CARACTERIZACIÓN BACTERIANA PARTE I Y II 

1
Estudiantes Microbiología 
1Ana Sofía Díaz;   1 Edwar Orlando Granados; 1 Fabián Arturo Benavides
Sabogal; 
  1 Félix Eduardo Jaramillo Niño; 1 Alexander Mendieta Martínez; 
2
profesor  
  Johan Manuel Cifuentes Castellanos 
2

 
1,2
corporación Tecnológica de Bogotá - CTB 
Bogotá, D. C., 25 de abril de 2023 
 
RESUMEN: Las bacterias son seres microscópicos los cuales habitan en todas partes, tanto dentro como
fuera de nuestro cuerpo. Tanto así que, en el medio ambiente, existe una gran diversidad de estos organismos
microscópicos, tal variedad ha hecho que su conocimiento sea limitado, puesto que existen una gran variedad
de hábitats y condiciones en la que estos se pueden desarrollar. (Vivas, 2021) Por esto, se propuso realizar los
diferentes tipos de siembra microbiana por las diferentes técnicas de sembrado, teniendo en cuenta que es una
siembra microbiana el cual no es otra cosa que Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de
muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo y
multiplicación. Teniendo en cuenta los técnicos de cultivo en placa la cual se trata de sembrar o inocular es
introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un
cultivo microbiano, para su desarrollo y multiplicación.  Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a
una temperatura adecuada para el crecimiento. (Burdin, 1984).

Por otra parte, la siembra en tubo de medios solidos o semisólidos se da en los diferentes tipos como lo son:
Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo simple. Se toma el
material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con el material bacteriológico, se agita, con
movimientos moderados. 
Siembra por estrías en superficie: Se siembra el material en la superficie del agar inclinado en un tubo de
ensayo, allí se extiende por toda la superficie con el asa bacteriológica, 
Siembra por punción: como es obvio, el instrumento de siembra a emplear será la aguja de platino y el medio
de cultivo sólido, generalmente, en tubo de ensayo. 
Siembra por inoculación o agitación: Con un asa bacteriológica, esterilizada, se toma cantidad de inoculo, se
introduce en el centro del medio líquido, agitándose, no tocando la pared del tubo. 
Siembra por picadura: Asa recta, tomar la muestra, sembrar en agar semisólido, en el tubo de ensayo hasta
que la muestra quede bien impregnada al agar. (ESPINAL, 2005).

 ABSTRACT: Bacteria are microscopic beings which inhabit everywhere, both inside and outside our body.
So much so that, in the environment, there is a great diversity of these microscopic organisms, such a variety
has made their knowledge limited, since there is a great variety of habitats and conditions in which they can
develop. For this reason, it was proposed to carry out the different types of microbial seeding by the different
seeding techniques, taking into account that it is a microbial seeding which is nothing other than Seeding or
inoculating is artificially introducing a portion of sample (inoculum) in a medium. suitable, in order to start a
microbial culture, for its development and multiplication. Taking into account the plate culture technicians,
which is to sow or inoculate is to artificially introduce a portion of sample (inoculum) in a suitable medium,
in order to start a microbial culture, for its development and multiplication. Once seeded, the culture medium
is incubated at a temperature suitable for growth. 

On the other hand, the sowing in a tube of solid or semisolid media occurs in different types such as: Sowing
by dilution: The test tube is taken with a liquid medium, such as the simple broth. The material to be diluted is
taken and sown in the tube using the loop loaded with the bacteriological material, shaken with moderate
movements. 
Streaking on the surface: The material is sown on the surface of the agar slant in a test tube, there it is spread
over the entire surface with the bacteriological loop,Seeding by puncture: obviously, the seeding instrument to
be used will be the platinum needle and the solid culture medium, generally in a test tube. 
Sowing by inoculation or shaking: With a sterilized bacteriological loop, take an amount of inoculum,
introduce it into the center of the liquid medium, shaking, not touching the wall of the tube. 
Inoculation by sting: Straight loop, take the sample, inoculate in semisolid agar, in the test tube until the
sample is well impregnated with the agar. 
PALABRAS CLAVE: Medios de Cultivo Microbiológico, Asa Redonda, Curva, Inoculación de Bacterias,
Cajas De Petri, Bacterias, anaerobias, solido, líquidos, semisólidos, agares.    
KEY WORDS: Microbiological Culture Media, Round or Curved Handle, Bacteria Inoculation, Petri Dish,
Bacteria. 

