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    Postlaboratorio Práctica 4 - Separación de Células

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    Shirley Rodríguez
    Se realizó un experimento para separar leucocitos de eritrocitos mediante lisis diferencial de amonio. Se tomó una muestra de sangre y se sometió a varios procesos que incluyeron lisis con buffer de amonio y lavados con solución salina usando centrifugación. Esto permitió separar los leucocitos, que presentan membranas más resistentes. Finalmente, se obtuvieron muestras puras de leucocitos para futuros usos.

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    Shirley Rodríguez
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    Se realizó un experimento para separar leucocitos de eritrocitos mediante lisis diferencial de amonio. Se tomó una muestra de sangre y se sometió a varios procesos que incluyeron lisis con buffer de amonio y lavados con solución salina usando centrifugación. Esto permitió separar los leucocitos, que presentan membranas más resistentes. Finalmente, se obtuvieron muestras puras de leucocitos para futuros usos.

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    Se realizó un experimento para separar leucocitos de eritrocitos mediante lisis diferencial de amonio. Se tomó una muestra de sangre y se sometió a varios procesos que incluyeron lisis con buffer de amonio y lavados con solución salina usando centrifugación. Esto permitió separar los leucocitos, que presentan membranas más resistentes. Finalmente, se obtuvieron muestras puras de leucocitos para futuros usos.

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    Shirley Rodríguez
    Se realizó un experimento para separar leucocitos de eritrocitos mediante lisis diferencial de amonio. Se tomó una muestra de sangre y se sometió a varios procesos que incluyeron lisis con buffer de amonio y lavados con solución salina usando centrifugación. Esto permitió separar los leucocitos, que presentan membranas más resistentes. Finalmente, se obtuvieron muestras puras de leucocitos para futuros usos.

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    Universidad Mariano Gálvez

    Sede Huehuetenango
    Facultad de Ciencias Químicas y Biológicas
    Curso: Biología Celular l
    Laboratorio
    Catedrática: Licda. María Chavarría

    Post-laboratorio No. 4
    Separación de Células.

    Shirley Yadira Rodríguez Rivas


    1109-21-1090
    Daniel isaí Gómez Marroquín
    1109-21-8912
    Giancarlo André Ordoñez Castillo
    1109-20-602
    RESUMEN

    Se realizó un proceso de lisis de eritrocitos para la obtención de leucocitos de


    sangre periférica mediante la lisis diferencial de amonio y diferentes procesos que
    se realizaron con el fin de separar distintos tejidos y diferentes muestras mediante
    varios métodos y técnicas por los cuales los leucocitos presentan una membrana
    con características distintas al eritrocito, lo que las hace más resistentes a la
    influencia de la solución. Al utilizar este principio, es posible separar los leucocitos
    de los eritrocitos al realizar una lisis diferencial de amonio y se llegó a distinguir
    estos tipos de células por métodos de separación de tejidos los cuales se
    promovieron durante dicha práctica, los cuales se visualizaron en distintos videos de
    los cuales se sacaron todos los datos relacionados incluyendo los resultados dados
    en el siguiente reporte.

    METODOLOGÍA

    La técnica que se usó para realizar el experimento y con el cual se llevó a cabo fue
    por medio de la lisis diferencial de amonio el cual facilitó la separación de células en
    el tejido que en este caso fue sanguíneo que se trabajó también con una solución
    salina que realizó un lavado de células que se purificaron, en este caso se utilizó el
    buffer de amonio con el fin de obtener un proceso de separación en el cual se
    obtuvo leucocitos de sangre periférica, separando sus erocitos y eliminándolos
    poco a poco dando por último proceso la centrífuga que gracias a su proceso los
    leucocitos se vieron más claros y blancos que dio una muestra limpia para el
    experimento que se realizó.
    RESULTADOS
    DISCUSIÓN

    Al momento de obtener la muestra, se toma la medida para llevar un control sobre lo


    que estamos trabajando. Seguidamente se coloca la muestra obtenida dentro de la
    centrífuga y se configura para que ésta trabaje a 3000 rpm por un tiempo de 10
    minutos (previamente se debe saber cómo utilizar la centrífuga) llevando en
    consecuencia una separación del líquido con los precipitados (en nuestro caso, son
    los leucocitos).

