PRESENTACIÓN

El Manual de Microbiología –
Parasitología, se elaboró con la finalidad de
proporcionar un material ordenado y de fácil acceso al
trabajo académico, el cual se complementa con la actividad
científica en el laboratorio .

Actualmente, toda carrera profesional que esté

relacionada con el campo de la salud humana, debe contar con un
Manual de Prácticas de Microbiología, tal como los
estudiantes de Biología , Enfermería , Farmacia y
Bioquímica , Odontología , etc. Es por esta
razón que me di a la tarea de elaborar un manual que
satisfaga las necesidades del estudiantado, quienes deben
complementar el aspecto teórico, llevado en el aula, con
la actividad científica desarrollada en el laboratorio de
tal forma que se facilite el trabajo ordenado y uniforme en todos
los niveles de pre grado.

El Manual consta de dieciocho prácticas y fue

elaborado tomando en cuenta las referencias bibliográficas
que se mencionan en los diferentes currículos
académicos de la Universidad Nacional de "San Luís
Gonzaga" de Ica, para la asignatura de
Microbiología.

La elaboración del Manual se realizó en

varias etapas mediante la recopilación de
prácticas. Cada práctica inicia con el
título en la parte central el cual se seleccionó de
acuerdo a la dosificación del programa por semana. El
objetivo hace referencia al aspecto significativo que se pretende
que los alumnos logren al final del experimento. La
introducción es la parte teórica de cada una de las
prácticas, fue tomada de diversas referencias
bibliográficas. En la parte experimental el procedimiento
se tomó de diversos manuales de otras Universidades y de
la misma Universidad de Ica. El cuestionario en el que el alumno
demuestra su aprovechamiento logrado al final de la secuencia de
aprendizaje se elaboró basado en el aspecto introductorio
y resultados experimentales que se esperan de cada
práctica. Así mismo, se complementa con
observaciones que el alumno realizará mediante dibujos o
esquemas y finalizará con conclusiones personales del
mismo.Los autores

RECOMENDACIONES GENERALES
1. La hora de entrada al laboratorio tendrá 10
minutos de tolerancia , después de este tiempo , no se te
permitirá el acceso a dicho ambiente .

2. Al entrar al laboratorio, deberás ponerte la

bata y abotonarla completamente, sólo podrás
quitártela al salir de éste.

3. Las mesas deberán estar siempre limpias y

desocupadas, tu mochila debe ser colocada en el lugar indicado
por el profesor .

4. Terminantemente prohibido comer ni fumar en el

laboratorio, no debes introducirte ningún objeto a la
boca.

5. Para las señoritas, recógete el pelo

para efectuar el trabajo de laboratorio.

6. Limpia y desinfecta el área de trabajo antes y

después de usarlo.

7. No pasees entre las mesas del laboratorio, el trabajo

debes efectuarlo sentado y en tu equipo de trabajo.

8. Días antes de iniciar la práctica lee

cuidadosamente que es lo que se va a realizar, si no entiendes
pregunta al profesor.

9. Si hay necesidad de llevar material biológico

para la realización de la práctica, es necesario
que lo consigas, de lo contrario la práctica se
suspenderá para todo el equipo.

10. Informa al profesor de cualquier accidente que

ocurra.

11. En caso de derramar material que contenga

microorganismos, cúbrelo con fenol y deja actuar diez
minutos. Avisa al profesor.

12. Todo el material que vas a incubar o desechar, debes

colocarlo en el sitio indicado por el profesor.

13. Etiqueta todo el material que vas a incubar con los

siguientes datos : equipo, grupo, fecha y nombre del
material
14. Después de la incubación es necesario
la esterilización del material para eliminar
microorganismos que pudieran hacernos daño a nuestra
salud.

15. Lávate las manos con agua y jabón

antes de salir del laboratorio.

16. Es obligación de cada equipo entregar todo el

material limpio.

PRACTICA N°
01

RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO

OBJETIVO

Cada estudiante del curso de Microbiología debe

identificar y reconocer los materiales de laboratorio.

MATERIALES:

1. TUBOS DE ENSAYO : Son de vidrio , es empleado

para conservar microorganismos en medios de cultivo
líquido o sólido. Hay de diferentes formas y
capacidades, con borde o sin borde pero, lo que más
importa es su calidad termo resistente, es decir, su resistencia
al calentamiento y a los cambios bruscos de
temperatura .

2. PLACAS PETRI: Son materiales de vidrio que se

utiliza para aislar microorganismos provenientes de diversas
fuentes infecciosas.
3. PIPETAS: Son materiales de vidrio destinados a
medir volúmenes pequeños de medios de cultivo
líquidos u otras sustancias. Hay graduadas de 0.1 ml hasta
10 ml.

Pipetas graduadas con jeringa herméticamente

esmerilada

4. MATRAZ DE ERLENMEYER: Son recipientes de

vidrio en forma cónica que disponen una escala graduada y
permiten estimar o aproximar volúmenes de líquidos.
Se emplea para disolver medios de cultivos y conservarlos; los
hay de varias capacidades de 25 ml hasta 5 litros.

5. BALONES: Son recipientes de vidrio de fondo

plano (matraz Florencia), que sirve mayormente como contenedor,
tiene similar función que el matraz de
Erlenmeyer
6. MATRAZ DE KITASATO: Son recipientes de vidrio,
de forma cónica, similar al Erlenmeyer, con la diferencia
que en la parte del cuello posee un orificio lateral de salida.
Se emplea para realizar filtraciones al vacío.

7. PROBETAS: Son recipientes cilíndricos

graduados de vidrio grueso, con pico y con base para poderlos
parar. Se emplean para medir volúmenes de líquidos.
Hay de diferentes volúmenes, de 5 ml a 2 litros

8. BAGUETA: Llamadas también agitadores.

Son varillas sólidas de vidrio. El largo del agitador
está determinado por el tamaño y la forma del
recipiente en que se emplea, así en vasos de precipitados.
Sirven para homogenizar muestras y transportar pequeñas
cantidades de ella; agitar y trasvasar líquidos;
desprender partículas de precipitados adheridos al
recipiente que no se pueden sacar.

9. BEAKER: Son vasos de vidrio que se utilizan

para efectuar mezclas y titulaciones. Hay de diferentes
volúmenes, de 25 ml a 500 ml

10. JERINGAS Y AGUJAS HIPODERMICAS: son

materiales peligrosos que necesitan manejarse con
precaución para evitar la inyección accidental o a
generación de aerosoles durante las inoculaciones.
Generalmente, la utilización de las mismas debe
restringirse a los procedimientos para los que no existe una
alternativa. Las agujas no deben doblarse, romperse, guardarse en
la funda, o quitarlas de la jeringa después de su
uso.

11. PORTA Y CUBRE OBJETOS: Son de vidrio. El

porta objetos sirve para montar muestras de microorganismos, es
más grande y más grueso que el cubre objetos, ya
que éste sirve para cubrir las muestras montadas y
permitir una mejor visualización.

12. PIPETAS PARA RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS: Es

graduada a una dilución de 1/200. Es de vidrio con una
cápsula en la parte sub terminal que permite almacenar el
líquido diluyente en la sangre para una mezcla
adecuada.

13. CAMPANA DE BREWER: Son de vidrio pirex,

grueso y tienen mayor resistencia mecánica y
térmica. Se usa para mantener una ambiente carente de
oxígeno cuando se trabajan con bacterias exigentes. El
borde esmerilado debe estar ligeramente cubierto con vaselina
blanca o alguna grasa blanca especial, para conseguir un cierre
hermético al aire .
14. ASA DE KOLLE: Consiste de dos piezas: el
mango de Kolle y el asa, de bronce cromado y mango con bakelita.
Son de un material inoxidable. Sirve para tomar muestras y poder
realizar el cultivo en las placas petri.

15. MECHERO DE BUNSEN: Son aparatos para mantener

un ambiente de esterilidad cuando se trabajan con siembra de
microorganismos.

16. TRIPODE: Es de metal, construido de un anillo

circular apoyado en tres patas equidistantes, que son varilla
delgadas. Se utilizan para colocar sobre el la malla de asbesto
en una operación de calentamiento de cualquier matraces
con medios de cultivo.

17. GRADILLA: Es de metal o de madera . Es una

especie de escalerilla portátil y sencilla. Sirve para
portar a los tubos de ensayo durante un trabajo con
éstos.

18. GOTERO: Son tubos de vidrio cortos y

delgados, donde en uno de los extremos se adapta una perilla o
bombilla de goma y en el otro extremo se encuentra estrangulado.
Se emplea para la adición de pequeños
volúmenes (gotas) de colorantes en tinciones.

 EQUIPOS

1. AUTOCLAVE: Es un equipo cuyo uso se destina a

la esterilización de material para laboratorio. En la
parte superior hay un termómetro y un barómetro que
funciona: esterilización por aumento de la temperatura a
altas presiones.

2. INCUBADORA: Sirve para mantener en la

temperatura adecuada al cultivo de bacterias. Mantiene a una
temperatura de 37 a 34 °C
 PRACTICA Nº
02

MANEJO DEL MICROSCOPIO Y EL MUNDO MICROBIANO

OBJETIVO

El alumno reconocerá el microscopio compuesto,

identificará cada una de sus partes y lo manejará
correctamente observando la presencia de microorganismos en
muestras biológicas

MATERIAL

 Microscopio compuesto

 Porta y cubre objetos

 Palillo

 Hisopo
  Agua estancada

INTRODUCCION

El microscopio es el instrumento más

frecuentemente utilizado y el más útil en un
laboratorio de Microbiología, proporciona la
amplificación o agrandamiento que nos permite ver
organismos y estructuras invisibles a simple vista. Los
microscopios permiten una amplia gama de amplificaciones, desde
cien veces a cientos de miles de veces.

Las dos categorías de microscopios disponibles

son los microscopios ópticos y los microscopios
electrónicos. Los microscopios ópticos utilizan un
sistema de lentes ópticas y comprenden los microscopios de
campo claro, campo oscuro, fluorescencia y contraste de fases.
Los microscopios electrónicos emplean haces de electrones
en lugar de ondas de luz para producir una imagen
ampliada.

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO

ÓPTICO

 Colocar el objetivo de menor aumento en

posición de empleo y bajar la platina completamente.
Si el microscopio se recogió correctamente en el uso
anterior, ya debería estar en esas
condiciones.

 Colocar la preparación sobre la platina

sujetándola con las pinzas
metálicas.

 Comenzar la observación con el objetivo de 4x

(ya está en posición) o colocar el de 10
aumentos (10x) si la preparación es de
bacterias.

 Para realizar el enfoque:

 Acercar al máximo la lente del objetivo a la

preparación, empleando el tornillo
macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y
no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparación
pudiéndose dañar alguno de ellos o
ambos.
  Mirando, ahora sí, a través de los
oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se
observe algo nítido la muestra , girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

 Pasar al siguiente objetivo. La imagen

debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente
con mover un poco el micrométrico para lograr el
enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el
objetivo anterior y repetir la operación desde el paso
3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
preparación y por ello es fácil que ocurran dos
tipos de percances: incrustarlo en la preparación si
se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo con
aceite de inmersión si se observa una
preparación que ya se enfocó con el objetivo de
inmersión.

PROCEDIMIENTO

Técnicas de montaje
húmedo

La gota pendiente o las preparaciones húmedas

permiten examinar organismos vivos suspendidos en un fluido. Las
preparaciones húmedas se hacen colocando una gota del
fluido que contiene el organismo sobre una lámina de
vidrio y cubriéndola con una fina pieza de vidrio
(cubreobjetos): para reducir la tasa de evaporación y
eliminar corrientes de aire, generalmente se rodea la gota con
vaselina.

Cuando se examinan las preparaciones húmedas por

microscopía de campo claro, es importante ajustar la
fuente de luz de forma adecuada. Es posible disminuir la
intensidad de la luz mediante la utilización de filtros
especiales.

Utilizada para estudiar la movilidad de los

microorganismos

 En el centro de un portaobjetos coloca una gota de

agua estancada

 Con una laminilla cubre cuidadosamente dicha gota,

sin formar burbujas de aire
  Examina con objetivos de 10X y 40X.

CUESTIONARIO:

1. ¿Qué es poder de
resolución?

_________________________________________________________________________
___________

2. ¿Con qué finalidad se utiliza el

microscopio compuesto?

__________________________________________

3. ¿Cual es la importancia que tiene el diafragma

en el microscopio?

__________________________________________________________

4. ¿Qué diferencias hay entre el

microscopio óptico y electrónico?

________________________________________________________

5. ¿Que importancia tiene el estudiar y observar

los microorganismos en muestras biológicas
frescas?

__________________________________________________________

6. Escribe el nombre de cada una de las partes del

microscopio compuesto
OBSERVACIONES

Dibuja lo observado en los diferentes objetivos para

cada muestra que preparaste durante el experimento.
CONCLUSIONES:

_______________________________________________________________

Práctica Nº 02

Nombre del Alumno:______________________________

Grupo___________

Prof. de Laboratorio ______________________________

Calif:___________

PRÁCTICA
Nº 03

COLORACIONES BACTERIANAS: COLORACIÓN DE GRAM

OBJETIVO

El alumno aplicará una técnica de

coloración diferencial para la identificación de
bacterias Gram positivas y Gram negativas.

MATERIAL

 Asa de Kolle

 Microscopio

 Porta objetos

 Cultivo de Staphylococcus aureus

 Cultivos de Escherichia coli

 Cultivo de Candida albicans

  Aceite de inmersión

 Colorante cristal violeta

 Solución decolorante alcohol

acetona

 Colorante safranina

 Lugol para Gram

INTRODUCCIÓN

TINCION DE GRAM

Tinción empleada en microbiología para la

visualización de bacterias en muestras clínicas.
También se emplea como primer paso en la
diferenciación bacteriana. El examen con microscopio
óptico de preparación con tinción de Gram se
emplea de rutina para determinar la forma de las bacterias. Las
formas comunes son cocos, bacilos y formas espiraladas

Las bacterias pueden diferenciarse con esta

tinción en dos grupos . Los microorganismos Gram positivos
se tiñen de azul, mientras que aproximadamente un tercio
de los cocos, la mitad de los bacilos y todos los organismos
espiralados se tiñen de rojo y se dice que son Gram
negativos.

