Guia Practica Bacteriologia
Guia Practica Bacteriologia
Guia Practica Bacteriologia
Código VRA-FR-031
Versión V.3.1
BACTERIOLOGÍA
Documento de Aprobación Acta 025-2022
GUÍA DE PRÁCTICA
ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA ESPECIALIDAD
LABORATORIO CLÍNICO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA
ASIGNATURA: BACTERIOLOGÍA
GUÍA PRÁCTICA
Preparando el camino…
1.2. Escuela Profesional
1. DATOS GENERALES
1.1. ASIGNATURA
1.2. DOCENTE
Docente responsable por Programa de Pregrado
Sede Lima - Chorrillos Ronald Bautista Gómez
Correo electrónico institucional ronalds.bautista@upsjb.edu.pe
Filial Ica Daniel Mejia Robles
Correo electrónico institucional daniel.mejia@upsjb.edu.pe
Filial Chincha Giancarlo Jara Pisconi
Correo electrónico institucional giancarlo.jara@upsjb.edu.pe
2. SUMILLA
3. INTRODUCCIÓN
La asignatura de practica de Bacteriología se realiza de manera presencial de
forma didáctica y practica en los laboratorios de cada sede y/o filiales organizados
desde la primera semana hasta la semana décimo sexta.
Partiendo de los temas básicos sobre Bioseguridad en el laboratorio,
reconocimiento de estructura bacteriana por medio de las diferentes coloraciones
simples y compuestas; reconocimientos de bacterias Gram Positivas y Gram
Negativas; Métodos de asilamiento e identificación bacteriana a través de las
diversas técnicas empleadas en el laboratorio de bacteriología y finalmente se
realiza pruebas de susceptibilidad antimicrobiana por los diversos métodos
conocidos internacionalmente.
Cada práctica se realizará en diferentes sesiones correspondientes que permitan
al alumnado la correcta identificación de bacterias de importancia clínica.
• Cada persona que ingrese a la institución deberá previamente aceptar a través del intranet
la Declaración jurada de estado de salud y adjuntar el certificado del resultado de prueba
rápida COVID-19 negativa, para su envío al Programa de Estudios correspondiente, al
Departamento de Atención Primaria de Salud y a la Jefatura de Seguridad. Esta declaración
jurada es obligatoria para ingresar a los locales en los horarios de cada Programa de
Estudios previstos para actividades de laboratorio y talleres que contemplan las asignaturas
del presente semestre. El Departamento de Atención Primaria de Salud es responsable de
validar la Declaración Jurada y el certificado del resultado de prueba rápida COVID-19, si
es conforme quedará habilitado para el ingreso, caso contrario, se deberá reiniciar el
proceso.
• Toda persona que ingrese a la UPSJB SAC debe identificarse con su respectivo
documento de identidad.
• Toda persona que ingrese y permanezca en las instalaciones de la UPSJB SAC debe
respetar las señales de distanciamiento social.
• El personal asignado a la puerta de ingreso indicara a los estudiantes donde tienen que
lavarse y/o desinfectarse las manos.
• Se instalarán bandeja metálica y felpudo con hipoclorito de sodio al ingreso, para que
todas las personas se desinfecten las suelas de los zapatos, antes de ingresar a la
universidad.
• Los dispensadores con alcohol en gel estarán debidamente señalizados dentro de las
instalaciones de la UPSJB SAC para su constante uso.
• La mascarilla que porte cada persona al ingresar a las instalaciones de la UPSJB SAC
deberá ser la adecuada de acuerdo con las características y especificaciones dispuestas
por el MINSA. La UPSJB SAC se reserva el derecho de limitar el ingreso y/o acceso de
aquellas personas que no cumplan con el uso correcto de la mascarilla, así como de retirar
a aquellas personas que no lleven puesta la mascarilla dentro de las instalaciones de la
UPSJB SAC, ello por cuanto su uso es permanente.
• Todo laboratorio y taller de la UPSJB SAC tiene un aforo del 50% de su capacidad,
teniendo en cuenta el distanciamiento social.
• Cualquier ambiente adicional será modificado para asegurar que se respeten las medidas
de distanciamiento social de entre un (1) a dos (2) metros entre persona a persona,
reubicando carpetas, escritorios, mesas, sillas o bancas, orientados en la misma dirección
(en lugar de uno frente al otro) para reducir la transmisión causada por las gotitas
respiratorias que contienen el virus al momento de hablar, toser o estornudar.
• Toda persona que ingrese al laboratorio o taller deberá contar con los equipos de
protección personal (mascarilla adecuada, guantes, mandil, careta facial y cabello
recogido). El mandil podrá ser desechable o de tela, siendo responsabilidad del estudiante
que el mandil de tela utilizado cumpla con las medidas de desinfección y lavado.
• El ingreso a los laboratorios y talleres estará limitado según los aforos correspondientes.
• Durante las clases los alumnos deberán guardar el distanciamiento social mínimo un metro
(1m) de distancia.
• Se prohibirá el contacto de manos con el rostro, boca, nariz y ojos, salvo que sea necesario
y se haya seguido previamente el procedimiento de limpieza y/o desinfección respectivo.
• El estudiante no deberá compartir sus materiales de clase y no podrá dejarlos sobre las
mesas, esto con el fin de facilitar la desinfección.
• Está prohibido que se utilice joyas, accesorios, barba y bigotes, celulares y laptop toda
vez que son reservorios del virus y demás microorganismos.
• El alumno debe traer ropa ligera y esta debe cambiarse diariamente para ingresar a la
institución, para prevenir el contagio.
• Se darán periodos de receso de 5 min a los estudiantes para que realicen sus pausas
activas con el docente, en el mismo laboratorio y/o taller.
• Si algún alumno o docente presenta algún síntoma, una prueba positiva, o estuvieron
expuestos a alguien con COVID-19 en los últimos 14 días, deberá contactarse con el
departamento atención primaria de salud de la universidad y según evaluación del médico
ocupacional se le derivará al centro de salud según lo requiera.
• Se cerrarán las áreas que recientemente hayan sido utilizadas por la persona enferma y
no se usarán hasta después de limpiarlas y desinfectarlas.
• Se informará a aquellas personas que hayan tenido contacto cercano con una persona
diagnosticada con COVID-19 para que se queden en sus viviendas, controlen los síntomas,
y sigan los procedimientos respectivos si los síntomas se desarrollan.
• Cada grupo de práctica está programado a desarrollar ocho (8) horas académicas en el
laboratorio y/o taller, por tal motivo cada tres (3) horas el docente realizará pausas activas
con los estudiantes en un tiempo de cinco (5) minutos y las dos (2) últimas horas finaliza
también con estas pausas activas.
5. SISTEMA DE EVALUACION
Las evaluaciones de las clases prácticas se realizarán de forma presencial en los
laboratorios de práctica. Se evaluará empleando técnicas de visualización microscópica,
identificación bacteriana a través de láminas fijadas y procedimientos prácticos de
coloraciones.
En las Practicas calificadas se empleará exposiciones con rubricas de evaluación.
6. BIBLIOGRAFÍA
6.1. Bibliografía Básica
• Murray, Patrick R., Rosenthal, Ken, Pfaller, Michael. Microbiología Médica. 8ª
Edición. Elservier, España, 2017.
• Koneman, Elmer W. Koneman Diagnóstico microbiológico. Texto y Atlas en color.
7ª Edición. Wolters Kluwer, España, 2018.
• BROOKS, JAWETZ. MICROBIOLOGIA MEDICA. MCGRAW HILL, 2014.
• ROMERO. MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA HUMANA. MEDICA
PANAMERICANA. 2013
6.2. Bibliografía Complementaria
• ORDOÑEZ SMITH DE DANIES, MARGARET. GUÍA PRÁCTICA PARA LOS
LABORATORIOS DE BACTERIOLOGÍA, 2014 EDITORIAL MEDICA PANAMERICANA
6.3. Base de Datos
• WWW.NCBI.NLM.NIH.GOV
• WWW.TELMEDS.ORG/AVIM/AMICO/INDEX_AMICO.HTM
• HTTP://CAL.VET.UPENN.EDU/PROJECTS/PARAAV/LABS/LAB6.HTM
•HTTP://WWW.FACMED.UNAM.MX/DEPTOS/MICROBIOLOGIA/PDF/BACTERIOL
OGIA_2015-2016.PDF
6.4. Publicaciones de la UPSJB
• Bejar V, Villanueva F, Leon SR, Guevara-Granados JM, Uribe A, Vergaray G, et al.
[Molecular identification of Aspergillus fumigatus isolated from patients with invasive
aspergillosis]. Rev Peru Med Exp Salud Publica. 2019;36(1):81-6.
• De la Cruz-Pérez, J. P., & Camacho-Conchucos, H. T. (2022). Dolor, rigidez y
capacidad funcional asociados a la kinesiofobia en pacientes con artrosis de rodilla,
Hospital Nacional Hipólito Unanue (Perú). Revista Ciencias De La Salud, 20(2).
https://doi.org/10.12804/revistas.urosario.edu.co/revsalud/a.10320
• Flores JA, Calderón R, Mesman AW, Soto M, Coit J, Aliaga J, et al. Detection of
Mycobacterium tuberculosis DNA in buccal swab samples from children in Lima,
Peru. Pediatric Infectious Disease Journal. 2020:E376-E80.