1. MATERIALES Y MÉTODO

MATERIALES 
Mechero  Asa redonda / curva 
Asa Recta  Incubadora 
Gradilla para tubos  Vinipel 
 
REACTIVOS 
2 cajas de petri con agar XLD  Alcohol antiséptico 

REACTIVOS 
Bacteria en medio de cultivo sólido  2 cajas petri con Agar 
Tubo de ensayo con medio Tioglicolato  Tubo de ensayo con medio SIM 
Tubo de ensayo con medio TSI  Tubo de ensayo con medio Urea 
Tubo de ensayo con medio citrato de simmons  Tubo de ensayo con medio LIA 
Tubo de ensayo medio RMVP   Tubo de ensayo con medio gelatina 
Alfa Naftol 5%  KOH 40% 
Rojo de metilo 0,04%  Reactivo de Kovac´s de Erlich 
2 cajas de petri con agar nutritivo  2 cajas de petri con agar EMB 
2 cajas de petri con agar salmonella Shingella  2 cajas de petri con agar Vogel Johnson 
2 cajas de petri con agar Cetrimida  2 cajas de petri con agar VRB 

1.1. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 

 
Siembra en medios de cultivo 
 
En la primera parte del desarrollo de los análisis para la caracterización de la bacteria problema se empleó medios de
cultivo diferenciales, selectivos y combinaciones de ambos, se seleccionó a un integrante del grupo para cada siembra
para identificar las diferentes variables presentadas durante la siembra (garantizando que el método empleado se hubiese
ejecutado de la misma manera por todos los integrantes del grupo).  
 
Se inició con la siembra de la bacteria problema en el medio de cultivo Tioglicolato empleando un asa redonda/curva, este
medio permite el crecimiento de una gran variedad de microrganismos tanto aerobios como anaerobios, se sometió a una
temperatura de 37° durante 24 horas. Se procedió a sembrar en el medio de cultivo SIM en el cual se puede verificar la
formación de Indol para esto es necesario emplear el reactivo de Kovac´s o Erlich, en esta siembra se utilizó asa recta y se
sometió a las mismas condiciones que el cultivo anterior. Posteriormente se procedió a sembrar en los medios de cultivo
TSI, LIA, Citrato de Simmons, el primero se utiliza para la identificación de enterobacterias a partir de la fermentación de
la glucosa (presente en la parte inferior del medio), sacarosa y lactosa (presente en la parte superior del medio), el segundo
permite diferenciar microrganismos a través de la descarboxilación de la lisina, el siguiente permite diferenciar
enterobacterias utilizando el citrato como única fuente de energía, se sometieron los medios a las mismas condiciones.
Luego se sembró en los medios de Urea y gelatina empleando el asa recta, el primer medio permite identificar bacterias
que hidrolizan urea y el segundo permite determinar la capacidad de cierto microorganismo para producir enzimas
conocidas como gelatinasas, al igual que las anteriores se llevo a incubación durante 24 horas a una temperatura de 37° C,
para terminar la primera parte se sembró en el medio RMVP se tomó el asa redonda curva, este permite la clasificación de
enterobacterias mediante el ensayo de rojo de metilo y Voges Proskauer. 
 
 

 
 

 
Imagen 1. Procedimiento siembra en medios de cultivo 
 
 
Aislamiento 
 
En la segunda parte se realizó el aislamiento de la bacteria problema en cajas de Petri con agar nutritivo, al igual que en la
primera parte cada integrante del grupo sembró en un agar nutritivo esto con el objetivo de evaluar la capacidad de
aislamiento por estudiante. 
 