Las aplicaciones más comunes de la

coloración de Gram son las siguientes:

 La presencia de cocos Gram positivos agrupados

sugiere estafilococos; en cadenas sugiere estreptococos; en
forma de lanceta a los diplococos

 La presencia de diplococos Gram negativos son

características de especies de Neisseria

 Los bacilos Gram positivos grandes sugieren especies

de Bacillus o Clostridium, los bacilos Gram positivos
pequeños sugieren especies de Listeria o una de las
corineiformes (difteroides)

 Los bacilos Gram negativos son las bacterias

más comunes halladas en los laboratorios
clínicos e incluyen a Enterobacteriaceae, bacilos no
fermentados y especies de Haemophilus.
El valor diagnóstico de esta tinción es
variable; normalmente permite una buena orientación al
microbiólogo para seleccionar las técnicas de
cultivo más adecuadas y también tiene valor en
orientar hacia un diagnóstico etiológico, en
especial para instaurar un tratamiento inicial.

PROCEDIMIENTO

REALIZACIÓN DEL FROTIS

 Coloca una pequeña gota de agua en el centro

de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de
agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en
el extremo curvo de su filamento queda retenida una
mínima gota de agua, que resulta
suficiente.

 Flamea el asa de siembra y toma en condiciones

asépticas una pequeña cantidad del cultivo
bacteriano y transfiérelo a la gota de agua. Remueve
la mezcla con el asa de siembra hasta formar una
suspensión homogénea que quede bastante
extendida para facilitar su secado. Si la muestra se toma de
un cultivo en medio líquido, no es necesario que
realices los dos primeros pasos ya que basta con colocar y
extender una gota de la suspensión bacteriana, que se
toma con el asa de siembra, directamente sobre el
portaobjetos.

FIJACIÓN

 Acerca la lámina a la llama del mechero para

que la muestra se seque en forma paulatina. En este caso hay
que tener mucha precaución de no calentar demasiado la
lámina, pues las células pueden deformarse o
romperse.

COLORACIÓN

 Tiñe con cristal violeta, 1minuto.

 Lava con abundante agua el exceso de

colorante.

 Cubre con Lugol, 1 minuto.

 Lava con agua el exceso de Lugol.

  Decolora con alcohol-acetona o simplemente con
alcohol hasta que la preparación deje de perder color
(30seg)

 Lava con abundante agua para eliminar el resto de

disolvente.

 Tiñe con safranina 1 minuto.

 Lava con agua para eliminar el colorante de

contraste.

 Seca la preparación.

 Examina al microscopio con aceite de

inmersión y fijándote sobre todo en el color de
cada preparación.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un colorante?

________________________________________________________________

2. ¿Con qué finalidad se fija la muestra

de microorganismos en el porta objetos?

________________________________________________________________

3. ¿Qué tipos de coloraciones conoces,

describe brevemente
_________________________________________________________________________
__________________________________

4.- ¿Por qué es necesario emplear aceite

de inmersión para la observación de los
microorganismos?

_______________________________________________________________________

5. De los reactivos que utilizaste para la

tinción de Gram, ¿El cristal violeta a qué
estructuras de la bacteria colorea?

_________________________________________________________________________
____

6. ¿Por qué se dice que la

coloración Gram es de orientación?

__________________________________________________

7. Menciona tres bacterias Gram positivas y escribe la

enfermedad que causa cada una de ellas

_________________________________________________________________________
__________

8. Menciona tres bacterias Gram negativas y escribe la

enfermedad que causa cada una de ellas

__________________________________________________________________

OBSERVACIONES:

Realiza los dibujos y esquemas correspondientes a las

tinciones realizadas

CONCLUSIONES:

__________________________________________________________________

Práctica Nº 03

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio_______________________________
Calif:______
 PRÁCTICA
Nº 04

COLORACIÓN ÁCIDO-ALCOHOL RESISTENTE

OBJETIVO:

El alumno aplicará las técnicas de

coloración de microorganismos ácido-resistentes
para diferenciarlos e identificarlos, en base a sus propiedades
morfológicas

MATERIAL:

 Esputo de tuberculoso procesado en

autoclave.

 Fucsina fenicada de Ziehl- Neelsen

 Azul de metileno

 Alcohol acidulado

 Fenol al 5%

INTRODUCCIÓN

Los microorganismos pertenecientes al género

Mycobacterium se caracterizan por tener una pared celular
completamente diferente a las restantes bacterias. La pared de
las Mycobacterias posee un alto contenido de lípidos
(ácidos micólicos), que la hace impermeable a los
agentes hidrofílicos. Las Mycobacterias son teñidas
adecuadamente por el método de Ziehl-Neelsen
(Tinción Ácido-Rápida o Acid-Fast Stain) que
utiliza como solución decolorante una mezcla de etanol y
ácido clorhídrico. Son bacilos ácido-alcohol
resistentes (BAAR) por lo que la tinción de Ziehl-Neelsen
es útil para la coloración de estos microorganismos
obtenidos de muestras clínicas o de cultivo. Con esta
tinción, los bacilos aparecen de color rojo brillante
sobre un fondo azul. Los bacilos tuberculosos son
difíciles de teñir con la tinción de Gram, y
se observan como bacilos Gram positivos con tinción
irregular. Estos microorganismos una vez coloreados son
resistentes a la decoloración
ácido-alcohólica y por eso se denominan Bacilos
Ácido Alcohol Resistentes (BAAR)
El género Mycobacterium incluye
más de 100 especies que pueden clasificarse en seis grupos
desde el punto de vista bacteriológico, pero con fines
didácticos se dividen en tres apartados: Complejo
tuberculosis . Incluye las especies M. tuberculosis,
Mycobacterium bovis y Mycobacterium africanum,
productoras todas ellas de tuberculosis. Se incluye
también Mycobacterium microti, productor de
tuberculosis en rata. Complejo lepra, en el que se incluyen las
especies M. leprae, productor de la lepra humana y
Mycobacterium lepraemurium, que produce lepra en
roedores. El Mycobacterium leprae que es un
parásito intracelular obligado que se multiplica
lentamente en células fagocitarias mononucleares como los
histiocitos de la piel y en las células de Shwan de los
nervios Otras Micobacterias, no comprendidas en los dos grupos
anteriores, sólo algunas de ellas suelen ser
patógenas, otras pueden ser patógenas oportunistas
y finalmente otras suelen ser saprofitas. Producen las
denominadas micobacteriosis las infecciones producidas por M.
avium, M. kansakii, M. fortuitum y M.
chelonei son consideradas oportunistas y no
tuberculosas

PROCEDIMIENTO

 Prepara un frotis del esputo, haciendo un delgado

extendido del material para su estudio y deja que se seque al
aire.

 Cubre la preparación con fucsina

fenicada

 Calienta la preparación en un mechero Bunsen

durante 5 minutos, no debe hervir. Si se evapora,
añade más fucsina para que no se seque en
ningún momento.

 Lava con agua el resto de colorante.

 Decolora con ácido-alcohol, hasta que

adquiera un tenue color rosa.

 Lava con agua para que no prosiga la

decoloración.

 Tiñe con azul de metileno por 1

minuto.
  Lava con agua el resto de colorante.

 Seca la preparación al medio

ambiente.

 Examina al microscopio con objetivo de

inmersión por 100 X (aceite)

 La tinción es positiva para bacilos rojos

contra un fondo azul claro

CUESTIONARIO

1. Describe las características

morfológicas del bacilo de la tuberculosis

_________________________________________________________________________
______

2. ¿Por qué el bacilo de Koch tiene mucha

resistencia a la desecación?

_____________________________________________________________

3. ¿Cuál es el protocolo de tratamiento

para un paciente con TBC?

_______________________________________________________________________

4. ¿En qué casos el médico solicita

el cultivo de esputo para el diagnóstico de una posible
TBC?

_______________________________________________________________________

5. ¿Cómo se hace el reporte de la

coloración Ziehl – Neelsen?

_____________________________________

OBSERVACIONES:

Haz un esquema de los pasos que realizaste durante la

realización de la práctica, así como el
dibujo de las bacterias bacilares observadas en el
microscopio.
CONCLUSIONES:

___________________________________________________________________

Práctica Nº 04

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio_______________________________
Calif:______

PRACTICA Nº
05

MEDIOS DE CULTIVO
OBJETIVO

 Conocer los medios de cultivo y la finalidad que

cumplen.

 Aplicar técnicas de siembre y observar la

variedad de microorganismos presentes en el medio
ambiente.

MATERIAL

 Placas con Agar nutritivo

 Placas con Agar Mac Conkey

 Placas con Agar Manitol Salado

 2 Mecheros
  caja de hisopos estériles sin
abrir

 toallas de papel

 cinta adhesiva

 marcador permanente o lápiz de

cera

 un desinfectante con 70% de solución de

alcohol, 10% de una solución blanqueadora,
jabón líquido Extran o alkox.

INTRODUCCIÓN

Uno de los sistemas más importantes para la

identificación de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los
microorganismos es el Medio de Cultivo. Para que las
bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado
de humedad y presión de oxígeno adecuado,
así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un
medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas
requieren nutrientes complejos similares en composición a
los líquidos orgánicos del cuerpo humano . Por eso,
la base de muchos medios de cultivo es una infusión de
extractos de carne y Peptona a la que se añadirán
otros ingredientes. El Agar es un elemento solidificante muy
empleado para la preparación de medios de cultivo. En los
diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales
de enriquecimiento como carbohidratos , suero, sangre completa,
bilis, etc. Los carbohidratos se adicionan por dos motivos
fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y
para detectar reacciones de fermentación de los
microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre
completa se añaden para promover el crecimiento de los
microorganismos menos resistentes.

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE

CULTIVO:

A) POR SU ASPECTO FISICO

Medios líquidos. Se emplean fundamentalmente
para:

 Cultivar los microorganismos y obtener grandes

cantidades de los mismos. La multiplicación bacteriana
en los medios de cultivos líquidos se manifiesta
generalmente por el enturbiamiento de éste;

 Estimular y promover la selección de

algún o algunos microorganismos e impedir que otros se
multipliquen.

 Identificar al microorganismo estudiado mediante

pruebas bioquímicas.

Medios semisólidos.- Se utilizan para

identificaciones bioquímicas y averiguar si el germen
estudiado es móvil. Los medios semisólidos tienen
una consistencia blanda. (0.5 gramos de agar por 100
ml)

Medios sólidos.- Se utilizan para obtener

colonias aisladas de microorganismos. En los medios de cultivos
sólidos la multiplicación bacteriana se manifiesta
por una formación macroscópica denominada colonia
bacteriana, que es el resultado de la multiplicación de
una sola célula bacteriana. (2 gramos por 100
ml)

B) POR SU FUNCION

I. Medios de cultivos comunes o básicos.

Se caracterizan por que el material nutritivo, permite el
crecimiento de diferentes especies de bacterias, constituyen la
base para la preparación de otros medios. Como ejemplo
pueden citarse el caldo nutritivo y el agar nutritivo.

II. Medios de cultivos especiales. Entre estos se

encuentran:

a) Medios enriquecidos. En general son los mismos medios

básicos a los que se les agrega una sustancia
enriquecedora como sangre, suero, etc. El uso está
orientado especialmente a obtener buen desarrollo de bacterias
exigentes, se utilizan en primera instancia en el aislamiento
bacteriano de productos patológicos. Los medios de este
tipo de uso más frecuente son: Agar sangre, Agar
chocolate.
b) Medios selectivos. Son medios que contienen
sustancias que impiden el crecimiento de algunas especies
microbianas y permiten el desarrollo de otras. Se incluyen en
este grupo el agar cristal violeta para el aislamiento de
bacterias Gram(-) y el agar telurito de potasio para el
aislamiento de bacterias Gram(+).

c) Medios de cultivos diferenciales. Se emplean para

demostrar alguna propiedad bioquímica de la bacteria como
degradación de carbohidratos, proteínas , etc.,
contienen indicadores de ácido base, redox o sustancias
que detectan cambios en el medio o en las características
típicas de las colonias. Entre los de uso más
corriente se encuentran: Agar fierro-triple-azúcar (TSI
agar) Medio de SIM.

d) Medios de transporte . Estos medios impiden que se

altere la proporción original de la flora microbiana en
los especimenes, es decir, que no permiten la
multiplicación de las bacterias manteniéndolos
viables.

Técnicas de siembra

La población microbiana existente en nuestro

entorno es grande y compleja. Cientos de especies microbianas
habitan normalmente en distintas partes de nuestro cuerpo,
incluidas la boca, el tracto intestinal y la piel. Al nacer, los
microbios inmediatamente empiezan a colonizar nuestros cuerpos,
así como a casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan
alrededor hasta que entran en contacto con una superficie que
ofrezca comida y resguardo. Se encuentran más
frecuentemente en la oscuridad, en objetos húmedos que a
menudo entran en contacto con la comida, la suciedad o la
vegetación . Las superficies del baño, los cepillos
para el cabello, los refrigeradores, los lavaplatos y las tablas
de cocina tienen a menudo muchos microbios. Las manijas y las
paredes tienen menos porque son pobres en nutrientes y
secos.

Un estudio adecuado de microorganismos que hay en este

hábitat requiere técnicas que permitan conocer y
ordenar la compleja población mixta o cultivo mixto,
separándole en sus distintas especies como cultivos puros.
Un cultivo puro consta de una población de células
derivadas todas ellas de una célula parental. El material
que se inocula sobre el medio se denomina inóculo mediante
alguna técnica. Durante la incubación a 37°C,
las células microbianas individuales se reproducen tan
rápidamente que en un lapso de 18 a 24 horas producen
colonias. Si dos células microbianas procedentes del
inóculo original quedan muy cerca una de otra sobre el
medio de Agar, la masa de células observables no
será un cultivo puro. La mayoría de los microbios
en nuestro cuerpo y otras superficies son inofensivas, pero
algunos son patógenos o causan enfermedad.