• Flores JA, Coit J, Mendoza M, Leon SR, Konda K, Lecca L, et al. Is exclusive
breastfeeding for six-months protective against pediatric tuberculosis? Global Health
Action. 2021;14(1).
• Galvez TM, Flores JA, Pérez DG, Gutiérrez C, Huertas M, León-Sandoval S.
Concordance between self-sampling and standar endocervical sample collection to
identify sexual transmission infections in an urban-rural area of Peru. Revista
peruana de medicina experimental y salud publica. 2021;38(1):83-8.
• Iverson KR, Roa L, Shu S, Wong M, Rubenstein S, Zavala P, et al. Quality
Improvement to Address Surgical Burden of Disease at a Large Tertiary Public
Hospital in Peru. World Journal of Surgery. 2021;45(8):2357-69.
• Kojima N, Siebert JC, Maecker H, Rosenberg-Hasson Y, Leon SR, Vargas SK, et al.
The application of cytokine expression assays to differentiate active from previously
treated syphilis. Journal of Infectious Diseases. 2020;222(4):690-4.
• León SR. A radiolabeled mAb 3BNC117 with copper-64: First round in favor for
studying clearance of HIV reservoirs. EBioMedicine. 2021;66.
• Penn-Nicholson A, Mbandi SK, Thompson E, Mendelsohn SC, Suliman S, Chegou
NN, et al. RISK6, a 6-gene transcriptomic signature of TB disease risk, diagnosis
and treatment response. Sci Rep. 2020;10(1):8629.
• Ramirez Ubilluz G, Neira-Montoya CR, Sedano-Galvet EE, Verona-Cueva JF. New
algorithm to differentiate histochemical types of intestinal metaplasia: G&S2 method.
J Bras Patol Med Lab. 2022;58:1-6. doi: 10.1900/JBPML.2022.58.413.
• Santos S, Flores JA. Musculoskeletal physiotherapy in physical sequelae of SARS-
CoV-2 infection: A case report. Physiother Res Int. 2022;27(2):e1938. doi:
10.1002/pri.1938.
• Soca-Saavedra L, Camacho-Conchucos HT. Depressive symptoms and chronic
back pain in patients who start rehabilitation in Lima, Perú. Revista Habanera de
Ciencias Medicas. 2021;20(2).
• Suliman S, Gela A, Mendelsohn SC, Iwany SK, Tamara KL, Mabwe S, et al.
Peripheral Blood Mucosal-Associated Invariant T Cells in Tuberculosis Patients and
Healthy Mycobacterium tuberculosis-Exposed Controls. J Infect Dis.
2020;222(6):995-1007.
7. GUÍAS PRÁCTICAS
1. Las puertas del laboratorio deberán portar emblemas que digan: "Peligro
biológico".
2. Entrar al laboratorio en forma ordenada, dejar las carteras, libros y otros objetos
personales en el lugar que se les indique para tal fin.
3. Usar bata o mandil dentro del laboratorio en todo momento y la misma
debe permanecer cerrada. Esta ropa protectora deberá ser quitada
inmediatamente antes de abandonar el área de trabajo.
4. Lavar las manos con agua y jabón antes de realizar las actividades programadas,
antes de salir del laboratorio y siempre después de manejar materiales que se
sabe o se sospecha que son contaminantes.
5. Llevar calzado apropiado, preferiblemente cerrado y de suela antideslizante en
las áreas de laboratorio.
6. Evitar desplazamientos innecesarios, movimientos bruscos para evitar algun
accidente que pudiera implicar riesgos para la integridad del alumno
7. Limpiar y desinfectar las superficies de trabajo, antes de comenzar y al finalizar
la sesión práctica.
8. Trabajar cerca de la mesa de práctica, adoptando una buena postura y
estando físicamente cómodo.
9. Antes de iniciar la práctica asegúrese que la piel de sus manos no presente
cortes, raspones y otras lastimaduras, en caso que así sea cubrir la herida
de manera conveniente antes de colocarse los guantes.
10. Usar guantes de látex de buena calidad para todo manejo de material biológico
o donde exista aunque sea de manera potencial el riesgo de exposición a
sangre o fluidos corporales.
11. Cambiar los guantes de látex toda vez que hayan sido contaminados, lavarse las
manos y ponerse guantes limpios.
12. No tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas.
13. No abandonar el laboratorio o caminar fuera del lugar de trabajo con los
guantes puestos.
14. Conocer el manejo de todos los equipos y reactivos a emplear antes de iniciar
las actividades indicadas en la práctica. Si usted tiene alguna duda, diríjase al
profesor
15. El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deberá ser restringido
a su uso indispensable. Las agujas y otros elementos punzantes deberán ser
descartados en un recipiente resistente. Se deberán evitar los intentos de
reintroducir las agujas descartadas en capuchones o de romperlas o doblarlas ya
que esta conducta produce aumento de la posibilidad de accidentes por pinchazos
o salpicaduras. No usar tijeras con puntas muy agudas. Por ningún concepto las
agujas serán retapadas. El conjunto aguja-jeringa deberá ser descartado en el
recipiente destinado a tal fin.
16. Todos los procedimientos deberán ser realizados de manera tal que sea
nula la creación de aerosoles, gotas, salpicaduras, etc.
17. Bajo ninguna circunstancia se pipeteará sustancia alguna con la boca, de ser
necesario se usarán pipeteadores automáticos.
18. Tener cuidado con el alcohol cuando manipule el mechero. Nunca debe dejar
éste desatendido
19. El recipiente para descontaminar especímenes deberá contar con tapa de
seguridad para todo traslado fuera del lugar de trabajo. En ese caso el exterior
del recipiente deberá ser mantenido l i b r e de toda contaminación con sangre
usando solución descontaminante.
20. El desecho de los fluidos orgánicos será responsabilidad del personal de apoyo
del laboratorio empleando los métodos de descontaminación.
21. Una vez usados los guantes de látex deberán ser colocados dentro del recipiente
con solución descontaminante.
22. Regresar los reactivos y equipos empleados (microscopio, mechero, etc.), limpios
y de manera ordenada a su respectivo lugar una vez finalizada la actividad.
Reporte cualquier daño de los mismos al profesor.
23. Realizar solamente aquellas actividades indicadas por el profesor, no llevar a cabo
experimentos no autorizados.
24. Emplear técnicas asépticas para el manejo de cultivos de microorganismos.
25. Informe inmediatamente al Docente responsable de la Mesa de Práctica de
cualquier accidente ocasionado con elementos del laboratorio.
MEDIDAS EN CASO DE EMERGENCIA
A continuación mencionaremos los pasos que se deben seguir en caso de
que ocurran los siguientes accidentes:
a. MARCO TEÓRICO
Existen ciertas sustancias químicas que influyen negativamente sobre las bacterias,
pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes:
- Bacteriostáticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano
- Bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias
Se denomina esterilización al conjunto de procedimientos físicos o químicos que
permiten destruir microorganismos patógenos o saprófitos que se encuentran en el
interior o en la superficie de los objetos y sustancias. La desinfección es la destrucción
de microorganismos por agentes químicos. De los agentes físicos uno de los más
empleados es el calor húmedo (ebullición, autoclave). Como agentes químicos
tenemos a los desinfectantes (empleados sobre superficies inanimadas: fenol, cloro,
HCL) y a los antisépticos (de aplicación sobre la piel y las mucosas: alcoholes,
colorantes, sales de metales pesados, jabones).
Los agentes químicos pueden a su vez clasificarse con base a su mecanismo de acción:
los que desnaturalizan proteínas (fenol, etanol); los que afectan los procesos de
oxidorreducción (KMnO4) y modificando la permeabilidad de la membrana (jabones)
entre otros
b. MATERIAL DIDÁCTICO
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente práctica se realizarán de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
a. Efecto de la ebullición. -
Se proporcionarán cultivos de un microorganismo esporulado (Bacillus sp.) y no
esporulado (E. coli). Dividir la placa de TSA en 4 cuadrantes; tome una muestra del
tubo con el asa bacteriológica para el tiempo 0. Colocar los caldos en agua hirviendo
y tomar muestras a los 10, 15 y 30 minutos. Incubar a 37 ° C por 24 horas.
e. Acción de la LUV.-
Divida la placa de ATS en dos y rotule “acción de la LUV” y “sin acción de la LUV”
Siembre la placa de ATS en los dos lados rotulados con una cepa de Staphylococcus
aureus Lleve la placa a la acción de la LUV en el lado correspondiente y en el otro
tape con un cartón. Espere aproximadamente 15 minutos de exposición.
Lleve a estufa de 37°C por 24 horas
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno reconocerá los diferentes métodos físicos y químicos de esterilización.
- El alumno empleara los diversos métodos de esterilización en la práctica
bacteriológica.
- El alumno al término de la sesión conocerá los métodos físicos y químicos de
esterilización en el laboratorio de microbiología.
GUIA PRÁCTICA Nº 02 SEMANA 2
Observaciones Microscópicas: Examen directo en fresco.
Coloraciones simples
OBJETIVO Los alumnos deben identificar y aplicar el examen en fresco,
las coloraciones simples y sus utilidades.
