CARACTERIZACIÓN DE BACTERIAS DE 8

SUPERFICIES DISTINTAS MEDIANTE

TÉCNICAS DE CULTIVO, TINCIÓN GRAM Y
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Cristopher Maldonado – Ester Madariaga – Matías González – Joshua Quinteros

FECHA: 11 / 10 / 2023

IQUIQUE, CHILE
INTRODUCCIÓN:
La caracterización de la microbiota normal, es decir, la comunidad de microorganismos
que habita distintos nichos del cuerpo humano es fundamental para comprender el
papel de cada bacteria en la salud y el bienestar, o bien determinar su grado de peligro
hacia el ser humano. (1) (2)

La microbiota normal juega un papel crucial en la protección contra agentes

patógenos, la digestión de nutrientes, la síntesis de vitaminas y muchos otros procesos
biológicos. A través de su correcta caracterización, se pretende obtener una mejor
comprensión sobre la composición y diversidad de la microbiota de una muestra
específica, lo que puede ayudar a dilucidar sobre su papel potencial en la salud o
enfermedad. Así la caracterización de la microbiota mediante técnicas de cultivo y
observación microscópica permite identificar y clasificar microorganismos. (1) (3)

Este informe de laboratorio se enfocó en analizar parte de la microbiota presente en 8

distintas superficies, tanto del cuerpo humano como de algunos objetos, que suelen
tener contacto físico frecuente con nuestra piel. Lo anterior, con el objetivo de conocer
las técnicas necesarias para realizar la caracterización de la microbiota normal
mediante observación bajo el microscopio, tales como: La preparación del medio de
cultivo, la toma de la muestra, el cultivo de la muestra, el frotis de una colonia del
cultivo, la tinción del frotis, y finalmente su caracterización frente a un microscopio.
Con la finalidad de reconocer la forma del microbio, y si es que este presenta tinción
Gram positiva o Gram negativa. (1) (2) (4)

Lo que proporcionará información sobre el conocimiento de la microbiota normal y el

manejo de laboratorio, aprendiendo de primera mano las técnicas necesarias para
llevar a cabo el objetivo, teniendo en cuenta la rigurosidad del trabajo, pudiendo
entender dificultades, tales como la contaminación de una muestra, la mala fijación, la
mala tinción, etc. Para tener un mejor control sobre dichas variables en un futuro.
(1) (5)
MATERIALES Y MÉTODOS:

Materiales medio de cultivo

1. 4 g Agar tripticasa soya
2. Micro - espátula
3. Matraz de Erlenmeyer de 250 ml
4. Balanza
5. Agua desmineralizada 100 ml
6. Algodón
7. Microondas
8. Aluminio
9. Autoclave
10.Cinta testigo para la esterilización

Preparación
Se lleva a la balanza un trozo de aluminio de alrededor de 5 cm por 5 cm, se utiliza la
tecla tare de la balanza y luego se agrega el agar utilizando la micro – espátula para
obtener los 4 g. Se vierte el agua en el matraz de Erlenmeyer, luego el agar de
tripticasa de soya, se disuelve en horno microondas, se tapa la boquilla del matraz
utilizando algodón y luego el aluminio. Se coloca una cinta testigo y se lleva a la
autoclave para su esterilización.

Materiales siembra
1. Placa Petri circular
2. Mechero bunsen
3. Marcador permanente
4. Hisopos de algodón

Preparación
Se marcan las placas Petri con el marcador permanente dividendo en cuatro
segmentos enumerados. Se vierten 4 mm del agar tripticasa de soya en dos placas
Petri, estando bajo mechero, para impedir posibles contaminaciones no deseadas; una
vez la solución se solidifica y se enfría, se procede a tomar las muestras.
Toma de Muestra
Se toman las muestras con un hisopo de algodón, y se frota cuidadosamente desde el
borde, en una de las divisiones de la placa Petri

Figura 1: Placa Petri con Agar Tripticasa Soya solidificado.

Se colectan ocho distintas muestras para la observación de bacterias, las
cuales fueron tomadas por medio de hisopos de algodón, los cuales fueron
frotados sobre las superficies escogidas y cuidadosamente traspasadas a una
de las divisiones de la placa Petri, estas son:
1. Un billete de 10.000 pesos chilenos
2. Un billete de 1.000 pesos chilenos
3. Superficie de un celular
4. Espacio interdigital
5. Cuero cabelludo
6. Interior de nariz
7. Comisura de labios
8. Debajo de la uña se dejan cultivar por unos días.

