PROGRAMA DE FORMACIÓN

TÉCNICO EN ALISTAMIENTO DE LABORATORIOS DE MICROBIOLOGÍA Y

BIOTECNOLOGÍA

PRÁCTICA DE LABORATORIO MANEJO DE MATERIAL Y TÉCNICAS BÁSICAS DE

LABORATORIO

Objetivo:

Desarrollar habilidades para el manejo adecuado de equipos, sustancias, reactivos y material de laboratorio.

Introducción:

El trabajo en laboratorio exige una correcta manipulación y operación de los materiales, equipos, sustancias
y reactivos químicos a fin de obtener el menor error posible en los procedimientos. De esta forma se
garantiza la validez de los resultados obtenidos. La medición está relacionada con una correcta observación
de los instrumentos y la habilidad que se tenga con el manejo de estos. Con la práctica, estas dos se pueden
ir perfeccionando, haciendo que los errores de operación disminuyan.

Parte II: Manejo de material, equipos y técnicas básicas de laboratorio

Medición de Peso - Técnica de Pesaje

1. Manejo de la Balanza: Uso de la balanza, concepto de tara y calibración

2. Pesaje de sustancias: Pesar las sustancias y otros objetos en los dos tipos de balanza con la
finalidad de corroborar las mediciones hechas en los dos tipos.

2.1. Verificar la ubicación y nivelación de la balanza

2.2. Encender el equipo
2.3. Verificar la calibración de la balanza (periódicamente)
2.4. Programar la unidad de peso de interés
2.5. En el caso de la Balanza analítica, abrir la cabina cortacorrientes
2.6. Una vez el display muestre el valor 0 estable, Colocar el vidrio de reloj sobre el plato de pesaje
2.7. Observar en el display el cambio de los datos del peso obtenido
2.8. Tarar el peso del vidrio de reloj
2.9. Una vez el display muestre el valor 0 estable, proceda a pesar la sustancia o el objeto de interés

En la balanza gramera pesar:

 NaCl 5 g – 0.8 g
 Sacarosa 2.5 g – 0.55 g
 Suelo 10 g
 Moneda de $50 1.9990
 Moneda de $100 3.3364
 Moneda de $200 4.6042
 Moneda de $500 7.2185
 Moneda de $1000 __________________

En la balanza analítica pesar:

 Carbonato de Calcio 1 g – 0.2 g - 0.0025g – 1 mg – 0.5 mg
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2.10. Analice los pesos medidos en la balanza gramera y en la balanza analítica, ¿Cuál es su
conclusión?
R.T.A: La balanza analítica es mucho más exacta que la balanza gramera aunque se demora un poco
en tomar el dato exacto del peso

Medición de Volumen

1. Manejo del material de Medición de Volumen: Material Volumétrico, Material Aforado, nivel de
volumen (Menisco o aforo)

2. Medición de Volumen: Usando material volumétrico y aforado y determinar la precisión o

exactitud de la medición.

2.1. Tomar una probeta de 100 ml, una de 500 ml y una de 1000 ml, en cada una agregar 100 ml de
agua destilada y pasar los 100 ml medidos en cada probeta a un balón aforado de 100 ml.
Determinar si en cada medición el aforo del volumen es exacto o no y calcular el error de la
medición, en caso de presentarse, midiendo el volumen de líquido sobrante o faltante en cada
caso.
2.2. Tomar un Vaso de Precipitado de 1000 ml agregar 250 ml de agua, luego transferirlos a un
Erlenmeyer de 500 ml y finalmente transferirlos a una Probeta de 500 ml. Determinar si en
cada medición el aforo del volumen es exacto o no y calcular el error de la medición midiendo
el volumen de líquido sobrante o faltante en cada caso.