Realizar las coloraciones compuestas, e identificar y clasificar
las bacterias Interpretar el efecto bactericida y/o bacteriostático
de los agentes físicos y químicos
LOGRO A MEDIR Empleo de coloraciones simples
a. MARCO TEÓRICO
Las coloraciones tienen por finalidad la mejor observación de los microorganismos
y también evidenciar estructuras que pueden permitir identificarlos o realzar sus
características.
En el caso de bacterias: flagelos, espora, capsula, gránulos metacromáticos etc.
Las bacterias pueden ser observadas con 1000 aumentos tanto en exámenes en
fresco como con coloraciones.
El examen en fresco se realiza en una lámina colocando una gota, cubierta con una
laminilla de la secreción biológica o de una suspensión líquida de colonias de
microorganismos. Es especialmente útil para observar la movilidad de
microorganismos vivos. Es el examen microscópico más simple.
Las coloraciones simples utilizan un solo colorante. Se frota la secreción biológica o
suspensión de microorganismos en una lámina, en una extensión de 2 centímetros
de largo por un centímetro de ancho. Se observa, generalmente a 100 y 400
aumentos. La suspensión de bacterias debe realizarse a 1000 aumentos con aceite
de inmersión.
Los microorganismos miden micras (milésima parte del milímetro). Las bacterias
pueden observarse coloreadas con azul de metileno de forma redonda o alargada.
Los hongos pueden observarse con diversas estructuras redondas y en largos
filamentos, coloreadas con Azul de Lactofenol. El hongo Cryptococcus neoformans
se observa transparente en el fondo negro de la Tinta China.
La coloración Gram es necesaria para clasificar, especialmente a las
bacterias, en Gram Positivas y Gram Negativas. Las bacterias Gram Positivas se
tiñen de azul y las Gram Negativas se tiñen de color fucsia o rojas.
Las bacterias Gram Positivas retienen Violeta de Genciana, por su pared
gruesa rica en
Peptidoglicanos, luego de resistir la decoloración con solución alcohol acetona.
Las bacterias Gram Negativas no retienen Violeta de Genciana, por su pared
delgada rica en lipopolisacáridos, luego de decolorarse totalmente con solución
alcohol - acetona.
La Coloración Ziehl Neelsen nos permite identificar bacterias Ácido-Alcohol
Resistentes. Esta coloración se basa en que la alta cantidad de ácidos micólicos,
dándole un gran contenido lipídico, en la pared de algunas bacterias. Los ácidos
micólicos retienen el colorante Fucsina fenicada luego de resistir la decoloración
con la solución de alcohol-ácido.
b. MATERIAL DIDÁCTICO
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente practica se realizará de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Durante todo el procedimiento en adelante se trabajará al lado del mechero.
Recuerde que estará con todo el equipo de protección personal.
Examen en fresco:
Tomar una o varias asadas, o una gota con pipeta de suspensión, en una lámina.
Cubrir la gota con una laminilla cubreobjetos.
Observar al microscopio con 100 y 400 aumentos. Finalmente colocar una gota de
Aceite de inmersión en zona con material y observar el movimiento de las bacterias.
Coloración Azul de Metileno:
Realizar un frotis: seguir los pasos según el esquema. Si es a partir de medio líquido
no habrá necesidad de aplicar agua o solución salina
Cubrir el extendido o
frotis con Azul de
Metileno durante 2
minutos. Lavar con
abundante
agua. Secar la
preparación suavemente con calor.
Observar la lámina coloreada con Azul de Metileno.
Enfocar con menor aumento y luego con 1000 aumentos y aceite de inmersión, la
morfología de bacterias.
EXAMEN EN FRESCO
AZUL DE METILENO
AZUL DE LACTOFENOL
TINTA CHINA
COLORACIONES DIFERENCIALES: GRAM, ZIEHL NEELSEN.
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
Preguntas
1. ¿ Cuál es la utilidad del examen en fresco?
2. ¿Que nos permite observar la coloración de Azul de metileno?
3. ¿Que nos permite observar la coloración de Azul de lactofenol?
4. ¿Qué nos permite observar la coloración negativa?
5. ¿Por qué denominamos coloraciones simples?
PREGUNTA S:
1. ¿Cuál es el fundamento de la coloración Gram y Ziehl Neelse n?
2. Realice un esquema de los pasos de cada coloración
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno reconocerá e identificará las diferentes estructuras bacterianas
empleando coloraciones simples.
a. MARCO TEÓRICO
b. MATERIAL DIDÁCTICO
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente práctica se realizarán de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
A.- Procedimiento:
1. Fijar el frotis, previamente preparada, con calor suave a la llama.
2. Cubrir la lámina totalmente con colorante de Albert (colorante metal cromático) dejar
actuar durante 10 minutos.
3. Enjuagar con agua corriente.
4. Dejar secar y observar bajo el objeto de 100x.
Existe un método abreviado para hacer la coloración así:
1. Impregnar la lámina con el frotis con colorante hasta cubrirla totalmente.
2. Colocar un mechero bajo la placa y calentar hasta que emita vapores.
3. Retirar la llama y repetir el proceso hasta completar 3 minutos.
4. Enjuagar con agua corriente.
RESULTADOS:
Coloración Albert
Bacilos de color verde
Gránulos metacromáticos en los extremos: azul
B.PROCEDIMIENTO
1. Sobre una lámina portaobjetos haga un frotis fino de la bacteria a colorear y déjelo secar al
aire.
2. Fije la preparación a la llama del mechero.
3. Cubra el frotis con el colorante de Hiss.
4. Proceda a pasar la llama del mechero por debajo de la lámina hasta que el colorante se
caliente y empiece a emitir vapores. Esperar de 5 a 10 segundos.
5. Lavar el colorante con solución acuosa de sulfato de cobre al 20%.
6. Dejar que la preparación se seque al aire y examinar al microscopio.
RESULTADOS: Coloración de Hiss
Las bacterias, así como otras células y el fondo del campo se teñirán de rojo intenso en tanto
que las cápsulas se observan incoloras y en ocasiones con un matiz celeste muy tenue.
C.PROCEDIMIENTO
1. Preparar los frotis bacterianos en capa no muy gruesa y fijar ligeramente al calor
2. Aplicar sobre el frotis verde malaquita.
3. Con unas pinzas de madera colocar la muestra encima de la llama del mechero de forma que el
colorante humee durante 5 min. Nota: evitar que la muestra hierva. Añadir más colorante si éste
se evapora; es importante que la muestra no se seque.
4. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
5. Teñir con safranina 1 min.
6. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
7. Secar la preparación.
RESULTADOS:
Wirtz Conklin
El bacilo se observará de color rojo y la espora verde
PROCEDIMIENTO
1. Fijar químicamente la suspensión bacteriana, mediante formol, y se hace la extensión en
un portaobjetos.
2. Se deja secar al aire, sin calentamiento alguno.
3. Se cubre la preparación con una mezcla de ácido tánico y el colorante de fucsina. El
ácido tánico engruesa los flagelos y la fucsina los tiñe.
4. Se retira el exceso de colorante con agua.
5. Por último, se deja secar al aire, antes de su observación al microscopio
RESULTADOS:
Coloración de Leifson
Se observará el bacilo rojo y los flagelos rosados
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
PREGUNTAS
1. Identifique que otras estructuras bacterianas podrían teñirse
2. Que coloraciones especiales pueden aplicarse para reconocimiento de
estructuras bacterianas
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno reconocerá e identificará las diferentes estructuras bacterianas
empleando coloraciones compuestas y diferenciales.
GUIA PRÁCTICA Nº 04 SEMANA 4
ESTUDIO MORFOLÓGICO Y CULTIVO DE ESPECIES
PATÓGENAS DE LOS GÉNEROS Staphylococcus, Streptococcus
y Enterococcus
OBJETIVO El alumno deberá reconocer, observar e identificar las
características morfológicas microscópicas y de cultivo, así como
pruebas de identificación en el laboratorio de especies
bacterianas de Staphylococcus, Streptococcus y
Enterococcus importantes que causan infecciones en el ser
humano.
LOGRO A MEDIR Identificar especies bacterianas empleando métodos
bacteriológicos.
a. MARCO TEÓRICO
GENERO Staphylococcus
Los estafilococos constituyen un grupo de microorganismos esféricos, Gram
positivos, agrupados en forma de racimos, tetradas o aisladas, inmóviles no
esporulados. La especie patógena del género es Staphylococcus aureus. Este
microorganismo puede formar parte de la flora nasal del hombre y también es
causante de diversos procesos infecciosos tales como impétigo, forunculosis,
abscesos, intoxicaciones alimentarias e infecciosas particularmente
graves como bacteriemias. La especie patógena produce una enzima llamada
coagulasa, que puede estar libre (free-coagulase) o ligada (clumping factor).
Algunas especies de Staphylococcus coagulasa negativas, tales como S.
epidermidis y S. saprophyticus considerados hasta hace relativamente poco tiempo
como no patógenos, vienen teniendo un papel relevante en cuadros infecciosos
bacteriémicos y urinarios.
GENERO Streptococcus
Constituye un grupo de microorganismos esféricos o lanceolados, gram positivos,
inmóviles no esporulados, en cadenas cortas o largas. En el género
Streptococcus están comprendidas especies patógenas para el hombre tales como
Streptococcus pyogenes y patógeno potencial Streptococcus pneumoniae; existen
portadores asintomáticos de ambas especies.
