Resumen Microbiologia Como Abordar y Resolver Aspectos Practicos Demicrobiologia Tema 1 4

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Resumen Microbiología Como abordar y resolver aspectos

practicos deMicrobiología Tema 1-4
Microbiología (Universidad del País Vasco)
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Inés Arana, Maite Orruño e Isabel Barcina
Departamento Inmunología, Microbiología y Parasitología

Universidad del País Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea

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1.
Es un hecho que en la mayoría de los ambientes, la densidad microbiana suele ser

demasiado elevada o baja para poder realizar una siembra directa de la muestra que
de buenos resultados en la enumeración de microorganismos. Esta situación hace
necesaria la dilución o la concentración de la muestra previa a la realización de
cualquier estudio. Además, las muestras sólidas requieren su dilución para facilitar la
manipulación y permitir trabajar con ellas como si fueran muestras líquidas.
En la mayoría de los casos, se trabaja con diluciones decimales. El caso más sencillo es la preparación
de 10 ml de la dilución 1/10 de la muestra. Para ello, se añade 1 ml de muestra a 9 ml de diluyente; es
decir de cada 10 ml de esta dilución 1/10, 1 ml corresponde a la muestra. Expresándolo mediante una
ecuación:
1 ml Muestra
Dilución 1/10 = 10 ml de dilución 1/10 ó 1041
1 ml Muestra + 9 ml Diluyente
Se pueden preparar diluciones sucesivas. Por ejemplo, si se requiere la dilución 1/100, ó expresado de
otro modo la dilución 1042, a partir de esta dilución 1/10, se elaboraría de acuerdo con la ecuación
siguiente:
1 ml Dilución 1041
41
1 ml Dilución 10 + 9 ml Diluyente
O bien directamente,
1 ml Muestra
1 ml Muestra + 99 ml Diluyente
0,1 ml Muestra
0, 1 ml Muestra + 9,9 ml Diluyente
Nota: El volumen final obtenido viene dado por el denominador de la ecuación.
Con estas nociones, se deben !"# para los problemas siguientes:
1.1. ¿Cómo se preparan 250 ml de la dilución 1041 a partir de una muestra de agua?
1.2. Queremos preparar 10 ml de la dilución 1045 en 3 únicos pasos, ¿cómo lo haría?

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1.3. Se requiere la dilución 1046 de una muestra de agua, pero se dispone únicamente de 3 tubos vacíos
estériles y de 30 ml de solución salina (diluyente) estériles ¿Cómo se prepararía esa dilución?
¿Y si tuviéramos 6 tubos Eppendorff (volumen hasta 1 ml) pero únicamente 10 ml de solución
salina?
1.4. Se necesitan preparar 150 ml de dilución 1041 de una muestra de agua. Realizar un esquema claro
y detallado de los pasos que se deben llevar a cabo, volúmenes transferidos, etc.
¿Y si se tuvieran que preparar 150 ml de dilución 1043?
1.5. A partir de una muestra de agua, ¿cómo se elaboran las diluciones: 1/10; 1/5; ¼; ½?
En el caso de $! % & ' #(& , se debe sustituir ml de muestra por g de muestra:
1 g Muestra
1 g Muestra + 9 ml Diluyente
1.6. Se pesan 1,5 g de alimento, se añaden 13,5 ml de Solución Ringer (diluyente) y se homogeniza,
¿cuál es la dilución de trabajo?
1.7. Con el fin de determinar la densidad microbiana en un yogur, se requiere la dilución 1042. Indicar
los pasos a seguir y detallar como se prepara esa dilución.
1.8. A partir de una muestra de agua ¿Cómo prepararía 500 ml de la dilución 1041? Expliqué la
elaboración del mismo volumen de dicha dilución pero partiendo de una muestra sólida, por
ejemplo, una muestra de suelo.
Como ya se ha indicado, en ocasiones, debido a la baja densidad de microorganismos, es preciso

" " % & la muestra mediante filtración o centrifugación. Este hecho requiere que para su
manipulación posterior, los filtros o los pellets obtenidos se resuspendan en un volumen determinado
de diluyente. En este caso es preciso determinar el )&"% ( " " % &"#' con el que se trabaja. Por
ejemplo:
10 ml Muestra filtrados
Facto de concntración = 1 ml de concentrado 10X
1 ml Diluyente
1.9. Se filtran 100 ml de una muestra de agua. El filtro se resuspende en 10 ml solución salina y se
agita vigorosamente. ¿Cuál es el factor de concentración?

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1.10. 100 ml de una suspensión microbiana densa se centrifugan a 5.000 r.p.m. Se retira el
sobrenadante y el precipitado se resuspende tras la adición de 2,5 ml de diluyente. ¿Cuál es el
factor de concentración?
No sólo es necesario saber diluir o concentrar una muestra, también se debe entender cómo & #"&
" "%&$ % )&"% ( (# !"#' ( " " % &"#' para establecer la densidad microbiana
de una muestra. A continuación se plantean algunos problemas basados en la enumeración de
microorganismos mediante el método de contaje de Unidades Formadoras de Colonias (UFC).
A colonias enumeradas
UFC/ml = X Factor de dilución
B ml sembrados
A colonias enumeradas 1
UFC/ml = X
B ml sembrados Factor de concentración
1.11. Tras preparar las siguientes diluciones: 1/10; 1/5; ¼; ½ a partir de diferentes muestras, se
siembra 1 placa por dilución, inoculando en cada caso 0,1 ml por placa. Tras la incubación, en
todos los casos se obtienen 27 colonias por placa, ¿cuales son las densidades microbianas de las
diferentes muestras?
1.12. A partir de una muestra de agua, se prepara la dilución 1043. 2 ml de esta dilución se transfieren a
un tubo que contiene 8 ml de diluyente, se agita y 0,5 ml se siembran en la superficie de una
placa con medio nutritivo. Si, tras la incubación, se enumeran 50 colonias, ¿cuál es la densidad
microbiana de la muestra?
1.13. A partir de una muestra de agua, se transfieren 4 ml a un tubo que contiene 4 ml de diluyente. Se
siembran 0,5 ml en la superficie de una placa con medio nutritivo. Si, tras la incubación, se
obtienen 82 colonias, ¿cual es la densidad microbiana de la muestra?
1.14. Se recoge una muestra de un alimento sólido y se sigue el siguiente protocolo de siembra:
• Pesar 15 g de alimento y añadir 135 ml de Solución Ringer. Homogeneizar.
• 2 ml del homogeneizado se pipetean a un vial que contiene 18 ml de diluyente. Homogeneizar.
• 0,2 ml de esta última suspensión se siembran en una placa de Agar Nutritivo. Incubar.
• Se cuentan 100 colonias.
• A partir de esta información, ¿cual es el número de microorganismos por gramo de alimento?

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1.15. ¿Cómo se prepararía la dilución 1/5 a partir de una muestra de sedimento? ¿Y la dilución 1/8? Si
tras sembrar 0,5 ml en una placa y, posterior, incubación, se obtienen 120 colonias. ¿Cual es la
densidad microbiana expresada como Nº de microorganismos cultivables/100 g de sedimento?
1.16. 20 g de sedimento se resuspenden en 40 ml de solución salina. Se agita vigorosamente y se

sonica para separar las bacterias de las partículas de sedimento. 10 ml de la suspensión
resultante se centrifugan a velocidad baja (sedimentación de partículas > 3 µm). Se recoge el
sobrenadante y se diluye 1.000 veces. 0,2 ml de esta dilución se siembra en profundidad en
Agar Nutritivo. Al finalizar el periodo de incubación se obtienen 126 colonias. ¿Número de
bacterias cultivables por g de sedimento?
1.17. Tras filtrar 50 ml de una muestra de agua y resuspender el filtro en 10 ml de solución salina, se
agita vigorosamente. 0,1 ml de esta suspensión se siembran en una placa de Agar Nutriente.
Tras la incubación se cuentan 50 colonias. ¿Cuál es la densidad microbiana de la muestra?
1.18. Se filtran 50 ml de una muestra de agua. El filtro se resuspende en 15 ml solución salina y se

agita vigorosamente. A partir de esta dilución se preparan 2 diluciones sucesivas: 1/10 y ½. 0,2
ml de la dilución final resultante se siembran en una placa de Agar Nutriente. Tras la
incubación se cuentan 35 colonias. ¿Cuál es la densidad microbiana de la muestra?
1.19. Se va a realizar un estudio para valorar la calidad microbiológica de las aguas de la ría de Bilbao.
Para ello se enumerarán las bacterias heterotrofas aerobias (BHA) presentes. Se decide realizar
diluciones decimales y sembrar una placa de Agar Nutriente por dilución a razón de 100 Ol por
placa. Sabiendo, tras consultar la bibliografía relacionada, que la densidad de BHA oscila entre
5 107 y 7 108 bacterias/ml, ¿qué diluciones deberíamos sembrar?
1.20. Se va a realizar un estudio para determinar la presencia de bacterias reductoras de sulfato (BRS)
en los sedimentos de la ría de Bilbao. El sedimento recogido se tratará añadiendo 10 ml de
diluyente por cada 2 g de sedimento y se homogeneizará. Posteriormente, a partir de esta
suspensión se realizarán diluciones decimales y se sembrará una placa de medio de cultivo
adecuado por dilución a razón de 100 Ol por placa. Sabiendo, tras consultar la bibliografía
relacionada, que en ambientes similares, la densidad media de BRS es de 5 104 BRS/ml, ¿qué
diluciones deberíamos sembrar?

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250 ml de la dilución 1041
* 10 ml de la dilución 1045 en 3 únicos pasos.
Podemos proponer otras opciones, por ejemplo:

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+ Dilución 1046. Se dispone únicamente de 3 tubos vacíos estériles y de 30 ml de diluyente.
! "
Dilución 1046. Se dispone de 6 tubos Eppendorff (1 ml) y de 10 ml de solución salina.
! "
, 150 ml de la dilución 1041.
150 ml de dilución 1043

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2 ¿Cómo se elaboran las diluciones: 1/10; 1/5; ¼; ½?