Imagen 2. Procedimiento aislamiento 

 

 
 
 
 
  
 
 
 
2. RESULTADOS
RESULTADOS Y ANÁLISIS
SE OBTUVO CRECIMIENTO
MEDIO DE CULTIVO CARACTERIZACIÓN DEL CULTIVO RESULTADO OBTENIDO
(SI/NO)

Medio Solido Esta prueba se recomienda para la

identificación de patógenos entéricos gram negativos. Se En la prueba podemos ver que el medio
TSI emplea para detectar la fermentación de lactosa, está desplazado por el tubo, sería
sacarosa y glucosa, con formación de ácido y gas, y resultado A/A fermenta 3 azúcares.
también para detectar producción de ácido sulfhídrico.

Medio Solido Medio utilizado para la diferenciación de La prueba es negativa puesto que para
enterobacterias en base ser positiva el color del indicador debe ser
SIMMONS
a la capacidad de usar citrato como única fuente de azul y de esta manera la bacteria tendría
carbono y energía. la enzima citrato permeasa.

Medio SIM es un medio semisólido utilizado para la

diferenciación de bacterias entéricas a través de la La prueba es positiva para motilidad ya
SIM producción de sulfuro, la formación de indol y la que se aprecia una turbidez gracias a la
motilidad. La prueba de reducción de azufre es útil para enzima triptofanasa.
diferenciar organismos entéricos, especialmente E coli.

Esta prueba consiste en detectar la presencia de la

enzima ureasa en un determinado microorganismo Positivo para enzima ureasa ya que el
UREA
problema. Esta enzima cataliza la hidrólisis de la urea, medio viro de amarillo.
que da lugar a dióxido de carbono y amoniaco.
  

El Medio de Lisina y hierro (L.I.A.) es un medio de cultivo

ampliamente utilizado para la diferenciación de bacilos
Un posible resultado de la prueba es R/A
Gram negativos entéricos, especialmente miembros del
LIA Se desamina la lisina presencia de ácido
género Salmonella con capacidad de fermentación de
alfa ceto carbónico.
lactosa, sobre la base de la producción de H2S y la
actividad de la enzima Lisina decarboxilasa.

 
 

RESULTADOS Y ANÁLISIS
SE OBTUVO CRECIMIENTO
MEDIO DE CULTIVO CARACTERIZACIÓN DEL CULTIVO RESULTADO OBTENIDO
(SI/NO)

El estándar es un medio adecuado para el cultivo y

El agar nutritivo es un medio de cultivo
enumeración de bacterias exigentes. La adición de
favorable para cualquier tipo de
AGAR NUTRITIVO sangre, fluido de ascitis o suero lo hace también
microorganismo puesto que es rico en
adecuado para cultivar estreptococos, neumococos y
peptona, carbohidratos, vitaminas.
otros microorganismos.

Esta prueba consiste en la cual el microorganismo Positivo para enzima proteolítica

GELATINA posee la enzima proteolítica gelatinasa, al cultivarlo en gelatinasa se observa el crecimiento
el medio, la gelatina se desnaturaliza. normal de la bacteria.

El Agar Vogel-Johnosn es un medio selectivo y

diferencial utilizado para la detección temprana de
Staphylococcus aureus mediante la identificación de A través del medio podemos determinar
VOGEL JONSOHN cepas coagulasa positivas y la fermentación de manitol. u crecimiento de color verde oscuro,
El medio es excelente para la detección de portadores dando como positivo la muestra.
de estafilococos, así como para estudios de interés
sanitario.

(agar SS) es un medio selectivo y de diferenciación

para el aislamiento de bacilos entéricos patógenos, en
SS Positivo para E COLI .
especial los pertenecientes al género E coli, a partir de
muestras clínicas.
  