S. pyogenes es causante de faringitis, amigdalitis, otitis, escarlatina, erisipela e
impétigo; la fiebre reumática y glomérulo nefritis pueden ser secuelas de la
infección. En placas de agar sangre produce hemólisis tipo ß y puede ser
identificada mediante su sensibilidad a la bacitracina.
La especie S. pneumoniae se presenta en forma de diplococo, posee una
cápsula nítida asociada con la virulencia del germen. Se identifican por su
sensibilidad a la etilhydrocupreína (optochin), solubilidad en sales biliares, por
metabolizar la inulina. Produce hemólisis tipo alfa en Agar sangre, carácter que
comparte con los estreptococos alfa hemolíticos o S. viridans. S. pneumoniae es
uno de los agentes causales más frecuentes de neumonía, meningitis, otitis media
y sinusitis.
GENERO: Enterococcus
b. MATERIAL DIDÁCTICO
Staphylococcus
MATERIALES:
- Placas Petri con medio hipertónico de Chapman (MH)
- Placas Petri con agar sangre
- Placas Petri con agar chocolate
- Placas con agar DNAsa
- Placas con Agar Mueller Hinton
- Tubos con CTS
- Discos de
- Tubos con CTS sembradas con Staphylococcus aureus, S. saprophyticus y S. epidermidis
- Placa de ATS sembrada con Staphylococcus aureus, S. saprophyticus y S. epidermidis
- Caldo plasma humano para pruebas de patogenicidad (coagulasa en tubo).
- Láminas demostrativas con frotises de S. aureus y S. epidermidis, teñidos con Gram.
- Hisopos esteriles
- Disco de Novobiocina 5 ug
- Tubo con solución salina estéril
- Tubo de MacFarland 0.5
- Reactivo de catalasa
- Pinzas
- Laminas portaobjeto
- Set de colorantes de Gram
- Asa de siembra en aro
Streptococcus
MATERIAL
- Placas petri con agar sangre
- Placas con Agar Chocolate
- Tubos de 16x150 con Medio de Thioglicolato e indicador
- Caldo BHI
- Caldo inulina
- Cultivo de Streptococcus beta hemolítico en BHI
- Cultivo de Streptococcus alfa hemolítico en BHI
- Cultivo de Streptococcus pneumoniae en BHI
- Placas Petri con agar sangre sembradas con S. pyogenes, S agalactiae, S.viridans y S.
pneumoniae
- Cepa de Staphylococcus aureus
- Discos de Optochin
- Discos de Bacitracina 0.04 U
- Solución de sales biliares al 10%
- Solución de suero fisiológico
- Laminas portaobjeto
- Set de colorantes de Gram
- Asa de siembra en aro
Enterococcus
MATERIALES
- Placas con Agar Sangre de carnero
- Placas con Agar Chocolate
- Placas con Agar Telurito de Potasio
- Caldo tripticasa de soya
- Caldo NaCl al 6.5%
- Placa con Agar sangre sembrada con Enterococcus
- Caldo tripticasa de Soya sembrado con Enterococcus
- Laminas portaobjeto
- Set de colorantes de Gram
- Asa de siembra en aro
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente práctica se realizarán de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Staphylococcus
PROCEDIMIENTO:
- Rotular las placas con el nombre de cada cepa en una bacteria de Agar Sangre, Agar
Chocolate y Agar Manitol Salado
- Tomar del CTS con las bacterias con asa en aro y sembrar en las placas
Dividir la placa del Agar DNAsa en tres secciones y rotular con las cepas de Staphylococcus
- Tomar con asa en aro de la placa sembrada con las cepas y realizar siembra en círculo en el
centro de cada sección. Repetir para cada cepa
- Realizar una suspensión bacteriana turbidez 0.5 de MacFarland con cada una de las cepas.
- Rotular las placas de Mueller Hinton con cada una de las cepas y sembrar con hisopo.
- Dejar secar por 10 minutos y aplicar en cada placa discos de Novobiocina
- A partir de la cepa en el ATS sembrar con asa en punta a cada uno de los CTS
- A partir de las cepas de ATS sembrar con asa en punta en los tubos con Caldo plasma
- Llevar a incubación a 37°C por 24 a 48 horas
- Realizar frotises para coloración de las cepas
Streptococcus
PROCEDIMIENTO
- Rotular las placas de agar sangre y agar chocolate con cada cepa de Streptococcus
- Sembrar con asa en aro por dispersión y agotamiento a partir de BHI sembrado con las
cepas de Streptococcus
- Rotular los tubos con BHI
- Sembrar con asa en punta las cepas de Streptococcus a partir de las placas de Agar sangre en
BHI
- Rotular los tubos de Medio de Thioglicolato con indicador
- Sembrar con pipeta pasteur a partir de los caldos al fondo de los tubos
- Tomar placas de agar sangre rotular con S. pyogenes y S. agalactiae
- Sembrar con asa en aro a partir de los agares con desarrollo de Streptococcus
- Aplicar disco de Bacitracina a cada una
- Tomar placas de agar sangre rotular con S. pneumoniae y S. viridans
- Sembrar con asa en aro a partir del AS con desarrollo de S. pneumoniae y S. viridans
- Aplicar disco de Optochin para cada cepa
- Sembrar en Caldo Inulina las cepas de S. pneumoniae y s. viridans
- Tomar una placa de Agar Sangre y rotular Prueba de CAMP
- Con el asa en punta tomar la cepa de Staphylococcus aureus y sembrar en el centro de la
placa.
- Con asa en punta tomar una colonia de S. pyogenes y S. agalactiae y sembrar
perpendicularmente a la estría de Staphylococcus. Tal como se muestra en el gráfico.
- Incubar las placas con los agares y tubos con medios liquidos en CO2 5% a 37°C por 24 a 48
horas
- Preparar frotises de S. pyogenes, S. viridans y S. pneumoniae para tinción con Gram.
Enterococcus
PROCEDIMIENTO
- Rotular las placas y tubos con Enterococcus faecalis
- Tomar una asada a partir de los caldos y sembrar en las placas por dispersión y
agotamiento
- Sembrar en CTS y NaCl al 6.5% con asa en aro a partir de la placa de Agar Sangre sembrado
con la Enterococcus
- Preparar frotis para coloración Gram
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
PREGUNTAS:
1. ¿Cómo se aprecia el desarrollo bacteriano en los medios líquidos presentados
en la práctica?
2. ¿Qué características ha podido observar en las placas con agar sembrado con las
cepas bacterianas?
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno estará en la capacidad de reconocer las diferentes especies
bacterianas empleando coloraciones simples, compuestas y métodos de
identificación.
- Identificara especies de Cocos Gram Positivos.
GUIA PRÁCTICA Nº 05 SEMANA 5
LECTURA E INTERPRETACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
SEMBRADOS CON CEPAS DE Staphylococcus, Streptococcus y
Enterococcus
OBJETIVO Identificar e interpretar el desarrollo bacteriano de las cepas de
Staphylococcus, Streptococcus y Enterococcus en los medios
de aislamiento y las pruebas para su identificación.
Colorear y realizar la observación microscópica y determinar la
morfología bacteriana.
LOGRO A MEDIR Identificar especies bacterianas a través de medios de cultivo a
partir de muestras clínicas
a. MARCO TEÓRICO
GENERO Staphylococcus
Los estafilococos constituyen un grupo de microorganismos esféricos, Gram positivos,
agrupados en forma de racimos, tetradas o aisladas, inmóviles no esporulados. La especie
patógena del género es Staphylococcus aureus. Este microorganismo puede formar parte
de la flora nasal del hombre y también es causante de diversos procesos infecciosos tales
como impétigo, forunculosis, abscesos, intoxicaciones alimentarias e infecciosas
particularmente graves como bacteriemias. La especie patógena produce una enzima
llamada coagulasa, que puede estar libre (free-coagulase) o ligada (clumping factor).
Algunas especies de Staphylococcus coagulasa negativas, tales como S. epidermidis
y S. saprophyticus considerados hasta hace relativamente poco tiempo como no
patógenos, vienen teniendo un papel relevante en cuadros infecciosos bacteriémicos y
urinarios.
GENERO Streptococcus
Constituye un grupo de microorganismos esféricos o lanceolados, gram positivos, inmóviles
no esporulados, en cadenas cortas o largas. En el género Streptococcus están
comprendidas especies patógenas para el hombre tales como Streptococcus pyogenes y
patógeno potencial Streptococcus pneumoniae; existen portadores asintomáticos de ambas
especies.
S. pyogenes es causante de faringitis, amigdalitis, otitis, escarlatina, erisipela e impétigo; la
fiebre reumática y glomérulo nefritis pueden ser secuelas de la infección. En placas de agar
sangre produce hemólisis tipo ß y puede ser identificada mediante su sensibilidad a
la bacitracina.
La especie S. pneumoniae se presenta en forma de diplococo, posee una cápsula
nítida asociada con la virulencia del germen. Se identifican por su sensibilidad a la
etilhydrocupreína (optochin), solubilidad en sales biliares, por metabolizar la inulina.
Produce hemólisis tipo alfa en Agar sangre, carácter que comparte con los estreptococos
alfa hemolíticos o S. viridans. S. pneumoniae es uno de los agentes causales más
frecuentes de neumonía, meningitis, otitis media y sinusitis.