La siembra de microorganismos puede realizarse en medios

líquidos o en medios sólidos. En el primer caso,
para la inoculación se utilizará asa estéril
si el medio de partida es sólido, o pipeta estéril
(Pasteur o graduada) si es líquido. En el segundo caso,
cuando se parte de otro medio sólido, se utiliza el asa de
platino normal para siembra en placa o tubo inclinado y el asa
recta para siembra en picadura en tubos rectos o, en general,
cuando se quiere introducir el microorganismo en el seno del
medio de cultivo sólido; cuando el medio de partida es
líquido, se puede pasar al medio sólido con un asa
de platino calibrada, con la que se extiende la muestra
directamente, o con pipeta, depositando la muestra que luego se
extenderá sobre la placa con un asa de Digralsky o con una
varilla doblada.

PROCEDIMIENTO

En esta actividad escogerás un fomite (cualquier

objeto inanimado que pueda causar enfermedad en los organismos
por contener microorganismos como: la manija, el marco, el
control remoto de la televisión , una moneda). Este fomite
ayudará a confirmar la presencia de microbios y los
efectos de un desinfectante por medio del crecimiento de colonias
de bacterias en un medio de cultivo en placas de
Petri.

1. Si tienes el cabello largo, recógetelo para

mantenerlo lejos de las placas de Petri cuando estés
trabajando. Lava tus manos. Limpia tú área de
trabajo frotando suavemente, con la solución desinfectante
en una toalla de papel. Saca tus placas de Petri pero no las
abras hasta que se te indique.

2. Escoge un objeto del salón de laboratorio (la

manija, el marco, el control remoto de la televisión , una
moneda, etc.). Toma una placa de Petri sin abrir y con
tú lápiz de cera o marcador, divide la base de la
caja en cuatro secciones iguales. Escribe el nombre del objeto al
otro lado y designa las secciones de 1 hasta 4. Abre la caja de
hisopos de algodón y escoge uno con cuidado para no tocar
la punta. Limpia tu objeto escogido con todos los lados de la
punta del hisopo volteándolo y retorciendo el hisopo a
medida que lo mueves por la superficie del objeto.

3. Ahora abre la tapa de la placa y suavemente

haz cuatro siembras sobre la superficie del medio de cultivo como
se muestra en la ilustración , empezando en la
sección designada "1" y continuando en el orden de las
secciones, de manera que la última siembra esté en
la sección 4. Presiona firme pero suavemente y no repitas
las siembras anteriores. Tus siembras sólo deben dejar una
impresión muy ligera en el Agar. Cierra la placa. No
cubras la caja con cinta o no podrás verla
bien.

4. Divide una segunda caja de Petri en 4 secciones

numeradas de 1 hasta 4 y desígnala "Control."
Limpia la mitad del objeto que escogiste anteriormente con
una toalla de papel humedecida con agua, solo
frótala un par de veces; no la restriegues. Con un
nuevo hisopo estéril, toma muestra del área
limpiada. Abre la tapa de la segunda placa y haz SUAVEMENTE 4
siembras en la superficie, siguiendo el orden de las secciones
numeradas como lo hiciste previamente. Cierra la
placa.

5. Divide la tercera placa de Petri en 4 secciones

numeradas y desígnalas con el nombre del
desinfectante que escogiste (por ejemplo "blanqueador").
Usa el desinfectante escogido para limpiar la otra mitad
del objeto que trabajaste antes. Con un nuevo hisopo
estéril, toma muestra del área. Repite el proceso
de sembrar la placa y ciérrala.
6. Esteriliza los hisopos usados con desinfectante y
descártalos. Pon las placas en un lugar apartado e
incúbalas a 37°C por 24 horas. Limpia tu área
de trabajo con la solución desinfectante y lava tus
manos.

7. Repite todo el experimento utilizando placas con

cultivo de Agar sangre sólo que ahora selecciona otro
Fomite que no hayas empleado

8. Después de que hayan pasado 24 horas, mira las

placas de Petri iniciales. No la abras. Crea una tabla que
compare las placas sembradas antes y después de limpiar el
objeto (mira la tabla de ejemplo). Asegúrate de indicar si
los microbios crecieron en cada siembra.

9. Nota: el profesor supervisor debe hacer este paso

preferiblemente Cuidadosamente abre las placas de Petri en un
lavadero e inúndalas con blanqueador o alcohol sin diluir.
Déjalas por una hora y enjuágalas completamente;
colócalas en una bolsa plástica, amárrala y
descártala. Asegúrate de no tocar la superficie de
las placas cuando las abras y lava tus manos cuidadosamente
después de manipularlas. Limpia tú área de
trabajo con la solución desinfectante.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es metabolismo
bacteriano?

_________________________________________________________________

2. ¿Qué finalidad tiene utilizar medios de

cultivo sólidos?

_________________________________________________________________

3. Escribe el nombre de 5 medios de cultivo que se

emplean en el laboratorio de microbiología

_________________________________________________________________

4. ¿Por qué la base de muchos medios de

cultivo es una infusión de extractos de carne y
peptona?

_________________________________________________________________
5. ¿Qué medios de cultivo se emplean para
aislar bacterias causantes de meningitis, tifoidea y
neumonía ?

_________________________________________________________________

6. ¿Cómo podemos controlar la

contaminación microbiana?

_________________________________________________________________

7. Completa en la siguiente tabla anotando X en

los espacios correspondientes a las divisiones realizadas en
donde hayan crecido los microorganismos:

A) MEDIOS DE CULTIVO CON AGAR NUTRITIVO

B) MEDIOS DE CULTIVO CON AGAR SANGRE

OBSERVACIONES.

Dibuja todos los pasos empleados en el sembrado de las

placas de petri y los resultados de las colonias bacterianas que
crecieron.

CONCLUSIONES:

_________________________________________________________________________
______________

Práctica Nº 05

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______
Profesor de Laboratorio_______________________________
Calif:_______

PRÁCTICA
Nº 06

ESTUDIO DE HONGOS
OBJETIVO:

 Aislar hongos ambientales de un establecimiento de

salud mediante el método de exposición en
placa

 Realizar preparaciones en fresco y en cinta adhesiva

de distintas especies de mohos.

 Observar la morfología de los hongos y

distinguir entre hifas septadas y no septadas y entre
distintos tipos de esporas y las estructuras que las
originan

MATERIAL

 Ambientes de un establecimiento de salud

 4 placas con medio de cultivo estéril de Agar

Sabouraud

 Lupas

 1 varilla de vidrio doblada

 Asa bacteriológica

 Alcohol al 70%

 Microscopio

 Porta y cubreobjetos (22×22 mm) limpios y

desengrasados con alcohol

 Solución de lactofenol al azul

algodón

 Cinta adhesiva transparente

INTRODUCCION

Los hongos no son plantas ni animales , aunque se

parezcan en algunas de sus características tanto a las
unas como a los otros. A las plantas, por ser organismos
sedentarios que se encuentran fijos a un sustrato y, mientras
están vivos, no cesan de crecer. A los animales, pues,
aunque las células de los hongos poseen pared como las de
las plantas, las paredes celulares fúngicas son ricas en
quitina, la misma sustancia que hace duro el esqueleto externo de
los insectos.

En realidad, los organismos que conocemos como hongos

tienen diferentes orígenes en el árbol de la vida,
razón por la cual conforman el reino de los hongos
(Fungi o Eumycota).

Se estima que existe más de un millón de

especies de hongos en el planeta, pero tan sólo unas
70,000 de ellas han sido descritas por los especialistas, lo cual
hace evidente la necesidad de contar con más
científicos (micólogos) que estudien estos
organismos. Mientras tanto, muchas especies de hongos se han
extinguido y otras se encuentran amenazadas en todo el
mundo.

Los hongos tienen distintos hábitos de vida. Los

hongos saprófitos, es decir descomponedores de materia
orgánica, cumplen una función ecológica de
la mayor relevancia pues garantizan el reciclaje de la materia
muerta y, por lo tanto, la recirculación de sustancias
nutritivas en los ecosistemas . Los hongos parásitos, que
viven sobre o dentro de otros seres vivos, obtienen su alimento
de éstos y llegan a producir enfermedad en su hospedero.
Los hongos simbiontes que se asocian de manera mutualista con
otros organismos constituyen alianzas vivas de beneficio mutuo
como por ejemplo los líquenes (asociación de hongo
y alga) y las micorrizas (asociación de hongo y
raíz de una planta), simbiosis estas de gran importancia
en la naturaleza en procesos de colonización de
hábitats y de circulación de nutrientes.

Desde la perspectiva económica, los hongos

ofrecen múltiples servicios , pues se utilizan como
alimentos , levaduras de la masa de pan, fermentadores en la
producción de vino y cerveza , en la maduración de
quesos y en el control biológico de plagas
agrícolas. Además, como fuentes de sustancias que
por su actividad biológica pueden ser de enorme utilidad
en medicina y en la bioindustria (ej. antibióticos) y como
agentes para estimular el desarrollo de las plantas (hongos
formadores de micorriza). Sin embargo, también son
dañinos cuando actúan como parásitos de
plantas y animales o cuando estropean estructuras de madera ,
alimentos almacenados, libros y hasta obras de arte , amén
de ser peligrosos si, por desconocimiento, se consumen aquellos
que tienen principios tóxicos o
alucinógenos.

PROCEDIMIENTO

AISLAMIENTO DE HONGOS AMBIENTALES

 Debes tener tus placas de petri con Agar Sabouraud a

la que se añadió antibiótico para evitar
el crecimiento de microorganismos diferentes a los
hongos

 Con la compañía de tu profesor

supervisor, acude a un ambiente asistencial del
establecimiento de salud.

 Cuando te encuentres en dicho ambiente, saca tu

placa petri y colócala sobre la superficie de una
mesa

 Luego, abre la tapa de placa y déjala en

exposición por espacio de 2 minutos

 Transcurrido el tiempo , tápala nuevamente y

rotula las placas de petri el nombre del servicio
asistencial

 Haz el mismo procedimiento con otras placas y en

diferentes servicios del establecimiento de salud, anotando
siempre el nombre del ambiente

 Luego, traslada tus placas al laboratorio y

déjalas incubando a temperatura de 30°C por 3 o
más días

 Observa el crecimiento de colonias de

hongos

ESTUDIO MICROSCÓPICO

Preparación en cinta adhesiva

Técnica
  Coloca sobre un portaobjetos una gota de
solución de lactofenol no demasiado grande.

 Corta un trozo de cinta adhesiva transparente de

aproximadamente 2cm.

 Toca con el lado adhesivo de la cinta la superficie

de la fruta o el pan enmohecido o el borde de una colonia de
hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede
haber una excesiva concentración de
esporas.

 Pega la cinta adhesiva sobre la gota del

portaobjetos.

 Elimina el colorante sobrante con un papel de

filtro.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un hongo?

_________________________________________________________

2. ¿Por qué los hongos que causan micosis

cutánea se llaman queratinofílicos?

_________________________________________________________________________
____________

3. Menciona 4 hongos causantes de micosis

subcutánea en los humanos

_________________________________________________________________________
_____________

4. ¿Debido a qué Candida albican

es conocido como un hongo causante de micosis
oportunista?

_________________________________________________________________________
______

5. Menciona la forma de prevención de las micosis

cutáneas

_________________________________________________________________________
__________
6. ¿Por qué se añade
antibiótico al medio de cultivo para aislar
hongos?

_________________________________________________________________________
___________________

OBSERVACIONES

Dibuja todo el proceso llevado a cabo para el

aislamiento de hongos, así como los resultados
obtenidos.
CONCLUSIONES

_____________________________________________________

Práctica Nº 06

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio______________________________
Calif: _______

PRÁCTICA
Nº 07

AISLAMIENTO DE BACTERIAS PATÓGENAS DE HERIDAS Y

SECRECIONES
OBJETIVO:
Demostración de la presencia de bacterias
patógenas en la piel y garganta, mediante el método
de siembra en placa.

MATERIAL

 Placas de petri con Agar- Sangre (GS)

 Placas de petri con Manitol sal Agar

(MSA)

 Placas de petri con Agar vogel y Jonson

(AVJ)

 Solución salina estéril

 Exudado faríngeo

 Raspado de piel

 Mechero

 Asa de platino

 Hisopos estériles

INTRODUCCIÓN

La piel (en condiciones normales) es una barrera que

impide la penetración de los gérmenes, por ello
actúa como mecanismo de defensa. Los mamíferos son
frecuentemente infectados por algunas de las bacterias
preexistentes en su medio ambiente , aunque en general viven en
equilibrio con estos microorganismos, manteniéndoles
limitados a zonas relativamente superficiales de su organismo.
Sin embargo las bacterias infecciosas producen enfermedades al
invadir tejidos más profundos. Por lo tanto para mantener
la salud, el huésped debe defenderse constantemente frente
a la invasión por parte de las bacterias.

Los factores mecánicos, químicos y

microbianos desempeñan un papel importante al restringir
la colonización de las bacterias a las superficies
corporales.

Factores mecánicos: Las superficies

epiteliales de la piel y de las mucosas constituyen barreras que
resultan más o menos impermeables a las bacterias. La
impermeabilidad de la piel es mayor que en la mayoría de
las mucosas. Cuando se altera la integridad de la superficie
epitelial, pueden desarrollarse infecciones subcutáneas.
Las bacterias que causan más frecuentemente estas
infecciones son las que existen habitualmente en la superficie
cutánea, folículos pilosos y glándulas
sudoríparas en la piel, es decir los
estafilococos.

