Acta Agronómica 0120-2812: Issn: Actaagronomica@palmira - Unal.edu - Co
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ISSN: 0120-2812
actaagronomica@palmira.unal.edu.co
Universidad Nacional de Colombia
Colombia
"Corp ora ci ón Colombiana de Investigación Agropecuaria (Corpoica). 2Centro de Investigación Nataima. Km 9 Vía Espinal-Ibagué.
Tolima, Colombia. *Autor para correspondencia: mlozano@corpoica.org.co
Resumen
El cultivo de maracuyá (Passiflora edulis), de gran importancia económica para Colombia, actualmente
es afectado por la enfermedad del marchitamiento vascular causado por Fusarium sp . lo que hace ne-
cesario la búsqueda de alternativas que permitan un control eficiente de esta enfermedad. Aislados de
las bacterias Azotobacter spp., Azospirillum spp. y el hongo Trichoderma spp., fueron evaluados como
potenciales biocontroladores de Fusarium sp . en pruebas in vitro e in vivo. Las pruebas de "test dual"
evidenciaron que un aislado nativo de Trichoderma sp. y un producto comercial (Trichoderma lignomm),
provocaron la inhibición del crecimiento micelial de Fusarium sp . entre 94.2% y 93.6%, respectivamente .
La evaluación de aislados de Trichoderma sobre plántulas de maracuyá en tres momentos de aplicación
indicó que la inoculación previa disminuyó el porcentaje de infección de las plantas entre un 75 y 50%,
mientras que con aplicaciones después o simultáneamente con el patógeno, el porcentaje de infección
disminuyó en 25%. Estos resultados indican que la aplicación de organismos de biocontrol en semillas
pregerminadas mejora la protección de las plantas contra el fitopatógeno estudiado y son un recurso
importante en el manejo preventivo de las enfermedades de maracuyá.
Palabras clave: Azospirillum spp., Azotobacter spp., biocontrol, Passiflora edulis, Trichoderma spp.
Abstract
The passion fruit crop (Passiflora edulis) is very impartant far the Colombian economy. Nowadays this crop
is affected by damping-off disease caused by Fusarium sp. So, it is necessary to look far alternatives which
allow us to control the disease efficiently. The bacteria Azotobacter spp., Azoospirillum spp. and the fungi
Trichoderma spp., were evaluated as a Fusarium sp. potential biocontrol in In vitro and In vivo test. The
research was carried out in laboratory and nursery. The "dual test" showed that an wild isolate of Tricho-
derma spp. and a commercial product (Triclwderma lignorum), inhibited the mycelial growth of Fusarium
sp. between 94.2 and 93.6 % respectively. Trichoderma assessment on passion fruit plantlets at three
application times demonstrated that applying Trichoderma befare Fusarium. sp. appearance, decreased the
disease occurrence between 75.0 and 50.0 %, whereas applying Trichoderma after ar simultaneously with
the pathogen the disease in the plantlets decreased until 25.0 %. This suggest that inoculation of preger-
minated seeds with bio-control agents improved the protection of plants against the pathogenic and they
are an important tool for management of diseases in plants of maracuyá.
Key words: Azospirillum spp ., Azotobacter spp ., biocontrol, Passiflora edulis, Trichoderma spp.
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MICROORGANISMOS RIZOSFÉRICOS, POTENCIALES ANTAGONISTAS DE FUSARIUM SP.
CAUSANTE DE LA PUDRICIÓN RADICULAR DE MARACUYÁ (PASSIFLORA EDUUS SIMS)
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aplicado ocho días después de la inoculación ml (Sutton, 2011). Se evaluaron dos momentos
del antagonista; momento 2: inoculación del de aplicación: momento 1: inoculación previa
patógeno y del antagonista al mismo tiempo; de los antagonistas a la semilla pregerminada
y momento 3: aplicación de patógeno ocho y siembra de éstas 48 h después de la aplica-
días antes del antagonista. Se utilizaron tres ción del patógeno en el sustrato; momento 2:
controles de la forma siguiente: químico (48% inoculación de los antagonistas a las semillas
p/v de Mefenoxam, equivalente a 465 gil de pregerminadas y siembra ocho días antes de la
Metalaxil-M; negativo o blanco consistente aplicación del fitopatógeno en el sustrato. Las
en plántulas sin inóculos; y positivo o plán- observaciones del desarrollo de la enfermedad
tulas inoculadas con solo el fitopatógeno. se hicieron durante cuatro meses, registrando
Las observaciones sobre el desarrollo de la la sintomatología externa y la mortalidad de
enfermedad se hicieron durante cuatro me- las plantas. El ensayo se realizó con un diseño
ses, registrando la sintomatología externa de completamente al azar con cuatro repeticio-
ésta y la mortalidad de las plantas. Se utilizó nes. Se establecieron, además, tres controles,
un diseño completamente aleatorizado con corno se describió anteriormente.
