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    Practica #10 Valtex-Urea

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    Practica N° 10 Valtex-Urea

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    VALTEK DIAGNOSTICS

    Phone: + (562) 379 2100


    FAX: + (562) 379 1634
    Las Dalias 1900 - Ñuñoa
    Santiago – CHILE

    UREA-S
    Reactivo para determinación enzimática de urea en suero, plasma y otros fluídos biológicos.
    Para uso en el diagnóstico in vitro. TECNICA

    SIGNIFICANCIA CLINICA PREPARACION DEL REACTIVO DE TRABAJO

    La urea es el producto final mayoritario del metabolismo del Mezclar 1 ml. de Reactivo Salicilato con 50 ul de Suspensión
    nitrógeno proteico en los seres humanos. Constituye la de Ureasa, o preparar el volumen requerido manteniendo la
    fracción más abundante del nitrógeno no proteico. La urea se proporción. (i.e. 30 ml. Reactivo Salicilato + 1,5 ml.
    produce en el hígado y es excretada por la orina. Su Suspensión Ureasa). Almacenar el reactivo de trabajo entre
    elevación es producto de trastornos en la función renal o 2° y 8°C y protegido de la luz. El reactivo de trabajo es
    hepática, problemas dietéticos, diabetes y otros. estable por 30 días almacenado entre 2° y 8°C. y protegido
    de la luz.
    FUNDAMENTOS DEL METODO
    Blanco Standard Desconocido
    La urea presente en la muestra, es desdoblada a amonio por Muestra (ml) ---- ---- 0.01
    acción de la enzima ureasa, según la proposición de Faucet
    y Scott. Standard (ml) ---- 0.01 ----
    Reactivo de Trabajo (ml) 1.00 1.00 1.00
    (NH2)2CO + 2 H2O UREASA > 2 NH3 + CO2 + H2O Incubar 5 minutos a temperatura ambiente (sobre 20° C.) ,o
    3 minutos a 37° C. Agregar a cada tubo:
    El amonio producido reacciona con salicilato e hipoclorito en
    Reactivo hipoclorito (ml) 1.00 1.00 1.00
    ambiente alcalino, formándose un complejo de color verde.
    La intensidad del color producido es directamente Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente (sobre
    proporcional a la cantidad de urea presente en la muestra, y 20° C.), o 5 minutos a 37° C. Leer las absorbancias dentro
    su absorbancia se lee a 600 nm. (580-620). del plazo de una hora.

    REACTIVOS CALCULOS

    La Urea-S de VALTEK® NO CONTIENE FENOL. FACTOR= 66


    Conservados entre 2° y 8° C.y protegidos de la luz, estables Absorbancia Standard
    hasta le fecha de caducidad indicada en cada etiqueta. Urea (mg%) = Factor x Absorbancia desconocido

    - Suspensión de Ureasa OBSERVACIONES


    Ureasa ≥50 U/ml
    Estab. y preserv. no reactivos c.s.
    • Para expresar los valores obtenidos como nitrógeno
    - Reactivo Salicilato
    ureico (mg%), multiplicar el valor obtenido por 0.455.
    Acido Salicílico 5 mM
    • La reacción es lineal hasta 300 mg% de urea. Para
    Nitroprusiato 5 mM
    concentraciones mayores, diluir la muestra
    - Reactivo Hipoclorito
    Hipoclorito 10 mM adecuadamente con agua destilada y multiplicar el
    NaOH 200 Mm resultado obtenido por el factor de dilución
    correspondiente.
    - Solución Standard
    Urea 66 mg% • Los volumenes de reacción pueden ser modificados
    Equivalente Nitrógeno Ureico 30 mg% proporcionalmente sin alteración en los resultados.
    Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s.
    RANGOS DE REFERENCIA
    MUESTRAS
    Suero o plasma:
    Suero, plasma u orina diluída 1:100. El plasma debe Urea : 10 a 50 mg%
    obtenerse utilizando anticoagulantes libres de amonio.No Nitrógeno Ureico : 4.5 a 22.7 mg%
    utilizar fluoruro pues inhibe la acción de la enzima ureasa. La Orina:
    urea es estable en el suero por a lo menos 24 horas a Urea : 15 a 30 g/24 hrs.
    temperatura ambiente, varios días entre 2° y 8° C., más de Nitrógeno Ureico : 7 a 14 g/24 hrs.
    seis meses a -20° C.
    BIBLIOGRAFIA
    EQUIPO REQUERIDO
    1. Berthelot, N.P.E., Repertoire de Chemie Applique
    Espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros capaz de leer 1(284),1959.
    absorbancias a 600 nm. (rango 580 a 620 nm.), timer, 2. Fawcet, J.K.& Scott, J.E., J.Clin.Path. 13(156),1960.
    pipetas y opcionalmente baño termorregulado a 37° C. 3. Chaney, A.L. & Marbach, C.P., Clin.Chem. 8(130),1962.

    E-mail: [email protected] – WEB site: http://www.valtekdiagnostics.com

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