Factores químicos: La acidez de las

secreciones gástricas mantienen sin duda la esterilidad
habitual del estómago. El pH bajo de la piel (3-5), debido
en gran parte a los productos ácidos del metabolismo
bacteriano, frena sin duda el crecimiento de muchos
microorganismos que toman contacto con sus superficie

Factores microbianos: El antagonismo microbiano

inhibe el crecimiento de muchas bacterias y hongos potencial
mente patógenos en lugares superficiales donde de no ser
así, podrían producirse enfermedades.

La flora de la región faríngea presenta

problemas peculiares para el aislamiento e identificación
de microorganismos, por lo tanto se refiere a los componentes de
la flora normal como a microorganismos con acción
patógena. Es importante recordar que algunos
microorganismos tienen capacidad patógena definida y su
presencia es un indicio claro de enfermedades, en tanto que
otros, llamados oportunistas, guardan una posición ambigua
y pueden encontrarse tanto como componentes de la flora normal,
como asociados a procesos patológicos, causados por otros
microorganismos que son verdaderos responsables (por ejemplo los
virus ) Los estafilococos están entre las primeras
bacterias que se reconocieron como patógenas, y se
descubrieron por primera vez a principios de la década
de1880.

Se encuentran ampliamente distribuidos por la

naturaleza, y a menudo forman parte de la flora bacteriana de la
piel y el tracto respiratorio superior; muchas de las especies
que se encuentran en el hombre son comensales. La especie
predominante patógena para el hombre es el
Staphylococcus aureus, constituye la causa más
común de las infecciones supurativas para el hombre. El
aislamiento de S. aureus a partir del exudado
faríngeo y exudado de piel, no tiene importancia
diagnóstica, ya que se considera parte de la flora normal
de la faringe y nasofaringe, por lo que no tiene significado
clínico.

PROCEDIMIENTO:

 Limpia y esteriliza el área a trabajar con

fenol al 5%

 Prende el mechero cerca de donde se va a trabajar,

si es posible coloca otro

 Humedece el hisopo en solución salina

estéril, pásalo sobre la superficie de la piel
(con o sin pelo)

 Descarga el hisopo en tres placas de petri con el

medio ya preparado. (Es recomendable que para cada dos placas
se utilice un solo hisopo con muestra ). No retires
completamente las tapas de los medios de cultivo para evitar
que se contaminen

 Quema el hisopo y deséchalo.

 Esteriliza el asa de platino hasta el rojo vivo,

enfríalo introduciéndolo en un extremo del
Agar

 Realiza el sembrado de los microorganismos por el

método de estría utilizando el asa y como se
muestra en la figura. Evita destapar completamente la tapa de
los medios de cultivo.

 Incuba a 37ºC por 24-48 horas y observa los

resultados.

 Repite el mismo procedimiento pero ahora toma

muestra de la faringe con hisopos estériles en las
zonas afectadas como: amígdalas, pared posterior de la
faringe, en general cualquier área que manifiesta
signos de inflamación , exudados y úlceras,
procurando no tocar con el hisopo la lengua .
 

INTERPRETACIÓN DE
RESULTADOS:

A) REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS

MEDIOS

AGAR SANGRE

Para el aislamiento, cultivo y detección de

actividad hemolítica de Staphylococcus, Streptococcus
y otros microorganismos exigentes. Se observan colonias
blancas casi grises, grandes, convexas de consistencia
butirácea, Presentan bordes regulares. Se observa que
presenta hemólisis. Las colonias en medio
sólido son redondeadas, uniformes, estos crecen
rápidamente a 37ºC pero tienden a formar
pigmentos mejor a temperatura ambiente
(20ºC).

MANITOL SAL AGAR (MSA)

Se utiliza como medio selectivo, para cultivar y

enumerar especies clínicas de estafilococos El manitol
cuando es utilizado por los microorganismos, vira de su color
original rojo a amarillo. Se observan colonias chicas,
blancas, convexas, de consistencia butirácea,
presentan bordes irregulares. S. aureus forma
colonia amarilla, S. Epidermidis, colonia
incolora

AGAR VOGEL Y JONSON (AVJ)

Para la detección de Staphylococcus
aureus coagulasa-positivo, se observan colonias negras
pequeñas, bordes irregulares con halo amarillo. Para
S. epidermidis y otros pequeñas,
negro-grisáceos, sin halo, el medio presenta un vire
de rojo pálido a amarillo.

B) DESCRIPCIÓN DEL TIPO DE COLONIAS

OBTENIDAS

Observar las colonias obtenidas y describirlas

teniendo en cuenta las siguientes
características:

FORMA: Puntiforme, circular, rizoide,

irregular, filamentosa.

TAMAÑO: Grande (más de 3 mm.),

mediana (2-3 mm.), pequeña (1-2 mm.)

COLOR. Reportar el color final después

de la incubación

BORDE: Entero, ondulado, lobulado,

filamentoso, ondeado

ELEVACIÓN: Plano, elevado, convexo,

pulvinado, umbonado

SUPERFICIE: Suave, brillante, rugosa,

plegada, seca, polvorienta

CUESTIONARIO:
1. Explica a qué se debe que las bacterias
son conocidas como piógenas

____________________________________________________________
______________________

2. ¿Qué tipo de bacterias son

encontradas con mayor frecuencia en quemaduras?

____________________________________________________________
__________________________

3. ¿Qué finalidad tiene humedecer el

hisopo con solución salina estéril?

____________________________________________________________
____________________________

4. ¿Qué son hemolisinas y cuantos

tipos hay?

____________________________________________________________
______________________________

5. ¿Qué es la infección
intrahospitalaria?

____________________________________________________________
___________________________

6. ¿Qué otros patógenos pueden

encontrarse en heridas?

____________________________________________________________
____________________________

7. Después de haber incubado a 37ºC por

48 horas describe las colonias obtenidas en cada medio de
cultivo utilizado

GELOSA SANGRE MANITOL SAL AGAR

(MSA)

.FORMA: FORMA:

.TAMAÑO:
TAMAÑO:

.COLOR. COLOR:
.BORDE: BORDE:

.ELEVACIÓN:
ELEVACIÓN:

AGAR VOGEL Y JONSON (AVJ) ESTAFILOCOCO

S110

.FORMA: FORMA:

.TAMAÑO:
TAMAÑO:

.COLOR. COLOR:

.BORDE: BORDE:

.ELEVACIÓN:
ELEVACIÓN:

OBSERVACIONES

Dibuja y colorea todos los resultados obtenidos

después de las 48 horas de haber sido
incubados.

CONCLUSIONES:

____________________________________________________________
______________________________

Práctica Nº 07

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 8

AISLAMIENTO DE PATÓGENOS EN INFECCIÓN URINARIA

OBJETIVOS
 o Que los alumnos conozcan los patógenos
causantes de infección urinaria .

o Presenciar la técnica que se utiliza para

el urocultivo.

o Interpretar dicha técnica

MATERIAL

o Muestra de orina

o Tubos con solución salina

fisiológica estéril (9 ml)

o Agar Tripticase Soya

o Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)

o Agar Mac Conkey

o Pipetas de 1 ml estériles

o Placas Petri estériles

o Asa de Kolle

o Mechero

INTRODUCCIÓN

La ITU es una de las enfermedades más

frecuentes, que consiste en la infección por
algún agente patógeno (bacterias con mayor
frecuencia), de cualquiera de los segmentos del aparato
urinario: riñones, uréteres, vejiga o
uretra.

PIELONEFRITIS: es la infección del

riñón.

URETERITIS: es la infección de uno o

de los dos uréteres.

CISTITIS: es la infección de la
vejiga.

URETRITIS: es la infección de la
uretra.
A las Pielonefritis se les conoce también
como Infecciones del Tracto Urinario Alto. A las Cistitis y
Uretritis también se les conoce como infecciones del
Tracto Urinario Bajo

Las Ureteritis son generalmente una extensión

de la infección en el riñón o en vejiga
(Cistitis).

FACTORES PREDISPONENTES A UNA ITU

o El sexo femenino, porque la longitud de

la uretra femenina es pequeña, y se favorece que
las infecciones asciendan desde la región
perineal.

o Los varones que tienen la próstata

aumentada de tamaño, porque se tiende a
retener la orina debido a que la próstata
aumentada de tamaño genera obstrucción
parcial o total en el segmento que corresponde a la
uretra.

o Uso de ropas ajustadas, predispone

a desarrollar infecciones urinarias por la
presión que ejercen estos que hacen que la orina
refluya hacia el interior de las vías urinarias
favoreciendo la contaminación de estas.

o La retención voluntaria de la
orina, es importante que una persona use el
uirinario, tan pronto siente ganas de hacerlo

o Las personas que ingieren poca ingesta de

líquidos.

o Las personas diabéticas, por la

facilidad que tienen para todo tipo de
infección.

o Aquellos que tienen alguna

malformación congénita de las vías
urinarias.

SÍNTOMAS DE LAS
ITU
Lo fundamental es el ardor al orinar conocido como
disuria, otros síntomas agregados pueden polaquiuria
(orinar varias veces en cantidad menor a lo habitual), dolor
al final de la emisión, fiebre , náuseas,
vómitos , malestar general, dolor lumbar dependiendo de
la localización de la infección. Cuando es una
infección urinaria alta se suele acompañar de
fiebre, malestar general, dolor lumbar, náuseas o
vómitos; mientras que cuando es baja no.

Si se trata de una uretritis gonocócica (se

hace únicamente evidente en el varón), que es
una enfermedad de transmisión sexual, se presenta
ardor al orinar y al inicio de la micción se evidencia
una secreción blanquecina maloliente con el color
parecido al de la "leche condensada".

UROCULTIVO

EL urocultivo se utiliza para diagnosticar

bacteriuria, la orina constituye un método excelente
para cultivar la mayor parte de microorganismos que infectan
el aparato urinario.

La combinación de piuria con bacteriuria

considerable sugiere la presencia de una infección
urinaria.

Utilidad Clínica

o Cuando los síntomas indican una posible

infección urinaria como: dolor y sensación
de calor al orinar, así como urgencia frecuente de
orinar.

o Cuando un paciente esta canalizado por largo

tiempo, aunque no muestre síntomas de
infección.

o En mujeres embarazadas para monitorear cualquier

bacteria en la orina que pueda causar algún
problema al bebé.

PROCEDIMIENTO

Toma de muestra en
mujeres
La muestra debe ser tomada preferentemente en el
Laboratorio. Si ello no es posible, seguir las mismas
instrucciones en su casa.

Debe hacerse una antisepsia previa de la zona

genital, por lo tanto debe tener a la mano lo
siguiente:

o jabón desinfectante

o agua hervida o agua estéril

o gasa estéril o un paño acabado de

lavar

o el recipiente para tomar la muestra.

Proceda primero a lavarse las manos y luego

siéntese en el inodoro, lo más hacia
atrás que pueda. Separe los labios genitales con
una mano y mantenga los pliegues separados y proceda a
asearse toda la zona genital con el jabón
desinfectante. Enjuague con abundante agua estéril y
luego seque bien con gasa estéril o con un paño
limpio.

Proceda a recoger la orina, destapando

previamente el frasco SÓLO EN EL MOMENTO DE LA
MICCIÓN y sin tocar con los dedos su interior,
coloque la tapa con el lado plano hacia abajo. No toque el
interior del recipiente o de la tapa. Empiece a orinar y
recoja en el frasco, sólo la muestra del chorro del
medio es decir, no debe recoger ni la primera, ni la
última parte del chorro de orina.

Tape muy bien el frasco y rotúlelo con su

nombre.
Tráigalo al Laboratorio lo más pronto
posible, en un recipiente con hielo, cuidando de que no se
bote el contenido.

Examen cuantitativo

Método de conteo en placa o recuento

de colonias. Introducido por Kass para evitar los riesgos del
cateterismo vesical y diferenciar bacteriuria verdadera de
contaminación , se realiza de la siguiente
manera:

o Homogeneiza la muestra mediante

agitación.

o Diluye al 1:10, colocando 1 ml. de orina en 9

ml. de suero fisiológico
estéril.

o Prepara diluciones al 1:100; 1: 1000 y 1:10 000,

a partir de la dilución al 1:10.

o Deposita 1 ml. de cada dilución en placas

Petri esterilizadas, sobre las cuales vacía un
tubo de agar tripticase soya, fundido y enfriado a
45°. Mediante rotación suave, distribuye
homogéneamente la siembra.

o Lleva a incubar todas las siembras a 37ºC

durante 24 a 48 horas.

Para calcular el número de colonias elige

placas que contengan entre 30 y 300 colonias. Contadas
éstas, basta multiplicar su número por la
dilución respectiva para obtener la cuenta
total.

Los resultados del estudio cuantitativo se informan

de la siguiente manera:

o No hubo desarrollo microbiano.

o Menos de 10 000 colonias por ml.

o Entre 10 000 y 100 000 colonias por

ml.

o Más de 100 000 colonias por

ml.
Por lo general, las muestras contaminadas tienden a
mostrar cuentas inferiores a 10 000 colonias/ml. Cuando el
recuento revela valores intermedios, entre 10 0000 y 100 000
colonias/ml, el examen debe repetirse. Conviene advertir que
pueden pasar inadvertidas infecciones urinarias verdaderas,
si no se toman en cuenta cuentas inferiores a 100 000
colonias por ml, ya que existen diversos factores que pueden
explicar recuentos bajos en infecciones urinarias verdaderas,
diuresis acentuada, obstrucción uretral, infecciones
crónicas e infecciones por cocos
grampositivos.

Examen cualitativo

El estudio cualitativo, que conduce a la

identificación del agente, se realiza mediante la
siembra de la muestra homogeneizada, en placas con agar
eosina azul de metileno (EMB) o MacConkey.

