Este documento describe los procedimientos para determinar los niveles de urea y creatinina en sangre. Se extrae sangre de un paciente y se separa el suero. Para medir la urea, el suero se mezcla con reactivos y se mide la absorción, usando esta para calcular la concentración de urea. Para medir la creatinina, el suero se desproteiniza y se mezcla con reactivos, midiendo la absorción para calcular la concentración. Los resultados se comparan con valores de referencia para evaluar el estado del paciente.
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Este documento describe los procedimientos para determinar los niveles de urea y creatinina en sangre. Se extrae sangre de un paciente y se separa el suero. Para medir la urea, el suero se mezcla con reactivos y se mide la absorción, usando esta para calcular la concentración de urea. Para medir la creatinina, el suero se desproteiniza y se mezcla con reactivos, midiendo la absorción para calcular la concentración. Los resultados se comparan con valores de referencia para evaluar el estado del paciente.
Este documento describe los procedimientos para determinar los niveles de urea y creatinina en sangre. Se extrae sangre de un paciente y se separa el suero. Para medir la urea, el suero se mezcla con reactivos y se mide la absorción, usando esta para calcular la concentración de urea. Para medir la creatinina, el suero se desproteiniza y se mezcla con reactivos, midiendo la absorción para calcular la concentración. Los resultados se comparan con valores de referencia para evaluar el estado del paciente.
Este documento describe los procedimientos para determinar los niveles de urea y creatinina en sangre. Se extrae sangre de un paciente y se separa el suero. Para medir la urea, el suero se mezcla con reactivos y se mide la absorción, usando esta para calcular la concentración de urea. Para medir la creatinina, el suero se desproteiniza y se mezcla con reactivos, midiendo la absorción para calcular la concentración. Los resultados se comparan con valores de referencia para evaluar el estado del paciente.
Reactivo B: solución concentrada de hipoclorito de sodio 10 mmol/l en hidróxido de sodio 0.1
mol/l
Reactivo C: ureasa ≥ 75 U/ml en solución glicerada.
Kit para Creatinina Wiener Lab.
Sol. Estándar: solución de creatinina = 20 mg/l.
Reactivo A: Ácido pícrico 41.4 mmol/l.
Reactivo B: Buffer glicina/NaOH 1mol/l.
III. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Determinación de Urea sérica.
La secuencia de reacciones que se emplean en esta determinación es la siguiente:
Ureasa Urea CO2 + NH3; pH NH3 + Salicilato + Hipoclorito Indofenol (verde) Alcalino 1) Extracción de muestras: previa limpieza de la zona con alcohol, se extraerá 5 cc de sangre de la flexura del codo con jeringa hipodérmica de 5 cc y aguja N° 20, de un paciente en ayunas.
2) Una vez obtenida la muestra, colocarla en un tubo de ensayo y dejarlas reposar
durante 10 minutos.
3) Terminado el reposo, contrapesar los tubos conteniendo las muestras y centrifugarlos a
3000 RPM durante 10 minutos.
4) Finalizado el centrifugado separar el suero para trabajar la determinación.
5) Para la determinación de úrea: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S
(estándar) y D (Desconocido), se debe colocar:
COMPONENTES TUBOS DE ENSAYO
B S D
Muestra (suero / ul) -- -- 10
Estándar (ul) -- 10 --
Reactivo A + C (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente
(18 a 25 °C). Luego agregar:
Reactivo B (ml) 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C o 10 minutos a temperatura ambiente
(18 a 25 °C). Leer en espectrofotómetro a 570 nm. dentro del plazo de una hora.
6) Cálculos de resultados:
Cálculo del factor:
𝟎. 𝟔𝟎 𝒈/𝒍 𝑭= 𝑺 Cálculo de la concentración de Urea.
Urea (g/l) = D x F
7) Interpretación de los resultados.
Valores Referenciales: 0.10 – 0.50 g/l
Determinación de Creatinina sérica.
La creatinina en medio alcalino reacciona con el ácido pícrico produciendo un cromógeno de
picrato de creatinina de color rojo (Reacción de Jaffé). La determinación se realiza en un filtrado de proteínas obtenido a partir del suero (desproteinizado). 1) Para la determinación de creatinina: En 3 tubos de ensayo marcados con B (Blanco), S (estándar) y D (Desconocido), se debe realizar lo siguiente:
Desproteinización del suero: Colocar en un tubo 0.4 ml de suero y agregar 2 ml
de Reactivo A. Mezclar por inversión. Dejar en reposo durante 10 minutos y luego centrifugar a 3000 rpm por cinco minutos. Transcurrido el tiempo armar el siguiente sistema:
COMPONENTES TUBOS DE ENSAYO
B S D
Desproteinizado (ml) -- -- 1.5
Estándar (ml) -- 0.25 --
Agua Destilada (ml) 0.5 0.25 --
Reactivo A (ml) 1.0 1.0 --
Reactivo B (ml) 0.25 0.25 0.25
Mezclar por inversión. Incubar 20 minutos a temperatura ambiente. Luego leer
en espectrofotómetro a 510 nm, llevando a cero el aparato con agua destilada.
2) Cálculos de resultados: Corregir las lecturas S y D restándoles el blanco (B).
Cálculo del factor:
𝟐𝟎 𝒎𝒈/𝒍 𝑭= 𝑺 Cálculo de la concentración de Creatinina.
Creatinina (mg/l) = D x F
3) Interpretación de los resultados.
Valores Referenciales:
● Suero = 8 a 14 mg/l
IV. CONCLUSIONES
El estudiante debe plantear las conclusiones, en base al análisis de los resultados obtenidos en el desarrollo de la práctica de laboratorio.
La conclusión es una afirmación en respuesta a los objetivos.