2.3. Presentar los resultados en la siguiente tabla:

Material de vidrio Material de vidrio Volumen Volumen Volumen

medición inicial medición final medido sobrante faltante
Probeta 100 ml Balón aforado 100 ml 3 ml
100 ml
Probeta 500 ml Balón aforado 100 ml 3 ml
100 ml
Probeta 1000 ml Balón aforado 100 ml 4.6ml
100 ml
Vaso precipitado 600 Erlenmeyer 500 250 ml 1.5 ml
ml ml
Erlenmeyer Probeta 250 ml 5 ml
500 ml 500 ml

2.4. Tomar una pipeta de 10 ml y medir 10 ml, 7.5 ml, 5 ml, 2.5 ml de agua.
2.5. Tomar una pipeta de 5 ml y medir 5 ml, 3.5 ml, 1 ml y 0.5 ml de agua.
2.6. Tomar una pipeta de 2 ml y medir 2 ml, 1.3 ml y 0.8 ml de agua.
2.7. Tomar una pipeta de 1 ml y medir 1 ml, 0.9 ml, 0.8 ml, 0.7 ml, 0.6 ml, 0.5 ml, 0.4 ml, 0.3 ml, 0,2
ml y 0.1 ml de agua.
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2.8. Con una transfer pipeta de 1000 µl medir 725 µl, 480 µl, y 150 µl de agua.
2.9. Con una transfer pipeta de 100 µl medir 80 µl, 50 µl y 25 µl de agua.

Medición de Temperatura

1. Manejo del Termómetro: Escala, nivel de mercurio, lectura de la Temperatura

2. Medición de la Temperatura: Uso del termómetro.

2.1. En una plancha de calentamiento a 300 ºC colocar un vaso de precipitado de 1000 ml con 500
ml de agua, con un termómetro de mercurio medir la temperatura inicial y luego medirla en
intervalos de 10 minutos durante 30 minutos.

2.2. Registrar las mediciones en la siguiente tabla:

Intervalo de tiempo Temperatura del agua

0 20 grados
10 min 55 grados
20 min 80 grados
30 min 86 grados

Medición de pH

1. Manejo del pHmetro: Uso del equipo concepto de calibración, escala de pH

2. Medición del pH: Medir el pH de diferentes soluciones y determinar si son ácidas, neutras o
alcalinas

2.1. Verificar la ubicación y nivelación del pHmetro

2.2. Encender el equipo
2.3. Verificar la calibración del phmetro
2.4. Una vez el display muestre el valor estable, proceda a medir el pH de la sustancia
2.5. Una vez estabilice el valor tome registro del pH obtenido
2.6. Lave con agua destilada el electrodo y procesa a medir el pH de la siguiente sustancia

2.7. Registrar los resultados en la siguiente tabla:

Sustancia Valor de pH Tipo de Sustancia

Agua 7.25 neutra
Agua + Sal 7.35 alcalina
Agua + Azúcar 7.65 alcalina
Agua + nitrato de amonio 6.62 acido
Agua + suelo filtrado 6.88 acido
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Separación de sustancias

1. Manejo del Material: Montaje, Papel Filtro, concepto de porosidad, retención

2. Proceso de Filtración por gravedad: Separación de las partículas sólidas de un líquido

2.1. Preparar una suspensión de 100 ml agua + 10 g de carbón activado

2.2. Pesar el papel filtro y registrar el valor obtenido
2.3. Colocar el papel de filtro dentro del embudo y situar el embudo sobre el frasco de 500 ml.
2.4. Verter lentamente la suspensión preparada sobre el filtro, tener cuidado de que no se derrame
el contenido.
2.5. Describir el material filtrado respecto a cómo se observaba la suspensión antes de filtrarla.
2.6. Determinar la cantidad de material retenido mediante la diferencia de medición del peso del
papel filtro limpio y el papel filtro utilizado y a su vez, calcular si la cantidad de material
retenido corresponde a la cantidad de carbón activado inicial mediante la diferencia de la
cantidad de carbón activado pesado inicialmente respecto al material retenido.