La identificación final de los agentes se

hace mediante el estudio de sus propiedades
bioquímicas y características
serológicas. Esto permite establecer relaciones de
identidad entre microorganismos aislados en cultivos
sucesivos o de control, y definir el estado de revivida o de
reinfección. De esto deriva el valor que tiene el
conocimiento del biotipo, del serotipo (particularmente en
E. coli), del piocinotipo (en especial cuando es de
Ps. aeruginosa) y del antibiótico.
Éste último se obtiene al comparar el
antibiograma de cepas aisladas de muestras obtenidas de
diferentes oportunidades en un mismo paciente Si existe
correspondencia, se concluye que se trata de una misma
cepa.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué tipos de bacterias pueden

causar infección urinaria?

____________________________________________________________
____________________________________________________________
___

2. ¿Qué puede suceder cuando una mujer

tiene bacteriuria asintomática?
____________________________________________________________
_____________________________________________________

3. ¿Por qué la mujer es más

propensa a la ITU?

____________________________________________________________
____________________________________________________________
_

4. ¿Qué medidas se debe seguir para

evitar las ITU?

____________________________________________________________
__________________________________________

5. Investiga qué grupo de edad tiene mayores

casos de ITU en los tres hospitales de Ica

__________________________________________________________

OBSERVACIONES

Dibuja lo que observaste en la

práctica

CONCLUSIONES:

____________________________________________________________
____________

Práctica Nº 08

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 09

CONTROL DE LOS MICROORGANISMOS: EL ANTIBIOGRAMA

OBJETIVO:

El alumno manejará algunas técnicas

para poner de manifiesto la actividad de los
antibióticos sobre el crecimiento
microbiano.
MATERIAL:

o Placas de petri con medios de cultivo

Mueller-Hinton.

o Asa bacteriológica

o Mechero

o Sensidiscos (antibiogramas)

o Fenol al 5%

o Cultivo de en caldo nutritivo de 18 horas de

Pseudomonas aeruginosa

o Cultivo de 18 horas Staphylococcus

aureus en manitol sal Agar

o Cultivo de 18 horas de Salmonella typhi

en medio Mac Conkey

INTRODUCCIÓN

ANTIBIÓTICOS

Son sustancias capaces de destruir y eliminar los

microorganismos causantes de una infección producida
por bacterias (faringitis, bronquitis, otitis,
neumonía , amigdalitis, etc). No son eficaces cuando la
infección es producida por virus (gripe).

Cada tipo de antibiótico será efectivo

para destruir una clase de microorganismos en función
de su modo de actuación. Se les llama
antibióticos de amplio espectro a los que son
efectivos frente a un gran número de agentes
microbianos, los microorganismos causantes de la
infección son capaces de desarrollar resistencias al
antibiótico de manera que este no será eficaz
para eliminarlos. Cada año se investiga creando nuevos
antibióticos eficaces para las formas microbianas
resistentes a sus anteriores tratamientos. Se deben usar
siempre bajo prescripción médica.

Existen pruebas (antibiogramas) que determinan el

antibiótico más eficaz para cada
infección, pero normalmente se sigue un protocolo de
actuación de los antibióticos de
elección para cada tipo de infección. Es el
médico el profesional que juzga la infección
existente y el antibiótico eficaz para su
tratamiento.

Los antibióticos siempre se deben tomar bajo

prescripción médica y cumplir el tratamiento
completo. El incumplimiento del tratamiento puede dar lugar a
recaídas que precisarán el tratamiento con otro
tipo de antibiótico por haber desarrollado resistencia
al primero

MODO DE ACCION DE LOS

ANTIBIÓTICOS

o Inhibición de la síntesis de la
pared celular.

o Alteración sobre la membrana

citoplásmica.

o Inhibición de la síntesis
proteica.

o Bloqueo de la síntesis de los

ácidos nucleicos.

ANTIBIOGRAMAS

Para estudiar la sensibilidad de un microorganismo

por técnicas de difusión se dispone de dos
sistemas , el de discos de papel impregnados con el
antibiótico y las tabletas, consistentes en una
suspensión del antibiótico liofilizada y
comprimida en material inerte. Los fabricantes recomiendan
conservar los discos a –20 °C para largos periodos
o entre 2 y 8 °C si se utilizan en el plazo de una
semana. Por el contrario, las tabletas se han considerado
más estables, pudiéndose almacenar a
temperatura ambiente y manteniendo su actividad más
tiempo que los discos .Por lo que respecta a la temperatura
de conservación, al comparar para cada
antibiótico los diámetros de los halos de
inhibición de los discos conservados entre 4 y 6
°C con los conservados a temperatura ambiente no se
encontraron diferencias significativas a lo largo de todo el
estudio; tampoco se encontraron diferencias al comparar los
halos de las pastillas conservadas entre 4 y 6 °C con las
conservadas a temperatura ambiente, de modo que tanto los
antibióticos que permanecieron estables durante el
tiempo del estudio como los que disminuyeron su actividad lo
hicieron de modo paralelo a ambas temperaturas

PROCEDIMIENTO:

A) PREPARACIÓN DE LAS SUSPENSIONES

MICROBIANAS

Suspende la cepa bacteriana en agua destilada

logrado obtener una turbiedad del N° 10 del
nefelómetro de Mac- Farland. En caso de no tener el
nefelómetro solo ve la turbiedad a manera de
suspensión.

B) ACTIVIDAD DE LOS ANTIBIÓTICOS EN

DISCO

o Marca 3 placas Muller-Hinton, o Agar nutritivo

con el nombre de la cepa S. aureus,
Salmonella typhi y otra con Ps.
aeruginosa.

o Toma con un hisopo diferente las muestras que

fueron preparadas en el inciso A de este procedimiento y
siembra las placas rotuladas

o Quema el hisopo y deséchalo.

o Coloca los discos individuales sobre las placas

y presiona ligeramente los discos contra la
gelosa

o Incuba las placas a 37ºC durante 24

horas

o Mide el diámetro de los halos de

inhibición del crecimiento producidos por cada
antibiótico y anota los resultados
C) DETERMINACIÓN DE INHIBIDORES EN LA
LECHE

o Prepara medio de cultivo Muller-Hinton, a

40ºC

o Añade 0.5 ml de B. subtilis

obtenido de un cultivo de 18 horas en caldo
nutritivo.

o Echa 15 ml del medio de cultivo ya enfriado a

40ºC y distribuye en forma
homogénea

o Deja que solidifique.

2. Toma una muestra de leche y calienta en

baño María a 80ºC durante 3 minutos
exactamente, enfría bruscamente la leche en un
baño con hielo
3. Impregna un disco de papel filtro con la leche
fría, sécalo ligeramente y con unas pinzas
esterilizadas deposita en el centro de la placa de petri
preparada anteriormente

4. Incuba la placa de 18 a 20 horas a 37ºC y

observa las zonas de inhibición causadas por los
antibióticos sobre B. subtilis.

5. Si la muestra de leche contiene

antibióticos, alrededor del disco se formará un
halo, el cual indica la inhibición de microorganismos
y presencia de antibióticos en concentraciones
superiores a las permitidas

CUESTIONARIO

1. ¿Qué función tienen los

antibióticos?

____________________________________________________________
_________________________

2. Explica la acción de los

antibióticos en la inhibición de la
síntesis de proteínas bacterianas

____________________________________________________________
_________________________________

3. Menciona dos causas del porque los

microorganismos pueden llegar a hacerse resistentes a los
antibióticos

____________________________________________________________
__________________________

4. Señala 3 antibióticos que

actúan sobre la pared celular bacteriana

____________________________________________________________
_________________________

5. De qué fuentes se obtienen los siguientes

medicamentos: estreptomicina, eritromicina, cefalosporina y
cloranfenicol

____________________________________________________________
___________________________
6. Según los resultados de tu
práctica. ¿Qué medicamentos puedes
utilizar para destruir y eliminar a Staphylococcus y
Escherichia coli:

____________________________________________________________
______________

7. Investiga que tipo de enfermedades pueden

ocasionar los microorganismos estudiados en la
práctica

____________________________________________________________
____________________________

8. ¿Cuál es la acción
farmacológica de los siguientes medicamentos:
cloranfenicol, penicilina, cefalosporinas, gentamicina,
ácido nalidíxico?
____________________________________________________________
______________________________

9. ¿Qué finalidad tiene el lavar el

material que se empleará en la realización de
prácticas de microbiología ?

____________________________________________________________
___________________________

10. ¿Por qué se recomienda que la

temperatura del lavado del material sea entre 40ºC y
50ºC?

____________________________________________________________
_________________________

11. ¿Qué finalidad tiene el empacado

antes de la esterilización?

____________________________________________________________
___________

12. ¿Qué desventaja tiene el utilizar

la esterilización por calor seco?

____________________________________________________________
________________________
13. ¿Cómo actúa la
radiación ultravioleta en los
microorganismos?

____________________________________________________________
_______

14. ¿Cuál es el proceso de

esterilización de los materiales sintéticos que
se utilizan en los hospitales?

____________________________________________________________
___________________

15. ¿Cómo actúa el proceso de

desecación en los microorganismos?

____________________________________________________________
_____________________________

16. ¿A qué condiciones de temperatura

y presión se destruyen todas las formas vegetativas y
esporas?

____________________________________________________________
_________________________

17. ¿Cómo actúa la

esterilización por calor húmedo en los
microorganismos?

____________________________________________________________
___________________________________

18. ¿Qué es DAN y cuáles son

sus ventajas y desventajas?

____________________________________________________________
_____

OBSERVACIONES

Realiza dibujos de los resultados obtenidos a las 24

horas de incubación

CONCLUSIONES

____________________________________________________________
________________________________________
Práctica Nº 09

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de
Laboratorio_______________________________
Calif:______

PRÁCTICA
Nº 10

ESTUDIO SEROLÓGICO: ANTÍGENOS

FEBRILES
OBJETIVO:

o Describir la acción antígeno

– anticuerpo en casos infecciosos

o Aplicar la reacción de Widal en la

identificación de pacientes con
tifoidea.

o Interpretar los resultados de la prueba de

Widal

MATERIAL

o Sangre venosa

o Set de antígeno febriles

o Micropipetas

o Láminas excavadas

INTRODUCCION

Antígenos Febriles es un término

referido a un grupo de suspensiones bacterianas,
representativo de un número de bacterias
patógenas para la especie humana y responsables de la
aparición de infecciones (brucelosis, salmonelosis y
ciertas rickettsiosis) que cursan con un cuadro febril en el
huésped infectado. La mejor forma para establecer la
etiología de una enfermedad infecciosa es el
aislamiento e identificación del agente causal de la
misma. Sin embargo, estos medios de diagnóstico no son
siempre de fácil aplicación y es ahí
donde radica la importancia del uso de las suspensiones
bacterianas en la detección de los anticuerpos
presentes en el suero del paciente (método indirecto
de diagnóstico).

En el diagnóstico clínico, los

resultados obtenidos con el uso de los Antígenos
Febriles deben ser considerados siempre en relación a
los hallazgos clínicos y otras pruebas de
laboratorio.

Nuestra sangre consta de un líquido

amarillento denominado plasma. Cuando la sangre se coagula se
obtiene una porción acuosa a la cual se le denomina
suero. En esta porción están suspendidas
glucoproteínas, llamadas inmunoglobulinas o
"Anticuerpos", que son sintetizados en nuestro organismo.
Ante una exposición a una sustancia o
microorganismo extraño (Salmonella typhi en
este caso), un tipo de células llamadas Linfocitos B
(Inmunidad mediada por células) produce estos
anticuerpos en su forma unida a la membrana. Este anticuerpo
unido a la membrana constituye el receptor de
antígenos de la célula B. Los linfocitos B
secretan anticuerpos sólo tras su
diferenciación, inducida por la interacción del
antígeno con el anticuerpo de membrana de este tipo
celular. Esta interacción constituye la fase de
reconocimiento de la inmunidad. Aquellas partes de la
molécula que interactúan y que son reconocidas
con más frecuencia por los anticuerpos se denominan
"Determinantes antigénicos inmunodominantes" o
"epítopes".

Los Linfocitos B se activan ante la presencia del

antígeno, se multiplican originando un clon de
células iguales y se diferencian en células
plasmáticas capaces de elaborar el mismo tipo de
Anticuerpo específico contra el antígeno. Los
linfocitos B no empiezan su diferenciación y
producción de anticuerpos hasta que no reciben la
"señal" de los linfocitos TH colaboradores.

Cada molécula de Ig (inmunoglobulina)

está formada por 4 cadenas polipeptídicas que
en conjunto adoptan la forma de Y. En la molécula se
diferencian 3 zonas: la subunidad Fc (pie de la Y) y las dos
subunidades Fab (brazos de la Y) que son las que permiten el
acoplamiento al antígeno. Existen 5 tipos de
inmunoglobulinas humanas:

o IgG: Antibacterianas y antivirales. Favorecen la

fagocitosis.

o Ig A: presentes en las secreciones (mucus,

saliva, etc.). Evitan fijación virus.

o IgM: Activación del complemento y

precipitación de antígenos
solubles.

o IgE: Intervienen en procesos

alérgicos.

o IgD: Estimulan la producción de

anticuerpos por parte de los linfocitos B

ANTÍGENO (que engendra a su contrario):

Moléculas ajenas a un organismo, que son reconocidas
como tales y que desencadenan contra el organismo que las
presenta, una respuesta inmunitaria.

La unión entre el antígeno y el

anticuerpo es específica: cada anticuerpo reconoce y
se une a un determinado antígeno. Su unión
puede provocar:

o Neutralización: se produce sobre toxinas

y virus. El anticuerpo se une al antígeno e impide
que se fije a las membranas celulares, neutralizando su
acción.

o Precipitación: se produce cuando el

antígeno se encuentra disuelto, de forma que la
unión antígeno-anticuerpo resulta insoluble
y precipita.

o Aglutinación: cada anticuerpo se une a

dos antígenos y el resultado es la
formación de un entramado de complejos
antígeno-anticuerpo aglutinados. Facilita la
acción de los fagocitos.

o Opsonización: estimula la acción

de los fagocitos.
Para esta prueba, en el laboratorio se utilizan
suero de conejo. El conejo fue previamente inmunizado
inyectándole la bacteria atenuada; su sistema inmune
crea anticuerpos contra las salmonellas, entonces se extrae
la sangre del conejo, y se purifica todo el contenido de
inmunoglobulinas; esto es en laboratorios con equipo y
métodos adecuados.