    Mientras la centrífuga trabaja, se agregan 10 ml de buffer de lisis de amonio a una


    temperatura de 4°C a un tubo cónico de 15 ml (este proceso se puede hacer
    minutos antes de que termine de centrifugar). Una vez la centrífuga haya terminado
    con la muestra, se observa como los leucocitos quedan en la parte inferior de
    nuestro recipiente, utilizando una pipeta pasteur, se trasladan los leucocitos al tubo
    de 15 ml con el buffer. A continuación se lleva la muestra al frío y se realizan
    homogeneizaciones (pequeños sapesitos al tubo) durante 10 minutos dejando
    actuar así al buffer.

    Una vez pasaron los 10 minutos, se lleva nuevamente a la centrífuga a la misma


    potencia por el mismo tiempo (3000 rpm por 10 min). Una vez la muestra haya
    terminado de centrifugar se repite el proceso realizado anteriormente. Luego de
    dicho proceso, se resuspenden los leucocitos, esta vez en solución salina isotónica
    y se homogeniza por inversión. Esto da como resultado una aclaración de la
    muestra (eliminación de pigmentación) en la cual los leucocitos se verán afectados
    perdiendo su color. Nuevamente el resultado obtenido se lleva a la centrífuga una
    vez más por el mismo tiempo a la misma potencia.

    Se descarta el sobrenadante (se retira el líquido sobrante con mucho cuidado de no


    absorber los leucocitos), y se observa el precipitado (los leucocitos). Seguidamente
    se repite el mismo proceso de lavado con la solución salina y de nuevo se lleva a la
    centrífuga a las mismas condiciones. Una vez la centrífuga haya terminado el
    proceso, se descarta el sobrenadante y se le agrega 1.5 ml de RNALater al tubo con
    las células y se homogeniza para luego dispensar 0.5 ml en cada microtubo.
    Finalmente se rotula el recipiente con el número de mesa y el número de grupo para
    almacenarlo (a una temperatura de -20°C) y ser utilizado en futuras prácticas.
    CONCLUSIONES

    ● Las células monocelulares de la sangre periférica humana (PBMC), son


    utilizadas para investigaciones de los efectos bioactivos alimentarios en
    numerosas células inmunitarias.

    ● La sangre también puede ser separada por su densidad, ya que esta posee
    una densidad menor a la de otras células.

    ● Una centrífuga es utilizada para separar ciertas partículas de una solución,


    esta se programa de forma diferente según la muestra que estemos
    trabajando.

    ● Ciertamente la sangre es una de las sustancias más examinadas dentro de


    un laboratorio, se examina todos sus componentes los cuales son los
    glóbulos blancos y rojos, plasma y plaquetas.

    ● En un principio, la separación de la sangre surgió como una forma de


    transfusión para algunos pacientes que solamente necesitaban de ciertos
    elementos en la sangre.
    REFERENCIAS

    Castell, AE., Leucuona, MA. Y Samperdro EA. (2013). Manual de prácticas de


    laboratorio de Biología celular e histologia Médica. Depto de Biología Celular y
    Tisular, Faculta de Medicina, UNAM. Chernysheva A. et al. (2007).

    Erythrocyte lysis in isotonic solution of ammonium chloride: Theoretical modeling


    and experimental verification. Journal Theoretical Biology (251) pp. 93-107
    ANEXOS

    1. Toma de la muestra

    2. Incorporación del buffer a la muestra

    3. Homogeneización de la muestra
    4. Resultado de homogeneizar periódicamente por 10 minutos

    5. Momento en el que se lleva la muestra a la centrífuga (este se utiliza


    en futuros procesos)

    6. Muestra después de los 10 minutos en la centrífuga


    7. Se agrega la solución s.

    8. Resultado del primer proceso de lisis.

    9. Resultado final del lavado.

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