GENERO: Enterococcus
El género Enterococcus ha sufrido variaciones en su clasificación y es considerado
actualmente como un género independiente de Streptococcus. Por su elevada incidencia
en las infecciones nosocomiales y su resistencia antimicrobiana, y por ser
considerados indicadores de contaminación fecal, estos microorganismos han adquirido
una importancia notable en la actualidad y se ha desarrollado una gran cantidad de
medios de cultivo de diferentes propósitos, tanto convencionales como cromogénicos y/o
fluorogénicos, específicos para este género, que son empleados en los laboratorios de
Microbiología de todo el mundo para lograr su aislamiento e identificación de muestras
clínicas, aguas y algunos alimentos.
b. MATERIAL DIDÁCTICO
- Placas Petri
- Cepas de microorganismos en estudios
- Medios de cultivo
- Asas de siembra
- Mechero
- Hisopos estériles
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente practica se realizará de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Staphylococcus
PROCEDIMIENTO:
- Observar las placas sembradas con las cepas de Staphylococcus con 24-48 horas de
incubación
- Observar las características de desarrollo de las colonias en los medios AS y ACH que son
las siguientes: 2 a 3 mm, lisas, amarillas, hemolíticas, y vira al amarillo el medio MH, en el
caso de Staphylococcus aureus.
- Observar la reacción en el caldo plasma
- Para la prueba de la DNAsa agregar gotas HCl 1N con azul de metileno, observar
precipitación alrededor de la colonia
- Observar los resultados en la placa con el disco de Vancomicina
- Realizar la prueba de catalasa
- Colorear y realizar la observación microscópica
- Anote sus observaciones en el protocolo
RESULTADOS
Aislamiento e identificación: Staphylococcus
PRUEBA/CEPA S. aureus S. epidermidis S. saprophyticus
CARACTERISTICAS DE GÉNERO
Streptococcus
PROCEDIMIENTO
- Observar en medio líquido el desarrollo con formación de sedimento (S. pyogenes).
- En las placas de agar sangre observar las colonias pequeñas y rodeadas de hemólisis, sin
destapar la placa observar al microscopio con objetivo de 5x la zona de hemólisis tipo beta
(lisis total de los hematíes) y la hemólisis tipo alfa (lisis parcial)
- Observar el desarrollo en las placas de agar chocolate
- En las placas de agar sangre con el disco de bacitracina, observar el halo de inhibición de
desarrollo del estreptococo beta hemolítico del grupo A. (Streptococcus pyogenes) y
resistente para Streptococcus del grupo B (Streptococcus agalactiae)
- En la placa de agar sangre observar la colonia pequeña aplanada y rodeada de un color
verdoso por la hemólisis tipo alfa de Streptococcus pneumoniae (Neumococo).
- En las placas de agar sangre con disco de Optochin, observar halo de ausencia de
desarrollo con el neumococo y resistente para Streptococcus viridans
- En el medio con inulina constatar la formación de acidez (cambio de color) por
metabolismo de este carbohidrato.
- Observar el aclaramiento del cultivo líquido al añadirse sales biliares al 10%.
- Observar con lentes de inmersión los cocos gram positivos en cadena en la lámina
demostrativa de S. pyogenes y S. pneumoniae.
- Registrar las observaciones en el protocolo correspondiente
RESULTADOS:
Aislamiento del Streptococcus beta hemolítico y alfa hemolitico
MEDIO DE S. pyogenes S.agalactiae S. pneumoniae S. viridans
CULTIVO
Identificación
MEDIOS
BACITRACINA
CAMP
OPTOCHIN
INULINA
DESOXICOLATO
RESULTADOS
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
PREGUNTAS:
1. Indique cuales son las pruebas de identificación de género para Staphylococcus
2. Indique cuales son las pruebas de identificación de genero par Streptococcus
3. ¿A que se denomina PYR?
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno interpretara e identificara especies bacterianas del genero
Staphylococcus, Streptococcus y Enterococcus ; empleando diversas pruebas
bioquímicas para su identificación de género y especie.
a. MARCO TEÓRICO
c. ACTIVIDADES
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PROCEDIMIENTO
- Rotular las placas Petri con agar y tubos con medios diferenciales con cada una
de las cepas
- Tomar a partir de los medios líquidos con las cepas con asa en aro estéril y sembrar
en las placas Petri con agares por dispersión y agotamiento
- Tomar a partir de las placas con siembra de las cepas de enterobacterias y sembrar
en los medios diferenciales.
- Realizar frotis para coloración Gram
PROCEDIMIENTO
- Observar el desarrollo bacteriano en las placas de Agar Mac Conkey.
Las colonias rojas corresponden a bacterias que han metabolizado la lactosa
(E. coli) debido al indicador de pH ácido (rojo neutro).
Las colonias incoloras corresponden a bacterias que NO han metabolizado la
lactosa, sospechosas de ser patógenas
- Observar el desarrollo bacteriano en Medio XLD (Xylose-Lysine-Desoxycholate Agar).
Las colonias sospechosas de Shigella sobre el agar XLD son transparentes y parecen
rojas por el color del medio. Este género bacteriano al no fermentar la xilosa, la
lactosa, ni la sacarosa, no da lugar a que el rojo fenol vire a amarillo. Como estos
microorganismos tampoco tienen la capacidad de alcalinizar el medio por la
descarboxilación de la lisina, no se produce color rojo púrpura alrededor de las
colonias. Las colonias típicas de la Salmonella son de color rojo con el centro negro
debido a la producción de H2S. Mientras que las de E. coli son grandes, amarillas con
o sin precipitado de bilis.
- Observar el desarrollo bacteriano en el agar EMB Escherichia coli: Colonias azul a
moradas, con brillo metálico azul verdoso, Salmonella typhimurium: Colonias
incoloras y/o transparentes, Shigella flexner:–Colonias incoloras y/o transparentes.
- Observar el desarrollo bacteriano en Medio Salmonella – Shigella.
Observar el desarrollo de colonias transparentes lactosa negativas negras
productoras de hidrógeno sulfurado serán sospechosas de Salmonella, Proteus y las
que son incoloras serán sospechosas de Shigella o Yersinia
- Observarla serie de identificación Bioquímica: Para su identificación se requiere la
batería de pruebas diferenciales
Medio TSI (Glucosa, Lactosa, Sacarosa y Fierro)
Medio Lisina: (aminoácido para la formación de proteínas) Indol:
Citrato: (como única fuente de carbono)
Rojo de Metilo (MR) para evidenciar el uso de azucares con producción de ácidos
fuertes:
se agrega rojo de metilo
Voges Proskaguer producción de acetoina (VP)
Medio de urea: producción de ureasa
MIO: motilidad, indol y ornitina
- Realizar la prueba de oxidasa y catalasa
- Colorear los frotises con Gram y realizar la observación microscópica
RESULTADOS
Anotar en el protocolo los resultados obtenidos
Placas Petri con medios selectivos anotar los resultados y hacer los gráficos
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
PREGUNTAS
1. Clasifique las enterobacterias oportunistas de las enteropatógenas
2. Que infecciones pueden producir las enterobacterias oportunistas
3. ¿Se puede identificar a las enterobacterias por la coloración Gram? ¿Por qué?
f. RESULTADOS ESPERADOS
a. MARCO TEÓRICO
Salmonella
El género Salmonella se incluye en la familia Enterobacteriaceae, integrada por bacilos Gram
negativos anaerobios facultativos. Poseen, por lo tanto, las características generales de las
enterobacterias: son fermentadores de la glucosa, catalasa positiva, oxidasas negativo y suelen
ser móviles.
La nomenclatura de Salmonella es compleja. Se han usado diferentes sistemas para referir a
este género. Teniendo en cuenta que estas bacterias tienen una muy importante homología
general de su ADN, deberían ser caracterizadas como dos únicas especies.
Los antígenos capsulares o de envoltura sólo lo presentan algunos serotipos de Salmonella
(Typhi y Dublin)
Las Salmonellosis humanas pueden clasificarse en dos grandes grupos: por un lado, las debidas a
serotipos estrictamente humanos, que causan habitualmente síndromes tifoídicos con
presencia de bacterias en la sangre, y las debidas a serotipos ubicuos, que provocan diarrea,
vómitos y fiebre. La duración y entidad de esta enfermedad es variable, dependiendo del
estado general del huésped, pudiendo ocasionalmente causar enfermedades generalizadas
Shigella
Las distintas especies de Shigella constituyen la principal causa de bacteriana de disentería,
diarrea caracterizada por eliminación frecuente de heces conteniendo pus, sangre y/o mucus. El
ser humano es el único reservorio conocido de este agente. La mayoría de los casos ocurren en
niños, en general trasmitidos por contacto directo. Los brotes a gran escala, vinculados a
alimentos, son más raros. A pesar de ello, constituye un importante problema de salud pública
mundial, debido fundamentalmente a su elevada transmisibilidad, la emergencia de cepas
resistentes a antimicrobianos y la falta de vacunas efectivas.