PROCEDIMIENTO

MÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN

PLACA.

Al paciente se le realiza una venopunción,

extrayendo la sangre en un tubo sin anticoagulante y es
centrifugada por 10 minutos a 3000 revoluciones por minuto.
Se separa el suero el cual se utiliza para la
determinación de los anticuerpos.

Marcar en una placa de vidrio correctamente

indicando el antígeno que se esté
usando:

o Tífico "O" – Salmonella typhi;

Antígeno somático, pH: 6.5 ±
1.0

o Tífico "H" – Salmonella typhi;

Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0

NOTA: El reactivo así como los sueros, deben

alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la
prueba.

1. Deposita en sitios diferentes de la placa una

gota de suero (30 ul).

2. Agita el antígeno a utilizar para tener

una suspensión uniforme.

3. Añade 30 ul de la suspensión de
antígeno a cada una de los sueros. Se recomienda
utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido
proporciona una gota de 30-40 ul).

4. Mezcla el antígeno y el suero utilizando

un aplicador diferente para cada una de las cantidades de
suero.
5. Gira la placa manualmente o utiliza un agitador
mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.

6. Realiza la lectura utilizando una fuente de luz

directa y observa la aglutinación
macroscópica.

7. Se recomienda incluir controles Positivo y

Negativo.

INTERPRETACIÓN DE LOS
RESULTADOS

Observar la aglutinación con ayuda de una

lámpara.

Cuando hay reacción positiva se repite la

técnica con diluciones las cuales se obtienen con el
uso de las siguientes cantidades del suero en la siguiente
forma:

Mililitros de suero Dilución

0.08 1:20

0.04 1:40

0.02 1:80

0.01 1:160

0.005 1:329

INTERPRETACIÓN.

El informe del resultado de la prueba se hace

tomando en consideración la dilución más
alta que se observe en la reacción positiva. En
tifoideas los anticuerpos llegan a tener títulos
diagnósticos hasta los 8 días después de
la fiebre.

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de

1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a
vacunaciones o alguna infección anterior. No siempre
se presenta producción de aglutininas en infecciones
bacterianas.

2. Se pueden producir reacciones cruzadas de

aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades.
La vacuna tífica puede producir aglutininas contra
antígenos Proteus.

CUESTIONARIO

1. Menciones algunas
características del género
Salmonella.

____________________________________________________________
______________________

2. ¿Dónde se
localiza en antígeno "O"?

____________________________________________________________
______________________________

3. ¿Dónde se
localiza el antígeno "H"?

____________________________________________________________
_______________________________

4. Menciona otros
métodos de laboratorio para el
diagnóstico de salmonelosis.

____________________________________________________________
____________________________

5. Menciona algunas
propiedades generales del género Brucella.

____________________________________________________________
____________________________

6. Esquematiza tus observaciones

CONCLUSIONES:

____________________________________________________________
____

Práctica Nº 10
Nombre del Alumno:_________________________________
Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 11

EL SHOCK ANAFILÁCTICO
OBJETIVO

Que el alumno conozca la fisiopatología y

síntomas de la anafilaxia inmediata

MATERIAL

o 2 conejos adultos

o 2 jeringas hipodérmicas de 10
ml

o Solución al 5% de albúmina
bovina

o Solución al 5% de albúmina de
huevo

o Alcohol

o Algodón

INTRODUCCIÓN

Las reacciones anafilácticas constituyen una

urgencia clínica. Pueden conducir a una insuficiencia
respiratoria, shock y muerte súbita.

La lista de causas potenciales de reacciones

anafilácticas es muy grande:

o Antibióticos.

o Agentes diagnósticos y
quimioterapeúticas.

o Anestésicos.

o Medicamentos.
 o Ciertos alimentos.

La anafilaxis es el resultado de la respuesta en dos

fases del sistema inmunitario a un antígeno
extraño:

a) En la primera de ellas, el contacto inicial con

el antígeno determina la síntesis de una
inmunoglobulina IgE específico para ese
antígeno. A continuación, estos complejos
antígeno-anticuerpo IgE específico se fijan a
los mastocitos del tejido conectivo que rodean a los vasos
sanguíneos y a los basófilos que circulan por
la sangre. A partir de este momento la persona esta
sensibilizada al antígeno.

b) La segunda fase se inicia cuando un

antígeno frente a la cual la persona ha desarrollado
sensibilidad logra penetrar nuevamente en su organismo a
través de la piel, el tracto digestivo, o las
vías respiratorias. La interacción del
antígeno y el anticuerpo IgE a nivel de los mastocitos
desencadena la liberación de una serie de mediadores
químicos. Entre estos mediadores figura la histamina,
sustancia que afecta numerosos tejidos y sistemas
orgánicos, determinando en definitiva la respuesta
fisiológica característica del paciente con una
reacción anafiláctica.

La forma de aparición y la naturaleza de una

reacción anafiláctica dependen de diversos
factores:

o La vía por la que el antígeno

penetra en el organismo.

o La cantidad de antígeno
absorbido.

o La velocidad de absorción.

o El grado de hipersensibilidad de la
persona.

Cuanto mas rápido se produce la

reacción mas grave suele ser esta y por tanto, es
importante reconocer los signos y síntomas de cara a
una reacción inmediata.
Los signos y síntomas iniciales más
comunes de la reacción anafiláctica son de tipo
cutáneo, progresando típicamente desde prurito
y eritema difuso a urticaria generalizada y edema vascular
especialmente en los labios, párpados y lengua.
También el paciente puede referir mucho
calor.

Los trastornos respiratorios se inician con

sensación de nudo en la garganta para seguir con
ronquera, tos o estornudos, disnea y estridor. La
úvula cuerdas vocales y parte posterior de la faringe
pueden aparecer tumefactas. A la auscultación, se
detectan sibilancias difusas.

A partir de este momento el paciente corre grave

peligro por insuficiencia respiratoria por obstrucción
de las vías respiratorias altas o bajas. Una
complicación frecuente es el edema laríngeo. De
hecho, la causa inmediata mas habitual de fallecimiento en
los casos de reacción anafiláctica es la
asfixia secundaria a edema laringe y
broncoespasmos.

Los problemas cardiovasculares cuando

aparecen durante una reacción anafiláctica,
pueden dividirse en dos etapas. En primer lugar, el volumen
plasmático disminuye de forma notable como
consecuencia de una dilatación vascular, y la
consecuente salida del líquido intravascular hacia el
espacio extravascular, así pues, se puede
observar:

o Hipotensión, shock.

o El hematocrito puede ser mayor de lo normal como

resultado de una hemoconcentración.

o Alteraciones electrocardiográficas como

taquicardia, bradicardia e isquemia.

En la segunda fase de las complicaciones

cardiovasculares puede aparecer depresión
miocárdica.

Entre las alteraciones metabólicas figura un

aumento de los niveles séricos de histamina, acidosis
láctica y depleción de los factores de
coagulación.

Los trastornos digestivos suelen ser infrecuentes,

los signos y síntomas más habituales son
náuseas, calambres abdominales, vómitos y
diarrea intensa secundaria a los espasmos de la musculatura
lisa.

La prioridad máxima es valorar inmediatamente

el estado respiratorio del paciente:

o Si ha dejado de respirar inicie

reanimación respiratoria.

o Si además carece de pulso, inicie

reanimación cardiorrespiratoria.

o Administrar oxigeno según

necesidades.

o Estar preparados para una intubación

endotraqueal.

o Si el edema laríngeo ha ocluido las

vías respiratorias, el medico efectuara una
traqueostomía de urgencia.

o Insertar una vía intravenosa.

PREVENCIÓN DE LA ANAFILAXIS

o Preguntar siempre acerca de posibles alergias

cuando se elabore la historia del paciente.

o Aparte de citar los alergenos responsables

describa las características y la gravedad de las
reacciones.

o Destacar los antecedentes de alergia en la

gráfica y en le plan de cuidados del
paciente.

o Siempre que se deba administrar algún

medicamento que pueda desencadenar anfilaxis, preguntar
al paciente si ha presentado alguna reacción y
permanezca con el paciente y observar si aparecen
manifestaciones de rechazo.
 o Tener cuidado con los medicamentos que son
familia de los medicamentos de los cuales el paciente es
alérgico (ANTIBIOTICOS). Por ejemplo los pacientes
con antecedentes de sensibilidad a las penicilinas no
deben ser tratados con cefalosporinas.

o Todo paciente con riesgo a anafilaxis debe de

ser advertido de la posible gravedad de este tipo de
reacciones. Enseñarle las precauciones que debe de
tomar.

PROCEDIMIENTO

a) Dosis sensibilizante

1. Una persona debe sujetar firmemente al conejo A y

lo mantendrá con la posición en declive y con
la cabeza hacia abajo.

2. Introduce la aguja bajo la piel, luego,

levantando ligeramente la mano, debes forzar el paso de la
punta de la aguja a través de la capa muscular y el
peritoneo

3. Luego de ello, inocula 2.5 ml de solución

de albúmina bovina.

4. Haz lo mismo con el conejo B; pero, en este caso

inocula solución de albúmina de
huevo

5. Deja en descanso a los conejos por espacio de 21

días

b) Dosis desencadenante

1. Inocula lentamente por vía cardíaca

3 ml de albúmina bovina al conejo A y al conejo
B

2. Observa los resultados

CUESTIONARIO

1. ¿Cómo se diagnostica el shock

anafiláctico en una persona?

____________________________________________________________
______
2. ¿Qué tratamiento se debe dar en
estos casos?

____________________________________________________________
________________________________________________

3. ¿Qué tipos de hipersensibilidad

conoces? Descríbelos

____________________________________________________________
______________________________________________________

4. En la práctica. ¿Por qué se

hizo la primera inoculación a los conejos?

____________________________________________________________
____________________________________________________

5. ¿Qué observaste cuando se hizo la

segunda inoculación a los conejos?

____________________________________________________________
__________________________________________________

6. ¿A qué se debe ello?

____________________________________________________________
_____

OBSERVACIONES

Representa gráficamente lo que has observado

durante el desarrollo de la práctica.

CONCLUSIONES:

____________________________________________________________
____________________

Práctica Nº 11

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 12
ESTUDIO PARASITOLÓGICO
OBJETIVO

Que el alumno conozca la morfología de las

diferentes estructuras de los parásitos

MATERIALES

o Materia fecal

o Láminas portaobjetos

o Láminas cubreobjetos

o Palitos mondadientes

o Solución lugol

o Solución salina
fisiológica

o Microscopio

INTRODUCCIÓN

PARASITISMO INTESTINAL

Este término define la infección del

tracto gastrointestinal por organismos que se aprovechan de
los nutrientes del cuerpo humano donde cumplen su ciclo
vital. Existen muchos parásitos causantes de
síntomas en el ser humano. De una manera simplificada
podemos agrupar los parásitos intestinales más
comunes en dos grupos :

1) Protozoarios (microscópicos):
Amebas, Giardia y Criptosporidium.

2) Helmintos ("gusanos"): Oxiuro, Ascaris,

Tricocéfalo, Ancylostoma, Necator, Strongyloides y
Toxocara.

El mecanismo de contagio varía dependiendo de

cada parásito. La mayoría de ellos se adquieren
al ingerir agua o alimentos contaminados con sus quistes o
huevos; otros penetran a través de la piel, cuando la
persona o el niño camina descalzo sobre la
tierra .
Los síntomas producidos por los
parásitos dependerán del organismo causante y
en muchas ocasiones no se presenta ninguna molestia. Los
parásitos protozoarios causarán síntomas
predominantemente intestinales (diarrea, distensión y
dolor abdominal); en cambio los helmintos, además de
producir los mismos síntomas, pueden ocasionar
molestias generales o en otros órganos y sistemas
(debilidad, palidez, pérdida de peso, deficiencias
nutricionales progresivas, anemia , tos crónica,
picazón anal).

El diagnóstico se logra mediante la

visualización de quistes o huevos en exámenes
de heces, aunque ocasionalmente se pueden observar los
parásitos en estudios radiológicos intestinales
o en colonoscopias. En otras ocasiones se observan en las
heces o en las márgenes del ano.

El tratamiento que se recomienda contra los

protozoarios se basa en el uso de diversos medicamentos,
tales como: Secnidazol, Tinidazol, Metronidazol y
Diodohidroxiquinolina.

Para el tratamiento de las helmintos disponemos de

diversos anti-helmínticos de amplio espectro
efectivos, tales como: Albendazol, Mebendazol y Pirantel, que
permiten eliminar diferentes variedades de parásitos
con pocas dosis.

En muchas ocasiones los síntomas se deben a

una infección mixta, bacteriana y parasitaria, por lo
que se requerirá tratamiento anti-parasitario y
antibiótico conjunto. En otras ocasiones son causados
por varios parásitos y requieren tratamientos con
medicamentos anti-protozoarios y anti-helmínticos
conjuntos .

PROCEDIMIENTO

1. Para trabajar con materia fecal es recomendable

que utilices mascarilla y guantes
quirúrgicos.

2. En una lámina portaobjetos, coloca en uno

de sus extremos una gota de solución salina
fisiológica y en el otro extremo una de
lugol
3. Utiliza un mondadientes y coge una
fracción de materia fecal

4. Mezcla con la gota de solución salina,

formando una película delgada y homogénea. No
debes hacer frotices gruesos, porque no permiten
visualizar.

5. Haz la misma operación mezclando con la

solución de lugol.

6. Coloca una laminilla cada preparación,

cuidando de que no se formen burbujas

7. Examina al microscopio a 10X y 40X

CUESTIONARIO

1. ¿Por qué elementos orgánicos

está formado la materia fecal humana?

____________________________________________________________
____

2. Para diagnosticar protozoarios ¿Qué

debes encontrar en la muestra de estudio?

