y
activadores // Existen 2000 F.T. / Pax 6: Desarrolla el ojo / Ubx: copia 2 veces el torax.
3 genes: estructural de hojas.
Factores de transcripcion: son importantes, prot q se unen a anf y prenden o apagan gen
Represores
Activadores
Dentro del ser humano hay 2000 tipos
Y mediante estudios o enfermedades que se han sucitado, y tambien por mecanismos de factores
modelos
Factores de trasn pax 6 que activa o desactivan esto y cuando hay errores se dan la diferenciacion
del iris
Organismo modelo para el Ubx que genera que se duplique la parte del torax
En plantas cuando se restringe 3 genes que forman la flor y asi se forman las tipos hojas como flor
MECANISMOS DE LA REGULACION DE LA EXPRESION GENICA
ACCESIBILIDD A LA CROMATINA: Niveles de empaquetamiento del ADN // hace referencia a que el
adn tiene diferetnes etapas de condensacion por lo general si el adn esta en una etapa donde cromatina ya
forma cromosoma metafasico ya no es util para proteians solo para mitosis, si esta en cromatina en
INTERFASE desenvuelta si se puede dar sintesis proteica y aquí gen puede activarse o inhibirse // Cuando
no esta muy condensada si se da
Romatican genera estos dos
Eucromatina: cromatina activa // Cromatina menos compactada y transcripcionalmente activa.
Heterocromatina: cromatina inactiva // Cromatina más compactada y transcripcionalmente
inactiva.
Facultativa: Se encuentra en regiones ricas en genes y puede convertirse en eucromatina en
tipos celulares específicos o en determinados estadios del desarrollo. Tiene la facultad de
regresar a la cromatina interfasica y se puede reactivas
Constitutiva: Se encuentra permanentemente silenciada y tiene una función estructural .
Asociada a regiones centroméricas o teloméricas. Solo es parte estructural y forma las
secciones de centromeros y telomeros
METILACION: Es un proceso por el cual se añaden grupos metilo al ADN. Actúa para reprimir la
transcripción génica. Citosina y Adenina pueden ser metiladas. Adenina metilada: Solo en procariotas.
Citocina metilada: Forma 5-metilcitosina en el C 5 del anillo de la pirimidina // por lo general el adn esta
conformado de grupo fosfato, azucar, bases nitrogenadas entonces el adn pasa por proceso de metilacion
donde se añade grupo metilo a su conformacion principalmente en citosina (en humano) y adenina (en cel
procariota) // en la citocina forma el 5 metil citosina que cambia la permeabilidad y no permite la
transcripcion // Adición de un grupo metilo mediada por las enzimas ADN metiltransferasas. Esta unión
se produce en los dinucleótidos citosina- guanina (CpG), los cuales, se agrupan en el genoma
constituyendo las llamadas islas CpG. Celulas madre. Suprime la expresión de genes retrovirales. Tramos
nocivos de ADN. Cancer // Esto esta regulado por la ADN metiltransferasas // mientras mas metilacion en
cisteina se gorman isalas en adn que son CpG, dependiendo de la cantidad se determina si se da cel
cancerigena, mientras mas metilacion haya mas probabilidad de cancer, y no solo esto si no tambien
celulas madres // sprimen secciones de genes retrovirales por lo que el adn detectaa cierta anomalia en
replicacion de nucleotidos y genera estas isalsa donde a partir de esta seccion es algo aaprte de nuestro
genoma // Tramos nocivos de ADN tambien se segmentan o se quedan aislados del proceso de replicacion
normal// IMPIDE QUE SE DE LA SINTESIS PROTEICA
REGULACION EN CIS Y TRANS
Cis: Regiones no codificantes del ADN que regulan la transcripción de los genes cercanos // Enhancers:
Se unen a factores de transcripción para aumentar los niveles de transcripción de genes // Promotores:
Secuencias cortas de ADN (40pb), que normalmente se encuentran arriba o abajo del sitio de inicio de la
transcripción // Conformados por: TATA box, Sitio de reconocimiento de TFIIB, Iniciador, Elemento
promotor central // En cis son regioes no codigicantes del ad que se encargan de regular son dos los
enhancers(son secciones de adn donde se acompla la polimerza y son propulsores para la traduccion de la
formacion del arn mensajero, aumentan la velocidad de traduccion son importantes cuando son necesarios
en un proceso, como en el ejemplo de desdoblar el alcohol) y los promotores (secuencias de adn que no
son codifiantes y lo que hacen es donde se une arn polimerasa y esta se subdivide en 5// caja tata: que
depende el tipo de gen een el que actua // sitio de reconomiento de TFIIB // iniciador/ elementoo promotro
central)
Trans: Regular genes distantes a partir del gen por las que fueron transcritos. Trabajan a través de la
interacción intermolecular entre dos moléculas // Subunidades de ARN polimerasa. Proteínas que se unen
a la ARN polimerasa para estabilizar el complejo de iniciación. Proteínas que se unen a todos los
promotores de secuencias específicas, pero no a la ARN polimerasa (TFIID factores). Proteínas que se
unen a unos pocos promotores y son necesarios para la iniciación de la transcripción // En trans ocurren
en subunidades de ARN. ARN polimeras tiene diferetnes subunidades proteicas, y estas regiones son
transcritas en region diferetne de adn y se mueven siemrpre alrededor de transcriptos de adn y se unen al
arnd polimerasa para que ocurra // son las subunidades de arn polimerasa …………… // todas estas
permiten que se de la traduccion
SEMANA 8
TRANSCRIPCION
La regulación puede darse en cualquiera de estas etapas:
Iniciación: RNA polimerasa // ARN polimerasa se une al ADN
Elongación: Polimerización de los ribonucleótidos trifosfatos complementarios a la hebra
codificante de DNA // Polimerasa copia la secuancia de nucleotidos. Polimerasa lista y sale
directamente del nucleo a los ribosomas
Terminación: Procesamiento y Exportación del m RNA // Y al final ocurre la traduccion donde
se forman proteinas como parte de sintesis proteica
Y puede ocurrir en cualra de las partes anteriores donde se reprime o se activa
Traducción a proteína.
EN PROCARIOTAS
Al controlar la transcripción, una célula puede regular que proteínas y en que velocidad las
produce // Una cel procariota tiene la capacidda de controlar las proteinas que van a ser formadas
dependiendo del proteoma que tengan.
Transcripción de un gen está reprimida: Velocidades bajas.
Transcripción de un gen está activada: Velocidades altas.
Célula bacteriana normalmente sintetiza solo aquellas proteínas de su proteoma completo que son
necesarias para la supervivencia en condiciones particulares.
Operón lac y gen de la glutamina sintetasa: E. coli
-En E. coli mitad de los genes: operones.
Codifican enzimas involucradas en una vía metabólica particular o proteínas que
interactúan para formar una proteína multisubunidad.
-Operon lac codifica 3 proteínas para el metabolismo de la lactosa.
-Operón bacteriano: 3 o + genes regulados coordinadamente.
Con estos genes u operones de la lac y de la glutamina ocurre con el e coli
Operon de la lactosa: tiene la estructuracion del a imagen, estos sisnteitsan preotinas que vana
desdoblar la lactosa, el operon no es mas que secuencias que pueden ser de 3 o mas genes que se
activan mutuamente y en conjunto, en cel procariota el cromosoma se divide entre operones y
genes en solitario, en mitad y mitad.
Transcripción de los operones, controlada por la interacción RNA polimerasa y proteínas
activadoras o represoras (F.T.).
E. coli: RNA polimerasa + factores sigma (factor de iniciación).
Sigma 70: Se une a la doble hebra de ADN, después de que transcribe unas decenas de pb se
libera.
3 genes que producen enzimas (seccion codificante) y le aseccion no codificante que es
un sitio de union de lo que es la proteina ca oy el promotor donde se añada polimeras y el
operdor que gener union o desunion de lo que inhibe el proeso de traduccion
Como se une la polimerasa al transcripto: se une gracias a los factores de transcripcion, se
requiere el factor de transcripcion sigm 70, el proceso de sintesis siempre se da pero hay
represion cuando es a bajas velocidades y viceversas, dentro de la conformacion esta el
sitio cap que permite union de prot cap, promotor union de polimerasa y esta el operador
la ue permite unino de represor, este evita que se de transcripcion. 3 posibles casos
Regulación de la transcripción del operón lac de E. coli.
Región de control de la transcripción (~ 100 pb.):
sitio CAP: proteína activadora del catabolito.
Promotor lac: complejo RNA polimerasa-sigma70.
Operador lac: represor lac.
Ausencia lac: represor lac se une al operador, inhibiendo la iniciación de la transcripción.
Muy poca lactosa y mucha glucosa: no es necesaria sintesis de las que rompen lactosa por
lo que el represor nunca sale
Igual lactosa y glucosa: receptor capta la glucosa presente en citoplasma y sale de la parte
del operador de y polimerasa entra en receptor, nunca se une region cap, ocurre pero a
baja velocidad
Mas lactosa y menos glucosa: velocidad de reaccion tiene que ser rapida por lo que se una
cAMP (regulador en trans), que es propulsor de polimerasa
Iniciacion: todo lo anterior, cuando polimerasa se une
Presencia de glucosa y lac: represor se une a lac y se disocia del operador 🡪inicia la transcripción.