# $
# !
!#
#
- 1,5 g de alimento + 13,5 ml de diluyente. ¿Dilución?

% & % & % # % #
. ¿Dilución 1042? Sólido = yogur.

# & '(& & '(& $
# )ó )ó $
Podemos proponer otras opciones, por ejemplo:
# & '(& & '(& $$
/ ¿500 ml de dilución 1041? Muestra líquida

# !
¿500 ml de dilución 1041? Muestra sólida
# & & !
0 100 ml filtrados y resuspendidos en 10 ml de diluyente. ¿Factor de concentración?

#
1 100 ml centrifugados y resuspendidos en 2,5 ml de diluyente. ¿Factor de concentración?

% #!
. Diluciones 1/10, 1/5, ¼ y ½. 1 placa/dilución. 0,1 ml inoculados/placa. 27 colonicas/placa. ¿UFC/ml?
! " #$
%
! " #$
%
&
&! " ' #$
%
! " & #$
%

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* Dilución = 1043
2 ml Muestra + 8 ml Diluyente = Dilución 2/10 = 1/5
Volumen sembrado = 0,5 ml. Colonias/placa = 50 colonias. ¿Microorganismos por ml de muestra?
" #$
%
+ 4 ml Muestra + 4 ml Diluyente = Dilución 4/8 = 1/2

Volumen sembrado = 0,5 ml. Colonias/placa = 82 colonias. ¿Microorganismos por ml de muestra?
'
" ' #$
%
, 15 g Muestra sólida + 135 ml Diluyente = Dilución 15/150 = 1/10

2 ml Dilución 1/10 + 18 ml Diluyente = Dilución 2/20 = 1/10
Volumen sembrado = 0,2 ml. Colonias/placa = 100 colonias. ¿Microorganismos por g de alimento?
" & #$ (
%
2 ¿Dilución 1/5 de muestra de sedimento?

)ó # & * ( & * ( !
¿Dilución 1/8 de muestra de sedimento?
)ó +# & * ( & * ( ,
Dilución 1/5. 0,5 ml sembrados/placa. 120 colonias/placa. ¿UFC/g muestra?
" #$ (
%
Dilución 1/8. 0,5 ml sembrados/placa. 120 colonias/placa. ¿UFC/g muestra?
'
" #$ (
%
- ¿ 20 g sedimento + 40 ml solución salina = 20/60 = Dilución 1/3.

Centrifugar 10 ml. Recoger sobrenadante (10 ml). Diluir 1000 veces.
Sembrar 0,2 ml/placa. 126 colonias/placa. ¿Microorganismos/g sedimento?
)
" ' ) #$ (
%

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. Filtrar 50 ml. Resuspender en 10 ml. 50/10. Factor de concentración = 5.

0,1 ml/placa. 50 colonias/placa. ¿Microorganismos/ml?
" #$
%
/ Filtrar 50 ml. Resuspender en 15 ml. 50/15. Factor de concentración = 3,33.

Preparar diluciones 1/10 y ½.
0,2 ml/placa. 35 colonias/placa. ¿Microorganismos/ml?
" #$
%
0 5 107 bacterias/ml < bacterias heterotrofas aerobias (BHA)de agua ría de Bilbao < 7 108 bacterias/ml,
Definir las diluciones que permitan enumerar BHA. Sabiendo que para enumerar colonias, los valores
ideales se sitúan entre 30 y 300 colonias/placa, calculamos las diluciones.
- ) , " ! )( (
- ) + , " ! )( (
* * *( % + )

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*1 5 104 bacterias/ml = bacterias reductoras de sulfato (BRS) en sedimentos ría de Bilbao Definir las
diluciones que permitan enumerar BRS. Sabiendo que para enumerar colonias, los valores ideales se
sitúan entre 30 y 300 colonias/placa, calculamos las diluciones4
- ) ! ' ' ' )( (

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COMO ABORDAR Y RESOLVER

ASPECTOS PRÁCTICOS DE
MICROBIOLOGÍA
2. ENUMERACIÓN DE MICROORGANISMOS


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2. ENUMERACIÓN DE MICROORGANISMOS
Existen diversos métodos para enumerar microorganismos en muestras de muy

diferente origen. Cada método tiene sus peculiaridades a la hora de transformar los
datos obtenidos en una densidad microbiana de la muestra estudiada, bien sea
Unidades Formadoras de Colonias, Microorganismos Totales, etc.
Un método sencillo para la enumeración de bacterias y hongos se basa en la cuantificación de

Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml o g de muestra. En el capítulo anterior ya se han
resuelto problemas basados en el empleo de este método. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que el
número de placas sembradas por dilución suele ser 3 ó 5.
Cuando realizamos diferentes diluciones decimales y sembramos más de una placa por dilución, a la
hora de interpretar los resultados tenemos diferentes posibilidades. En nuestro caso utilizaremos el
método más sencillo: seleccionaremos una única dilución, aquella que produce entre 30 y 300 colonias
por placa y calcularemos la media de colonias obtenidas para la dilución seleccionada.
A colonias enumeradas (media)

UFC/ml = X Factor de dilución
B ml sembrados
A colonias enumeradas (media) 1

UFC/ml = X
B ml sembrados Factor de concentración
Con las nociones adquiridas en el capítulo anterior, se deben proponer soluciones para los problemas
siguientes:
2.1. Calcular la densidad bacteriana expresada como UFC/ml de las tres diferentes muestras cuyos
resultados y diluciones realizadas se presentan en la tabla. El volumen sembrado es 100 <l/placa.
Muestra Dilución sembrada Placa 1 Placa 2 Placa 3

=3
10 1816 1698 1885
1 10=4 180 159 186
10=5 16 19 10
10=2 475 477 480
2 10=3 45 48 51
10=4 5 10 4
100 335 328 324
3 10=1 32 28 29
10=2 5 3 2

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2.2. Sabiendo que se siembran 100 <l por placa y 3 placas por muestra, ¿cuál sería, en este caso, el
límite de detección de la técnica de enumeración de bacterias cultivables (UFC)?. Y, ¿si se
siembran 5 placas por muestra?
2.3. Un cultivo bacteriano dado tiene una densidad de 5 108 UFC/ml. Sabiendo que se sembraron 0,1
ml en la placa y tras la incubación se enumeraron 50 colonias, ¿cuál es la dilución que se sembró?
2.4. Se ha determinado la densidad bacteriana de una suspensión bacteriana mediante el método de

siembra en microgota (volumen sembrado entre 10 y 20 µl y sin extensión de la gota). Los
resultados y diluciones realizadas se presentan en la tabla. El volumen sembrado es 10 <l.
Dilución sembrada Recuento 1 Recuento 2 Recuento 3

=3
10 180 159 186
10=4 16 19 10
¿Cuál es la densidad bacteriana de la muestra?
2.5. En el caso del método de la microgota, sembrando 10 <l y 3 réplicas por muestra, ¿cuál es el
límite de detección de esta técnica de enumeración?
Otra técnica de enumeración habitual es el método del Número Más Probable (NMP). Se trata de un
método de enumeración basado en la estadística. Debe determinarse un número característico que
permite obtener el NMP. Resuelva los siguientes problemas utilizando la Tabla de MacGrady que se
adjunta.
Tabla de MacGrady (1 ml/tubo, 3 tubos/dilución, 3 diluciones consecutivas). Resultado expresado como bacterias/ml
Número característico NMP Número característico NMP Número característico NMP

000 = 201 1,4 302 6,5
001 0,3 202 2,0 310 4,5
010 0,3 210 1,5 311 7,5
011 0,6 211 2,0 312 11,5
020 0,6 212 3,0 313 16,0
100 0,4 220 2,0 320 9,5
101 0,7 221 3,0 321 15,0
102 1,1 222 3,5 322 20,0
110 0,7 223 4,0 323 30,0
111 1,1 230 3,0 330 25,0
120 1,1 231 3,5 331 45,0
121 1,5 232 4,0 332 110,0
130 1,6 300 2,5 333 140,0
200 0,9 301 4,0

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2.6. A partir de una muestra de agua se elaboran las diluciones 1/10 y 1/100. Paralelamente, se
preparan 3 series de 3 tubos que contienen cada uno de ellos 10 ml de Caldo Nutritivo. La
primera serie de tubos se inocula directamente con la muestra de agua. La segunda serie se
inocula con la dilución 1/10 y la tercera, con la dilución 1/100. El volumen inoculado es en todos
los casos de 1 ml de muestra o dilución correspondiente por tubo de medio de cultivo. Las series
inoculadas se incuban durante 48 h a 20ºC y al finalizar el periodo de incubación se comprueba la
presencia de turbidez, indicativa de crecimiento, en cada uno de los tubos. A partir de los
resultados expresados en la tabla, ¿Cuál es la densidad bacteriana de esa muestra de agua?:
Procesamiento Resultado Tubos*

Muestra C C C
Dilución 1/10 C C C
Dilución 1/100 NC C NC
*C = crecimiento = medio turbio; NC = no crecimiento = medio transparente.
2.7. Utilizando el ejemplo anterior, si no se hubiera detectado crecimiento en ninguno de los tubos
inoculados, ¿qué densidad bacteriana daría como resultado del estudio?
2.8. Para facilitar la enumeración de microorganismos presentes en una tarta, se realiza el siguiente
procedimiento: a 62,5 g de tarta se añaden 187,5 ml de agua de peptona tamponada. A partir de
esta suspensión se preparan tres diluciones decimales seriadas. Paralelamente, se preparan, 4
series de 3 tubos con caldo MacConkey a razón de 10 ml de medio por tubo. Tras incubar a
44,5ºC, los resultados obtenidos son los siguientes:

62,5 g de tarta + 187,5 ml de agua de peptona A A A
<1
Dilución decimal 10 A A M
<2
Dilución decimal 10 A M M
<3
Dilución decimal 10 M M M
*Cada tubo se ha inoculado con 1 ml de suspensión o dilución correspondiente. A = amarillo, M = morado.
¿Cuál es la densidad de microorganismos presente en la tarta expresada en bacterias/g?

