INSTRUCTIVO PARA LA PRACTICA 09

“PRUEBA MOLECULAR DE APOYO AL DIAGNÓSTICOCITO: HIBRIDACIÓN IN SITU

FLUORESCENTE (FISH)”
INTRODUCCIÓN:
La citogenética es el estudio de cromosomas, en cuanto a estructura y número, incluso sus
implicancias en la vida del hombre si es que sucediera una alteración en ellos; por tanto, con la
evolución tecnológica en apoyo al diagnóstico se puede elaborar mapas genéticos que nos
servirá de guía en un tratamiento específico, ya que, encontramos información detallada a
nivel cromosómico (Herrera, 2007).

Con el avance tecnológico en la citogenética, nos comenta Herrera (2007), en su investigación

lo siguiente:

Quince años debieron pasar antes que las llamadas “tecnologías del ADN” hicieran irrupción en
el área de la citogenética, dando comienzo a una revolución sin precedentes en el
conocimiento de la ultraestructura y el funcionamiento de los cromosomas. Como producto de
ello nació la citogenética molecular, una disciplina que podría definirse como la fusión entre la
citogenética clásica y la biología molecular. En forma general, agrupa un conjunto de técnicas
que aplican diferentes métodos de la biología molecular directamente sobre preparaciones
citológicas tales como tejidos, células, cromosomas y fibras de ADN. (p. 27)

Otros investigadores nos comentan que:

FISH o Hibridación in situ Fluorescente es una técnica que detecta secuencias de ácidos
nucleicos en células o tejidos preservados mediante el empleo de una sonda marcada con un
fluorocromo, la cual va dirigida hacia un lugar específico del cromosoma y que emite
florescencia que puede ser observada por medio de un microscopio. La técnica de hibridación
in situ se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para hibridarse entre sí,
es decir, la existencia de determinada secuencia de ADN o ARN, que resulta complementaria
con otra secuencia a través de puentes de hidrógeno formados entre las bases adeninatimina
(DNA) o uracilo (RNA) y citosina-guanina (DNA y RNA). (Rodríguez y Suescún, 2013, p. 328).
 Instrucciones: Lea el siguiente caso clínico y resuelva las preguntas del cuestionario

Caso clínico-práctico
Un niño de 2 años de edad sin antecedentes patológicos de importancia presentó, 2 meses
antes del diagnóstico, astenia, dolor óseo generalizado y pérdida de apetito; al examen físico,
presentó palidez y aumento de las dimensiones del bazo. El hemograma reportó anemia
microcítica (hemoglobina de 11,7 g/dl), hiperleucocitosis (80,8 x109/L) y trombocitosis
(721x109/L). El frotis de la sangre periférica evidenció eritrocitos maduros microcíticos e
hipocrómicos, neutrofilia asociada a basofilia y blastos (1%). El estudio de biopsia
osteomedular reflejó una marcada hiperplasia mieloide (100% de celularidad); megacariocitos
aumentados en número con frecuentes formas pequeñas monolobuladas y blastos menos del
3% de la población total.

El estudio de FISH (Fluorescent In Situ Hybridization) reportó 46, XY, t(9;22) (q34;q11.2) con el
gen de fusión BCRABL1. El test de RT-PCR (Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction)
para BCR-ABL1 fue positivo. Todos los datos obtenidos confirmaron el diagnóstico de Leucemia
Mieloide Crónica en fase crónica.