Transcripción máxima del operón lac: presencia de lac y ausencia de glucosa.
Aumenta el cAMP en respuesta baja concentración de glucosa y se forma el complejo CAP-cAMP.
que se une al sitio CAP, interactúa con la RNA pol estimula la velocidad de la iniciación de la
transcripción.
El mecanismo general involucra un represor específico que se une al operador de un gen u operón.
Una molécula de ligando o Ligandos que se une al represor.
Muchas regiones de transcripción contienen 1 o + operadores secundarios que contribuyen la
represión
Proteinas activadoras se unen al ADN para estimular la transcripción a partir de un promotor
específico.
La actividad de un activador puede ser modulada en respuesta a las necesidades celulares mediante
la unión de ligandos (cAMP) o por modificaciones postraduccionales, como la fosforilación, que
alteran la conformación del activador.
Elongacion:
La expresión de varios operones bacterianos está controlada por la regulación de la elongación de
la transcripción en la región proximal al promotor.
E. coli: Operon Trp (Operon del triptófano) – Represor Trp (Concentración alta de triptófano en
el citoplasma).
Atenuación: Concentración de tRNAtrp es suficiente como para soportar una alta tasa de síntesis
proteica.
Secuencia lider: 140nt del operon Trp no codifican proteínas para la biosíntesis del triptófano.
4 regiones
Operon del triptofano (aa necesario para produccion de ciertas proteinas, en cel
procariotas estas si pueden ser elaborados por la E.coli)
Cel procariota no tiene nucleo por lo que el arn llega directo a ribosoma y arn mensajero se
une al ribosoma. Tambien hay seccion no codificante que es toda la imagen, hay 4secciones
que impiden proceso de transcripicoin. Tiene capacidad de hacer orquilla unienso a seccion
dos o 4. Viene ribosoma se une por ahí pasa por seccion 1 la que avisa que llega ribosoma
y pasa a seccion 2 si es necesario un paro se forma una roquilla y se pegan 3 con 4, al
contrario cundo es necesario el triptofano, ribosoma se para en seccion 1 y se unen 2 y 3 y
la polimerasa lo q hace se captar oquilla por lo que se da proceso de transcripcion
Región 3: Apareamiento región 2 y 4
Ribosoma sigue de cerca a la RNA polimerasa e inicia la traducción poco después de que
emerge el extremo 5` de la secuencia líder.
Suficiente tRNAtrp: Ribosoma traduce a través de la región 1 a la región 2, bloquea la
capacidad de apareamiento entre 2 y 3. Región 3 forma apareamiento con 4 cuando emerge
de la polimerasa (Horquilla RNA), seguida por varios uracilos 🡪 señal de pausar la
transcripción y terminar.
Insuficiente tRNAtrp: Ribosoma se detiene en la región 1. Región 2 forma apareamiento
con 3. Ribosoma no termina la traducción.
EN EUCARIOTAS
Los genes inactivos
Polimerasa II: F.T. activador + ADN + complejos multiproteicos coactivadores + mediador
multi subunidad.
La RNA polimerasa inicia la transcripción pero se detiene después de transcribir 20-50
nucleótidos debido a la acción de inhibidores de la elongación.
DSIF: Factores de elongación productiva de todo el gen.
DRB, NELF: Factores de elongación negativa y P-TEFb.
Se utilizan 3 tipos de polimerasas, y el resultado de la expresion genica no es el paro completo
sino en referencia a la velcoidad de la reaccion, se dice q es inhibido cuando es lenta y activado
es cuando es rapida
Partimos de un gen en el ejemplo esta inactivado
Iniciacion: para que se una se necesita factor activador, de complejo multiproteico, mediador
multisubunidad, y esto permite que polimerasa se pegue
Elongacion: Y para esto se necesita de 2 factores mas que son el DSIF, y el que genera el paro
que es el NELF
EL OTRO METODO ES SPLICING
Hayc icertos arn que tiene funcion catalitica dentro de los mismo estan los espleiciosomas, y estos etsan
presentes en el proceso del splicing. Para formacion de arn maduro se separan todos los intrones (info
genetica que no regula nada de sintesis proteica) y se quedan solo los exones, esta arn inmaduro se va a
los ribosomas
Se pued dar de 5 maneras diferentes. Es el corte y empalme para dar una proteina en especifico
Mas comun es el splicing constitutivo o de caset: los exones (colores vivos) intrones (lineas azules),
salen los intrones y les dejan solamente a los exones para formar el arn maduro
Exon Skipping: En el proceso de corte se quita un exon en el proceso y el arn maduro se queda sin un
exon
Seccion 5 prima: se cortan los intrones sucede que uno de los exones se fusiona por la mitad con el
intron, por lo que ese exon se queda con menos info, se mantienen todos pero uno se queda con menos
info y se pega al lado 5’
Seccion 3 prima: se cortan los intrones sucede que uno de los exones se fusiona por la mitad con el
intron, por lo que ese exon se queda con menos info, se mantienen todos pero uno se queda con menos
info y se pega al lado 3’
Retencion de intrones: Salen intrones pero uno de ellos se mantuvo, por lo que estan todos los extrones y
un intron
ESTABILIAD DEL ARN
Arn tiene vida util dentro del citoplasma. Despues vienen otros que rompen el ARN. Lo que le interesa a
la cel es que se mantenga la mayor parte del tiempo por lo q necesita conformacion estable y mantiene
esta estabilidad uniendo el casquete o capucho en la seccion 5 prima que es metilacion de los
nucleotidos, y al final una cola que es la Poli-a, en ambis casos proteguen para que la secuencia no se
vea afectada. Y la miARN que corta pero solo las partes que se añaden para proteger
SILENCIAMIENTO GENETICO
-Postrasduccion: topamos los arns que se vieron en la clasificiacion de la clase anterior
- antes de traduccion: se relaciona con la metilacion
PARCIAL 3
SEMANA 12 (30/10/23)
Tipo de condiciones: temp, ph
CULTIVO, VISUALIZACIÓN Y PERTURBACIÓN DE CÉLULAS
Cultivo: Células aisladas mantenidas en el laboratorio bajo condiciones que permitan su supervivencia y
crecimiento.
Clon: Una única célula puede crecer de manera rápida para formar una colonia de células idénticas.
Los descubrimientos acerca de la organización celular han estado ligados a la microscopia óptica y
electrónica. (barrido y ____)
Microscopia de fluorescencia (1970): Permitió́ la localización específica de proteínas dentro de células
(mayoria de proteinas)// utilizan fluorocromos q tiñen proteinas y el micro permite q pase cierta onda de
luz para ver la fluorescencia // organelos estructurados de fosfolipidos y proteinas, cada organelo tiene
proteina especifica y puede ser reconocido por esta tincion// acido lactico es toxico para cel y bacterias
Cada tipo de orgánulo contienen un grupo distintivo de proteínas que son esenciales para que el orgánulo
lleve a cabo sus funciones.
Mosaico fluido
Para obtenert esta info se necesita de un métodos de fraccionamiento subcelular permiten aislar
orgánulos individuales con un alto grado de pureza.
CULTIVO DE CELULAS ANIMALES
Emulan condiciones de rato en referencia a la temp, ph, acceso a nutrientes y cuando todo este
medio esta compuesto van a la incubacion, cuando trabajamos con cel vivas se trabaja con
liquidos. Y se tienen 8 aa importantes (q estan ya dichos) y son las principales para tener una
buena condicion para proliferar y tambien se adicionan vitaminas, y plasma que tiene factores
proteicos. Cuando comienza a creecer la cel ya se tienen colonias, este proceso dura de 4 a 14
dias con condiciones adecuadas
Se debe simular las condiciones de temperatura, pH, fuerza iónica y acceso a los nutrientes, de
dentro de un organismo.
Incubadoras.
Células animales aisladas se colocan en un medio líquido rico en nutrientes, antibióticos
Aminoácidos: (Fenilalanina, valina, treonima, triptófano, isoleucina metionina, lisina e
histidina)
Vitaminas, diversas sales, ácidos grasos, glucosa y plasma.
El plasma tiene: Factores proteicos, insulina y factores de crecimiento.
Solo crecera adherida a una superficie solida , lo que demuestra que moléculas de adhesión
celular son importantes.
Una célula puede generar colonias de 4 a 14 días.
CULTIVOS TIENEN UN TIEMPO DE VIDA LIMITADO
Cuando hacemos este tipo de practicas las cel tienden a estar vivas o a generar la mitosis durante
50 generaciones consecutivas y despues mueren pero hay ciertas cel que tienen un problema de
mutaciones oncogenicas (cel malignas) que no cumplen este proceso y en vez de morirse
proliferan. Cel se muere se llama senectud.
La grafica muestra el eje de las X (generaciones cel) y en la Y (velocidad). Al inicio se dividen en
un monton y es un proceso muy rapido, es exponencial porq sube subitamente. En fase dos se
mantiene en esta formacion de cel hasta 50 generacions y despues comienzan a morir y grafica
decae y se le conoce como senectud. Las cel madre tampoco cumplen con eso
Piel, hígado, riñones y embriones.
Se deben romper las interacciones célula- célula por eso se usa proteasas y se elimina el Ca.
Tejido conectivo: se producen mas fibroblastos.
Se dividen alrededor de 50 veces antes de detener su crecimiento.
Estos cultivos se los denomina cepas celulares.
Cuando el cultivo deja de crecer se denomina
senectud.
Mutaciones oncogénicas. (Tumores se dan
afectano a 3 celulas en especificos)
Solo las celulas madre pueden vivir
indefinidamente.