Yersinia
El género Yersinia pertenece a la familia Enterobacteriaceae y comprende siete especies. Las
especies Y. pestis, Y. pseudotuberculosis y ciertos serotipos de Y. enterocolitica son patógenos
para el ser humano. Yersinia pestis es la causa de la peste bubónica y se transmite por
contacto con roedores y sus pulgas. Los microorganismos del género Yersinia son bacilos
gramnegativos, móviles a 25 ºC pero no a 37 ºC.
b. MATERIAL DIDÁCTICO
c. ACTIVIDADES
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PROCEDIMIENTO
- Rotular las placas Petri con agar y tubos con medios diferenciales con cada una de las
cepas
- Tomar a partir de los medios líquidos con las cepas con asa en aro estéril y sembrar en las
placas Petri con agares por dispersión y agotamiento
- Tomar a partir de las placas con siembra de las cepas de enterobacterias y sembrar en los
medios diferenciales.
- Realizar frotises para coloración Gram
RESULTADO
Anotar los resultados en las placas petri
Anotar los resultados de la batería bioquímica y realizar los esquemas de cada uno de
ellos
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno debe leer, interpretar e identificar los agares selectivos y diferenciales para
identificar a las enterobacterias patógenas: Salmonella typhi, Salmonella enteritidis, Shigella y
Yersinia
GUIA PRÁCTICA Nº 08 SEMANA 9
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas.
OBJETIVO El alumno deberá identificar, clasificar y aplicar los medios
de cultivo para el género Vibrio, Aeromonas y Plesiomonas.
LOGRO A MEDIR Identificación de otros microorganismo de importancia clinica
a. MARCO TEÓRICO
Los bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, oxidasa positiva, pertenecen a los
géneros Aeromonas, Vibrio y Plesiomonas, ubicados taxonómicamente en las familias
Aeromonadaceae, Vibrionaceae y Enterobacteriaceae, respectivamente.
GÉNERO Vibrio
El género Vibrio está compuesto por microorganismos cuyo hábitat natural son los
ecosistemas marinos y fluviales. Son bacterias móviles, crecen en agar nutritivo incubadas a
35ºC en atmósfera aerobia y anaerobia y fermentan la glucosa. Pueden presentar una
morfología curvada característica, producen catalasa y son sensibles al compuesto
vibriostático O/129 (2,4 diamino-6,7 diisopropilpteridina). Una particularidad de todas las
especies de este género es su dependencia del ion sodio, incluso de aquellas capaces de crecer en
agua de peptona carente de sal. Este catión estimula su crecimiento y favorece la rapidez del
mismo. El requerimiento de sodio es específico e independiente de una función osmótica, dado
que es difícilmente reemplazado por cantidades equimoleculares de otros cationes
monovalentes. El Na+ actúa sobre los sistemas de permeasas existentes en la bacteria
permitiendo la entrada de sustratos exógenos. No obstante, se puede sustituir NaCl por KCl
dentro de ciertos límites. El género Vibrio contiene más de 34 especies, 12 son patógenas para el
hombre o han sido aisladas en muestras clínicas y, de éstas, 10 se consideran halófilas. Las
especies halófilas requieren para su crecimiento óptimo una concentración de NaCl no inferior al
1%, aunque una concentración de 0,5% permite el aislamiento de las mismas. Se aíslan con
frecuencia de aguas costeras templadas y tropicales, especialmente en meses cálidos, cuando la
temperatura del agua es superior a 17°C. El reservorio de estos microorganismos lo
constituyen las aguas donde habitan y los alimentos de orígenes marinos o contaminados con
agua de mar. La mayor parte de los vibrios halófilos se asocian a infecciones del tracto
gastrointestinal aunque también se ha descrito su implicación en patología extraintestinal,
causando bacteriemia, otitis, conjuntivitis e infecciones de tejidos blandos entre otras. En la
tabla 1 se muestran las especies del género Vibrio asociadas a las principales muestras clínicas en
donde son aisladas. Las principales especies designadas como agentes etiológicos de
gastroenteritis son V. parahaemolyticus, V. hollisae y V. fluvialis. El período de incubación y las
manifestaciones clínicas pueden ser similares e indistinguibles de las ocasionadas por otros
enteropatógenos, por lo que estos microorganismos deben ser incluidos en el diagnóstico
diferencial de la diarrea aguda asociada al consumo de alimentos y de la diarrea del viajero.
GENERO Aeromonas
El género Aeromonas, perteneciente a la familia Vibrionaceae, está formado por bacilos
gramnegativos, no esporulantes y anaerobios facultativos. Presentan numerosas similitudes
con la familia Enterobacteriaceae. El género se divide en dos grupos. El grupo de las
aeromonas psicrófilas inmóviles está formado por una única especie, A. salmonicida, un
patógeno obligado de peces que no se aborda más a fondo en este documento. El grupo de las
aeromonas mesófilas móviles (con un flagelo polar único), considerado potencialmente
peligroso para la salud humana, está formado por las especies A. hydrophila, A. caviae, A.
veronii subsp. sobria, A. jandaei, A. veronii subsp. veronii y A. schubertii. Estas bacterias viven de
manera habitual en el agua dulce y están presentes en el agua, el suelo y muchos
alimentos, especialmente en la carne y la leche.
b. MATERIAL DIDÁCTICO
Vibrio
- Agar TCBS
- Agar ATS + 1% ClNa
- Set de diferenciación bioquímica: Citrato, TSI, LIA, Urea, MIO, MRVP
- APA 0%, 1%, 3%, 7%, 9% y 11% de ClNa
- Placas con ATS + 1% de Na Cl sembrada con cepas de V. parahaemolyticus, V, cholerae y V.
algynoliticus
- Reactivo de Oxidasa
- Asas de siembra en aro y en punta
- Laminas portaobjeto
Aeromonas y Plesiomonas
- Placas Petri con Agar MacConkey
- Placas Petri con Agar Nutritivo
- Placas Petri con agar sangre
- Tubos con medios diferenciales: Citrato, TSI, LIA, Urea, MIO, MRVP
- Placas con Agar Esculina
- Tubos con caldo rojo de fenol + manitol al 1% y salicina al 1%
- Laminas portaobjeto
- Reactivo de Oxidasa
- Asas de siembra en aro y en punta
- Placas con Agar MacConkey con desarrollo bacteriano de Aeromonas hydrophila, A, sobria, A,
caviae, Plesiomonas shigelloide
c. ACTIVIDADES
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PROCEDIMIENTO
- Rotular las placas y tubos con los nombres de las cepas de Vibrio
- Rotular las placas y tubos con los nombres de las cepas de Aeromonas y
Plesiomonas
- Tomar con asa en aro una alícuota de las cepas de Vibrio, Aeromonas y
Plesiomonas a partir de las placas con desarrollo bacteriano y sembrar por dispersión
y agotamiento en los agares clasificados en los materiales.
- Tomar con el asa en punta esteril una alícuota y sembrar en los medios diferenciales
clasificados en materiales para cada cepa
- Incubar a 37°C por 24 a 48 horas
- Realizar frotises para coloración Gram
AGARES/ V. V. V. V. Plesiomonas
CEPAS cholerae alginolyticus parahaemolyticus parahaemolyticus
TCBS
MacConkey
Nutritivo
Sangre
CITRATO
TSI
LIA
UREA
MIO
MRVP
APA + ClNa
RF+MANITOL
RF+SALICINA
MRVP
Gram
Carácter
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno reconoce e identifica principales microorganismos de importancia
clínica empleando las diversas pruebas diferenciales para su identificación.
GUIA PRÁCTICA Nº 09 SEMANA 10
AISLAMIENTO E IDENTIFICACION DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA Y
ACINETOBACTER
OBJETIVO El alumno deberá identificar, clasificar y aplicar los medios
de cultivo para el género Pseudomonas aeruginosa y
Acinetobacter
LOGRO A MEDIR Identificación de otros microorganismo de importancia clínica
a. MARCO TEÓRICO
GENERO Pseudomonas
GENERO Acinetobacter
GENERO Gardnerella
b. MATERIAL DIDÁCTICO
Pseudomonas y Acinetobacter
MATERIALES
- Placas con agar Nutritivo
- Placas con agar sangre
- Placas con agar MacConkey
- Placas Petri con agar Sellers
- Medios diferenciales: Citrato, TSI, Urea y MIO o SIM
- Tubo de 16x150 con caldo peptonado
- Medios OF con glucosa
- Tubos con parafina liquida estéril
- Placas con Agar nutritivo con desarrollo de Pseudomonas y Acinetobacter
- Tiras reactivas de oxidasa
- Solución salina
- Laminas portaobjeto
- Asas de siembra en aro y en punta
- Mechero
- Microscopios, aceite de inmersión y alcohol isopropilico
Gardnerella vaginalis
MATERIAL
- Muestras de secreción vaginal
- Laminas con frotises de secreción vaginal
- Colorantes de Gram
- Laminas portaobjeto
- Hidróxido de potasio
- Microscopios, aceite de inmersión y alcohol isopropilico
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente práctica se realizará de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PROCEDIMIENTO
- Rotular las placas y tubos con los nombres de las cepas de Pseudomonas y Acinetobacter
- Tomar con asa en aro una alícuota de las cepas de Pseudomonas y Acinetobacter a partir
de las placas con desarrollo bacteriano y sembrar por dispersión y agotamiento en los
agares
- Tomar con el asa en punta estéril una alícuota y sembrar en los medios diferenciales para
cada cepa
- Luego de sembrar por puntura en los medios OF (2) por cepa rotular uno de ello con O:
oxidación y con F: fermentación.