2.7. Registrar los datos obtenidos en la siguiente tabla:

Muestra Observación del Peso papel Peso papel Diferencia del material
filtrado filtro limpio filtro usado retenido con relación a la
cantidad de carbón
activado inicial
10 Proceso que 3.1532 21.2450 18.0918
gramos toma tiempo
mientras el
agua es filtrada
en el papel filtro
quedara la
parte gruesa o
granulada de la
muestra
mientras el
agua toma la
coloración de la
muestra

Destilación de agua
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1. Manejo del destilador

1. Generador de vapor: También se le conoce como tanque de ebullición. Este componente es el

recipiente en el cual se almacena el agua que va a ser destilada. Por lo general, dispone de una
acometida hidráulica que permite reponer el agua que se evapora y destila. Se fabrica
generalmente en vidrio en pequeños destiladores o en acero inoxidable, cobre recubierto con
estaño o titanio en máquinas de gran capacidad. Puede disponer de controles de nivel, flujo y
calidad del agua de alimentación, que protegen el destilador en caso de que se presente alguna
irregularidad en el suministro de agua. Como fuente de energía se utiliza el vapor de agua
proveniente de una caldera o generador de vapor, o la energía térmica generada mediante
resistencias eléctricas de inmersión, que transmiten, mediante conducción directa, energía térmica
al agua. Esto hace que la temperatura del agua aumente, hasta que, a condiciones normales
(presión atmosférica igual a una atmósfera, y aceleración de la gravedad igual a 9,80665 m/s2), el
agua en fase líquida se transforma en agua en fase vapor a 100 °C.
2. Nivel de agua: Es un dispositivo que permite regular la cantidad de agua dentro del generador de
vapor. Se encuentra conectado directamente a la acometida que suministra el agua que utiliza el
destilador. Cuando la cantidad de agua en fase líquida contenida en el tanque de ebullición
disminuye, el dispositivo permite recuperar la cantidad de líquido que se ha evaporado.
3. Válvula de control: Es un dispositivo mecánico o electromecánico que permite regular el flujo de
agua hacia el tanque del generador de vapor.
4. Acometida hidráulica: Es la red que suministra el agua en fase líquida al tanque del generador de
vapor.
5. Agua en fase líquida: Es el agua que se encuentra dentro del tanque del generador de vapor.
Recibe la energía térmica que transfieren las resistencias de inmersión y se convierte a fase vapor,
cuando se cumplen las condiciones de presión y temperatura requeridas.
6. Resistencias de inmersión: Son dispositivos que generan calor cuando a través de los mismos
circula una corriente eléctrica. Se encuentran aisladas por una capa de cerámica y protegidas del
ambiente externo por una coraza metálica.
7. Salida del agua de refrigeración: Es la línea que conduce el agua que se ha utilizado para
condensar el vapor de agua, retirando al mismo energía térmica.
8. Condensador: Es un dispositivo en el cual el vapor pierde energía térmica, se enfría y vuelve a la
fase líquida. Para acelerar el proceso se utilizan métodos de convección forzada, mediante la
circulación de fluidos –aire o agua– a baja temperatura alrededor del conducto, a través del cual
fluye el vapor.
9. Filtro: Los destiladores disponen de filtros de carbón activado que se colocan a la salida del
condensador o a la salida del colector, con el fin de eliminar sabores o partículas que pudieran estar
presentes en el vapor que se condensa.
10. Depósito de agua destilada: Es un dispositivo en el cual se recolecta el fluido que se ha sometido
al proceso de destilación. El agua destilada debe almacenarse en recipientes especiales fabricados
principalmente en materiales plásticos, para evitar que se presente contaminación iónica. Se
utilizan para el efecto recipientes de polietileno, polipropileno o politetrafluoruroetileno2.