LAS CELULAS TRANSFORMADAS PUEDEN CRECER INDEFINIDAMENTE


Despues de la senectus se forma una nueva colonia
pero ya de cel cancerigenas que surgen a partir de la
generacion 50
Línea celular: Células que sufren transformación
oncogénica son llamadas inmortales.
Se da principalmente en ratones.
La línea celular HeLa: Primera línea celular humana
(1952), a partir de un tumor maligno
(carcinoma) de cuello uterino // obtenida a partir de
tumor maligno, ahí se supo que estas cel cancerigenas
se pueden mantener con el tiempo // esto intenta inhibir
el proceso de formacion de cel cancerigenas
LA CITOMETRIA DE FLUJO
Dentro de lo que se necesitaria para ver estas cel se puede
utlizar la citometria de flujo. Es un clasificador de cel en base
a densidad que existe. Citometro tiene embudo que permite
paso de ]uno por uno y adicionan fluorocromo que le da otro
color, y dentro tienen detectores de luz fluorescente y otro de
dispercion de luz, y mas debajo de la carga electrica y se
divide en densidad. Esto sirve para generar info cuando tiene
falta de globulos blancos
Embudo que es tan pequeño que permite el paso de cel de
una por una, y adicionan sustancia que son fluorocromos que
son para teñir y esta relacionado con carga electrica, carga
electrica de cel depende de su densidad // se puede identificar
celulas tumorales
Separa diferentes tipos de células.
Ejemplo: glóbulos rojos y blancos (rojos no tienen nucleos
y los blancos si por lo que hay diferencia de densidad)
Tienen densidades diferentes por la faltas de núcleo (GR).
Citómetro de flujo: Hace fluir las células por un haz de
láser que mide la luz que dispersan y la fluorescencia que
emiten.
Puede cuantificar las cantidades de células del tipo deseado a partir de una mezcla.
Un clasificador celular activado por fluorescencia
MICROSCOPIA OPTICA
Como funcionan los microscopios permiten ver 1000 veces mas y dependen
Tienen objetivos (lentes a muestras) oculares (cercas a ojos), estos permiten el acercamiento, lo
importante es la resolucion que tienen.
Microscopio normal(XIX) permite ver 1000 veces mas que el ojo humano por la combinación
del ocular y los objetivos.
Microscopia de fluorescencia (XX).
La resolución: numéricamente equivalente a D
Alpha: apertura angular. (hace referencia a como entra la longitud de onda)
N: es el índice de refracción del medio entre la muestra y el objetivo .
⑁: es la longitud de onda de la luz incidente.
Mas sencillo es de campo claro que es utilizado con azul de metileno que tiñen, siguiente avanze
es el microscopio de avance de fase (q sirve para ver cel vivias de animales) y ete permite gener
un relieve y el del finale s que utiliza fluorsecencia que permite captar los fluorocromos o molec
teñidas y tengan coloracion diferente
Campo claro:
De fases: obtengo colores grises para analizar tumores
De fluorescencia: deja pasar solamente una longitud de onda la que puede prender al fluorocromo
utilizado
Microtomo (estos son por lo general maquinitas donde se ponen tejidos para ver le sellan por
formaldehido y le ponen parafina para que no se rompan, esperan a q se seque y cortan en 0.05
micras en cortes consecutivos) cortes transversales para obtener info de los tejidos
Las muestras se fijan en formaldehido.
Parafina.
MICROSCOPIA DE INMUNOFLUORESCENCIA
Deja pasar la luz, se necesita de algun tipo de tincion
Para detectar proteina se le añade anticuerpo, y depsues lo meten en sustancia o muestra donde se
quiere ver y se ven proteinas por fluorocromos
Detecta proteínas especificas.
Las proteínas se tiñen con sustancias fluorescentes.
Para poderlas ver se necesitan generar anticuerpos.
Se adiciona en un plasmido el segmento del gen y se adicion un fluorocromo, entonces con el
fluorocromo y el plasmido se adicion y se forman anticuerpo que tiñen la atp sintasa y se obtiene
info de donde esta teñido
MICROSCOPIA ELECTRONICA
Ofrece una resolución de las ultraestructuras.
Resolución para un microscopio electrónico de transmisión es teóricamente 0,010 nm, 2000
veces mas que un M. óptico.
Las lentes electromagnéticas enfocan un haz de electrones de alta velocidad en lugar de la
luz visible usada por las lentes ópticas.
Los electrones son emitidos desde un filamento y acelerados en un campo eléctrico.
M. electrónico de transmisión y de Barrido.
A. Golgi
La imagen ya esta traducida al monitor. Hay 2 tipos
Transmision:
De barrido: El mas avanzado, imagen completamente 3d de muestra
SEMANA 13 (6-NOV-23)
AISLAMIENTO Y CARACTERIZACION DE LOS ORGANULOS CELULARES
 Orgánulos formados de fosfolípidos y cumplen una función.
 Ejemplo: ATP sintetasa, los biólogos lograron ver todos los orgánulos mediante estas técnicas
y gracias a las proteínas teñidas.
Peroxisomas:
Contiene oxidasas, enzimas que usan oxigeno molecular para oxidar toxinas, para elaborar
productos inofensivos y para la oxidación de ácidos grasos de cadenas largas para formar
grupos acetilos.
Producen peróxido de hidrógeno.
Producen ácidos biliares
LA ROTURA DE LAS CELULAS LIBERA SUS ORGANULOS
El paso inicial en la purificación de las estructuras subcelulares rompiendo las cél
Suspender las células en una solución de pH y contenido salino adecuados o sacarosa
Centrifugar o exposición a sonido en frecuencias ultra altas.
Temperatura de 0 C para una mejor preservación de las enzimas y otros componentes.
Los anticuerpos específicos de orgánulos son útiles en la preparación de orgánulos altamente
purificados.
Se necesita diferenciar cada organelo y aislarlo, pasan por proceso de termociclado, donde se
adiciona temperatura y movimientos consecutivos y depende de la cantidad de ciclo
Si quiero mas especifico se añade inmunofluorescencia
LA PROTEÓMICA REVELA LA COMPOSICIÓN DE PROTEÍNAS DE LOS ORGÁNULOS
Primero: Obtener el orgánulos en alta pureza.
Segundo: Se debe tener una forma de identificar todas las secuencias de las proteínas en
el orgánulo.
Tercero: Tener la secuencia genómica para identificar las proteínas a partir de las cuales
provienen todos los péptidos.
EN BIOLOGÍA CELULAR SE UTILIZAN FÁRMACOS
Extractos de azafrán se utilizaban para tratar la gota.
Extracto contiene colchicina.
Despolimeriza los microtúbulos e interfiere con la capacidad de los glóbulos blancos de
moverse hacia los sitios de la inflamación.
• Monoastrol: Inhibe la cinesina 5
Azafran ayudaba a la gota, y este tenia la colchicina que inhibe el proceso inflamatorio de los
globulos blancos y en base a esto se investigo sobre las celulas del cancer y se dieron cuenta que 6230
compuestos quimicos pueden tener algo que ver con la mitosis, y se busco a aquellos q dentiene a la cel
en la mitosis y se quedaron con 139, despues fue fase exploratoria que afecta a los microtubulos y se
quedaron con 68, otro experimento para que detenga el uso mitotico y se quedaron solo con 5, y por un
proceso de clonacion se dieron ucenta que no se formar los dos aster y se dieron cuanta que se producia
una sustancia conocida como monoastorol que inhibe la cinesina 5
SEMANA 15 (20-NOV-23)
AMPLIFICACION DE ACIDOS NUCLEICOS
LA BETA GLOBINA: FUNCIÓN, MUTACIONES Y TRASTORNOS ASOCIADOS
EXTRACCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS
• Fuente del ácido nucleico: cultivo celular, tejido (biopsia), sangre (leucocitos), expectoración, suero,
orina, líquido cefalorraquídeo.
• Tipo de ácido nucleico que se va a extraer: ADN de cadena sencilla (ADNss), Cadenas dobles
(DNAds), ARN total, ARN mensajero (ARNm) o ARN ribosomal (ARNr).
• Técnicas a utilizar: Electroforesis, Retrotranscripción, PCR, Northern blot y Clonación.
ELECTROFORESIS EN GEL
• Técnica en la que una corriente eléctrica impulsa fragmentos de ADN a través de una matriz de gel y
los fragmentos de ADN se separan según su tamaño.
• Se incluye un marcador de peso molecular, para que pueda determinarse el tamaño de los fragmentos
en la muestra.
• Los fragmentos de ADN de la misma longitud forman una "banda" en el gel que se puede identificar
a simple vista si el gel se tiñe con un pigmento que se una al ADN.
Tenemos un gel que puede ser de ___ y este es un tipo de tamiz que permite el paso del aden desde los
pozos donde se pone el material genetico y por un proceso de adciion de electricidad se puede evidenciar
el gen o genoma que se esta analizando
Se ubica muestra que es el marcador que ya viene en la prueba, despues se pone en los otros pozillos los
genes de cada paciente y lo que queremos ver es la cantidad de pares de bases que tiene en base a la
muestra del marcador, y se añade para que sea fluorescente o fosforescente. Y esto pasasa porq mientras
mas cantidad de pares de base tiene una carga negativa mas fuerte, y esto le cuesta al ADN migrar.
Adicional al gel se ubica una solucion salina para que se pueda captar bien la electricidad
RETROTRANSCRIPCION
Lo utilizan los de forense. El ADN complementario es el que permite ver que persona se estuvo
involucrado
• Generación de un ADN de doble cadena denominado ADN complementario (ADNc) a partir de
un ARN de cadena simple.
• La actividad está mediada por varias enzimas y proteínas estructurales de la cápside de virus.
• Descrita por vez primera en virus de la familia Retroviridae de forma independiente por: Howard
Temin y David Baltimore en 1970.
Tienen capacidad de formar adn complemntario
• Útil cuando solo tienen tejido y quieren estudiar la secuencia de genes.
Se puede aislar el ARNm del tejido para producir ADNc.
• En la naturaleza, la enzima transcriptasa inversa es lo que permite a los retrovirus (virus de tipo ARN)
duplicarse e integrar sus genomas de ARN en un genoma de ADN de un organismo hospedero.
• ADN polimerasa dependiente de ARN.
• Ribonucleasa H.
• ADN polimerasa dependiente de ADN.
• Virus – huésped: El ARN viral y las enzimas usan nucleótidos del huésped para ensamblar una sola
hebra complementaria de ADN que se hibrida con la hebra de ARN original. La ARNasa H corta el
híbrido ARN-ADN, lo que permite la formación de ADN de doble hebra utilizando la ADN polimerasa
dependiente de ADN. Con la ayuda de la enzima integrasa, la nueva hebra de ADN se incorpora al
genoma del huésped.
Funcion con la transcriptasa inversa que estas tres enzimas adicionadas a la integrasa le permite al virus
incorporar su info al genoma del huesped, helicasa rompe el adn. Virus con ARN se queda en tu vida para
siempre nunca te puedes escapar de eso
(PCR) REACCION EN CADENA DE POLIMERASA
• Forma rápida y precisa de diagnosticar ciertas enfermedades infecciosas y cambios genéticos.
• La muestra tiene su propio ADN y posiblemente el ADN de un patógeno o de una célula cancerosa.
• La muestra se introduce en un termociclador. Se añade una enzima llamada polimerasa (Taq) y
cebadores.
• El proceso de copia se repite varias veces. Después de 2 horas, se hacen miles de millones de copias.
Se obtiene entre 20 a 30 ciclos despue se hacen miles de millones de copias
Se generan copias consecutivas, para esto pasa por tres pasos
• Taq polimerasa: Bacteria tolerante al calor de la que se aislÓ (Thermus aquaticus).
Cebadores: Son pedazos cortos de ADN de cadena sencilla (20n). Diseñados para flanquear la región
blanco. Los cebadores se unen al molde mediante complementariedad de bases.