cuatro repeticiones. A todas las plántulas se
les realizó un corte superficial con un bisturí Análisis de resultados
en el cuello de la raíz en el momento de la Los datos fueron procesados mediante análi-
inoculación del patógeno. sis de varianza y se establecieron diferencias
de medias con la prueba de rango múltiple
Evaluación de la aplicación de microorganismos Tukey al 95% (P < 0.05), utilizando el progra-
antagónicos en semillas pregerminadas y sem- ma Statistix 8 (2008).
bradas en sustrato inoculado con Fusarium sp.
Las semillas de maracuyá fueron desinfec- Resultados y discusión
tadas con hipoclorito de sodio al 0.8% por
un minuto y lavadas tres veces con agua Actividad antagónica de Trichoderma spp.
estéril. Luego fueron colocadas en agua sobre Fusarium sp.
por 24 h para su pregerminación. Los mi- La evaluación de la actividad antagónica
croorganismos antagónicos Azotobacter spp. mostró diferencias entre los tratamientos
(015 y 028), Azospirillum spp. (002 y 023), (P < 0.001); donde el aislamiento Tr003 y el
Trichoderma sp. (Tr003) fueron cultivados producto comercial T. lignorum presentaron
en medios específicos (Ashby, NFB semi- los mayores porcentajes de inhibición del cre-
sólido y Jugo V8). El inóculo de Fusarium cimiento micelial de Fusarium sp. con 94.2
sp. fue obtenido mediante la metodología y 93.6%, respectivamente. Según la escala
anteriormente mencionada. Se utilizó una propuesta por Bell et al. (1982), el aislamiento
concentración de 1 x 10 6 conidios/rnl para el nativo Tr003 fue calificado corno clase 4, ya
caso de Trichoderma spp. y Fusarium sp. La que invadió totalmente la superficie del pató-
concentración de los aislamientos bacterianos geno y esporuló sobre él (Cuadro 1). Avenda-
se ajustó por colorimetría a 600 x 10 6 UFC/ ño et al. (2006) en pruebas de antagonismo
Cuadro 1. Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial de Fuearium. sp. en cultivos de plato dual con Trichoderma spp.
y valoración según la escala de Bell et al. (1982).
Tratamiento Inhibición Calificación
(%) (Escala de Bell et al., 1982)
aisladoTr003 94.2 a* 3.S a
T. lignomm 93.6 a 3.3 ab
T. harzianum 79.4 b 2.8 abe
ais ladoTr001 78.7 b 3.0 abe
ais ladoTr002 77.4 b 2.3 be
Pre-formulado 73.6 b 2.0 e
* Valores con letras iguales en columnas no presentan diferencias estadísticas significativas, según la prueba de Tukey (P
< 0.05).
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MICROORGANISMOS RIZOSFÉRICOS, POTENCIALES ANTAGONISTAS DE FUSARIUM SP.
CAUSANTE DE LA PUDRICIÓN RADICULAR DE MARACUYÁ (PASSIFLORA EDUUS SIMS)
in vitro con Trichoderma spp. encontraron de enzimas que produce Trichoderma spp.
igualmente inhibiciones del crecimiento de F. corno glucanasas, quitinasas, exonucleasas,
oxysporum con invasión total del micelio del proteasas, además de otros metabolitos alta-
patógeno siete días después de la aplicación. mente tóxicos corno ácido harziánico, alamen-
Según Tovar (2008) aislamientos de Tricho- tianas, peptaiboles, antibióticos, 6-pentil-a-
derma spp. inhibieron el crecimiento de R. pirona, viridina, gliovirina, glisoperinas, ácido
solani hasta 63.67% después de 72 h. Según hepteldico, entre otros (Benítez et al., 2004).
Melo y Faull (2000) T. harzianumy T. koningii Según Michel et al. (2005) cepas de Tricho-
inhibieron entre el 79-82% del crecimiento derma producen quitinasas y glucanasas e
micelial de R. solani, demostrando diferentes inhiben el potencial reproductivo de conidios
mecanismos de acción donde T. harzianum de F. oxysporun hasta en 95% e inhiben el
parasita y destruye el micelio de R. solani y crecimiento micelial en 34%.