Sabiendo que la composición del caldo MacConkey es: peptona, 20 g; bilis de buey desecada, 5
g; lactosa, 10 g; púrpura de bromocresol, 0,03 g en 1 litro de agua destilada, ¿podría aportar más
información acerca del tipo de bacterias y dar una característica metabólica de las mismas?
También podemos utilizar métodos de enumeración basados en la microscopia (fotónica,

epifluorescencia, …) para determinar el número total de microorganismos.

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Los microorganismos relativamente grandes tales como levaduras o protistas pueden enumerarse
utilizando cámaras de recuento.
Las ecuaciones que deben utilizarse, dependiendo de si la muestra se ha diluido o concentrado son
las siguientes:
Nº medio de microorganismos/cuadrícula
Microorganismo/ml = X Factor de dilución
Nº ml/cuadrícula*
Nº médio de microorganismos/cuadrícula 1
Microorgansimos/ml = X
Nº ml/cuadrícula* Factor de concentración
Debe prestarse atención a las unidades de cada uno de los factores de la ecuación. El resultado final se expresa
como Nº de microorganismos por volumen de muestra. *Este factor, propio de cada cámara de recuento, puede
venir expresado como cuadrícula/ml o ml=1, en este caso el factor aparecerá en el numerador de la ecuación.
2.9. Se enumeran los microorganismos presentes en una suspensión densa de levaduras. Esta
suspensión se diluye 1.000 veces antes de preparar la cámara de recuento. El factor de la cámara
dado por el fabricante es 0,25 10=6 ml/cuadrícula. Si los resultados obtenidos son los presentados
en la tabla, ¿cuál es el número de levaduras por ml de dicha suspensión?
Cuadrícula 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
N° 12 14 12 11 12 14 15 12 9 11 12 14 15 10 11 9 10 11 12 14
2.10. ¿Cuál sería el límite de detección del método de recuento de levaduras totales empleando cámara
de recuento (hemocitómetro), si contamos un máximo de 20 campos en la cámara y el factor de
la misma es 1,5 105/ml?

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Desde hace varias décadas la microscopia de epifluorescencia permite la enumeración de

microorganismos previamente teñidos con fluorocromos. Esta técnica es muy válida para la
cuantificación de bacterias.
La ecuación empleada para transformar los datos obtenidos en una densidad microbiana es:
Nº microorganismos/campo
Microorganismo/ml = X Factor microscopio X Factor de dilución
Nº ml/filtro
El factor del microscopio se expresa como Nº de campos por filtro.
2.11. Se desea estimar la densidad bacteriana de una muestra de agua. Para ello, 100 <l de la muestra
se tiñen con naranja de acridina y se filtran a través de un filtro de membrana de 0,2 <m de
diámetro de poro. El filtro se monta sobre un portaobjetos y se observa utilizando un
microscopio de epifluorescencia. Se cuentan 20 campos obteniéndose los siguientes recuentos
bacterianos por campo:
Campo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
N° 15 12 11 9 21 16 13 13 15 20 22 13 14 12 18 17 9 22 18 18
Sabiendo que el factor de conversión del microscopio es de 30.954 campos/filtro, ¿cuál es la

densidad bacteriana de la muestra? Si se hubiera filtrado 1 ml de la dilución 10=2, utilizando los
mismos recuentos, ¿cuál es la densidad bacteriana de la muestra?
2.12. Calcule la densidad de las suspensiones bacterianas que se indican en la tabla teniendo en cuenta
que las cuantificaciones se han realizado empleando microscopia de epifluorescencia. Los
volumenes filtrados y las diluciones empleadas, así como, el número de bacterias por campo se

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detallan en la tabla. El factor del microscopio de epifluorescencia utilizado es 64.761,9 (N° de

campos/filtro).
Muestra Volumen filtrado Dilución N° bacterias/campo

1 1 ml Muestra 25/32/31/30/35/21/14/21/21/20
0
2 100 <l 10 22/22/21/22/23/23/21/17/21/21
3 50 <l 10=1 23/23/22/21/23/24/15/31/24/24
=2
4 100 <l 10 6/8/11/9/13/7/7/8/9/11
2.13. ¿Cuál sería el límite de detección del método de recuento de bacterias totales mediante
microscopia de epifluorescencia, si el volumen máximo que podemos filtrar es 5 ml, F es
34.520 campos/filtro y contamos un máximo de 30 campos por filtro?
2.14. En el río Butrón a su paso por Munguía, se recogieron muestras de agua. Ya en el laboratorio, se
preparó un matraz de 1.000 ml con 500 ml de muestra no tratada. El matraz se inoculó con
(densidad final, aproximadamente 106 UFC/ml) y se incubó durante 6 días a 20°C (120
r.p.m.). Periódicamente, se tomaron alícuotas encaminadas a la enumeración de y de
protozoos flagelados. La enumeración de UFC de se realizó en Agar EMB (Medio
selectivo y diferencial en el que produce colonias verdes metálicas características). La
enumeración de protozoos flagelados se realizó mediante microscopia de epifluorescencia en
alícuotas filtradas a través de filtros de 0,8 <m de diámetro de poro y teñidas con DAPI (factor
del microscopio de epifluorescencia utilizado, 64761,9 campos/filtro).
Se obtuvieron los resultados expresados en la tabla:
Tiempo (d) Dil. Vol. Sembrado (@l) Colonias/placa Dil. Vol. Filtrado (ml) N° flagelados/campo
=3
0 10 100 96/96/108 M 40 4/6/6/5/4/1/1/3/4/5
6/4/4/3/1/2/1/4/4/3
1 10=3 100 106/111/98
2 10=1 100 240/216/248 10=1 5 8/7/6/7/8/8/5/5/7/8
8/7/7/5/5/7/8/3/7/5
3 M* 100 315/296/298
4 M 100 88/76/78 10=1 20 3/4/3/3/0/3/4/1/4/2
0/0/2/4/3/6/7/7/6/4
5 M 1000 265/267/281
6 M 1000 166/166/168 10=1 40 4/4/3/4/5/0/0/3/4/3
3/2/4/4/2/1/0/6/4/2
* M = muestra.
¿Cuál es el efecto de la población de protozoos flagelados sobre la supervivencia de ?.
2.15. Sospechamos que la densidad de un cultivo bacteriano cuando alcanza la fase estacionaria de
crecimiento es de 4 108 células/ml. Para confirmar la densidad del cultivo utilizaremos el
método de enumeración basado en el empleo de microscopia de epifluorescencia. Sabiendo que

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se recomienda enumerar unas 20=30 bacterias por campo y que el factor del microscopio
utilizado es 20.000 campos/filtro, para una correcta enumeración ¿qué dilución de la muestra y
que volumen de dilución recomendaría filtrar?
2.16. Debemos preparar 20 ml de la dilución 10=3 de un cultivo microbiano. Indique como la realizaría.
A continuación:
• 5 ml de esta dilución se filtran para cuantificar las bacterias cultivables presentes. Este filtro se
coloca sobre un medio de cultivo adecuado. Tras la incubación se cuentan 125 colonias.
¿Qué número de UFC/ml tiene la muestra?
• Otros 10 ml se filtran por un filtro de 0,22 µm de diámetro de poro y se tiñen con naranja de
acridina. Los recuentos obtenidos mediante microscopia de epifluorescencia son:
15/14/13/20/12/10/15/17/16/17. ¿Cuál es la densidad bacteriana total si el factor del
microscopio es 1.920 campos/filtro?
2.17. ¿Cuál es el porcentaje de células cultivables Gram negativas en un cultivo mixto? Razone la
respuesta.
Sabemos que:
• Siendo el volumen filtrado es 2 ml de la dilución 10=2 y el factor del microscopio, 15.000
campos/filtro, los recuentos obtenidos mediante microscopia de epifluorescencia son:
22/21/20/23/22/22/23/24/25/25..
• Tras sembrar 3 placas de Agar MacConkey con 0,1 ml de la dilución 10=3, los resultados
obtenidos fueron: Lactosas positivas = 170/165/182 y Lactosa negativas = 80/70/76.
Un método clásico, y muy sencillo, de cuantificación de microorganismos se basa en la medición de

la Absorbancia (a una determinada longitud de onda) de una suspensión microbiana y la
transformación de este valor en un número de células (o UFC) por ml. Obviamente, este método
requiere de un estudio previo en el que se preparan diferentes diluciones de la suspensión microbiana y
para cada dilución se determina el valor de Absorbancia y el Nº de microorganismos/ml. Con esta
información se obtiene una ecuación que relaciona ambos parámetros y, en estudios posteriores, nos
permitirá conociendo la Absorbancia determinar la densidad microbiana.
2.18. Un cultivo de en fase exponencial tiene una absorbancia = 0,2 medida a

600 nm. Al realizar un recuento en placa se contaron 40 colonias tras sembrar 0,2 ml de la
dilución 10–4 del cultivo.
a) Calcula la densidad del cultivo.
b) Calcula las UFC totales si el volumen del cultivo es de 3 ml.