Materiales Frotis
1. Asa
2. Mechero
3. Placa Petri con cultivo de bacterias
4. Porta objeto
5. Agua destilada, filtrada y desmineralizada
6. Pipeta Pasteur
7. Marcador permanente
8. Horno
Frotis
Se marcan cada uno de los portaobjetos. Se esparce una gota de agua
destilada en el portaobjetos utilizando la pipeta Pasteur. Se esterilizada el asa
con una inclinación de 45° en el mechero, se pincha un lugar en la placa Petri y
se procede a tomar la muestra de una de las colonias de bacterias. Se esparce
en la gota de agua puesta en el portaobjeto, se lleva al horno a 50° C, para que
se seque completamente la gota de agua.
FigA. Toma de muestra utilizando un asa.

FigB. Siembra de la muestra en placa Petri circular.

Materiales Tinción Gram

1. Agua destilada
2. Cristal violeta al 1%
3. Solución de Lugol
4. Alcohol al 95%
5. Safranina
Tinción Gram
Las ocho muestras, en los portaobjetos, fueron expuestas a un grupo de
componentes que facilitarían la caracterización de las bacterias contenidas
como Gram positivas o Gram negativas, esto se llevó a cabo siguiendo las
siguientes instrucciones:
 Primero se coloreo la muestra con Cristal Violeta al 1% por 60
segundos, luego de estos segundos, se lavó el portaobjetos con
agua.

 Se coloreo nuevamente, esta vez con una solución de Gram o

Lugol por 60 segundos, nuevamente lavando la muestra al terminar
el minuto.

 Decoloración por medio de alcohol al 95% por 30 segundos, luego

se lavó con agua.

 Finalmente, se volvió a colorear, esta vez con Safranina por 10

segundos. Luego se hizo el ultimo lavado.
Se siguieron estos pasos debido a que, si la muestra contuvo bacterias Gram
positivas, los “poros” del peptidoglucano y su característica de ser compacta
mantendrían la coloración azul entregada por el Lugol, pero si estas fueran
Gram negativas, el peptidoglucano más “abierto” causaría que el alcohol
introducido descolorara esta bacteria, lo cual causaría que el color rojo dado
por la Safranina permaneciese.
 RESULTADOS:

Luego de los pasos listados anteriormente, las muestras ya teñidas se

observan con microscopios ópticos, con el objetivo x100 utilizando aceite de
inmersión.
De distintas muestras realizamos un cultivo y de esas salieron colonias
bacterianas, existen 2 grandes grupos de bacterias las gram+,gram-, con la
tinción. Podemos diferenciarlas este complejo es retenido por las bacterias
grampositivas resistiendo la decoloración. Las gramnegativas, sin embargo,
son más permeables al alcohol por su alto contenido lipídico y esto permite que
el complejo coloreado sea arrastrado. Así las grampositivas conservan el color
inicial del complejo y se observan de color violeta, mientras que las gram- se
decoloran y aceptan el colorante de contraste observándose de color rosado.
después de todo este proceso colocamos en un portaobjeto agregamos aceite
de inmersión sobre el porta a través del microscopio se observa a 100X. Para
poder diferenciar e identificar al tipo de microorganismo.

Fig1. Muestra de superficie de Billete de mil pesos Fig2. Muestra de superficie de Billete de mil pesos (zoom digital)

En esta muestra, al identificar el tipo de microorganismo, se observa una

masa muy grande de bacterias Gram(+). Respecto a su morfologia, por la
forma ovoide, se pueden observar cocos, y por las agrupaciones que
forman, se pueden identificar estreptococos y diplococos.

Fig3. Muestra de superficie de billete de diez mil Fig4. Muestra de superficie de billete de diez mil pesos (zoom digital)
pesos

En esta muestra al momento de identificar el tipo de microorganismo, se

pueden encontrar bacterias del tipo Gram(-) y entre ellas Gram(+). Respecto a
su morfología, por la forma que presentan se identifican como bacilos.
 Fig5. Muestra de superficie de Teléfono Fig6. Muestra de superficie de Teléfono (zoom digital)

En esta muestra al identificar el tipo de microorganismo, se observan gran

parte de Gram(+) y entre ellos Gram(-).Respecto a su morfología, la gran
mayoría por la forma cilíndrica parecieran pertenecer a los bacilos y por la
forma esférica diplococos. Sin embargo, por la forma de tinción, podríamos
decir que se trata de un microorganismo no bacteriano, como un hongo o
levadura.