Desnaturalización (96 °C): La reacción se calienta para separar, o desnaturalizar, las cadenas de
ADN. Esto proporciona los moldes de cadena sencilla para el siguiente paso. Se rompen puentes de
hidrogeno
Templado (55 -65°C): La reacción se enfría para que los cebadores puedan unirse a sus secuencias
complementarias en el molde de ADN de cadena sencilla. Se adicionan los cebadores que son
secuencias de adn o arn complementario y apartir de aquí los cebadores tienen un extremo 3 prima
libre donde la polimeraza genera un copiado complementario a las cadenas parentales
• Extensión (72°C): La temperatura de la reacción se eleva para que la Taqpolimerasa extienda los
cebadores y sintetice así nuevas cadenas de ADN. Se utiliza la taq polimerasa que es la q se extrajo de
una bacteria que vive en un agua calida, y es necesario que esten a altas temperaturas porque si se baja
las molec de adn se comienzan a pegar, esto apra que no haya esta union
SOUTHERN BLOT
• Se digiere mediante una enzima de restricción, y los fragmentos de ADN
resultantes se separan mediante corriente eléctrica para hacerlos desplazar
a través de un gel o matriz similar a un tamiz.
• Permite que los fragmentos más pequeños se desplacen más rápido que los
fragmentos más grandes. Los fragmentos de ADN se transfieren fuera del
gel o de la matriz a una membrana sólida, que luego se expone a una sonda
de ADN marcada con una sustancia radioactiva, fluorescente o química.
• La marcación permite que los fragmentos de ADN que contienen
secuencias complementarias a la secuencia de ADN utilizada como sonda
sean visualizados.
Se divide el adn y se aisla un gen en especifico y se pasa por el proceso de
electroforesis y se adiciona del gen a una matriz solida para adicionar radiacion y obtner resultado en
espefico
Y la diferencia entre el norther y southern es que el uno trabaja con el ADN y el otro con ADN