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c) ¿Qué diluciones deberías realizar a partir del mismo cultivo de cuando alcanza
una absorbancia = 0,5 para contar en una placa 100 colonias después de sembrar 0,2 ml?
2.19. A partir de una suspensión densa de se han preparado suspensiones diferentes

en las que se han determinado Absorbancia y UFC/ml. Los resultados obtenidos se expresan en
la siguiente tabla:
Suspensión Absorbancia (550 nm) Bacterias/ml
1 0,020 3,55 106
2 0.052 2,04 107
3 0,102 5,65 107
4 0,164 1,95 108
5 0,213 4,75 108
6 0,264 6,90 108
¿Cuál sería la densidad de una suspensión con Absorbancia = 0,18?
2.20. Se ha obtenido la siguiente ecuación que relaciona Absorbancia (600 nm) y

/ml: N° bacterias/ml = 1,032 107 Abs – 2,19 105.
Se toma una alícuota de un cultivo de , se diluye 10 veces y se determina la
Absorbancia (600 nm) de la dilución. El valor obtenido es 0,49. ¿Cuál es la densidad del cultivo.

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PROPUESTAS DE RESOLUCIÓN
2.1. ¿UFC/ml? Volumen sembrado = 100 <l/placa.
Muestra Dilución sembrada Placa 1 Placa 2 Placa 3 UFC/ml

=3
10 1816 1698 1885
1 10=4 180 159 186 1,75 107
10=5 16 19 10
10=2 475 477 480
2 10=3 45 48 51 4,8 105
10=4 5 10 4
100 335 328 324
3 10=1 32 28 29 2,97 103
10=2 5 3 2
2.2. Límite detección del método de enumeración de UFC. Supuesto: 100 <l sembrados/placa, 3
placas/muestra.
0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml
Caso real (colonias enumeradas): 0 0 0

Caso límite para enumeración: 0 0 1
0,33 colonias
= 3,3 UFC/ml
0,1 ml inoculados
Caso
Caso límite para enumeración: 1 colonia/3 placas = 3,3 UFC/ml
Caso real: 0 colonias/3 placas = Límite de detección: <3,3 UFC/ml
Límite detección del método de enumeración de UFC. Supuesto: 100 <l sembrados/placa, 5 placas/muestra.
Límite de detección: <2 UFC/ml
2.3. Densidad = 5 108 UFC/ml. 0,1 ml/placa. 50 colonias, ¿Dilución sembrada?
50 colonias x D
= 5 108 UFC/ml D = 106
0,1 ml inoculados
2.4. Microgota (10 <l/gota). ¿UFC/ml?
Dilución sembrada Recuento 1 Recuento 2 Recuento 3 UFC/ml

=3
10 180 159 186
10=4 16 19 10 1,5 103

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2.5. Límite de detección del método de microgota: 10 <l/gota, 3 réplicas/muestra (dilución).

0,33 colonias
= 33,3 UFC/ml
0,01 ml inoculados
Caso límite para enumeración: 1 colonia/3 gotas = 33,3 UFC/ml
Caso real: 0 colonias/3 gotas = Límite de detección: <33,3 UFC/ml
2.6. NMP. ¿Densidad bacteriana?
muestra dilución 1/10 dilución 1/100

Volumen inoculado = 1 ml muestra o dilución
Se incuban 48 h a 20ºC
Se comprueba crecimiento (turbidez)
3 3 1
45 bacterias/ml
2.7. NMP. ¿Límite de detección?
muestra dilución 1/10 dilución 1/100

Caso real (tubos
(tubos positivos):
positivos): 0 0 0
Caso límite para enumeración:
enumeración: 1 0 0
0,3 bacterias/ml
Límite de detección <0,3 bacterias/ml
2.8. NMP. ¿Microorganismos presentes?

62,5 g de tarta
tarta + 187,5 ml de agua de peptona A A A
Dilución decimal 1051 A A M
Dilución decimal 1052 A M M
Dilución decimal 1053 M M M
*M = Morado = Ausencia de crecimiento. A = Amarillo = Fermentación de lactosa
Nº característico = 321 = 15 microorganismos

Dilución = 62,5 / 250 = 1 / 4
NMP = 15 x 4 = 60 bacterias
bacterias Gram – Lac+/g

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2.9. Suspensión de levaduras. Diluir 1.000 veces. Factor de la cámara = 0,25 10=6 ml/cuadrícula.
¿Nº Levaduras/ml dde suspensión?
Cuadrícula 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
N° 12 14 12 11 12 14 15 12 9 11 12 14 15 10 11 9 10 11 12 14
12 células/cuadrícula
X 1.000 = 4,8 1010 levaduras/ml
0,25 1056 ml/cuadrícula
2.10. Cámara de recuento. Cuadrículas contadas = 20. Factor = 1,5 106 cuadrícula/ml.
¿Límite de detección?
Caso real (células/cuadrícula
(células/cuadrícula):
células/cuadrícula): 0
Caso límite para enumeración: 1 célula en 1 cuadrícula de las 20 enumeradas
1 célula/20 cuadrículas X 1,5 106 cuadrículas/ml = 7,5 104 levaduras/ml
Límite de detección <7,5 104 levaduras/ml

levaduras/ml
2.11. Microscopia de epifluorescencia. Volumen filtrado = 100 µl. Factor = 30.954 campos/filtro.
¿Densidad bacteriana?
Campo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
N° 15 12 11 9 21 16 13 13 15 20 22 13 14 12 18 17 9 22 18 18
15,4 bacterias/campo X 30.954 campos/filtro

= 4,77 106 bacterias/ml
0,1 ml/filtro
Volumen filtrado = 1 ml. Dilución 10=2. Factor = 30.954 campos/filtro. ¿Densidad bacteriana?
15,4 bacterias/campo X 30.954 campos/filtro X 100
1 ml/filtro
2.12. Microscopia de epifluorescencia. Factor = 64.761,9 campos/filtro.
Muestra Volumen filtrado Dilución N° bacterias/campo N° bacterias/ml

1 1 ml Muestra 25/32/31/30/35/21/14/21/21/20 1,62 106
2 100 Al 100 22/22/21/22/23/23/21/17/21/21 1,38 107
3 50 Al 1051 23/23/22/21/23/24/15/31/24/24 2,98 108
4 100 Al 1052 6/8/11/9/13/7/7/8/9/11 5,76 108

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2.13. Microscopia de epifluorescencia. Volumen máximo filtrado = 5 ml. Factor = 34.520 campos/filtro. 30
campos/filtro
Caso real (células/campo
(células/campo):
células/campo): 0
Caso límite para enumeración: 1 célula en 1 campo de los 30 enumerados
1 bacteria/30 campos X 34.520 campos/filtro

= 230 bacterias/ml
5 ml/filtro
Límite de detección <230 bacterias/ml

bacterias/ml
2.14. Efecto de la población de protozoos flagelados sobre la población de (Factor = 64761,9)
Tiempo Dil. Vol. Colonias/placa UFC/ml Dil. Vol. flagelados/campo Flagelados/ml

(d) Sembrado (Al) Filtrado (ml)
0 1053 100 96/96/108 106 M 40 4/6/6/5/4/1/1/3/4/5 5,75 103
6/4/4/3/1/2/1/4/4/3
1 1053 100 106/111/98 1,05 106
2 1051 100 240/216/248 2,35 104 1051 5 8/7/6/7/8/8/5/5/7/8 8,48 105
8/7/7/5/5/7/8/3/7/5
3 M* 100 315/296/298 3,03 103
4 M 100 88/76/78 8,07 102 1051 20 3/4/3/3/0/3/4/1/4/2 1,07 105
0/0/2/4/3/6/7/7/6/4
5 M 1000 265/267/281 271
6 M 1000 166/166/168 166,67 1051 40 4/4/3/4/5/0/0/3/4/3 14,70 104
3/2/4/4/2/1/0/6/4/2
• M = muestra.
log Nº m.o./ml

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2.15. Microscopia de epifluorescencia. ¿Volumen filtrado? ¿Dilución?
25 bacterias/ campo X 20.000 campos/filtro

= 4 108 bacterias/ml
V ml/filtro
V = 1,25 1053 ml V = 1,25 ml D = 103
2.16. 20 ml dilución 10=3.

5 Dilución 1051 = 1 ml Muestra + 9 ml Diluyente
5 Dilución 1052 = 1 ml Muestra + 9 ml Dilución 1051
5 Dilución 1053 = 2 ml Muestra + 18 ml Dilución 1052
¿UFC/ml?
125 colonias X 103
= 2,5 104 UFC/ml
5 ml
¿Nº total de bacterias/ml? Nº medio bacterias/campo = 14,9.
14,9 bacterias/campo X 1.920 X 103
10 ml
2.17. ¿Porcentaje de células Gram negativas cultivables?
22,7 bacterias/campo X 15.000 X 102

2 ml
[172,33 (Lac+) + 75,33 (Lac5)] colonias X 103

= 2,48 106 UFC Gram 5/ml
0,1 ml
14,59 %
2.18. ¿Densidad del cultivo de ?

40 colonias X 104
= 2 106 UFC/ml
0,2 ml
¿UFC totales en 3 ml? 2 106 UFC/ml X 3 ml = 6 106 UFC totales
¿Dilución?
0,2 Abs ____________ 2 106 UFC/ml
0,5 Abs ____________ 5 106 UFC/ml
100 colonias X D
= 5 106 UFC/ml
0,2 ml
D = 1054

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2.19. ¿Densidad de una suspensión de con Absorbancia (550) = 0,18?
Suspensión Absorbancia (550 nm) Bacterias/ml Log bact

bacterias
acterias/ml
erias/ml
1 0,020 3,55 106 6,55
2 0.052 2,04 107 7,31
3 0,102 5,65 107 7,75
4 0,164 1,95 108 8,29
5 0,213 4,75 108 8,68
6 0,264 6,90 108 8,84
Log bacterias/ml = 8,982 Abs + 6,683 (r = 0,97)
1,994 108 bacterias/ml
2.20. ¿ . N° bacterias/ml= 1,032 107 Abs – 2,19 105.

