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    El documento describe un método de electroforesis capilar para cuantificar la producción de penicilina G por el hongo Penicillium chrysogenum durante un proceso de fermentación. El método involucra la inoculación del hongo en un medio de cultivo, la detección de la penicilina G en el caldo de fermentación usando un equipo de electroforesis capilar, y la cuantificación de 900 microgramos/mL de penicilina G con un tiempo de detección de 3.7 minutos. La electroforesis capilar permite cuantificar la penic

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    Electroforesis capilar para cuantificar la producción de

    penicilina G
    Licenciatura: Química Farmacéutica Biológica
    Institución: Universidad Veracruzana

    Experiencia Educativa: Física


    Docente: Abril de los Ángeles Aguilar Tirado

    Integrantes:
    Sara Fox Belmonte S23015934
    Danna Anyelina Herrera Iglesias S23015974
    Mariel del Milagro Lozano García S23016023
    Efraín Xocoyotzin Reyes López S23015999
    Xania Zarate Castro S23015944
    Método de electroforesis capilar para cuantificar la producción de penicilina G,
    utilizando P. chrysogenum durante la fermentación
    Introducción
    ¿Qué es penicilina G?
    También se conoce como bencilpenicilina, fue el primer antibiótico descubierto por el
    Alexander Fleming, un bacteriólogo británico en 1928, marcando un antes y después
    en el tratamiento de enfermedades bacterianas. Actualmente conocemos diferentes
    clasificaciones de las penicilinas, las naturales y las sintéticas, las naturales se dividen
    en G y V, son llamadas así debido a que son producidas por algunas especies de
    hongos para matar o controlar el crecimiento bacteriano.
    La penicilina G es producida por el hongo Penicillium chrysogenum y tiene una
    estructura química que consta de un anillo beta-lactámico, importante para la
    actividad antibacteriana, evita la síntesis de la pared celular de las bacterias,
    debilitándola, haciendo que se rompa y muera la bacteria. Generalmente es
    administrada vía intravenosa por su poca estabilidad en el ácido estomacal y por esto
    es usada en enfermedades más graves en las que se necesita este tipo de
    administración, de no ser así se opta por la penicilina G que puede ser administrada
    de forma oral
    ¿Qué es la electroforesis?
    Es una técnica de laboratorio que separa moléculas según su tamaño y su carga. La
    electroforesis se basa en el movimiento de las moléculas cargadas eléctricamente a
    través de la superficie hidratada en un medio sólido. Un sistema de electroforesis se
    expresa como un dispositivo compuesto por 2 paredes o una cubeta que funcionan
    como un recipiente, este recipiente presenta 2 cavidades en las que se introduce un
    ánodo (+) y un cátodo (-), cada uno señalizado con su carga respectiva y conectado
    a una fuente de alimentación, la muestra se deposita en espacios para muestras
    suspendidos en un gel, el cual a su vez funciona como un tamiz para que aquellas
    moléculas pequeñas se desplacen más rápido que las grandes, al que se le aplica
    energía, generando que las moléculas con cargas opuestas se atraigan y las iguales
    se repelan y haciendo notar la diferencia en el desplazamiento según el tamaño.
    Electroforesis capilar
    Se basa en la migración ocurrida dentro de un capilar de moléculas disueltas
    cargadas, en una solución de electrolitos, desplazados por la influencia de un campo
    eléctrico. Utiliza como soporte un fino tubo de sílica fundida, necesita así también de
    un dispositivo capaz de detectar la migración de las moléculas y que transmita los
    resultados a otro dispositivo. Es el tipo de electroforesis que requiere menos muestra
    o reactivos. Es comúnmente usada en medicina para separar aminoácidos, ácidos
    orgánicos, iones inorgánicos, carbohidratos, esteroides, contaminantes y material
    genéticos, así como en la síntesis de algunos fármacos.
    Equipo que realiza el método:
    El equipo utilizado para esta técnica es: Beckman P/ACE MDQ Capillary
    Electrophoresis System.
    Características:
    − Requiere de una instrumentación relativamente sencilla que consta de una
    fuente de alto voltaje, un capilar con extremos sumergidos, dos electrodos, en
    dos viales que contienen una disolución amortiguadora (buffer).
    − Las columnas de EC son capilares de sílice fundida de diámetros internos
    entre 10 y 100 μm cubiertas con poliamida para darle flexibilidad y disminuir
    la fragilidad.
    − Permeabilidad a la luz UV y visible.
    − Tensión 20 -40Kv constantes, con el fin de obtener 40Kv constantes, para
    conseguir una alta reproducibilidad en los tiempos de migración.
    − El control de la temperatura de la muestra dentro del sistema funciona para
    minimizar la degradación de compuestos termolábiles y controlar las
    velocidades de reacción cuando se observa la cinética enzimática.
    − Equipo programable y automatizado para realizar separaciones rápidas de
    muestras complejas (1 a 96 muestras)
    − Ayuda a que los métodos se desarrollen más rápido, sean validados más fácil
    y sean menos costosos de ejecutar.
    Procedimiento (parte experimental)
    Muestras:
    Cepa: se estudió la cepa Penicillium chrysogenum ATCC 9840 perteneciente a la
    colección nacional de cepas microbianas y cultivos celulares del Centro de
    Investigación y de Estudios Avanzados del Instituto Politécnico Nacional, de México.
    Ésta se conservó en medio PDA 4 0 C.
    Medios de cultivo: se utilizó el medio de producción formulado con lactosa 3 %, agua
    de cocimiento de maíz 5 %, pharmamedia 1 %, fosfato monobásico y dibásico de
    potasio 0,3 % y cloruro de calcio 0,01 % ajustando el pH a 5,0 Todos los medios se
    esterilizaron a 15 lbs durante 15 min.
    Metodología (técnica implementada)
    1.- Se preparó una solución de esporas en solución salina que contenía 108
    esporas/mL.
    2.- Posteriormente, se trabajó a escala de laboratorio, inoculando el medio de
    producción al 1 % con la suspensión de esporas; se incubó a 28°C y a las 72 h se
    añadió ácido fenilacético al 1%.
    Nota: Durante los 7 días que duró la fermentación se realizaron determinaciones de
    pH, consumo de azúcares (DNS) y biomasa (peso seco).
    Sistema de electroforesis capilar: las determinaciones de la concentración de
    penicilina se realizaron en un equipo de electroforesis capilar Beckman Coulter P/ACE
    MDQ con un detector UV y un capilar de sílice fundida de 50 cm de longitud y 75 mm
    de diámetro interno. Se utilizó un buffer de fosfatos 10 mM; pH 7,0; voltaje de 20 kV
    e inyección hidrodinámica 0,5 psi por 5 seg, y una longitud de onda de 200 nm /8/.
    Discusión. La figura 5 muestra el electroferograma obtenido de las diferentes
    diluciones de penicilina G, donde el tiempo de detección fue a los 3,7 min.