CLONACION
Hay tres tipos de clonación:
Clonación génica produce copias de genes o segmentos de ADN. Se copia solamente segmenos
de adn
Clonación reproductiva produce copias de animales enteros. Se forma un organismo completo
Clonación terapéutica produce células madre embrionarias para experimentos dirigidos a crear
tejidos para reemplazar tejidos lesionados o afectados. Tratar de generar celulas madre y apartir de
cel madre se forman nuevos tejidos o organos
CLONACION GENICA
• El procedimiento consiste en insertar un gen de un organismo "ADN exógeno", en el material
genético de un portador denominado vector.
• Ejemplo: Bacterias, células de levadura, virus o plásmidos.
• Una vez que se ha insertado el gen, el vector se pone bajo condiciones de laboratorio que
promueven su multiplicación, lo cual hace que el gen se copie muchas veces.
Mediante enzimas de restricion aislan el gen, se le adiciona un plasmido, y el plasmido es utilizado
para escherichia coli que tiene el plasmido circular, y se le adiciona
CLONACION REPRODUCTIVA
• Extrae una célula somática madura. Luego, se transfiere el ADN de la célula somática del
animal donante a un óvulo, al que se le ha extraído su propio núcleo que contiene ADN.
• Se puede incorporar el ADN de la célula somática al óvulo de dos maneras:
• Extraer el núcleo de la célula somática con una aguja e inyectarlo en un óvulo.
• Usar una corriente eléctrica para unir la célula somática entera al óvulo vacío.
• Se deja que el óvulo se desarrolle para convertirse en un embrión en las primeras etapas en el
tubo de ensayo, y luego se implanta en el vientre de un animal hembra adulta.
• Al final, la hembra adulta da a luz a un animal que tiene la misma composición genética que el
animal que donó la célula somática. A esta cría se le conoce como clon. Ejemplo la oveja Dolly.
Poco de celula de animal y ponen en ovulo, sacan info genetica, ponen la info de cel diploide y se
obtiene un cigoto que ponen a que se cultive y despues le ponen a una hembra y obtienen un
organismo
LA BETA GLOBINA
Es una proteína que forma parte de la hemoglobina, la cual transporta el oxígeno en los glóbulos
rojos.
Las mutaciones en el gen de la beta globina pueden dar lugar a
trastornos como la anemia de células falciformes y la talasemia.
ESTRUCTURA
-El gen HBB hemoglobina codifica la secuencia peptídica de
la beta globina.
-Está conformada dos subunidades beta (HBB) (147aa) y dos
alfa (HBA) (142 aa), formando hélices alfa y láminas beta.
-Las mutaciones en el gen de la beta globina pueden alterar
su estructura y función.
FUNCION
-Transportar oxígeno, dióxido de carbono e Hidrógeno.
-La afinidad a estas moléculas está definida por
el efecto Haldane y Bohr
-Dependiendo de las condiciones del medio la hemoglobina será
más afín al CO2 o al H+.
-Pulmones (pH 7.6): Aumenta la afinidad de la hemoglobina por
el oxígeno, libera CO2 y el H+.
-Tejidos (pH 7.2): + CO2 y la hemoglobina se vuelve menos a
fin al O2 liberandolo y uniéndose al CO2 y el H+.
ACOPLAMIENTO DEL HIDRON Y DEL OXIGENO
Desoxihemoglobina (hemoglobina reducida), la N-
terminal de los grupos amino de las subunidades α y el C-
terminal de la histidina de la subunidad β participan en las
interacciones iónicas
MUTACIONES
Existen diversas mutaciones en el gen de la beta
globina que pueden afectar su función.
Mutación (HbS) asociada a la anemia de células falciformes.
Los glóbulos rojos tienen forma de hoz o de media luna. Estos glóbulos también se vuelven
rígidos y pegajosos, lo que puede retrasar o bloquear el flujo sanguíneo.
ANEMIA FALCIFORME
Las células falciformes suelen morir en un plazo de 10 a 20 días y, como
consecuencia, se produce una escasez de glóbulos rojos (anemia).
Sin suficientes glóbulos rojos, el cuerpo no puede obtener suficiente oxígeno, y esto
causa fatiga.
MUTACIÓN (HBE) ASOCIADA A LA TALASEMIA.
Esta malformación es causada por el cambio de una o varias bases nitrogenadas.
Afectar a la producción de subunidades beta y Alfa, generando talasemia.
Genera hemoglobinas inmaduras y no permiten el transporte de oxígeno.
Insuficiencia cardíaca y problemas hepáticos.
Muerte a los 30 años
METODOS PARA DETECTAR PATOLOGIAS
• Microscopia óptica: Los GR pequeños y de forma anormal al examinarlos.
• Hemograma o conteo sanguíneo completo (CSC) muestra anemia.
• Electroforesis hemoglobínica muestra la presencia de una forma anormal de hemoglobina.
CANCER
• El cáncer en el 2020 causo aproximadamente 10 millones de muertes en el mundo. Se da principalmente
en celulas somaticas
• Se genera por fallas de los mecanismos que controlan el crecimiento y la proliferación de las células
(exceso).
• La tasa de nacimiento y muerte celular determina el tamaño del cuerpo adulto y la tasa de crecimiento en
alcanzar ese tamaño. -tasa de crecimiento hace referencia a crecimiento del adulto
La proliferación celular ocurre continuamente como una estrategia constante de renovación del tejido. //
cancer se da en celulas que tienden a proliferar
• Ejemplo: Células de la piel viven 2-4 semanas, epitelio del intestino y leucocitos.
• Las células en muchos tejidos adultos normalmente no proliferan, excepto durante procesos de curación.
• Ejemplo: Hepatocitos, musculo cardiaco, neuronas.
Todos los casos de cáncer se deben a daños genéticos, dados por la exposición a: Carcinógenos (químicos
y radiación), hormonas y virus. excederese al alcohol tabaco, gasolina, mucho al sol
• Mutaciones generan una expresión genética aumentada.
Protooncogenes (ras) (promueven el crecimiento celular): mutaciones en estos generan oncogenes. Si se
dan mutaciones en los protooncongenes, genes supresores de tumores, genes cuidadores o de
mantenimieto // esto genere mas proliferacion // Oncogenes normales cuando se dañan son los
Protooncogenes que son los ras // normalemten promueven el crecimienot celular
Genes supresores de tumores (APC) (limitan el crecimiento): Mutaciones generan divisiones excesivas.
Los APC limitan a los protooncogenes
• Genes cuidadores o de mantenimiento (protegen la integridad del genoma): Cuando están inactivados,