Agar Bilis y Rojo Violeta con Glucosa (VRBG) es un

medio selectivo, que contiene bilis y colorante rojo
violeta, para el aislamiento y la enumeración de Medio que nos permitió ver
VRB enterobacterias. Está basado en el Medio MacConkey fermentadores de lactosa ya que se
(Cat. 1052) para la detección y enumeración de puede apreciar colonias rosadas
Enterobacteriaceae Gram- negativos tolerantes a la bilis
en productos lácteos y alimentos

Agar (agar de xilosa, lisina, desoxicolato) es un medio

moderadamente selectivo y de diferenciación para el En este medio de cultivo podemos ver
XLD aislamiento y la diferenciación de patógenos entéricos que es negativo para E coli no sufre
a partir de muestras clínicas. Es adecuado en especial ningún cambio
para el aislamiento de la especie E coli.

2.2 DISCUSIÓN DE RESULTADOS 

 
De acuerdo a los resultados de las siembras que realizamos de la bacteria (E coli), se observa que la colonia del medio de
cultivo (TSI) empezó con su crecimiento tal como se esperaba a las 24 horas. 
 
Por otro lado, el cultivo que se realizó en las cajas de Petri arrojó más resultados dado que hubo crecimiento en dos
medios, en lo cual se procedió a cultivar el microorganismo (E coli) en medio de cultivo (Agar Nutritivo). 
 
Es la obtención de un cultivo bacteriano puro, extraído de un ambiente a otro mediante técnicas de laboratorio, con la
finalidad de inducir su crecimiento en medios de cultivo artificiales, con el objetivo de realizar su identificación. El
método de aislamiento y los medios de cultivo para el desarrollo de una bacteria se seleccionan de acuerdo al patógeno del
que se sospecha, la enfermedad, la sintomatología y el hospedante. Los aspectos importantes a considerar son el tipo de
síntoma, órgano afectado, grado de avance de la enfermedad, así como del material y equipo disponible (Rodríguez,
2006). El aislamiento puede realizarse directamente de tejido vegetal con síntomas iniciales (Cuadro 1) o a partir de
material propagativo para confirmar la presencia o ausencia de patógenos; este incluye semillas, tubérculos, bulbos o
plántulas en las que se sospeche la presencia de infecciones latentes. (Senasica. Servicio Nacional de Sanidad, 2020) 
Cuadro 1. Técnicas de aislamiento a partir de los diferentes síntomas ocasionados por bacterias fitopatógenas
(Senasica. Servicio Nacional de Sanidad, 2020). 
 
3. CONCLUSIONES 
 
 
 Las siembras en varios tipos de medios de cultivo evidencian que no todos los medios son ideales
para el crecimiento de ciertos microorganismos. 
 Cuando no hay crecimiento de un microorganismo en un medio de cultivo, se puede considerar que
quizás el medio no era el apropiado ya que puede carecer de los nutrientes necesarios para el desarrollo
de la bacteria, de esto debemos tener en cuenta que los microorganismos tienen diferentes características
en su metabolismo, así como en la actividad enzimática que desarrollan. 
 En los medios en los que hubo crecimiento, se observó que fue completo, seguramente el medio de
cultivo proporcionó lo necesario (nutrientes) para el desarrollo del microrganismo. 
 
4. REFERENCIAS 
 Ederer, G.M., and M. Clark. 1970. Motility-Indole-Ornithine medium. Appl. Microbiol. 2:849.  
 Taylor, W.I. 1965. Isolation of shigellae. I. Xylose lysine agars; new media for isolation of enteric pathogens.
Am. J. Clin. Pathol., 44:471-475.   
 Rockville Md. Vogel R.A. Jonhson, M. 3. (1961) Pub. Hlth. Lab, 18, 131. 
 https://es.slideshare.net/rebecaoloarte/pruebas-bioqumicas-46069493  
 https://www.merckmillipore.com/CO/es/products/industrial-microbiology/culture-media/
dLWb.qB.5kgAAAFAX8JkiQpx,nav 
 Senasica. Servicio Nacional de Sanidad. (2020). Recuperado el 2023 de 03 de 6, de Aislamiento de bacterias
fitopatógenas:
https://www.gob.mx/cms/uploads/attachment/file/728771/1._FT._Aislamiento_de_bacterias_fitopat_genas_y_prueba
s_de_patogenicidad_1.0_2020.pdf