T. konningii produce cantidades considerables
de antibióticos. Efecto de Trichoderma spp. en el desarrollo de
la pudrición radicular en plantas de maracuyá
Evaluación del efecto de extractos crudos de inoculadas con Fusarium sp.
antagonistas sobre la germinación de conidios En el estudio realizado en casa de mallas, la
de Fusarium sp. inoculación previa presentó diferencias (P =
Se presentaron diferencias estadísticas entre 0.0003) entre los tratamientos. Los aislamien-
los tratamientos (P < 0.001), existiendo dife- tos nativos Tr002 y Tr003 de Trichoderma dis-
rencias entre todos los microorganismos frente minuyeron la infección de las plantas entre un
al control y diferencias entre antagonistas (Fi- 75 y 50%, respectivamente. No obstante, cuan-
gura 1). El producto comercial T. lignorumy el do se aplicaron simultáneamente con el pató-
aislamiento nativo de Trichoderma sp. (Tr003) geno la reducción de la infección solo fue de
presentaron el mayor porcentaje de inhibición 25% y cuando se aplicaron ocho días después
de la germinación de conidios de Fusariumsp., de la inoculación del patógeno no se observó
con 44.7 y 40.7%, respectivamente; mientras reducción de la enfermedad. Los productos de
que la inhibición observada con los extractos Trichoderma sp. (preformulado) y T. lignorum
de los aislados de Azotobacter y Azospirillum presentaron 100% de infecciones en todos los
fue inferior a 20% (Figura 1). La inhibición de momentos de aplicación (Cuadro 2), lo que
la germinación puede ocurrir por la variedad indica que algunas cepas del hongo Trichoder-
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Tratamientos
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Cuadro 2. Porcentaje de plantas de maracuyá afectadas por Fusarium sp. cuatro meses después de la inoculación del patógeno
y la aplicación de los diferentes tratamientos (aislados y momentos de aplicación).
Tratamientos Momentos de aplicación de Trichoderma spp.
Inoculación previa de Inoculación de Trichoderma spp. Inoculación previa
Trichoderma spp. y Fusarium sp. al mismo tiempo de Fusarium spp.
(% infección) (% infección) (% infección)
Control positivo 100.0 a* 100.0 b 100.0 b
Trichodenna sp. 100.0 a 100.0 b 100.0 b
(preformu1ado)
T. lignomm 100.0 a 100.0 b 100.0 b
T. harzianum 75.0 ab 100.0 b 75.0 b
TrOOl 75.0 ab 75.0 b 100.0 b
Tr003 50.0 ab 100.0 b 100.0 b
Tr002 25.0 ab 75.0 b 100.0 b
Control blanco 0.0 b 0.0 a 0.0 a
Control químico 0.0 b 75.0 b 50.0 ab
* Valores con letras iguales en columnas no presentan dife rencias estadísticas significativas, según la prueba de Tukey a 195%
(P < 0.05).
Cuadro 3. Porcentajes de p lantas afectadas por Fusarium sp. cuatro meses después de aplicado el patógeno y los aislados de
Trichoderma spp., Azospirillum spp. y Azotobacter spp. en semillas pregerminadas de maracuyá.
Tratamientos Momentos de aplicación
Semillas tratadas con microorganismos Semillas tratadas con Fusarium sp. 48
antagónicos ocho días antes de la inocu- horas antes de la aplicación de los
lación de Fusarium sp. microorganismos antagónicos
(% infección) (% infección)
Control positivo 100.0 a* 100.0 a
Azospirillum 023 50.0 ab 87.5 ab
Azotobacter 028 50.0 ab 75.0 abe
Azotobacter015 37.5 b 50.0 abe
Control químico 25.0 b 50.0 abe
Azospirillum 002 12.5 b 62.5 abe
Blanco 0.0 b 0.0 d
Tr003 0.0 b 12.5 cd
Trichodenna lignornm 0.0 b 25.0 bcd
* Valores con letras iguales en columnas no presentan diferencias estadísticas significativas, según la prueba de Tukey a l
95% (P < 0.05).
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MICROORGANISMOS RIZOSFÉRICOS, POTENCIALES ANTAGONISTAS DE FUSARIUM SP.