las células adquieren mutaciones adicionales a una velocidad mayor. Genes cuidadores o de
manteminento: Adn muta cada vez mas seguido y a veocidad mas rapida
4 mutuaciones puntuales y apartir de ahí va a tumer benigno a maligno y metastasis
Como se da una mutacion si termina en la mortalidad de la persona y
para que sea supera agresivo tiene que tener las seis caracteristicas de
la imagen // se supriman los genes supersores para q haya mitosis
consecutiva (señalizacion proligeraitca) // mas peligrosa es la
activacion del ainvarios y metastasis : estas eliminan uniones entre
celulas y comienzan a ser moviles las celulas y pueden adicionar las
protucriones q son invadopodios y con enzimas proteasas comienza
a romper membranas basales y se acomplan a vasos sanguineos y
colonizan lugares diferentes esto es cnocodico como metastasis //
induccino ala angiogenesis: capacidad de formara vasos sanguineso
/puede generar vasos sanguineos o alargarlos // los del cancer no
puede utilizar la mitocondria por lo q obtienen denergica de la
glucolisi o de los vasos
• Las mutaciones que causan cáncer ocurren en células somáticas, no en las células de la línea germinal, y
las mutaciones en células somáticas no se transmiten a la siguiente generación.
• Las mutaciones somáticas pueden combinarse con mutaciones heredadas para producir un cáncer.
• Serie de mutaciones en múltiples genes crea un tipo celular que prolifera de manera progresiva y con tanta
rapidez que escapa de las restricciones (clones)
• La habilidad de escapar de los epitelios normales y estimular el crecimiento de vascularización para
obtener oxigeno.
El clon de células crece hasta convertirse en un tumor.
Mutaciones para producrir cancer por lo general se dan en multiples genes porque la idea de tener esta
diploidia implica tener 2 cromosomas similares, uno del padre y uno de la madre, porq si hay una mutacion
en uno solo de los cromosomas el otro cromosoma puede sobrellevar la mutacion, por lo que siempre tiene
que ocurrir en multiples genes. Por lo q una sola mutacion en protooncogenes si puede generar un cancer.
Una sola cel q se escapo y va a gener clones consecutivos y apartir de esta se forman las tumoraciones
Metastasis: Las células del tumor primario migran a nuevos sitios, donde forman tumores secundarios.
Metastasis: capacidad de producir sus propios factores y angiogenicos; las mas vulnerables son los
huesos, vasos sanguineso e higado
• Producen sus propios factores de crecimiento y angiogénicos (inductores del crecimiento de vasos
sanguíneos)
Hueso, vasos sanguíneos e hígado son vulnerables.
CELULAS TUMORALES Y EL CANCER
• Las células cancerosas adquieren un impulso de proliferar que no requiere de una señal inductora
externa. Cel para q se divida necesita de factor externo que le diga ala cel q se van a dividir, las cel
del cancer no necesitan de señal del exterior
• Fallan en detectar señales que restringen la división celular y siguen viviendo cuando deberían
morir.
• Cambian su adhesión a las células circundantes o a la matriz extracelular y se sueltan alejándose y
diseminando el tumor. cambian las adhesiones por lo q pierden la capcidad de unirse entre cel y se
da por factores de transcripcion, las caderinas permiten la union de las celulares (desmosomas, etc)
son las principales y hay factores de transcripcion que evitan que aparezcan las caderinas
• Inmortales.
Los tumores son hipóxicos, de manera que para crecer más allá de un tamaño pequeño deben obtener
un suministro sanguíneo. Tumores son hipoxicos que no utilizan a la mitocondria
• Los tumores malignos se clasifican en:
• Carcinomas: Se derivan de epitelio del intestino o el ectodermo (piel y epitelio neuronal).
• 90% de tumores malignos y forman masas solidas.
• Sarcomas: Se derivan de mesodermo: músculo, sangre y tejido conjuntivo.
• Leucemias: sangre blanca (acumulacion de leucocitos tambien conocida como sangre
blanca)
• Linfomas: linfocitos y células plasmáticas ( en toda la seccion de los ganglios )
LAS CELULAS TUMORALES METASTASICAS SON INVASORAS Y PUEDEN
DISEMINARSE
• Tumores benignos: Como se reconocen los tumores benignos
▪ Son localizados y de pequeño tamaño
▪ Células parecidas a las normales y funcionan normalmente.
▪ Sus moléculas de adhesión funcionan bien. Celulas q lo forman todavia no tienen la
capcidad de mutar tanto, todavia cumplen con funciones normales del tejido por lo
que aun no pierden las adhesion
▪ Una capsula fibrosa limita la extensión del tumor.
▪ Problemáticos si su masa interfiere con las funciones normales o si secretan
cantidades excesivas de hormonas.
Acromegalia: Crecimiento excesivo de cabeza, manos y pies. Ocurre cuando un tumor pituitario
benigno causa una superproducción de la hormona de crecimiento.
Capsulas fiboras engloban en una sola masa y evitan la dispersion (facil de extraer dependiendo
en donde sea)
Masa se da en algun lugar como la pituitaria y genera hormonas excevias como la acromegalia
(le dice a pituitaria q produzca muchas hormonas por lo q hay crecimiento excesivo de manos y
pies)
• Tumores malignos
• Crecen y se dividen más rápidamente que las células normales y no mueren a la velocidad
usual.
• Capacidad para invadir tejidos cercanos, propagándose y sembrando tumores nuevos a
medida que las células siguen proliferando No tienen capsula fibrosa,por lo q colonizan
nuevos lugares
• Ejemplo: Ovario y Mama.
• Las células del cáncer han adquirido la capacidad de penetrar la lámina basal utilizando una
protrusión celular llamada "invadopodio" y de migrar a sitios distantes en el cuerpo.
• MEC: Fibras de la matriz extracelular.
• EGF: Factor de crecimiento epidérmico
▪ Factores de transcripcion q le permiten pasarse del epitelio al mesnquima principalmeten
el snail y twist q evita la formacion de caderinas
• Transición epitelio a mesénquima
o Snail y Twist. Estos factores de transcripción que promueven la expresión de genes
involucrados en la migración celular, disparan la regulación por disminución de factores de
adhesión (Caderinas) y aumentan proteasas.