    (Bautista, Gómez, et al., 2008)

    Conclusión del método


    En conclusión, se estableció la metodología adecuada para la detección de penicilina
    G por electroforesis capilar, con la que se pudo detectar la producción de penicilina G
    en el medio de cultivo, la cual fue de 900 microgramos/mL, y se detectó a los 3,7 min
    en las condiciones de electroforesis probadas. Del análisis de linealidad se obtuvo un
    coeficiente de correlación de 0,99. De tal manera que, la electroforesis capilar permite
    cuantificar la producción de penicilina G directamente de las muestras de
    fermentación, sin realizar ningún pretratamiento. Esta técnica muestra grandes
    ventajas con respecto al HPLC como es la utilización de menores cantidades de
    solventes, lo que representa un ahorro en economía y protección al medio ambiente
    Importancia en la química
    La electroforesis capilar permite cuantificar la producción de penicilina G directamente
    de las muestras de fermentación, sin realizar ningún pretratamiento. Así mismo,
    muestra grandes ventajas, como el desarrollo de mejores métodos analíticos que nos
    permiten detectar y cuantificar concentraciones altas o bajas de nuestro metabolito
    de interés de forma más rápida, sencilla y económica evitando el menor consumo de
    solventes de muestras y tiempo de análisis, representando un ahorro en economía y
    protección al medio ambiente.
    Es una técnica sensible, versátil, involucrada en investigación genómica,
    farmacéutica, diagnóstico y estudio de enfermedades genéticas, hereditarias,
    poligénicas e infecciosas, diagnóstico molecular y clínico, así como aplicaciones
    forenses. En general, este método se caracteriza por poder separar desde
    aminoácidos, ácidos orgánicos, iones inorgánicos, carbohidratos, esteroides,
    contaminantes alimenticios, material genético y fármacos.
    La electroforesis capilar es muy eficiente, capaz de separar cientos de componentes
    de forma simultánea, empleando mínimas cantidades de muestras y reactivos,
    razones suficientes para ser la herramienta de elección en el análisis bioquímico. De
    igual forma ha contribuido a la ciencia y a la medicina moderna, permitiendo conocer
    la secuencia completa de genoma humano.
    Referencias
    Alpízar Olivares, Yulién. (2000). La penicilina y sus derivados como agentes
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    Beckman Coulter P/ACE MDQ | Spectralab científica Inc.
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