- En el tubo F agregar 0.5 ml de parafina liquida
- Sembrar el tubo de 16x150 con caldo pentonado
- Incubar a 37°C por 24 a 48 horas
- Realizar frotises para coloración Gram
- Cloroformo
- Solución salina
- Laminas portaobjeto
- Asas de siembra en aro y en punta
- Mechero
- Microscopios, aceite de inmersión y alcohol isopropilico
PROCEDIMIENTO:
- Los cultivos vaginales en pacientes con vaginosis no son siempre confiables debido a que se
trata de una infección polimicrobiana.
- El ambiente de desarrollo es en anaerobiosis y en medios enriquecidos como agar sangre
humana y agar chocolate
- Realizar el test de aminas: una gota de la secreción vaginal y una gota de KOH.
Inmediatamente tartar de percibir el olor a pescado
RESULTADOS
Anote los resultados obtenidos y realice los esquemas en el protocolo
MacConkey
Nutritivo
Sangre
Sellers
Citrato
TSI
Urea
MIO o SIM
CP
OF Glucosa
Oxidasa
Catalasa
Fluorescencia
Identificación de Pseudomonas
RESULTADOS
Colorear las láminas de secreción vaginal y realizar la observación microscópica
teniendo en cuenta el cuadro
Anote y realice los esquemas en el protocolo
Descripcion
Esquema
Score Final
Test de Nugent y Amsel para diagnóstico de vaginosis bacteriana
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno reconoce e identifica principales microorganismos de importancia
clínica empleando las diversas pruebas diferenciales para su identificación.
GUIA PRÁCTICA Nº 10 SEMANA 11
Lectura de LÁMINAS - BACILOSCOPIA - BAAR
a. MARCO TEÓRICO
Mycobacterium es un grupo de bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR)
aeróbicos, con requerimientos nutricionales que incluyen proteínas y compuestos
del huevo de gallina. La principal especie es el Mycobacterium tuberculosis,
comúnmente llamado Bacilo de Koch (BK). Otras especies de importancia clínica
son Mycobacterium avium, Mycobacterium kansasii, Mycobacterium chelonae,
Mycobacterium fortuitum. Se les diferencia por su velocidad de crecimiento en
medio a base de huevo: de crecimiento rápido (en menos de siete días) o de
crecimiento lento (en más de siete días). El Mycobacterium tuberculosis es el
causante de la Tuberculosis (TB), produciendo una reacción inflamatoria con
destrucción de tejido que lleva a la formación de cavidades o cavernas,
especialmente en los pulmones, pero que se puede ubicar en cualquier órgano o
tejido. El diagnóstico de la TB se basa en el hallazgo microscópico de BAAR, examen
denominado baciloscopía. La mitad de pacientes con tuberculosis tienen la
baciloscopía negativa y en ellos debe realizarse un cultivo para diagnosticar la
enfermedad. Un 10 a 20% de enfermos de TB tienen baciloscopía y cultivo negativos
y en ellos otros exámenes diagnósticos (radiografías, otras pruebas por imágenes,
examen citoquímico de líquidos y secreciones, la Tuberculina especialmente en
niños, y otros) ayudan al diagnóstico. El bacilo de la tuberculosis se transmite de
persona a persona a través de gotitas que salen al respirar, hablar, silbar, cantar. Por
lo tanto la medida de prevención es diagnosticar y tratar la infección por
Mycobacterium tuberculosis. La principal medida de control de la TB es el
diagnóstico y tratamiento de la enfermedad TB. La infección TB es un estado de
latencia del BAAR en los ganglios hiliares de las personas sanas, estado muy
diferente al de enfermedad TB.
Tuberculosis XDR
En el Perú, la prevalencia anual de tuberculosis para el año 2011 fue de 108,8 por 100 000
habitantes, mientras que la incidencia fue de 96,3 por 100 000 habitantes para el mismo
año. Estas cifras sitúanal Perú en el segundo país con más alta carga de enfermedad
debida a la tuberculosis en la región de las Américas, siendo que todos los casos que se
reportan a nivel nacional, el 55,8% se encuentran en Lima y Callao. Además, el Perú es el
país con el mayor número de casos confirmados de tuberculosis multidrogorresistente
(TB MDR) en la región, con 1150 casos r Uno de los problemas de mayor preocupación local
e internacional es el surgimiento de casos de tuberculosis extremadamente resistente. El Perú
fue uno de países que reportó los primeros casos de TB XDR en el año 1999. Así, desde
el año 1999 hasta el 2011 se han reportado 396 casos y durante el primer trimestre de este
año, 2012, se han diagnosticado 17 casos. De todos los casos de TB XDR, el 89% se encuentran en
Lima y Callao.
Actualmente, se cuentan con muy pocas drogas para el tratamiento de la TB XDR. De hecho, en
nuestro medio no existe un esquema estándar, y la elección de drogas en estos casos se deja
abierta al criterio clínico, basado principalmente en los resultados de la prueba de
sensibilidad. El Linezolid es un antimicrobiano del grupo de las oxazolidinonas, desarrollado
para el tratamiento de infecciones por bacterias gram positivas resistentes. El linezolid, tiene
un mecanismo de acción que involucra la inhibición de la síntesis proteica bacteriana, y ha sido
reportado en estudios in vitro que tiene propiedades bacteriostáticas frente a M. tuberculosis,
lo que ha llevado a muchos clínicos a utilizarlo actualmente en el tratamiento de algunos casos
de TB XDR, siendosugeridas las dosis equivalentes en humanos de 600mg a 1200 mg por día.
Así, algunos estudios clínicos mencionan que el linezolid puede contribuir con la negativización
bacteriológica en los pacientes con pocas alternativas de tratamiento. Sin embargo, el uso del
linezolid ha sido limitado debido a que se han reportado serios efectos adversos, entre ellos,
mielotoxicidad y toxicidad neuropática, los cuales son dependientes de la dosis y de la
duración del tratamiento, y ocurren porque este fármaco también inhibe la síntesis proteica en
las mitocondrias.
La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha clasificado a las drogas de segunda línea para el
tratamiento de la TB MDR, considerando al linezolid dentro del grupo que incluye además a
laclofazimina, laamoxicillina/clavulanato, la thioacetazona, la claritromicina y elimipenem
(llamado, Grupo 5). Sin embargo, para la TB XDR el tratamiento no se encuentra estandarizado y
su eficacia es incierta.
b. MATERIAL DIDÁCTICO
- Laminas de extensiones de esputo coloreados con Tinción de Ziehl-Neelsen con carga
bacilar de una cruz, dos cruces y tres cruces.
- Imágenes y videos de cultivos con Mycobacterium tuberculosis y otras
especies.
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente práctica se realizarán de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PROCEDIMIENTO
Estudio de BAAR
Toma de muestra
Instruir al paciente para que tome la muestra esputo y no saliva y de preferencia la primera de la
mañana.
Se obtendrá una muestra por día durante tres días, aproximadamente tendrá un volumen de 3 a
4 ml
- Identificar BAAR en frotises de esputo, determinar la carga bacilar en la baciloscopía
relacionándola con la presencia de infección TB o enfermedad TB
- Se presentara las láminas coloreadas para la lectura microscópica.
- Los extendidos deben ser coloreados de inmediato, ya que algunos bacilos pueden
permanecer vivos después de fijados con calor hasta que incorporan la fucsina.
- Observar la lámina de una cruz, contar cuantos bacilos observa en cada campo.
- Observar 100 campos. Utilizar el “Cuadro de Lectura de Baciloscopía”.
- Observar la lámina de dos cruces,
- Contar cuantos bacilos observa en cada campo.
- Observar 50 campos. Utilizar el “Cuadro de Lectura de Baciloscopía”.
- Observar la lámina de tres cruces,
Contar cuantos bacilos observa en cada campo.
Observar 20 campos. Utilizar el “Cuadro de Lectura de Baciloscopía”.
Para fines educativos las láminas utilizadas son coloreadas libres de posible riesgo a contaminación
biológico.
CUADRO DE LECTURA DE BACILOSCOPÍAS:
Cada celda corresponde a cada campo microscópico. Recorrer ordenadamente el frotis donde
haya material inflamatorio (leucocitos, moco). Escribir el número de bacilos observados en
cada campo. Cada alumna o alumno debe usar un cuadro.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
41 42 43 44 45 46 47 48 49 50
51 52 53 54 55 56 57 58 59 60
61 62 63 64 65 66 67 68 69 70
71 72 73 74 75 76 77 78 79 80
81 82 83 84 85 86 87 88 89 90
91 92 93 94 95 96 97 98 99 100
Imágenes y videos de
Tubo de Lowenstein No aplica
Jensen con
M.tuberculosis
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
PREGUNTAS
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno leerá correctamente las láminas de baciloscopias empleando las
técnicas estándares para diagnóstico de TBC.
GUIA PRÁCTICA Nº 11 SEMANA 12
P R U E B A S PARA DEMOSTRAR EL EFECTO DE LOS ANTIBIOTICOS
SOBRE LAS BACTERIAS
OBJETIVO El alumno deberá reconocer e identificar los métodos
para demostrar el efecto de los antibióticos sobre las
bacterias
Desarrollar los métodos de Disco difusión, MIC y E-Test
LOGRO A MEDIR Interpretación de las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana
a. MARCO TEÓRICO
A escala mundial, existe una gran preocupación por el aumento en la resistencia bacteriana
hacia los diferentes antibióticos. Las bacterias han desarrollado una serie de mecanismos de
resistencia, algunos de ellos muy sofisticados, para poder contrarrestar los efectos dañinos de
los antibióticos en su estructura o metabolismo. Unido a esto, algunas bacterias tienen una
resistencia natural o innata contra antibióticos específicos.