2. Proceso de destilación de agua

2.1. Verifique las conexiones eléctricas e hidráulicas del equipo antes de encenderlo
2.2. Encienda el destilador
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2.3. Verifique el nivel de agua

2.4. Verifique el recipiente de recolección de agua destilada
2.5. Una vez se haya destilado la cantidad de agua requerida, apague el destilador

Esterilización

1. Manejo del Autoclave: Esterilización de material contaminado, medios de cultivo y líquidos

termoestables. El calor en forma de vapor saturado a presión proporciona temperaturas mayores
que la de ebullición.

Figura 1. Esquema de un autoclave automático

2. Esterilización de Material

1.1. Poner agua destilada en el autoclave.

1.2. Disponer el material a esterilizar (Pipetas, cajas de Petri previamente envueltas en papel kraft)
sobre la plataforma evitando amontonamiento. Los frascos deben estar con la tapa floja
1.3. Cerrar y asegurar la puerta del autoclave.
1.4. Verificar que la llave de salida se encuentre abierta.
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1.5. Encender y programar el autoclave.

1.6. Verificar las condiciones de esterilización durante el proceso: La esterilización en autoclave emplea
vapor saturado a 15 lb de presión cuya temperatura es de 121ºC, por 15 minutos contados a partir
del momento en que el material alcance los 121ºC
1.7. Una vez cumplido el ciclo de esterilización esperar a que el autoclave se apague
1.8. Cuando la temperatura o presión haya descendido, abrir el autoclave. Los materiales salen
húmedos por el contacto con el vapor. Aquellos que estén envueltos en papel deberán secarse en
la estufa, ya que el papel mojado es muy fácil de romper y el material se contaminaría nuevamente.

ACTIVIDAD DE ANÁLISIS:

1. Escriba las diferencias que encontró al realizar el pesaje de sustancias en los dos tipos de balanza
R.T.A: Una balanza es más precisa que la otra pero así mismo se demora más tiempo en tomar el
peso exacto
2. De acuerdo con los conceptos de Precisión y Exactitud, determine en qué tipo de balanza y en qué
tipo de material de medición de volumen se obtiene una medición exacta o una medición precisa
R.T.A: La balanza más exacta es la balanza analítica y en el material se obtiene mejor precisión en
los granulados ya que por el tamaño es un poco más fácil tomar la cantidad necesaria y si se pasa
de la cantidad es más fácil retirar parte de los granulados
3. ¿Cómo influye la temperatura de una solución en el pH de la misma?
R.T.A: Al cambiar la temperatura dela solución cambia el pH del
4. Teniendo en cuenta la escala de pH, determine si las sustancias medidas son ácidas, alcalinas o
neutras
R.T.A: Agua sola: neutra, agua + sal: alcalina, agua + azúcar: alcalina, agua + nitrato de amonio:
acida, agua + suelo filtrado: acida
5. ¿Se puede afirmar que el proceso de filtración genera cambios significativos en la calidad de la
muestra filtrada? ¿Por qué?
6. En relación a la cantidad de suelo utilizado para preparar la muestra filtrada ¿Se recuperó la misma
o menor cantidad de material retenido? Si se obtuvo menor cantidad ¿Que cree que sucedió con el
material faltante?
R.T.A: No se recuperó la misma cantidad de material ya que parte del material pasó a ser parte del
agua filtrada y en el papel filtro solo quedan las partes más gruesas que no se lograron filtrar
7. ¿Respecto a un proceso de limpieza y desinfección se puede esperar que la carga contaminante
disminuya considerablemente, no disminuya o sea eliminada totalmente? ¿Por qué?
8. ¿De acuerdo con los resultados obtenidos al lavar y desinfectar las manos se puede decir que el
proceso de limpieza y desinfección fue eficaz? ¿Porque?
9. ¿Cómo se puede establecer que el proceso de desinfección fue eficaz?
10. Investigue como se realiza el control del proceso de esterilización para garantizar su eficacia
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INFORME DE LABORATORIO

Presente el informe de laboratorio correspondiente a la práctica de laboratorio desarrollada. Debe contener

Título, Introducción, Objetivos, Materiales y Métodos, Resultados y Discusión, Conclusiones y Bibliografía.