¿Densidad de um cultivo co Absorbância = 0,49.
N° bacterias/ml= 1,032 107 0,49 – 2,19 105
4,84 106 bacterias/ml

bacterias/ml

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MICROBIOLOGÍA
3. CÁLCULOS DE BIOMASA


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3. CÁLCULO DE BIOMASA
Cuando usamos el término biomasa nos referimos a la cantidad de masa de material

vivo y se expresa como gramos o calorías (julios) por ml o g de muestra. Mide la
cantidad de energía que se almacena en un segmento determinado de una comunidad
biológica. Para cuantificar la biomasa de una población/comunidad microbiana
disponemos de diferentes métodos. Alguno de estos métodos es muy sencillo y no
requiere manipulaciones complejas; otros métodos son más complejos, siendo
necesarias medidas indirectas. Veremos algunos casos sencillos.
Uno método directo y sencillo de cuantificación de la biomasa de una población es la estimación del
peso seco por g ó ml de muestra. Se requieren una balanza (precisión g x 0,001), un cestillo para
colocar la muestra que puede elaborarse con papel de aluminio y una mufla para secar la muestra.
Este método es válido, y muy utilizado, con cultivos puros (de levaduras, etc.); pero su utilización con
muestras naturales (sedimentos, muestras de agua de mar, etc.) es problemática.
Nuevamente, se deben proponer soluciones para los problemas siguientes:
3.1. Para determinar el peso seco de un cultivo de , 10 ml de una suspensión

de levadura se centrifugaron a 5.000 g. Tras retirar el sobrenadante, se añadieron 3 ml de solución
salina estéril y se agitó hasta homogeneizar. 1 ml de esta nueva suspensión se colocaron en un
cestillo metálico (peso del cestillo vacío; 0,300 g) y se secaron en estufa a 105ºC durante 24 h.
Tras ese periodo de secado, el peso del cestillo fue de 0,350 g. ¿Cuál es el peso seco, expresado
como g/ml, del cultivo?
Otro método de determinación de biomasa, válido para poblaciones naturales pero más complejo y
laborioso, es la determinación de la biomasa a través del biovolumen. En este método, en
preparaciones para microscopia fotónica, de epiflluorescencia, etc. Se determina la longitud, anchura o
diámetro de un número determinado de microorganismos de esa muestra. Los microorganismos de la
muestra se asimilan a figuras geométricas más o menos complejas y se calcula el biovolumen de cada
uno de ellos.
Aplicaremos la siguiente ecuación:
Biomasa (µg C/ml) = N * Bv * F

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Siendo: N, el número de microorganismos enumerados por ml de muestra,

Bv, el biovolumen expresado como µm3 por microorganismo,
F, factor de conversión, µg de Carbono por µm3.
En la bibliografía se encuentran diferentes valores de F calculados tanto para cultivos puros como para
muestras naturales, fundamentalmente de sistemas acuáticos.
3.2. Una muestra bacteriana se tiñó con naranja de acridina y se preparó para microscopia de
epifluorescencia. Mediante un sistema de análisis de imagen se procedió a medir la longitud y
anchura de 10 células, obteniéndose los siguientes resultados:
Célula µm)
A: Anchura (µ µm)
L: Longitud (µ
1 0,51 1,0234
2 0,50 1,0342
3 0,51 1,1091
4 0,50 1,0921
5 0,49 1,0456
6 0,49 1,1001
7 0,50 1,1000
8 0,50 1,0761
9 0,51 1,0345
10 0,49 1,0555
Sabiendo que la densidad del cultivo es 4,8 107 bacterias/ml y el factor de conversión a carbono
es 164 fg C/µm3, ¿cuál es biomasa de este cultivo?
Se recomienda emplear la siguiente ecuación para el cálculo del biovolumen en bacterias
bacilares:
π 1
Bv = A2 (L H A)
4 3
Siendo: A, anchura,
L, longitud.
3.3. Suponga que trabaja en el laboratorio de una empresa de producción de cultivos iniciadores
(inóculos) para varias empresas de productos lácteos. Dispone de dos nuevas cepas
( y ) en las que se está comprobando la
capacidad de producir elevadas densidades celulares y biomasa.
En su laboratorio, hacen crecer los dos , por separado y en condiciones óptimas. Al
llegar a la fase estacionaria de crecimiento (24 h) se recogen muestras y,
• Los resultados obtenidos utilizando microscopia de epifluorescencia son los siguientes:

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Bacterias/campo Vol. Filtrado Dil. Factor microscopio

(ml) (campos/filtro)
25/32/30/28/33/34/35/29/28/24 0,5 10H2 14.520

15/32/33/18/20/22/18/23/19/26
5/12/13/8/13/8/15/9/8/14 1 10H3 7.220
15/12/13/8/10/7/8/9/9/6
¿Cuál de los dos microorganismos alcanza una mayor densidad celular en la fase estacionaria de
crecimiento?
• Se miden 200 células. Resultados obtenidos:
µm)
Longitud (µ µm)
Anchura (µ µm3)
Factor de conversión (mg C/µ
1,7 0,6
170 10H10
2 0,4
Si la fórmula del biovolumen es (L H A/3) πA2/4 ¿Cuál de los dos microorganismos alcanza una
mayor biomasa en la fase estacionaria de crecimiento?
3.4. Se lleva a cabo un estudio de densidad de unidades formadoras de colonia (UFC) en agar nutritivo
y biomasa bacteriana en un sistema acuático a 3 profundidades diferentes (5, 25 y 50 m). Para ello
se utilizan las técnicas de recuento en placa y recuento directo mediante microscopía.
Para el recuento de UFC. se sembraron 3 réplicas de 100 Kl de diferentes diluciones de la muestra
en Agar Marino. Los resultados se presentan en la siguiente tabla:
Dilución Profundidad (m)

5 25 50
H2
10 Incontables 500/617/593 363/303/395
10H3 357/452/403 53/67/60 35/30/40
10H4 35/45/40 5/7/6 4/2/5
Para la determinación de la biomasa se llevaron a cabo recuentos directos mediante microscopía

de epifluorescencia previa tinción de las bacterias con naranja de acridina. Asímismo, se midió el
biovolumen bacteriano mediante análisis de imagen de las preparaciones de estas muestras. Los
resultados se presentan en la siguiente tabla en la cual se indican las diluciones de la muestra
empleadas y el volumen filtrado por 0,2 Km en cada caso. El número de campos observados
fueron 10 por muestra:
Profundidad Dil. Volumen Recuentos Biovolumen

(m) Filtrado (-l) (Bacterias/campo) (-m3/célula)
5 10H1 100 30/35/40/25/30/25/33/25/27/30 0,15
25 10H1 200 31/25/40/37/20/15/32/26/25/31 0,45
50 100 100 31/33/37/43/23/34/21/19/26/30 0,47

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El factor de conversión del microscopio utilizado fue: 30.954 campos/filtro, y el factor de

conversión del volumen en biomasa fue: 2,2 10H7 KgC/Km3.
• ¿A qué profundidad se observa mayor densidad de UFC? ¿Cuál es la densidad de UFC a esta
profundidad?
• ¿A qué profundidad se observa la mayor biomasa bacteriana? ¿Cuales son los valores
máximos de biomasa bacteriana?
3.5. Como inóculo para la elaboración de yogur, se prepara un cultivo mixto compuesto por un 60% de
y un 40% de (porcentajes respecto a
biomasa). La biomasa del cultivo es de 3 mg C/ml. Sabiendo que:
• el diámetro (D) medio de es 1,2 Km; y la longitud (L) y anchura (A) medias de
son 1,8 y 0,5 Km, respectivamente;
• la ecuación del biovolumen en el caso de los cocos es Bv = πD3/6; y en el caso de los bacilos,
Bv = (L H A/3) πA2/4;
• el factor de conversión de biovolumen en carbono (F) es 170 10H10 mg C/ml;
¿Cuál será la densidad de las poblaciones de y de en el cultivo mixto
que hemos preparado?

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3.1. ¿Peso seco (g/ml) de un cultivo de ?
10 ml suspensión/ 3 ml diluyente = 3,33 = Factor de concentración

0,350 – 0,300 = 0,050 g
0,050 g
= 0,015 g/ml
3,33 ml
3.2. ¿Biomasa de un cultivo?
Célula (µm)
A: Anchura (µ (µm)
L: Longitud (µ (µm3)
Biovolumen (µ
1 0,51 1,0234 0,1743
2 0,50 1,0342 0,1903
3 0,51 1,1091 0,1918
4 0,50 1,0921 0,1817
5 0,49 1,0456 0,1664
6 0,49 1,1001 O,1767
7 0,50 1,1000 0,1833
8 0,50 1,0761 0,1786
9 0,51 1,0345 0,1766
10 0,49 1,0555 0,1682
Biovolumen medio (µm3/bacteria) 0,1717
Biomasa (µg C/ml) = N * Bv * F

Biomasa (µg C/ml) = 4,8 107 bacterias/ml * 0,1717 µm3/bactéria * 164 fg C/µm3 =
1,3516 µm3/ml
3.3. ¿Mayor densidad? Similares
Bacterias/campo Vol. Filtrado Dil. Factor microscopio Densidad

(ml) (campos/filtro) (bacterias/ml)
25/32/30/28/33 0,5 1042 14.520 7,61 107

34/35/29/28/24
15/32/33/18/20
22/18/23/19/26
5/12/13/8/13 1 1043 7.220 7,29
7,29 107
8/15/9/8/14
15/12/13/8/10
7/8/9/9/6
¿Mayor biomasa?
(µm)
Longitud (µ (µm)
Anchura (µ C/µm3)
Factor de conversión (mg C/µ Biomasa (m
(mg C/ml)
C/ml)
1,7 0,6
170 10410 0,549
2 0,4 0,291

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3.4. ¿Densidad en las diferentes profundidades? Volumen sembrado/placa = 100 µl. ¿Mayor densidad?
Dilución Profundidad (m)

5 25 50
1042 Incontables 500/617/593 363/303/395
1043 357/452/403 53/67/60 35/30/40
1044 35/45/40 5/7/6 4/2/5
UFC/ml 4 106 6 105 5,5 105
¿Biomasa en las diferentes profundidades? Factor del microscopio: 30.954 campos/filtro. Factor de
conversión dl volumen en biomasa: 2,2 10H7 KgC/Km3.
Profundidad Dil. Volumen Recuentos Bacterias/ml Biovolumen Biomasa

(m) Filtrado (7l) (Bacterias/campo) (7m3/célula)
/célula) (µg C/ml)
5 1041 100 30/35/40/25/30/ 0,15
25/33/25/27/30 9,29 107 3,06
25 1041 200 31/25/40/37/20/ 0,45
15/32/26/25/31 4,36 107 4,32
50 100 100 31/33/37/43/23/ 0,47
34/21/19/26/30 9,20 106 0,95
3.5. ¿Densidad de y en el cultivo mixto preparado?