CAUSANTE DE LA PUDRICIÓN RADICULAR DE MARACUYÁ (PASSIFLORA EDUUS SIMS)
3), mientras que los tratamientos con rizobac- Avendaño, C.; Arbeláez, G.; y Rondón, G. 2006.
terias y el control químico fueron similares Control biológico del marchitamiento vascular
al control positivo y su protección varió entre causado por Fusarium oxysporum f. sp. Phaseoli
12.5 y 50% (Cuadro 3). González et al. (2004) en frijol Phaseolus vulgaris, mediante la acción
combinada de Entrophospora colombiana, Tri-
observaron que la aplicación de T. harzianum
chodermasp., y Pseudomonafluorescens. Agron.
en semillas de melón redujo la incidencia de F
Col. 24:62 - 67.
oxysporum entre 37.5 y 46.3%. Rincón (1991) Bashan, Y. 1998. Inoculants of plant growth-pro-
demostró el efecto antagónico de Trichoderma moting bacteria for use in agriculture. Biot. Adv.
sobre R. solani en semilleros de café, Yobtuvo 16:729 - 770 .
una reducción de 55% en la incidencia de la Bell, D.; Well, H.; y Markham, C. 1982. In vitro anta-
enfermedad cuando inoculó el sustrato con el gonism of Trichoderma species against six fungal
hongo antagonista. Betancourt (1997) realizó plant pathogens. Phyt. 72:379 - 382.
un estudio empleando la cepa de Trichoderma Benítez, T.; Rincón, A.; Limon, C.; y Codón, A. 2004.
Th003 frente al fitopatógeno F oxysporum Review: Biocontrol mechanism of Trichoderma
en semillas de tomate en preemergencia y strains. Intern. Microb. 7:249 - 260.
observó que el porcentaje de protección fue Betancourt, J. 1997. Evaluación de una técnica de
pregerminación controlada en matriz sólida en
del 66.94% vs. el control.
combinación con los agentes de control biológico
Trichoderma koningii y Pseudomonas fluorescens
Conclusiones para el control del marchitamiento vascular del
• Las interacciones que tienen lugar en la tomate causada por Fusarium oxyspornm. Tesis
de grado (Biología). Universidad de los Andes.
rizósfera son muy complejas, es necesa-
Facultad de Ciencias Biológicas. Bogotá. 148 p.
rio profundizar en su conocimiento para
Fravel, D.; Olivain, C.; y Alabouvette, C. 2003. Re-
poder establecer estrategias que permitan search review Fusarium oxysporum and its bio-
un manejo más eficiente de los sistemas control. New Phyt. 157:493 - 502.
agrícolas. González, R.; Montealegre, J.; y Herrera, R. 2004.
• Los resultados de este trabajo indican Control biológico de Fusarium solani en tomate
la importancia de la colonización previa mediante el empleo de los bioantagonistas Pae-
de la rizósfera por organismos benéficos nibacillus lentimabus y Trichoderma sp. Ciencia
corno estrategia de manejo integrado de e Investigación Agraria 31: 1 - 5
enfermedades radicales en plantas, al Haahtela, K.; Wartiovaara, T.; Sundman V.; y
evidenciarse el efecto de las diferentes Skujins, J. 1981. Root- Associated N2 fixation
cepas de Trichoderma spp. disminuyendo (acetylene reduction) by enterobacteriaceae and
Azospirillum strains in cold- c1imate Spodosols.
el porcentaje de infección de las plantas
Applied Environ. Microb. 41 :203 - 206.
entre un 75 y 50%.
Harman, G. E.; Lorito, M.; y Lynch, J. M. 2004.
Uses of Trichoderma spp. to al1eviate o remediate
Agradecimientos soil and water pollution. Adv. Applied Microb.
56:313 - 320.
Esta investigación fue posible gracias a los
Hernández, J.; Arcia, M.; y Ramírez, R. 1999. Com-
recursos del Proyecto Manejo Preventivo de
paración in vitro del control químico y biologico de
la Pudrición Radicular de Maracuyá en el De- Dothiorella sp. causante de la pudrición apical de
partamento del Huila, ejecutado por Corpoica la guayaba (Psidium guajava L). Rev. Fac. Agron.
y cofinanciado por la gobernación del Huila, 16:49 - 55 .
Codecyt y Colciencias. Lozano-Tovar, M. D.; Rozo, L. S.; Ruiz, N.; Quiroga,
L. F.; Y Sandoval-Lozano, L. A. 2008. Manual de
Referencias manejo preventivo de la secadera (Fusarium sp.)
en el cultivo de maracuyá. Corporación Colombia-
Armstrong, G. M. Y Armstrong, J. K. 1981. Formae na de Investigación Agropecuaria Corpoica. 76 p.
specials and races of Fusarium oxyspornm causing Mantilla, E. 2007. Evaluación de la acción de un
wilt diseases. En: Nelson P.E., Toussoun T.A., bioinoculante sobre un cultivo de crisantemo
Cook R.J. (eds.). Fusarium: disease, biology, and (Chrysanthemum morijolium varo yoco ono) en
taxonomy. University Park, PA, EE.UU. State periodo de enraizamiento. Colombia. Tesis de
University Press. p. 391 - 399. grado. Pontificia Universidad Javeriana. Facultad
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