____________________________________________________________
________________________________________________

3. Para diagnosticar helmintos ¿Qué

debes encontrar en la muestra de estudio?

____________________________________________________________
______________________________________________________

4. En la práctica. ¿Por qué se

hizo la primera mezcla en solución salina
fisiológica y no en lugol?

____________________________________________________________
____________________________________________________

5. ¿Qué estructuras de
parásitos observaste en la práctica?

____________________________________________________________
__________________________________________________

OBSERVACIONES
Representa gráficamente lo que has observado
durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:

__________________________________________________________

Práctica Nº 12

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 13

ESTUDIO PARASITOLÓGICO: PROTOZOARIOS INTESTINALES

OBJETIVO

Que el alumno conozca la morfología de los

trofozoitos y quistes de los protozoarios

Que sepa diferenciar los diferentes estadios de los

protozoarios

MATERIALES

o Materia fecal diarreica

o Materia fecal fresco de cerdo

o Láminas portaobjetos

o Láminas cubreobjetos

o Palitos mondadientes

o Solución lugol

o Solución salina
fisiológica

o Láminas con preparados permanentes de:

Entamoeba histolytica, Giardia lamblia, Balantidium
coli, Cryptosporidium sp.

o Microscopio

INTRODUCCIÓN
Los protozoarios son organismos unicelulares. No son
visibles al ojo desnudo pero pueden ser vistos bajo el
microscopio. Un espécimen de excremento fresco es
requerido para encontrar a estos parásitos.

El ciclo de vida
de los protozoarios es complicado. Básicamente, la
infección resulta de la ingestión en forma de
quiste u ooquiste). Los quistes invaden el recubrimiento de
los intestinos donde maduran a formas adultas y son expelidos
en las heces. Bajo condiciones favorables se desarrollan a la
forma infecciosa.

Algunos absorben el alimento a través de sus

membranas celulares. Otros, como las amibas, rodean el
alimento y lo engullen. Otros tienen aberturas llamadas poros
bucales, con los cuales barren el alimento. Todos los
protozoarios digieren su alimento dentro de compartimientos
similares a estómagos llamados vacuolas.

Las amibas son células muy fluidas que se

movilizan extendiendo partes de sus células como
seudópodos o "pies falsos". Otros protozoarios como
Giardia se impulsan agitando estructuras llamados flagelos
similares a pelos largos. Otros, como Balantidium, nadan
batiendo proyecciones similares a pelos cortos llamados
cilios en un patrón rítmico similar al que
producirían muchos minúsculos remos.

La gran mayoría de protozoarios no hacen

ningún daño . Pero, sí hay algunos que
causan enfermedad. Un tipo de amiba, Entamoeba
histolytica, que puede vivir en el intestino humano se
alimenta de las células sanguíneas rojas y
causa disentería. El protozoario parásito
Cryptosporidium parvum afectó a 400.000
personas en Milwaukee cuando contaminó el agua del
acueducto en 1993. Otra amenaza protozoaria más
conocida es la Giardia lamblia, que causa diarrea y
mal absorción intestinal.

PROCEDIMIENTO

1. No olvides de usar mascarilla y guantes

quirúrgicos.
2. Para que prepares las muestras en fresco de
materia fecal diarreica y del cerdo, sigue el mismo
procedimiento de la práctica anterior.

3. Examina al microscopio a 10X y 40X

4. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en

los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude
sólo al tornillo micrométrico y gradúa
el espécimen

5. Observa el trofozoito de E. histolytica,

e identifica la forma, el ectoplasma, endoplasma, las
vacuolas y el núcleo.

6. Haz la misma observación con los

trofozoitos de Giardia y Balantidium.

7. Cuando observes los quistes de los 3

protozoarios, incide en su forma y el número de
núcleos. Ahora, observa el ooquiste de
Cryptosporidium.

CUESTIONARIO

1. ¿En qué se diferencia el trofozoito

de E. histolytica que es patógena, con el
trofozoito de E. coli, que es comensal?

____________________________________________________________
____

2. ¿Por qué se dice que

Cryptosporidium es un parásito emergente?

____________________________________________________________
_

3. Se dice que Giardia lamblia causa el

síndrome de mal absorción ¿A qué
se debe esta afirmación?

____________________________________________________________
______________________________________________________

4. ¿Qué diferencia(s) existe(n) entre

un quiste y un ooquiste?
____________________________________________________________
____________________________________________________

5. Balantidium es causante de una zoonosis

¿Por qué se dice así?

____________________________________________________________
__________________________________________________

OBSERVACIONES

Representa gráficamente lo que has observado

durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:

____________________________________________________________
_

Práctica Nº 13

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 14

ESTUDIO PARASITOLÓGICO: PROTOZOARIOS

HEMÁTICOS, TISULARES Y UROGENITALES
OBJETIVO

Que el alumno conozca la morfología de los

trofozoitos y formas evolutivas de los protozoarios
hemáticos y tisulares

Que sepa diferenciar los diferentes estadios de

estos protozoarios

MATERIALES

o Viales con solución salina

fisiológica

o Una paciente con tricomoniasis

vaginal
 o Láminas portaobjetos

o Lancetas estériles desechables

o Hisopos estériles

o Láminas con preparados permanentes de:

Trypanosoma cruzi, Toxoplasma gondii, Leishmania
braziliensis, Plasmodium vivax, Trichomonas
vaginalis.

o Microscopio

INTRODUCCIÓN

Trypanosoma cruzi es un protozoario

hemático, donde se encuentra en forma de
tripomastigote: tiene aspecto fusiforme, de unas 20 micras,
con un solo flagelo largo, membrana ondulante y presencia de
kinetoplasto que protusiona en el extremo opuesto al flagelo.
Es un parásito que requiere dos hospedadores para su
desarrollo completo, uno vertebrado (el hospedero definitivo)
y otro invertebrado (el vector). En la chinche ingresa el
parásito en forma de tripomastigote en el momento de
la succión, para adquirir -en el intestino medio- la
forma de epimastigote; finalmente, cuando alcanza la ampolla
rectal, recupera la forma de tripomastigote
metacíclico o infectivo. Ninguna de las formas de
tripomastigote se multiplica, mientras que epimastiogtes y
amastigotes lo hacen por fisión binaria.

Las Leishmanias, son protozoarios que pertenecen a

la familia Trypanosomatidae. Morfológicamente todas
las especies son similares, con diferencias en el
comportamiento biológico, inmunológico, tipo de
enfermedad y distribución geográfica. En el
hospedero vertebrado afecta el sistema reticuloendotelial y
se presenta intracelular en forma de amastigote. Este es
ovalado o redondeado, inmóvil, de 2 a 5 micrones. El
núcleo es voluminoso, esferoidal y central y cerca
está el quinetoplasto, el cual se colorea intensamente
y tiene forma de barra, asociado a un rudimento de flagelo
que no se extiende fuera del parásito.

Las cuatro formas de paludismo humano pueden ser tan

semejantes respecto a sus síntomas iniciales que
dificulten su diferenciación por
especies, sin estudios de laboratorio.
 Aún más el patrón febril de los
primeros días de la infección
se asemeja al que se observa en las etapas
incipientes de otras enfermedades bacterianas,
víricas y parasitarias. Incluso demostrar la presencia
del parásito no significa obligadamente que el
paciente tiene paludismo (puede haber también fiebre
amarilla, de Lassa y otras más en sus comienzos). La
forma más grave, que el paludismo por P.
falciparum (terciana maligna), puede mostrar un cuadro
clínico muy variado que incluye fiebre,
escalofríos, sudores y cefalalgia, y evolucionar a
ictericia, defectos de coagulación, choque,
insuficiencia renal y hepática, encefalopatía
aguda, edema pulmonar y cerebral, coma y muerte. Es
causa posible de coma y otros síntomas del sistema
nervioso central como la desorientación y el delirio,
en cualquier persona que haya retornado, recientemente de una
zona tropical, El tratamiento rápido es esencial,
incluso en los casos leves, porque pueden aparecer en forma
repentina complicaciones irreversibles; en los niños
no tratados y en los adultos no inmunes la tasa de letalidad
excede considerablemente del 10%.

Examen de sangre

La preparación de buenas extensiones

sanguíneas dependerá en gran medida de la
pulcritud de los portaobjetos, así como del resto del
material analítico, que debe de estar perfectamente
lavado en alcohol y secado, antes de preparar la
extensión. Para preparaciones permanentes se debe
utilizar material nuevo.

La preparación de sangre fresca debe ser

suficientemente delgada para que no queden los
parásitos enmascarados por las células
sanguíneas. Se coloca una gota en un porta (pudiendo
diluirse con suero salino) y se tapa con cubre para evitar la
coagulación. El análisis de sangre fresca es
práctico para la detección de trypanosomas y
microfilarias, por su característica forma de moverse.
Los trypanosomas se ven con un objetivo potente y poca
iluminación . Las microfilarias se detectan con bajos
aumentos. El movimiento en vivo de los parásitos atrae
la atención del observador facilitando el trabajo .
Pero para su determinación específica es
necesario realizar una posterior tinción
permanente.

Para el estudio de parásitos de la Malaria,

Trypanosomas, Filarias y otros, se deben de hacer frotis,
tanto finos como gruesos.

Frotis: Es una capa de células

sanguíneas regularmente distribuidas. Los frotis
delgados producen poca distorsión en la estructura
morfológica de los parásitos. Se usan para
detectar la malaria, tripanosomas y microfilarias. Si la
película de sangre es demasiado gruesa no se ve la
estructura del parásito.

Los frotis gruesos, aunque producen la

distorsión de los parásitos, permiten analizar
mayor cantidad de sangre y aumentan la probabilidad de
detectarlos, haciendo el análisis tres veces
más rápido. Sin embargo, si se hacen mal
resultan inútiles.

PROCEDIMIENTO

Es preferible emplear sangre periférica

(lóbulo de la oreja, yema del dedo) eliminando
previamente con alcohol la grasa de la piel . La
incisión debe ser limpia y profunda, sin que se
precise apretar la herida para que sangre. La
extensión debe de ser rápida para evitar la
coagulación. Es preferible la sangre arterial pues la
venosa distorsiona los resultados.

Frotis delgado:

1. No olvides de usar guantes quirúrgicos

como medida de bioseguridad.

2. Haz la incisión en la yema del dedo, tal

como se te recomienda al inicio

3. Coloca una gota de sangre a 2 cms del extremo de

la lámina portaobjetos

4. con el borde de otro porta contacta con la gota

de sangre y deja que se extienda la sangre por la
línea de contacto.
5. Desplaza el segundo porta sobre el primero con
una inclinación de 30º haciendo una
extensión uniforme y fina. Deja secar al aire y
tiñe.

Frotis grueso:

1. Sigue los pasos 1, 2 y 3 del proceso

anterior

2. Con la esquina de otro porta se extiende la

sangre con movimiento circular y un diámetro de 15
mm.

3. Deja secar y tiñe con Giemsa

1:50

Observación de láminas
coloreadas

1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en

los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude
sólo al tornillo micrométrico y gradúa
el espécimen

2. Observa el trofozoito de T. cruzi, e

identifica la forma, núcleo, flagelo y membrana
ondulante. Ahora, observa los nidos de
amastigotas.

3. Haz la misma observación con los

amastigotas y promastigotas de Leishmania.

4. Ahora, observa las formas de Plasmodium

vivax.

Observación de Trichomonas
vaginalis:

1. Haz un preparado en fresco con el hisopo

conteniendo la secreción vaginal y cúbrelo con
una laminilla

2. Observa a 10X y luego a 40X, busca formas

móviles del protozoario.

CUESTIONARIO
1. ¿Qué diferencias observas entre las
diferentes fases evolutivas de Trypanosoma?

_________________________________________________________________________
_________________________________________________

2. ¿Qué es lo que hace el Plasmodium

en el interior del organismo humano?

_______________________________________________________________

3. Se dice que Leishmania es causante de la

úlcera cutánea ¿Qué enfermedades
producen L. donovani y L.
tropica?

_________________________________________________________________________
________________

4. ¿Por qué T. vaginalis

causa síntomas sólo en las mujeres?

_________________________________________________________________________
_______________________________________

5. Menciona los diferentes vectores que transmiten a

los parásitos hemáticos y tisulares

_________________________________________________________________________
_____________________________________

OBSERVACIONES

Representa gráficamente lo que has observado

durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:

___________________________________________________________

Práctica Nº 14

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 15

ESTUDIO PARASITOLÓGICO: LOS TREMATODOS

OBJETIVO

Que el alumno conozca la morfología de los

tremátodos y sus formas evolutivas.

Que sepa diferenciar los diferentes estadios de

estos parásitos

MATERIALES

 Muestras de hígado con

fascioliosis
  Láminas portaobjetos

 Láminas cubreobjetos

 Bisturí

 Láminas con preparados permanentes de:

Fasciola hepatica, Paragonimus sp, Schistosoma
mansoni, Echinostoma. Fases evolutivas de huevo,
miracidio, redia, cercaria y metacercia

 Microscopio

 Estereoscopio

INTRODUCCIÓN

Los trematodos o duelas, son una

clase de platelmintos parásitos internos y externos,
tanto de vertebrados como invertebrados. Poseen ganchos o
ventosas en su parte ventral para sujetarse a las
víctimas; su adaptación parásita se ha
traducido en una ausencia de órganos sensoriales,
tales como los ojos. Aunque son hermafroditas y se da la
autofecundación, algunos como los Schistosomas
presentan macho y hembra. En los trematodos del orden
digenéticos, durante sus diferentes estados
larvarios ocupan otros tantos hospederos diferentes
(generalmente invertebrados), para después vivir en un
hospedero definitivo durante su etapa adulta (generalmente
vertebrados). Las duelas suelen vivir en el intestino y otras
cavidades del cuerpo de otros animales (también en la
sangre). Se defienden de la acción de los jugos
digestivos de sus hospederos, mediante una cutícula
muy resistente que reviste su superficie corporal.