H10
Biomasa del cultivo = 3 mg C/ml. Factor de conversión = 170 10 mg C/ml.
Microorganismo % Biomasa (µm)

Medidas (µ Formula
Formula Biovolumen Densidad
(µg C/ml) (7m3/célula) (bacterias/ml)
bacterias/ml)
60 1,8 D = 1,2 πD3/6 0,9048 1,17 108
L = 1,8
40 1,2 (L 4 A/3) πA2/4 0,3207 2,20 108
A = 0,5

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MICROBIOLOGÍA
4. CÁLCULO DE LOS PARÁMETROS QUE

DEFINEN EL CRECIMIENTO
BACTERIANO


lOMoARcPSD|27480825
4. CÁLCULO DE LOS PARÁMETROS QUE DEFINEN EL

CRECIMIENTO MICROBIANO
En condiciones controladas, en el laboratorio, se puede seguir la

evolución del número de células a lo largo del tiempo de un cultivo
microbiano en un sistema cerrado. Si representamos los resultados
obtenidos obtendremos la denominada curva de crecimiento que
comprende cuatro fases: fase de latencia o de adaptación, fase de
crecimiento exponencial o logarítmico, fase estacionaria y fase de muerte.
LATENCIA EXPONENCIAL ESTACIONARIA MUERTE
LAG LOG
Log N
Crecimiento neto 0 >0 0 <0
tiempo
inóculo
El concepto de crecimiento microbiano y las expresiones matemáticas que

lo definen pueden consultarse en cualquier texto de Microbiología (Brock
Biology of Microorganisms 2012, Prescott's Microbiology 2011).
Fase de crecimiento exponencial es la fase de crecimiento propiamente dicha y, simplificando el

desarrollo matemático,
dN/dt = µN
+(t-t0)
N=N0 e
se caracteriza mediante la siguiente ecuación:
Ln N-LnN0 = + (t-t0) ó log N - log N0= + / 2,303 (t-t0)

lOMoARcPSD|27480825
siendo la constante de proporcionalidad +, un índice de la velocidad de crecimiento que se denomina

constante específica de velocidad de crecimiento (velocidad de crecimiento por unidad de biomasa)
y tiene unidades de tiempo (h71).
Es posible utilizar otros parámetros como por ejemplo, el tiempo que tarda en duplicarse la población
o tiempo de generación, g.
g = 0,693/+
Al inverso del tiempo de generación se le denomina velocidad de crecimiento (K) y sus dimensiones
son generaciones/hora.
K = 1/g
Podemos calcular el valor de µmax (velocidad máxima) de crecimiento para un microorganismo y un

sustrato dado. Para ello se realizan curvas de crecimiento con concentraciones crecientes de sustrato y
se determinan los valores de µ para cada concentración estudiada.
µ = µmax S/(Ks + S)
siendo, Ks la constante de saturación para ese sustrato e igual a la concentración de sustrato para la
cual µ = ½ µmax.
También podemos utilizar la siguiente transformación de la ecuación:
µ µ µ
En la fase estacionaria se pueden determinar dos parámetros interesantes: cosecha máxima y

rendimiento.
Cosecha máxima es la biomasa máxima obtenida. Su cálculo se realiza mediante la expresión

siguiente:
M = Mt – M0

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siendo, Mt la biomasa en el tiempo t y se calcula en el momento en de la fase estacionaria en el que el

número de células es más elevado y M0 la biomasa del inóculo. El resultado se expresa en gramos,
miligramos, etc
Rendimiento es la biomasa producida por cantidad de sustrato consumida. Para su cálculo se utiliza la
siguiente expresión:
Y = Biomasa producida/Sustrato consumido = (Mt – M0)/(S0 – St)
siendo, S0 la cantidad de sustrato al inicio del cultivo y St la cantidad de sustrato en el tiempo (t) en el
que se obtiene el número de células más elevado. El resultado se expresa como g de células/g de
sustrato consumido.
Hasta aquí los aspectos teóricos del estudio del crecimiento microbiano, pero ¿cómo se analizan los
resultados obtenidos en el laboratorio o planteados en un problema? A continuación veremos como
los datos.
Los problemas más sencillos que nos pueden plantear son aquellos en los que conocidos varios
términos (p.e. densidad inicial de microorganismos, valor de µ y tiempo) nos pidan resolver una
incógnita (en este ejemplo, densidad final de microorganismos). Para ello nos bastará con sustituir en
las ecuaciones anteriores los términos conocidos y resolver.
Estos problemas son muy sencillos pero deberemos tener cuidado con las unidades o con la necesidad
de transformar algún dato, expresado de forma que no está recogida en la fórmula (p.e. desconocemos
µ pero nos dan el valor de g).
Con esta base, se deben proponer soluciones para los problemas siguientes:
4.1. Si partimos de 104 UFC/ml en un cultivo que tiene un tiempo de generación de 2 h, ¿cuántas
células cultivables tendremos al cabo de 4, 24 y 48 h de cultivo?
4.2. ¿Cuál es el tiempo de generación de un cultivo que tiene una constante específica de velocidad de
crecimiento de 0,01 min71? ¿Cuál será su velocidad de duplicación?
4.3. Si se quiere conseguir que un cultivo crezca hasta una densidad celular de 108 células/ml en 3 h, y
el tiempo de generación es de 30 min., ¿cuál debe ser la densidad celular al comienzo del cultivo?
4.4. Tenemos un cultivo de densidad 108 células/ml, con un tiempo de generación de 30 min. Si la
densidad inicial fue de 106 células/ml, ¿que tiempo de incubación ha sido necesario para alcanzar
la densidad final mencionada?

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4.5. Supongamos un cultivo en fase exponencial que en un momento dado tiene 10.000 células/ml y
cuatro horas más tarde 100.000.000 células/ml. Calcular F y g.
4.6. En una comida campestre se contaminó la paella con 46 células de . Si

tiene un tiempo de generación de 90 minutos y una fase de latencia (fase lag) de 1,5 h
¿cuántas células de esta bacteria estarán presentes en la paella al cabo de 10 h?
4.7. Un carnicero, portador asintomático de , picó carne sin proteger sus manos con
guantes. La carne picada se contaminó con 25 células de y con 32 células de
Sabiendo que Tiene un tiempo de generación de 30 minutos y una fase
de latencia de 3 h y que la constante específica de la velocidad de crecimiento de en la
71
carne es 0,17 h y la duración de su fase de latencia 5 h calcule el número de células del género
que habrá en la carne 10 h después de ser picada.
4.8. Se produce un vertido de aguas residuales urbanas en una playa. La densidad de y de

10 9
en las aguas residuales es de 7,8 10 y 6,2 10 células/100 ml,
respectivamente. El factor de dilución del vertido al incorporarse a la playa es de 1/1000. Dado
que la concentración de nutrientes en la playa es baja, el crecimiento de ambos microorganismos
está ralentizado. El tiempo de generación de es de 3 horas mientras que la constante
específica de la velocidad de crecimiento de es 0,11h71. Con los datos que se indican
¿podría indicar cual será el número de células por mililitro, de cada una de estas bacterias, en el
agua de la playa 24 horas después del vertido?
4.9. Calcular el rendimiento de producción de biomasa por gramo de carbono consumido de un cultivo
que produce 20 gramos por litro de células cuando utiliza como única fuente de carbono una
solución de glucosa al 10% (peso/volumen).
Sin embargo, en el laboratorio, cuando estudiamos el crecimiento microbiano, los problemas no son
tan sencillos o de resolución tan directa. Veamos un ejemplo:
En el laboratorio se inocula un matraz que contiene 100 ml de medio de cultivo X con el

microorganismo Y. Se incuba a XXºC con agitación y periódicamente se recogen alícuotas para
determinar el número de UFC/ml. Los datos se expresan una tabla como la del siguiente ejemplo
(datos en negro):

lOMoARcPSD|27480825
Tiempo (h) Nº UFC/ml Ln Nº UFC/ml (1) Ln Dx - Ln Dx-1 (2)