Invadopodios que son protruciones q genera la cel y producen proteasas


q se riengan en lamina basa y generan un espacio y comienzna a caer a
la matriz extracelular y baja a basos sanguineos y generan dispercion por
lo que ahí hay tumores secundarios. Acumulacion de cel mutadas
generan un nodulo.y estas cel q pierden la caoacudad de adherencia por
lo q forman lo invadopodios, una vez oasan lamina basal ella genera
cosas para q se recupere la lamina pero las celulas toman los factores de
crecimiento y hacen que baje mas rapido y ahí invaden vasos sanguineos

Tumores malignos terminan con coma

LOS CANCERES USUALMENTE SE ORIGINAN EN CELULAS PROLIFERANTES


• Para que la mayoría de mutaciones oncogénicas induzcan cáncer deben ocurrir en células en división.
• Cáncer si ocurre en tejidos de células diferenciadas que no están en división (eritrocitos).
• Células que inician los tumores: células precursoras (Células madre).
• Mutaciones tienen la habilidad de transformar una célula diferenciada (sin división) a una célula
similar a un precursor: evento iniciador del tumor.
• Células madre del cáncer.
Otra manera de cómo se da el cancer es cuando mutaciones hacen q se regrese celulas madres
cancerigenas.
EL ENTORNO LOCAL AFECTA LA FORMACIÓN DE TUMORES POR CÉLULAS MADRE
DEL CÁNCER
• Los tumores no siempre se componen de células uniformes, a pesar de provenir de una misma célula
iniciadora.
• Una minoría de células podría ser la verdaderamente peligrosa.
• Células tumorales pueden crecer con mayor rapidez o lentitud dependiendo del microentorno del
tumor.
• Con frecuencia los cánceres surgen en sitios de heridas o infecciones crónicas: Infección persistente
por Helicobacter pylori – Cáncer gástrico.
• Células inmunitarias producen factores de crecimiento para promover la curación y el
crecimiento de vasos sanguíneos.
Entorno genera ciertos cambios y en base a eso se pueden formar ciertos tipos de cancer como el
elicobacter pilori (q todo el tiempo haya esta inflamacion ye stas cel inmunitarios generan estos factores
de crecimienot para curar pero en lugar de esto se dividen exageradamente y hay mas factores q generar
cercimiento, y en liugar de curarse hay cancer)
EL CRECIMIENTO TUMORAL Y LA FORMACION DE VASOS SANGUINEOS
• Angiogénesis:
• Tumores requieren de nuevos vasos sanguíneos para crecer.
• Las células tumorales generan hipoxia
1. Degradación de la lamina basal de un capilar.
2. Migración de las células endoteliales.
3. Formación de una nueva lamina basal alrededor del capilar recién alargado.
• Otros inducen a las células circundantes a generar:
1. Factores de crecimiento de fibroblasto.
2. F. C. Transformador Alpha.
3. F. C. Endotelio vascular
Celulas tumorales tienen la capacidad de
Angiogenesis 2 maneras
-Esta cerca vaso sanguineo por lo que las cel se separan diviendo la lamina
basal, obligan a cel a que migren y al final vuelven a construir la mina
basal y alargan baso sanguineo
-Les obligan a cel cisrcundates q genere factores de crecimiento para
fibroblascos transtformador alpha, endoltelio vascular, para que irrigen al
tumor

IMPACTO MULTIPLE DEL CANCER


• Escenario de la formación de cáncer
• Una mutación en una célula (célula madre) le daría una ligera ventaja de crecimiento.
• Una de las células de la progenie sufriría una segunda mutación que le permitiría a sus
descendientes crecer de manera más incontrolada y formar un pequeño tumor benigno.
• Una tercera mutación en una célula dentro de este tumor le permitiría aventajar en
crecimiento a las otras y superar las restricciones impuestas por el microentorno del tumor,
y su progenie formaría una masa de células, cada una de las cuales tendría estas tres
mutaciones.
• Una mutación adicional en una de estas células le permitiría a su progenie escapar
hacia el torrente sanguíneo y establecer colonias hijas en otros sitios (metastásis).
Mutacion en cel q genera clones iguales pero despues se hacen nuevas mutaciones y asi con cada
cel hija. Un cancer tiene hasta 4 mutaciones consecutivas en un mismo tumor
• Cáncer de colon puede ser determinado en su progresión (pólipos,
adenomas benignos y carcinomas).
• Mutaciones de perdida de función en los supresores tumorales APC y p53 y
una mutación activante en el oncogén dominante K-ras.
• Este es una de los 11 000 alteraciones genéticas que generan pólipos en el
colon.