Peligros en el laboratorio

Pueden encontrarse estadios infectivos de

Schistosoma spp, (cercarla) y Fasciola spp.
(metacercaria) en el agua o enquistados en plantas
acuáticas en acuarios que se utilizan en los
laboratorios para mantener caracoles marinos, como hospederos
intermedios. La penetración de cercaria de Schistosoma
por la piel y la ingestión accidental de metacercaria
son los peligros primarios. La disección o el
aplastamiento de caracoles infectados con Schistosoma puede
provocar la exposición de la piel o membranas mucosas
a gotas conteniendo cercarias; además, la metacercaria
puede ser transferida inadvertidamente de las manos a la boca
por los dedos o guantes tras el contacto con la
vegetación acuática contaminada o superficies
de acuarios.

Las tres formas más evidentes de combatir la

esquistosomiasis son: practicas higiénicas adecuadas,
tratamiento de los huéspedes infectados y
eliminación de los caracoles. Existe tratamiento
seguro y efectivo para la mayoría de las infecciones
provocadas por trematodos.

Los trematodos tienen un ciclo biológico con

diferentes fases que se representan en la figura
1.

Figura 1.

Ciclo biológico de los

Trematodos

PROCEDIMIENTO

Siempre debes utilizar guantes

1. Con el bisturí, haz cortes del

hígado y con una pinza quita un espécimen
adulto de Fasciola, observa su forma, color ,
tamaño
2. Luego, con el mismo bisturí secciona a la
Fasciola aproximadamente a nivel de la ventosa
ventral.

3. Con un mondadientes raspa la zona seccionada

sobre una gota de lugol contenido en una lámina
portaobjetos

4. Cúbrelo con una laminilla y examina al

microscopio a 10X, verás gran cantidad de huevos del
parásito, observa su tamaño y color.

Observación de láminas
coloreadas

1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en

los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude
sólo al tornillo micrométrico y gradúa
el espécimen

2. Observa los adultos coloreados de Fasciola,

Paragonimus, Schistosoma y Echinostoma, haz diferencia entre
las estructuras internas de estos adultos.

3. Realiza la misma observación con las

formas evolutivas: miracidio, redia, cercaria y
metacercaria.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué diferencias observas entre las

diferentes fases evolutivas de Fasciola?

________________________________________________________________

2. Menciona en qué lugares del cuerpo humano

se ubican los adultos de los tremátodos
estudiados

_______________________________________________________________

3. Los huevos que has separado de los adultos de

Fasciola ¿son infecciosos para el hombre ?
Explica

_________________________________________________________________________
_________
4. ¿De qué manera causa
infección Schistosoma mansoni en el
hombre?

_________________________________________________________________________
___________

5. ¿Qué medidas preventivas das para

evitar la infección con tremátodos?

_________________________________________________________________________
_____________________________________

OBSERVACIONES

Representa gráficamente lo que has observado

durante el desarrollo de la práctica.

CONCLUSIONES:

________________________________________________________

Práctica Nº 15

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________
 PRÁCTICA
Nº 16

ESTUDIO PARASITOLÓGICO: LOS CESTODOS

OBJETIVO

Que el alumno conozca la morfología de los

cestodos y sus formas larvarias.

MATERIALES

 Muestras de hígado con

hidatidosis

 Muestras conservadas de adultos de

tenias

 Materia fecal

 Láminas portaobjetos

 Láminas cubreobjetos

 Bisturí

 Láminas con preparados permanentes de

estructuras de: T. saginata, T. solium,
Hymenolepis, Echinococcus, Dypilidium,
Diphyllobothrium.

 Microscopio

 Estereoscopio

INTRODUCCIÓN

Los cestodos o tenias son platelmintos hermafroditas

con el cuerpo segmentado y desprovisto de tubo digestivo, ya
que se alimentan directamente por ósmosis de los
nutrientes existentes en el intestino del hospedero. El
cuerpo de las tenias adultas, llamado estróbilo,
aplanado dorsoventralmente, está formado por una serie
de segmentos, anillos o proglótides (de 3 a 4.000),
tanto más grandes y maduros cuanto más disten
del escólex o cabeza, provisto de una serie de
ventosas o ganchos mediante los que se adhieren. En
función del número de anillos se diferencia en
inmaduros y maduros o grávidos. Las tenias, hasta
llegar al estado adulto, pueden pasar por diversas fases en
un solo hospedero (Hymenolepis nana) o, lo que es
más frecuente, en diversos hospederos intermediarios,
que son específicos para cada cestodo. Estas fases
son:

 Huevo o embrióforo .

 Oncósfera o embrión
hexacanto.

 Larva que según la especie puede ser:

Cisticerco, Cisticercoide, Cenuro, Hidátide,
Procercoide, Plerocercoide.

 Adulto.

El hombre puede ser parasitado por cestodos adultos

y en este caso, es el hospedero definitivo, fijándose
a la pared intestinal. El hombre también puede ser
parasitado por formas en estado larvario y en este caso es
hospedero intermediario, y las larvas pueden tener diversas
localizaciones: hígado, pulmón,
músculos , ojos, etc.

Las tenias presentan distintos tipos de ciclos

biológicos que se representan en las figuras 1, 2 y
3.

Las infecciones producidas por cestodos son debidas

a Echinococcus granulosus, Taenia solium e
Hymenolepsis nana. La vía de
penetración en el organismo es por ingestión de
huevos infectivos de E. granulosus o T.
solium. H. nana es un parásito
cosmopolita que no requiere de un hospedero intermediario y
que se transmite directamente por ingestión o bien a
través de heces infectadas de humanos o
roedores.

Figura 1

Ciclo biológico de
Taenia saginata
 Figura 2

Ciclo biológico de
Taenia solium

Figura 3

Ciclo biológico de
Hymenolepis nana en las heces de humanos, que son el
hospedero definitivo de estos
parásitos.
Precauciones recomendadas

Se recomienda el uso de guantes para las operaciones

que puedan implicar el contacto con heces o con superficies
contaminadas con heces frescas procedentes de perros
infectados con E. granulosus, de heces procedentes
de humanos infectadas con T. solium y heces de
humanos o roedores infectados con Hymenolepsis
nana.

PROCEDIMIENTO

Siempre debes utilizar guantes

1. Prepara láminas portaobjetos con muestras

de heces como ya sabes hacerlo

2. Observa al microscopio a 10X y 40X buscando

huevos de cestodos, grafícalos.

Observación de láminas
coloreadas

1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en

los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude
sólo al tornillo micrométrico y gradúa
el espécimen

2. Observa las diferentes formas de escólex

de las tenias estudiadas, grafícalos.

3. Realiza la misma observación con los

proglótidos grávidos de las tenias mostradas,
grafícalos.

4. Observa el espécimen adulto de

Echinococcus, grafícalo

CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son las formas larvarias de

los cestodos estudiados? Y ¿Cuáles pueden estar
como tales en el hombre?

_________________________________________________________________________
_________________________________________________

2. ¿Por qué es difícil eliminar

los adultos de las tenias del tracto intestinal?
_________________________________________________________________________
______________________________________________

3. ¿Qué es la neurocisticercosis
humana?

_________________________________________________________________________
_________________________________________

4. ¿De qué manera causa

infección Diphyllobothrium en el hombre?

_________________________________________________________________________
_______________________________________

5. ¿Qué medidas preventivas das para

evitar la infección con céstodos?

_________________________________________________________________________
_____________________________________

OBSERVACIONES

Representa gráficamente lo que has observado

durante el desarrollo de la práctica.
CONCLUSIONES:
_________________________________________________________________________
______________

Práctica Nº 16

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

PRÁCTICA
Nº 17

ESTUDIO PARASITOLÓGICO: LOS NEMATODOS

OBJETIVO

Que el alumno esté en condiciones de conocer

y diferenciar la morfología de los
nematodos.

MATERIALES

 Materia fecal

 Láminas portaobjetos

 Láminas cubreobjetos

 Especimenes adultos de Ascaris y Toxocara

conservados

 Láminas con preparados permanentes de

adultos de: Trichuris, Enterobius, Uncinarias.

 Microscopio

 Estereoscopio

INTRODUCCIÓN

Los nematodos (de nemas, hilo, y oedes, similar,

parecido) son gusanos filiformes, con un extremo anterior
provisto de papilas, ganchos, placas o dientes (para fijarse
en los tejidos o abrirse paso en ellos), y otro posterior, de
morfología variable. Algunas especies de nematodos son
vivíparas (triquina) u ovivíparas
(Strongyloides), pero la mayoría son
ovíparas.
Los nematodos tienen diferentes tipos de ciclos
vitales. La mayoría de ellos tienen un hospedero
definitivo, y se produce la transmisión a otro por
ingestión de huevos o de larvas, penetración de
éstas a través de la piel o las mucosas, o bien
a través de un hospedero intermediario
(artrópodo), en el que sufre un ciclo más o
menos complicado. Los huevos eliminados por las heces, orina,
esputo y piel se convierten en larvas, que presentan diversas
mudas o fases hasta invadir al nuevo hospedero. En algunas
especies, el huevo es la única forma
infectante.

Se han descrito casos de infecciones asociadas al

laboratorio con Ascaris, Strongyloides y Enterobius. Para
aquellas personas que están sensibilizadas pueden
representar un riesgo las reacciones alérgicas a
diferentes componentes antagónicos de los nematodos,
como por ejemplo antígenos en forma de aerosol de
Ascaris. No se conocen infecciones asociadas con animales de
laboratorio, incluidos los artrópodos, pero las larvas
infectivas de Strongyloides contenidas en las heces de
primates no homínidos, representan un peligro
potencial de infección para los cuidadores de animales
y personal de laboratorio.

Los huevos y larvas en las heces frescas de

hospederos infectados, en general, no son infecciosos. El
desarrollo a etapas infecciosas puede transcurrir en
períodos de un día a varias semanas. La
ingestión de huevos infectados o la penetración
a través de la piel de larvas infectivas representan
el principal peligro.

Los artrópodos infectados con filarias

representan un peligro potencial para el personal de
laboratorio. En este colectivo, con exposiciones repetidas a
antígenos de Ascaris en forma de aerosol, es frecuente
desarrollar hipersensibilidad.

PROCEDIMIENTO

Siempre debes utilizar guantes

1. Prepara láminas portaobjetos con muestras

de heces como ya sabes hacerlo
2. Observa al microscopio a 10X y 40X buscando
huevos de nematodos, grafícalos.

Observación de láminas
coloreadas

1. Ahora, observa lo que te muestra el profesor en

los microscopios, si no puedes verlo nítidamente acude
sólo al tornillo micrométrico y gradúa
el espécimen

2. Observa los adultos de los diferentes nematodos,

grafícalos.

3. Observa el espécimen adulto de Ascaris y

Toxocara, grafícalos

CUESTIONARIO

1. ¿Por qué se dice que los nematodos

son geohelmintos?

_________________________________________________________________________
_________________________________________________

2. ¿Qué acciones patológicas

puede causar Ascaris en el organismo humano?

_________________________________________________________________________
______________________________________________

3. ¿Qué es la anquilostomiasis y
cómo se adquiere?

_________________________________________________________________________
_________________________________________

4. ¿Qué parásito causa la

elefantiasis y de qué forma el hombre adquiere la
infección?

_________________________________________________________________________
_______________________________________

5. ¿Qué medidas preventivas das para

evitar la infección con nematodos?
_________________________________________________________________________
_____________________________________

OBSERVACIONES

Representa gráficamente lo que has observado

durante el desarrollo de la práctica.

CONCLUSIONES:

____________________________________________________________

Práctica Nº 17

Nombre del Alumno:_________________________________

Grupo______

Profesor de Laboratorio____________________________
Calif:________

BIBLIOGRAFÍA
 1. Atías, A. Parasitología
Clínica. 4ª Edición . Editorial El
Mediterráneo. Santiago – Chile.
1998
 2. Cortés, J. Manual de
prácticas de Microbiología.
Cualquiera de estas prácticas se puede hacer
perfectamente en un laboratorio de instituto. URL:
http ://www.joseacortes.com/practicas/

 3. Cortés El Microscopio
óptico compuesto. Práctica de
laboratorio: Manejo y uso del microscopio
óptico compuesto. Mantener seca y limpia la
platina del microscopio. Si se derrama
sobre ella
www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm

 4. Gaitán, MA, Manual de

prácticas de Bacteriología General,
Facultad de Ciencias Químicas, Universidad de
Colima. 1997

 5. gráficos obtenidos de:

http://www.uphs.upenn.edu/bugdrug/antibiotic_manual/gram.htm

 6. Koneman EW, et.al. Diagnóstico

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edición, México . 1994

 7. Las tinciones – Monografias .com.

Tinción Simple: utiliza un solo colorante.
Tinción de Gram: URL:
www.monografias .com/trabajos15/tinciones/tinciones

 8. Mandell/ Douglas/ Bennet. "Enfermedades

Infecciosas, principios y práctica " 4º
Edición., Editorial Panamericana 1995.

 9. Martínez, R. Manual de
Prácticas de Microbiología General, Centro
de Graduados e investigación , Instituto
Tecnológico de Veracruz, l993.

 10. NN.
http://html .rincondelvago.com/biologia_41.html

 11. NN.
http://html.rincondelvago.com/tincion-de-gram.html
 12. Pelczar, M, et.al, Elementos de
Microbiología, McGraw-Hill, México.
1995.

 13. Quero, A. Parasitología.

Departamento de Biología de Organismos y Sistemas
(BOS).
http://www.uniovi.es/bos/Asignaturas/Parasit/

 14. Ríos, A. Parasitología.

Tabasco – México. 2000. URL:
/trabajos12/paras/paras

 15. Torres, M. Parasitología para

Enfermería . Pontificia Universidad Católica
de Chile. 2001.
http://escuela .med.puc.cl/paginas/udas/Parasitologia/Parasitol_03.html

 16. Zinsser, Microbiología,

Editorial Médica Panamericana, 18º
edición, México. 1990