0 2,05 106 14,53
0
1 2,04 106 14,53
70,02
2 2,01 106 14,51
0,07
3 2,14 106 14,58
0,09
4 2,34 106 14,67
0,14
5 2,69 106 14,81
0,34 (3)
6 3,80 106 15,15
0,32
7 5,25 106 15,47
0,35
8 7,41 106 15,82
0,37
9 1,07 107 16,19
0,34
10 1,51 107 16,53
0,19
11 1,82 107 16,72
0,09
12 1,99 107 16,81
0,02
13 2,04 107 16,83
70,06
14 1,91 107 16,77
0,05
15 2,02 107 16,82
Pasos a seguir para definir los parámetros de crecimiento de este microorganismo XX:
a. Transformar el Nº de UFC/ml (en este caso) a log decimal o Ln (datos en rojo) (1).
b. Determinar el incremento en densidad de un tiempo al siguiente (2).
c. Buscar aquellos tiempos en los que la variación del crecimiento es constante (3).
d. Calcular la recta que relaciona, en este intervalo (3), tiempo densidad: Ln N/ml = 0,3486 t +
13,0752. La pendiente nos da el valor de µ = 0,3486 h71.
e. Para calcular la cosecha máxima debemos calcular la densidad máxima, en fase estacionaria, y la
densidad inicial. Podemos determinar un valor máximo (en este caso 2,04 107 UFC/ml) y un valor
inicial (2,05 106 UFC/ml) o, asumiendo que las fases estacionarias y lag están representados por la
media de los valores máximos y mínimos en los que no hay variación (1,88 107 y 2,14 106
UFC/ml, respectivamente). En el primer caso, el valor de M sería 1,835 107 UFC/ml; y en el
segundo, 1,666 107 UFC/ml. Es decir, una variación mínima.
Teniendo en cuenta esta información, se deben proponer soluciones para los problemas siguientes:

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4.10. Los datos de la fase exponencial de crecimiento de tres especies bacterianas que utilizan
glucosa como fuente de carbono son los siguientes:
Especie A Especie B Especie C

Tiempo (h) Log N Tiempo (h) Log N Tiempo (h) Log N
4 4,64 3 5,30 5 6,22
5 4,81 4 5,44 6 6,37
6 4,98 5 5,58 7 6,52
7 5,15 6 5,72 8 6,67
8 5,32 7 5,86 9 6,82
Indique cual de las tres especies crecerá más rápidamente. Razone la respuesta
4.11. Los resultados para en dos medios diferentes (mismas condiciones de incubación) son los
reflejados en la tabla. ¿Cuál de los dos medios seleccionaría para estudios posteriores?
Nº de células/ml
Tiempo (horas Medio A Medio B
6
0 2,09 10 2,29 105
1 2,04 106 2,24 105
2 1,99 106 2,25 105
3 2,63 106 2,19 105
4 3,47 106 2,23 105
5 4,68 106 3,16 105
6 6,17 106 4,47 105
7 7,94 106 6,46 105
8 8,32 106 9,33 105
9 8,51 106 1,32 106
10 8,33 106 1,29 106
11 8,13 106 1,26 106
4.12. Con el objetivo de hacer una curva de crecimiento de la bacteria en caldo nutritivo se
inocula un matraz con caldo nutritivo (37°C, 100 r.p.m.). Cada hora se extraen 2 ml del matraz y
se mide la absorbancia, obteniendo los siguientes resultados:
Tiempo (h) Absorbancia Tiempo (h) Absorbancia

0 0,0022 6 0,1108
1 0,0021 7 0,1643
2 0,0088 8 0,1905
3 0,0192 9 0,2732
4 0,0315 10 0,2603
5 0,0506 11 0,2611

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Paralelamente, a partir de un cultivo de , se preparan diferentes suspensiones celulares en

las que se determina el número de bacterias/ml y la absorbancia, obteniéndose siguiente ecuación:
Ln Nº células/ml = 20,688 Abs + 15,387, r = 0,97.
4.13. Previamente a la realización de una curva de crecimiento de la levadura en

caldo YNB, se establecieron las relaciones Absorbancia Densidad celular y Absorbancia .
Peso seco. Para ello, a partir de una suspensión densa de levadura, se prepararon 10 diluciones a
las que se mide la absorbancia (600 nm), y se determinaron la densidad celular y el peso seco,
obteniéndose los siguientes resultados:
Absorbancia Densidad celular (x105cel/ml) Peso seco (mg/ml)

0,203 15,43 0,06
0,076 7,08 0,02
0,079 7,18 0,02
0,325 28,80 0,08
0,11 10,90 0,038
0,095 5,33 0,035
0,47 47,00 0,169
0,237 24,90 0,06
0,865 87,50 0,40
0,68 68,00 0,25
Posteriormente, se inoculó un matraz con 100 ml de caldo YNB con aproximadamente 106
levaduras/ml. El matraz se incubó a 37°C con una agitación de 100 r.p.m. Periódicamente se
extrajeron submuestras de 2 ml del matraz para medida de la absorbancia:
Tiempo (h) Absorbancia

0 0,11
1 0,25
2 0,47
3 1,01
4 1,03
5 1,10
6 1,05
¿Cuál es la densidad del cultivo cuando entra en fase estacionaria? ¿Cuál es el peso seco del
cultivo cuando entra en fase estacionaria?
4.14. Teniendo estos datos referidos a un cultivo bacteriano, calcular F, g y cosecha máxima
Tiempo (h) Células/ml Tiempo (h) Células/ml Tiempo (h) Células/ml Tiempo (h) Células/ml
0 1000000 4 3650000 8 28100000 12 121000000

1 1100000 5 6080000 9 39100000 14 105000000
2 1600000 6 9900000 10 70100000
3 2620000 7 18000000 11 102000000

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Tras calcular F, g y cosecha máxima y, sabiendo que la concentración de sustrato inicial es de 5

mg S/ml y se agota durante el crecimiento, calcular el rendimiento.
Cuando nos piden calcular µmax, podemos hacerlo a partir de la representación gráfica de los valores de
µ obtenidos cuando el microorganismo crece con diferentes concentraciones de sustrato, si bien,
podemos obtener este valor a partir de la recta que la relaciona 1/µ 1/S .
+max
Fmax S
F=
F Ks + S
Ks [S]
1/F
1 1 Ks 1
= +
F Fmax Fmax S
Ks/Fmax
1/+max
1/[S]
Para calcular el rendimiento (Y), debemos obtener en primer lugar los valores de M (cosecha máxima)
para cada curva realizada con una concentración determinada de sustrato y obtener la recta que
relaciona M S (concentración de sustrato). Y será la pendiente de esa recta.

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M=YS+b
Pendiente = Y
4.15. Se pretende obtener biomasa a partir de . El sustrato que se utilizará en la

producción industrial es suero de leche (concentración de lactosa en el suero, 4%). Previamente,
para establecer las condiciones adecuadas, se realizan cultivos discontinuos con 10
concentraciones distintas de lactosa, obteniéndose los siguientes datos:
Concentración de lactosa (g/l) µ (1/h) Concentración de lactosa (g/l) µ (1/h)

1 0,083 10 0,332
2 0,143 12 0,351
4 0,221 14 0,367
6 0,273 16 0,366
8 0,310 20 0,368
Calcule: La constante de saturación del microorganismo para ese sustrato y la velocidad

específica de crecimiento máxima.
Al representar la cosecha máxima (mg células/ml) obtenidas en cada cultivo discontinuo frente a
la concentración de lactosa (mg lactosa/ml) se obtuvo la siguiente recta: y = 0,0383 + 0,409 x (r =
0,999). ¿Cuál es el rendimiento de ? y ¿Cuál será la cosecha obtenida usando como
sustrato el suero de leche?
Bibliografia
Madigan, M.T., J.M. Martinko, D.A. Stahl, D.P. Clark. 2012. Brock Biology of Microorganisms, 13ª
ed. Benjamin Cummings.
Willey, J.M., L.M. Sherwood, C.J. Woolverton. 2011. Prescott's Microbiology Companion Site, 8ª ed.
McGraw7Hill Ryerson Ltd.

lOMoARcPSD|27480825
4.1. N0 = 104 UFC/ml, g = 2 h, ¿cuántas células cultivables tendremos al cabo de 4, 24 y 48 h de cultivo?
log N ! log N0= # /2,303

/2,303 . (t!(t!t0) y g = 0,693/#
log N = [#
[# /2,303
/2,303 . (t!
(t!t0)] + log N0 y # = 0,693/g
0,693/g # = 0,3465 h!1
4 h:
h: log N = [0,3465
[0,3465 /2,303
/2,303 . (4)] + 4 N = 3,99 104 UFC/ml
24 h:
h: log N = [0,3465
[0,3465 /2,303
/2,303 . (24)] + 4 N = 4,09 10
107 UFC/ml
48 h:
h: log N = [0,3465
[0,3465 /2,303
/2,303 . (48)]
48)] + 4 N = 1,67 1011 UFC/ml
4.2. µ = 0,01 min71¿g? ¿K?
g = 0,693/# g = 69,3 min = 1,155 h

K = 1/g K = 0,8685 h!1
4.3. N = 108 células/ml, t = 3 h, g = 30 min.¿N0?
log N ! log N0= # /2,303

/2,303 . (t!(t!t0) y g = 0,693/#
log N ! [#
[# /2,303
/2,303 . (t!
(t!t0)] = log N0 y # = 0,693/g
0,693/g # = 1,386 h!1
N = 1,56 106 células/ml

células/ml
4.4. N0 = 104 células/ml, N = 108 células/ml, g = 30 min.¿t?
log N ! log N0= # /2,303

/2,303 . (t!
(t!t0) y g = 0,693/#
t = 3,323 h
4.5. N0 = 10.000 células/ml, N = 100.000.000 células/ml, t = 4 h.¿µ? ¿g?
µ = 2,303 h!1 g = 0,3 h
4.6. N0 = 46 células, g = 1,5 h, fase lag = 1,5 h ¿Células trás 10 h?
t = 10 h – 1,5 h = 8,5 h
log N ! log N0= # /2,303
/2,303 . (t!
(t!t0) y # = 0,693/g = 0,462 h!
h !1
log N = [#
[# /2,303
/2,303 . (t!
(t!t0)] + log N0 = [0,462/2,303
[0,462/2,303 (8,5)] + 1,663 = 3,368
2,33 103