El paciente inició tratamiento ambulatorio con mesilato de imatinib 200 mg/día en agosto de
2010; posteriormente, los estudios de enfermedad mínima residual por RTPCR para BCR-ABL1
fueron negativos desde el enero 2012 hasta marzo del 2015. (Amaru, et. al, 2016, p. 57)
 Cuestionario:
1. ¿Qué es la citogenética molecular?
 La citogenética es una rama de la genética que
estudia el material genético de las células, es
decir, el análisis de las propiedades del ADN,
que se condensa durante la división celular y la
formación de cromosomas. La hibridación in situ
de sondas fluorescentes (FISH) o las técnicas de
bandeo a cromosomas (clásicas) se han utilizado
para estudiar el número y la morfología de los
cromosomas. El número y la conformación de
los cromosomas en las células de una especie en
particular permanece constante en la mayoría
de las células de este organismo.
2. Defina la técnica FISH
 La técnica de FISH se la puede definir como la
técnica principal en la citogenética molecular,
esta prueba se lleva a cabo mediante una sonda
la cual ha sido previamente marcada
específicamente con algún fluorocromo híbrida
en una región del genoma humano. Gracias a
esto en una meta fase vamos a poder detectar
si una región está presente o no gracias a la
detección de fluorescencia, la cual puede llegar
a revelar dos pequeñas señales
correspondientes a cada una de las dos
cromátidas pertenecientes a un cromosoma, o
sea en el caso una señal más grande.
3. Pasos para le técnica de FISH
 Incluye cuatro pasos:
I) Fijación y permeabilización de la muestra.
II) Hibridación.
III) Lavado.
IV) La detección de las células marcadas a
través del microscopio de EPI fluorescencia o
con focal.
4. ¿La técnica FISH permite el estudio de la
expresión del ARN? ¿Por qué?
 Esta técnica molecular permite la detección de ácidos nucleicos en las células porque el FISH de
ADN se utiliza a menudo en la citogenética y el diagnóstico del cáncer, y puede detectar
aberraciones del genoma, que a menudo tiene importantes implicaciones clínicas. El ARN FISH se
puede usar para detectar moléculas de ARN en las células y que se ha proporcionado información
relevante en la regulación de la expresión génica. La combinación de ADN y ARN FISH dentro de la
misma célula es técnicamente difícil, ya que las condiciones adecuadas para el ADN podrían ser
demasiado fuertes para moléculas de ARN de cadena simple frágiles. La importancia de FISH radica
 en la capacidad que tiene la sonda de ADN de detectar una región específica del ácido nucleico de
la célula microbiana y ser visualizada por microscopía.
5. ¿La técnica FISH solo nos permite analizar cromosomas en metafase?
 La técnica de Fish también permite observar cromosomas en metafase o en interfase.
Recordemos que los cromosomas de manera individual no son visibles en el núcleo
celular, por lo que al analizarlos con la técnica FISH en metafase, estos se van a condensar
y posteriormente se pueden distinguir de forma individual. A diferencia de la técnica Fish
en metafase, la técnica en interfase permite visualizar a los cromosomas no
individualizados, sirviendo esto para poder detectar en el cariotipo aneuploidías.
6. ¿Cuál es la diferencia entre la hibridación cromogénica in situ (CISH) y FISH?
 Por un lado, la técnica CISH emplea sondas de ADN marcadas con digoxigenina en el locus del gen
Her2 del cromosoma 17q para poder hibridar con los ácidos nucleicos complementarios. Así mismo
también permite evaluar a las aberraciones genéticas bajo un microscopio de luz mediante
detección cromogénica, aunque los resultados pueden coincidir Fish.
Con Fish, refiere a preparar cortas secuencias de ADN de una sola hebra, denominadas sondas,
complementarias de las secuencias de ADN a estudiar. Realizada sobre cortes de extensiones
citológicas y se observa la fluorescencia al microscopio de EPI fluorescencia con filtros específicos.
Permite detectar al tiempo cambios cromosómicos numéricos y estructurales en un locus
específico. Esta técnica utiliza moléculas fluorescentes, fluorocromos, para localizar genes o
fragmentos de DNA
7. Interprete la figura 1
 Se puede observar al cromosoma filadelfia el cual está incorporado en las células de la
médula ósea, presentándose en la leucemia mieloide crónica. Primero, se produce una
anomalía cromosómica. Donde una sección del cromosoma 9 intercambia lugares con una
sección del cromosoma 22, siendo esto una translocación; lo que da lugar a un
cromosoma 22 extra corto (cromosoma de Filadelfia) y un cromosoma 9 extralargo.

Referencias bibliográficas:
Amaru, A., Peñaloza, R., Miguez, H., Patón, D., Oropeza, M. y Amaru, R. (2016). Leucemia
mieloide crónica en niño de 2 años. reporte de caso. Revista Médica La Paz, 22(1), 55-
58.http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1726-
89582016000100009&lng=es&tlng=es.

Herrera, J. C. (2007). La citogenética molecular y su aplicación en el estudio de los genomas

vegetales. Agronomía Colombiana, 25(1), 26-35. https://search.proquest.com/scholarly-
journals/la-citogenética-molecular-y-suaplicación-en-el/docview/1677586702/se-2?
accountid=37408

Rodríguez, R. y Suescún, O. (2013). Aplicaciones e inconvenientes de la técnica hibridación in

situ fluorescente (FISH) en la identificación de microorganismos. Salud Uninorte, 29(2)
https://search.proquest.com/scholarly-journals/aplicaciones-einconvenientes-de-la-tecnica/
docview/1464952583/se-2?accountid=3740