Fig7. Muestra de superficie pantalla del teléfono Fig8. Muestra de superficie pantalla del teléfono (zoom digital)

En esta muestra al identificar el tipo de microorganismo, observamos bacterias

del tipo Gram(+) y Gram(-).Respecto a su morfología, que por un frotis no
adecuado, las colonias se apilaron encima, por lo tanto no podemos describir al
tipo de morfología que pertenece.
Fig9. Muestra del interior de la nariz Fig10. Muestra del interior de la nariz (zoom digital)

En esta muestra, al caracterizar los microorganismos, se observan tipos de

bacteria, que son en su mayoría Gram(+), habiendo algunas Gram(-) dispersas.
Respecto a la morfología, en las Gram positivas, se encuentran estreptococos
y algunos diplobacilos de gran tamaño. En cuanto a las Gram negativas, por la
manera en la que se aglomeran, se tratan de estafilococos.

Fig11. Muestra de superficie del cuero cabelludo Fig12. Muestra de superficie del cuero cabelludo (zoom digital)

En esta muestra al identificar el tipo de microorganimos se reconocen tipos de

bacteria en su totalidad Gram(+). Respecto a su morfología estos pertenecen a
los cocos: se pueden encontrar diplococos o en tétradas.
Fig13. Muestra de comisura de los labios Fig14. Muestra de comisura de los labios (zoom digital)

En esta muestra, al identificar el tipo de microorganismo se observan bacterias

del tipo Gram(+). Respecto a su morfología pertenecen a los cocos,
específicamente diplococos.

Fig16.Muestra del interior de las uñas Fig16.Muestra del interior de las uñas (zoom digital)

En esta muestra al observar los microorganismos, se identifican tipos de

bacteria Gram(+) y Gram(-).Respecto a su morfología, por la forma ovoide y la
manera en que se agrupan pertenecen a los diplococos.
CONCLUSIÓN
La caracterización de la microbiota normal es esencial para comprender la
influencia de microorganismos en la salud humana y su potencial papel en
enfermedades. Estas sesiones experimentales, brindaron una oportunidad de
inmersión en el mundo de la microbiota a través de técnicas de cultivo y
observación microscópica, permitiendo identificar y clasificar microorganismos
de diferentes superficies, según su forma y tipo de pared celular gracias a la
tinción Gram. A lo largo del proceso se adquirieron valiosos conocimientos
sobre la preparación de medios de cultivo, toma de muestras, cultivo, frotis,
tinción, manejo del microscopio óptico y caracterización microscópica, lo que
ayudó a comprender las complejidades del trabajo y desafíos asociados con el
estudio de la microbiología. Se enfrentaron dificultades como mala fijación de
las bacterias a la placa Petri (por haber quedado húmeda), mala fijación de las
bacterias al portaobjeto previo a la tinción (por no pasar por llama directa un
par de veces) y dificultad al observar las muestras por exceso de material
biológico al realizar el frotis (mucha densidad bacteriana). Lo anterior suma
experiencias necesarias para tener un mejor desempeño en el laboratorio
relacionado a la microbiología y también brinda conocimientos para saber el
qué y porqué de una dificultad cuando esta se presenta. Esto permitirá mejorar
la calidad del trabajo práctico en futuros proyectos y contribuirá a tener un
mejor control de las variables críticas, como las dificultades presentadas
anteriormente, así también como la rigurosidad para enfrentar contaminación o
calidad de las muestras.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Michael T. Madigan, John M. Martinko, Jack Parker. (2004). “BROCK,
Biologia de los Microorganismos”. Décima edición. Editorial Pearson
Prentice Hall: 102–110.
2. Bergey, David H.; Holt, John G.; Krieg, Noel R.; Sneath, Peter H. A.
(1994): “Bergey's manual of determinative bacteriology”. Lippincott Williams
& Wilkins, novena edición, 1994.
3. Bordenave G (2003). "Louis Pasteur (1822-1895)". “Microbes and Infection”:
553–560.
4. Chung KT, Liu JK (2017). “Pioneers in Microbiology: The Human Side of
Science”.
5. Keen EC (2012). "Felix d'Herelle and our microbial future". Future
Microbiology: 1337–1339.