Esta resistencia natural, puede presentarse por varias maneras y una de ellas es la
interferencia mediante enzimas inactivadoras, otra manera, es por la baja afinidad natural de la
molécula blanco y por último podemos mencionar la reducción del potencial de membrana. Por
otro lado, la resistencia adquirida se puede dar mediante mecanismos de resistencia
cromosomales y mecanismos de resistencia extracromosomales y en mucho, está
principalmente mediada por Factores R, que son plásmidos que codifican para algún
mecanismo de resistencia.
Una vez que las bacterias desarrollan resistencia, sobrevivirán a la exposición al antibiótico. A
menudo, las bacterias adquieren resistencia concurrentemente a otros antibióticos con
estructura y modo de acción similares. Las cepas resistentes se multiplican y luego se
propagan. Estas bacterias pueden estar presentes solo de forma transitoria o persistir durante
largos periodos de tiempo causando problemas mayores de salud. En virtud de la creciente
prevalencia de la resistencia antimicrobiana entre los patógenos en todo el mundo, las
tendencias de resistencia para todos los antibióticos deben monitorearse muy de cerca para
poder asegurar un tratamiento efectivo.
Se han evaluado durante muchos años el estudio del efecto de los antibióticos sobre las
bacterias estableciéndose métodos estándarizados por la NCCLS como: disco difusión, MIC y E-
Test
b. MATERIAL DIDÁCTICO
Cepas bacterianas: E. coli, Salmonella, S. aureus, y Pseudomonas aeruginosa
- Placas con Agar Mueller Hinton
- Tubos 13 x100 con de suero fisiológico estériles (para suspensión bacetriana o
levadura a MacFarland 0.5)
- Discos de antibióticos
- Tubos con 1 ml de CTS para MIC
- Solución de antibiótico
- Tira de E.test
- Pinzas
- Gradillas
- Tubo 0.5 de macFarland
- Asas de siembra en aro y punta
- Mecheros bunsen o alcohol
- Hisopos estériles
- Bocal con lejía
- Micropipetas de 10-100 uL y 100uL a 1000 uL
- Puntas 10-100 uL y 100uL a 1000 uL estériles
- Mecheros
- Reglas medidoras
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente práctica se realizarán de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PROCEDIMIENTO:
Disco difusión
PROCEDIMIENTO
1. Añadir 0.5 mL de una solución 0.048 mol/L de BaCl2 (1.175% w/v BaCl2·2H20) a 99.5 mL de
H2S04 0.18 mol/L (0.36 N) (1% v/v) y mezclar completamente.
2. Comprobar la densidad de la suspensión en un espectrofotómetro empleando cuvetas de
paso de luz de 1 cm. La absorbancia a 625 nm debe estar en un rango de 0,08 a 0,13.
3. Distribuir la suspensión en tubos del mismo tamaño que los utilizados para realizar el
inóculo de estudio. Sellar los tubos.
4. Conservar las suspensiones estándar protegidas de la luz y a temperatura ambiente.
5. Agitar la suspensión estándar en un agitador Vortex inmediatamente antes de utilizarla.
6. Renovar las soluciones estándar o verificar su absorbancia transcurridos 6 meses de
almacenamiento.
7. En el caso de las soluciones estándar comerciales, deberá confirmarse que la absorbancia
esté dentro del rango establecido
II. METODO MINIMA CONCENTRACION INHIBITORIA
PROCEDIMIENTO
Suspensión
bacteriana 20 20 20 20 20 20 20 20 20
(0.5 MF) ul
Concentració
n
Título
III E-Test
Es uno de los métodos más utilizados debido a su fácil implementación y lectura. Actualmente
se encuentra aprobado por la FDA para susceptibilidad in vitro de Candida spp contra
fluconazol e itraconazol.
PROCEDIMIENTO
Cepa de E.coli
Medio Mueller Hinton
Preparar un inoculo de 0.5 MacFarland
Inocular el medio de cultivo (igual como se hizo para bacterias) en diferentes
direcciones.
Dejar secar 5 minutos
Aplicar la tira de E-Test
Incubar a 35 °C por 24 a 48 horas
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
f. RESULTADOS ESPERADOS
- El alumno interpretara correctamente las diversas técnicas de pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana.
GUIA PRÁCTICA Nº 12 SEMANA 13
LECTURA E INTERPRETACIÓN DE LOS MÉTODOS DE SENSIBILIDAD ANTIMICROBIANA:
DISCO DIFUSIÓN, MIC Y E-TEST. II
OBJETIVO El alumno deberá reconocer e identificar los métodos
para demostrar el efecto de los antibióticos sobre las
bacterias
Desarrollar los métodos de Disco difusión, MIC y E-Test
LOGRO A MEDIR Lectura e interpretación de pruebas de susceptibilidad
a. MARCO TEÓRICO
A escala mundial, existe una gran preocupación por el aumento en la resistencia bacteriana
hacia los diferentes antibióticos. Las bacterias han desarrollado una serie de mecanismos de
resistencia, algunos de ellos muy sofisticados, para poder contrarrestar los efectos dañinos de
los antibióticos en su estructura o metabolismo. Unido a esto, algunas bacterias tienen una
resistencia natural o innata contra antibióticos específicos.
Esta resistencia natural, puede presentarse por varias maneras y una de ellas es la
interferencia mediante enzimas inactivadoras, otra manera, es por la baja afinidad natural de la
molécula blanco y por último podemos mencionar la reducción del potencial de membrana. Por
otro lado, la resistencia adquirida se puede dar mediante mecanismos de resistencia
cromosomales y mecanismos de resistencia extracromosomales y en mucho, está
principalmente mediada por Factores R, que son plásmidos que codifican para algún
mecanismo de resistencia
Una vez que las bacterias desarrollan resistencia, sobrevivirán a la exposición al antibiótico. A
menudo, las bacterias adquieren resistencia concurrentemente a otros antibióticos con
estructura y modo de acción similares. Las cepas resistentes se multiplican y luego se
propagan. Estas bacterias pueden estar presentes solo de forma transitoria o persistir durante
largos periodos de tiempo causando problemas mayores de salud. En virtud de la creciente
prevalencia de la resistencia antimicrobiana entre los patógenos en todo el mundo, las
tendencias de resistencia para todos los antibióticos deben monitorearse muy de cerca para
poder asegurar un tratamiento efectivo.
Se han evaluado durante muchos años el estudio del efecto de los antibióticos sobre las
bacterias estableciéndose métodos estándarizados por la NCCLS como: disco difusión, MIC y E-
Test
b. MATERIAL DIDÁCTICO
c. ACTIVIDADES
Las actividades a realizar en la presente practica se realizará de manera individual
con la participación personal del alumnado.
d. DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
RESULTADOS
Disco difusión
Lectura de las placas e interpretación de los resultados:
Después de 16 a 18 horas de incubación, cada placa es examinada.
Las zonas de inhibición resultantes deben ser uniformemente circulares en una capa
homogénea de crecimiento. Si aparecen colonias individuales, el inóculo estaba muy
diluido y la prueba debe ser repetida.
Los diámetros de la zona de inhibición completa (a ojo desnudo son medidos en mm.
pasando por el centro del disco. La placa petri se mantiene a una distancia de pocos
centímetros sobre un fondo negro no reflactante y se ilumina con luz reflejada.
El margen de las zonas debe ser tomado como el área donde no se observa
crecimiento visible.
Un crecimiento pobre de pequeñas colonias, las que se detectan con lente de aumento
al borde de la zona de crecimiento inhibido, son ignoradas.
Sin embargo, colonias discretas creciendo dentro de la zona clara de inhibición deben
ser identificadas y probadas nuevamente.
Los tamaños de las zonas de inhibición son interpretados en las Tablas NCCLS para ser
informado como susceptible, intermedio, o resistente a los antimicrobianos que se han
probado.
MIC
LECTURA E INTERPRETACION
Retirar los tubos de la estufa
La MIC corresponde a la mínima concentración de ATB en donde no se observa
desarrollo (turbidez)
MIC se expresa en ug/ml
Luego se debe recurrir, teniendo en cuenta el valor de CIM obtenido para esa cepa, a las
tablas para definir según los valores de CIM que en ellas aparecen si las cepas en estudio
son sensibles o resistentes a un determinado antibiótico
E-TEST
Lectura e interpretación
Retirar las placas de la incubadora.
Leer las placas teniendo en cuenta la línea de crecimiento que cruza la tira en la
concentración correspondiente.
RESULTADOS
Anotar los resultados y esquemas de cada uno de los métodos
MIC
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CP
E. coli
Resultados
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CP
S. aureus
Resultados
DISCO DIFUSION
El color hace referencia a la turbidez que se obs ervara en los tubos en el momento
de la lectura
e. INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN
Informe de prácticas realizadas en la presente semana
f. RESULTADOS ESPERADOS
- Interpretar correctamente las diversa técnicas de disco difusión, MIC, e-test