P53 un solo tipo del conjunto de estos tres conjunto de genes de arriba
(prootncogenes y asi ) este cancer si cumple con lo de los polipos ------- y se da
cuando existen mutaciones en el APC y P53 y tambien en el K-rask, pero este es
un solo tipo de convincacion, se pueden tener hasta 11 mil mutacioes. Por eso
solo ne nombra el conjunto de genes
Comieza con mutacion en cromosoma 5 donde se purede el gen supresor de apc
que gener un polipo.q sigue siendo beningo cunanso se mantien el enrojecimiento
yc rece un poquito mas, hay actvacion del K-ras donde hay nueva mutacione en
el cromosma 12 y evolucion al tumor en adenoma de tipo 2 q sigue siendo benigno
y se forma adenoma de tipo 3 y si se mantiene el gen supresor se pierde p53 se da
en cromosoa 17 y cuando esta se acumula se da el carcino y cuando esta se
mantiene se da la metastasis (a traves del tiempo)

DIFERENCIAS ENTRE LAS CELULAS DE CANCER Y NORMALES


• Menos diferenciadas que las celulas normales. Menos especificas por loq involucionan un poquito
• Crecen rapidamente (Una alta relacion nucleo – citoplasma, organelos prominentes, más mitosis).
/ crecen rapido porq ocupan relacion estrecha entre nucleo y citomplasma por lo q se da mas mitosis
• Menos adherentes y forman un grupo tridimencional de celulas. como pierden adherencia son
agrupaciones de cel 3d y sobresalen mas
• La aneuploidia: Presencia de uno o más cromosomas supernumerarios, o ausencia de cromosomas
que lleva a desequilibrio en la dotación cromosómica. COMO HAY mitosis super rapida
comienzan a tener una aneuploidia q es un numero mas amplio de cromosomas y esto se da porq
no se respeta el proceso de division normal, y como la mitosis aquí va mas rapido se forman
aneuploidias
• Falla en los puntos de control de daños en el DNA, especificamente en el ensamblado del huso.
Cambios en el metabolismo: no usan la fosforilacion oxidativa
sino la glucolisis y producen lactato.

Cambios metabolicos donde no se usa la mitocondria se pasa


directamente a glucosa, piruvato y lactato

BASE GENETICA DEL CANCER


• Siete proteínas que participan en el crecimiento celular
y proliferación
• Mutaciones que cambian la estructura de estas
proteínas dan origen a oncogenes.
• V y VI son codificadas por genes supresores de
tumores.
Ciertas prot q se generan y si hay mutaciones ne estas tambien
generan problema y son estas 7: molec de san1ilacion, receptores de
sen1al, transducores intracelulres, receptores intra, proteinas
apoptoticas // se añade la q capta todo los virus // si hay virus q parte
de protoonconge y pueden generar cancer
• Las mutaciones de ganancia de función convierten a los protooncogenes en oncogenes
1. Mutación puntual (cambio en un solo par de bases): en un
protooncogén que resulta en un producto proteico hiperactivo o
constitutivamente activo.
2. Translocación cromosómica: Fusiona dos genes juntos para
producir un gen híbrido que codifica una proteína quimérica
cuya actividad es constitutiva.
3. Translocación cromosómica: Pone un gen regulador del
crecimiento bajo el control de un promotor diferente que causa
la expresión inapropiada del gen.
4. Amplificación (replicación anormal del DNA): Un segmento
de DNA que incluye un protooncogén, de manera que existan
numerosas copias, lo cual lleva a la sobreproducción de la
proteína codificada.
5. En referencia a las mutaciones q se pueden dar en el anterior tipo de proteinas
Mutacion puntual
Transolacion cromosoomiaca: donde le promotor generan igual prot q no cumplen funcion
Amplificacion:acumulacion enn todas las cel // por lo q pueden ser heredadas
LOS VIRUS QUE CAUSAN CÁNCER CONTIENEN ONCOGENES O ACTIVAN
PROTOONCOGENES CELULARES
Como funcionan los virus
• Un virus podría causar cáncer cuando es inyectado en un huésped animal adecuado.
• Virus del sarcoma – ROUS: Retrovirus de transduccion, tienen el gen v-src que promueve al
Sarcoma. Primer virus q causa cancer es el virus del sarcomo-ROUS: info de arn del virus es
especificamente un protooncogen q es el v-src, y este es super agresivo y puede generar
tumoraciones en cuestion de dias
• Se cree que han surgido incorporando, o transduciendo este protooncogen
• Induce tumores en cuestión de días. dias para q se mueran las personas
• Virus de la leucemia aviar: Retrovirus de accion lenta, adicionan la informacion cerca de un
protooncogen Leucemia: solo estan en los pajaros, ARN q se acopla a protooncogen con capacidad
de producir cancer
• El único retrovirus conocido que causa tumores humanos es el virus de la leucemia/linfoma de las
células T. Reconocidos son leucemia y linfoma de las cel t
• Virus de ADN: Infecta al huesped y tiene varios oncogenes, generan muchas verrugas y otros
tumores benignos de células epiteliales, son causados por los virus del papiloma humano Virus de
adn q generan papiloma
DIAGNOSTICO
• Historia clínica: Para determinar si existe algún síntoma sospechoso en el paciente.
• Síntomas variados, dependiendo del órgano afectado: Esputos con sangre (pulmón), hemorragia en las
heces (colon), dificultad para orinar (próstata) y nódulos (mama).
• Prueba complementaria: prueba complementaria al ya reconcoer masa se neesita biopsia
• Radiografía de pulmón, mamografís, endoscopia, análisis de sangre, ecografías, resonancia magnética
nuclear o tomografía axial computarizada.
• Para llegar al diagnóstico de certeza, una muestra del tumor (biopsia).
BIOMARCADORES
• Son moléculas que se encuentran en la sangre o en los tejidos tumorales y no se expresan habitualmente
en una célula normal.
• Gen HER2
• Gen Ras
• Fusión de genes EWS/FLI
• Gen TP53
• Gen ATM
Al analisis de sangre se necesita de biomarcadores q solo estan presentes en sangre, nos tenemos q fijar en HER2
GRADACION Y ESTRATIFICACION
• Clasificar las células cancerosas en cuanto a su diferencia de las células normales observadas al
microscopio.
• GX No es posible asignar un grado (Grado indeterminado).
• G1 Bien diferenciado (Grado bajo).
• G2 Moderadamente diferenciado (Grado intermedio).
• G3 Poco diferenciado (Grado intermedio-alto).
• G4 Indiferenciado (Grado alto).
• Describe la gravedad del cáncer basándose en la extensión del tumor original y metastasis.
• TX Tumor primario no puede ser evaluado.
• T0 No hay tumor primario.
• Tis Cáncer inicial no se ha diseminado a tejidos vecinos
• T1, T2, T3, T4 Tamaño y/o extensión del tumor primario.
• Ganglios linfáticos regionales
• NX No evalúa los ganglios linfáticos regionales
• N0 No se encontró cáncer en los ganglios linfáticos.
• N1, N2, N3 Complicación de ganglios linfáticos.
• Metástasis
• MX No evalúa una metástasis distante.
• M0 El cáncer no se ha diseminado a otras partes del cuerpo.
• M1 El cáncer se ha diseminado a partes distantes del cuerpo.

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