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4.7. ., N0 = 25 células, g = 0,5 h, fase lag = 3 h. , N0 = 32 células, µ = 0,17 h71, fase

lag = 5 h
¿Células de ( .+ ) trás 10 h?
Fase lag (h) 3 5

µ (h!1) 1,386 O,170
g (h) 0,50 4,08
N0 (células)
(células) 25 32
Tiempo de crecimiento (h)
(h) 7 5
N (células)
(células) 3,98 105 74,8
N( ) ( .+ ) 3,98 105
4.8. Tras 24 h después del vertido ¿densidad por ml?
Aguas residuales: células/100 ml 7,8 1010 6,2 109

Vertido: células/100 ml 7,8 107 6,2 106
µ (h!1) 0,231 0,11
g (h) 3 6,3
Tiempo
Tiempo de crecimiento (h) 24 24
N (células/100
(células/100 ml) 1,99 1010 8,71 107
N (células/ml)
(células/ml) 1,99 108 8,71 105
4.9. ¿Rendimiento?
Solución de glucosa = 10 % (p/v) = 10 g/100 ml = 100 g/l
Biomasa = 20 g/ll
Y = Biomasa producida/Glucosa consumida
20 g células/l
= 0,2 g células/g glucosa
100 g glucosa/l

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4.10. ¿Que especie crece más rápido?
Especie A Especie
Especie B Especie C
Tiempo (h) Log N Tiempo (h) Log N Tiempo (h) Log N
4 4,64 3 5,30 5 6,22
5 4,81 4 5,44 6 6,37
6 4,98 5 5,58 7 6,52
7 5,15 6 5,72 8 6,67
8 5,32 7 5,86 9 6,82
µ (h!1) 0,3915 µ (h!1) 0,3224 µ (h!1) 0,3455
g (h) 1,77 g (h) 2,15 g (h) 2,01
2,01
4.11. ¿En que médio de cultivo crece mejor?
Medio A Medio B
Tiempo (horas)
(horas) Células/ml Ln células/ml Células/ml Ln células/ml
0 2,09 106 14,55 2,29 105 12,34
1 2,04 106 14,53 2,24 105 12,32
2 1,99 106 14,50 2,25 105 12,32
3 2,63 106 14,78 2,19 105 12,30
Fase exponencial
4 3,47 106 15,06 2,23 105 12,31
5 4,68 106 15,36 3,16 105 12,66
6 6,17 106 15,64 4,47 105 13,01
7 7,94 106 15,89 6,46 105 13,38
8 8,32 106 15,93 9,33 105 13,75
9 8,51 106 15,96 1,32 106 14,09
10 8,33 106 15,94 1,29 106 14,07
11 8,13 106 15,91 1,26 106 14,05
Fase lag (h) 3 5
µ (h!1) 0,2809 0,3583
g (h) 2,47 1,93
M (células/ml) 6,28 106 1,07 106

lOMoARcPSD|27480825
4.12. Ln Nº células/ml = 20,688 Ab s + 15,387, r = 0,97. ¿Densidad del cultivo en fase estacionaria?
Tiempo (h) Absorbancia Ln células/ml Células/ml

0 0,0022 15,43 5,03 106
1 0,0021 15,43 5,03 106
2 0,0088 15,57 5,78 106
3 0,0192 15,78 7,13 106
4 0,0315 16,04 9,25 106
5 0,0506 16,43 1,37 107
6 0,1108 17,68 4,77 107
7 0,1643 18,79 1,45 108
Fase estacionaria
8 0,1905 19,33 2,48 108
9 0,2732 21,04 1,37 109
10 0,2603 2077 1,05 109
11 0,2611 20,79 1,07 109
Media fase estacionaria 1,16 109
4.13. ¿Densidad del cultivo en fase estacionaria? ¿Peso seco del cultivo en fase estacionaria?
Absorbancia Densidad
Densidad celular (x105cel/ml) Peso seco (mg/ml)
0,203 15,43 0,06
0,076 7,08 0,02
0,079 7,18 0,02
0,325 28,80 0,08
0,11 10,90 0,038
0,095 5,33 0,035
0,47 47,00 0,169
0,237 24,90 0,06
0,865 87,50 0,40
0,68 68,00 0,25
Ln N células/ml = 3,391 Abs

Abs + 13,433
Peso seco/ml = 0,444 Abs – 0,026
Tiempo (h) Absorbancia Ln células/ml Células/ml Peso seco/ml

0 0,11 13,81 9,95 105 0,023
Fase estacionaria
1 0,25 14,28 1,59 106 0,085

2 0,47 15,03 3,37 106 0,183
3 1,01 16,86 2,10 107 0,423
4 1,03 16,93 2,25107 0,431
5 1,10 17,16 2,84 107 0,463
6 1,05 16,99 2,39107 0,440
Media Fase estacionaria 2,395 107 0,439

lOMoARcPSD|27480825
4.14. ¿F, g y cosecha máxima?
Tiempo (h) Células/ml Ln células/ml
0 1000000 13,816
1 1100000 13,911
2 1600000 14,286
Fase exponencial
3 2620000 14,779
4 3650000 15,11
5 6080000 15,621
6 9900000 16,108
7 18000000 16,706
8 28100000 17,151
9 39100000 17,482
10 70100000 18,065
11 102000000 18,44
12 121000000 18,611
14 105000000 18,469
18,5
18 y = 0,47x + 13,4 r2 =0,997
17,5
17 µ = 0,47 h!1
Ln células/ml
16,5
16 g = 1,47 h
15,5
Cosecha = 1,21 108 – 1 106 = 1,20 108 cel/ ml
15
14,5
1,20108 células/
células/ ml
14 Y= =2,4 células/mg sustrato
13,5 5 mg/ml
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Tiempo (h)

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4.15. ¿Constante de saturación para la lactosa?
Concentración de lactosa (g/l) µ (1/h) 1/ lactosa (l/g) 1/µ (h)

1/µ
1 0,083 1 12,0481928
2 0,143 0,5 6,99300699
4 0,221 0,25 4,52488688
6 0,273 0,166666667 3,66300366
8 0,310 0,125 3,22580645
10 0,332 0,1 3,01204819
12 0,351 0,083333333 2,84900285
14 0,367 0,071428571 2,72479564
16 0,366 0,0625 2,73224044
20 0,368 0,05 2,7173913
1/µ = 9,9646 1/S + 2,0486 R² = 0,9994
µmax = 1/2,0486 = 0,4881 h!1

Ks = 9,9646 µmax = 4,864 g/l
mg células/ml = 0,0383 + 0,409 mg lactosa/ml (r = 0,999)
Y = 0,409 mg células/mg lactosa
Lactosa en suero de leche = 4 % = 4 g/100 ml = 40 mg/ml
Msuero de leche = 16,4 mg células/ml

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Resumen Microbiologia Como Abordar y Resolver Aspectos Practicos Demicrobiologia Tema 1 4

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Resumen Microbiología Como abordar y resolver aspectos

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Inés Arana, Maite Orruño e Isabel Barcina

Departamento Inmunología, Microbiología y Parasitología

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Es un hecho que en la mayoría de los ambientes, la densidad microbiana suele ser

Nota: El volumen final obtenido viene dado por el denominador de la ecuación.

Con estas nociones, se deben !"# para los problemas siguientes:

1.2. Queremos preparar 10 ml de la dilución 1045 en 3 únicos pasos, ¿cómo lo haría?

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En el caso de $! % & ' #(& , se debe sustituir ml de muestra por g de muestra:

Como ya se ha indicado, en ocasiones, debido a la baja densidad de microorganismos, es preciso

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1.16. 20 g de sedimento se resuspenden en 40 ml de solución salina. Se agita vigorosamente y se

1.18. Se filtran 50 ml de una muestra de agua. El filtro se resuspende en 15 ml solución salina y se

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250 ml de la dilución 1041

* 10 ml de la dilución 1045 en 3 únicos pasos.

Podemos proponer otras opciones, por ejemplo:

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+ Dilución 1046. Se dispone únicamente de 3 tubos vacíos estériles y de 30 ml de diluyente.

Dilución 1046. Se dispone de 6 tubos Eppendorff (1 ml) y de 10 ml de solución salina.

, 150 ml de la dilución 1041.

150 ml de dilución 1043

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2 ¿Cómo se elaboran las diluciones: 1/10; 1/5; ¼; ½?

- 1,5 g de alimento + 13,5 ml de diluyente. ¿Dilución?

. ¿Dilución 1042? Sólido = yogur.

/ ¿500 ml de dilución 1041? Muestra líquida

0 100 ml filtrados y resuspendidos en 10 ml de diluyente. ¿Factor de concentración?

1 100 ml centrifugados y resuspendidos en 2,5 ml de diluyente. ¿Factor de concentración?

. Diluciones 1/10, 1/5, ¼ y ½. 1 placa/dilución. 0,1 ml inoculados/placa. 27 colonicas/placa. ¿UFC/ml?

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+ 4 ml Muestra + 4 ml Diluyente = Dilución 4/8 = 1/2

, 15 g Muestra sólida + 135 ml Diluyente = Dilución 15/150 = 1/10

2 ¿Dilución 1/5 de muestra de sedimento?

- ¿ 20 g sedimento + 40 ml solución salina = 20/60 = Dilución 1/3.

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. Filtrar 50 ml. Resuspender en 10 ml. 50/10. Factor de concentración = 5.

/ Filtrar 50 ml. Resuspender en 15 ml. 50/15. Factor de concentración = 3,33.

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COMO ABORDAR Y RESOLVER

Inés Arana, Maite Orruño e Isabel Barcina

Departamento Inmunología, Microbiología y Parasitología

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Un método sencillo para la enumeración de bacterias y hongos se basa en la cuantificación de

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2.4. Se ha determinado la densidad bacteriana de una suspensión bacteriana mediante el método de

Dilución sembrada Recuento 1 Recuento 2 Recuento 3

¿Cuál es la densidad bacteriana de la muestra?

Número característico NMP Número característico NMP Número característico NMP