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Tema 2: Técnicas de estudio de la célula:
bases de la microscopía óptica y electrónica.

Fraccionamiento celular y ultra
centrifugación diferencial. Técnicas de
coloración en biología. Tipos de tinción.
Colorantes histológicos más comunes.
Historia del microscopio
El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen(inventor del microscopio óptico)
en 1590. En 1665 aparece en la obra de William Harvey sobre la circulación sanguínea
a la mira al microscopio los capilares sanguíneos y Robert Hooke público su obra
Micrographia.
los intentos de amplificar imágenes se remontan a los griegos y romanos, quienes

emplearon esferas de vidrio llenas de agua, las que solo eran útiles para observar heridas
y tejidos, mas no ese mundo diminuto.
Afortunadamente, años más tarde, gracias a la invención del microscopio óptico, el

hombre pudo tener evidencia del gran mundo que existía más allá de las lentes y
descubrir así un universo inorgánico, como los cristales de la sal de mesa o las sales de
oxalato que se encuentran en la orina y cuya acumulación es la causa de los cálculos
renales. Asimismo, pudo observar los lentos desplazamientos de un parásito intestinal,
la ameba, lo que también ayudó a que se quitara la venda del oscurantismo y dar así los
primeros pasos en la ciencia moderna. Un hecho más, de entre tantos destacables, fue
que gracias al microscopio óptico algunos químicos y médicos, como Louis Pasteur y
Robert Koch, pudieran estudiar las enfermedades que asediaban a la humanidad.
El microscopio óptico consta de tres sistemas: mecánico, de iluminación y óptico. El

sistema mecánico se encarga de dar estabilidad y fuerza a este aparato, así como
facilitar su manejo. Su función más importante consiste en sostener el sistema óptico y
variar la distancia entre las lentes y lo que deseamos observar. La iluminación se
encarga, como su nombre lo indica, de iluminar lo que se quiere ver. Finalmente, el
sistema óptico aumenta (ópticamente) el tamaño de las imágenes y está integrado por
lentes de cristal que desvían la luz al pasar a través de ellas, concentrándola o
dispersándola.
1
Antón Van Leeuwenhoek
Las primeras observaciones claramente microscópicas, con unos aparatos que se
fabricaba él mismo (el microscopio simple) fue otro holandés, Antonie van
Leeuwenhoek. Éste, describió que veía una gran variedad de organismos extraños en el
agua, los fluidos corporales, el suelo y, en general, partes donde dirige su aparato.
Aquel microscopio primitivo no tiene nada que ver con los microscopios actuales. Pero
abrió las puertas a todo un mundo, y rompió algunas teorías existentes entonces.
MICROSCOPIA OPTICA
PROPIEDADES
AMPLIFICACION: relación tamaño imagen
PODER DE RESOLUCION : Distintas imágenes en 2 puntos cercanos
PODER DE DEFINICION: Nitidez
MICROSCOPIA ELECTRONICA:
Según la ley de Abbe, no es posible distinguir dos objetos separados por una distancia
inferior a la mitad de la longitud de onda de la luz que los ilumina. En 1892 se
descubrieron los rayos X, que al poseer una longitud de onda muy inferior a la de la luz,
habrían podido ser un medio para superar la frontera de la microscopia óptica. En
aquellas fechas, sin embargo, los medios técnicos de que disponía la óptica todavía no
permitían localizarlos.
Quien inventó el microscopio electrónico
El primer microscopio electrónico, lo diseñan los alemanes Ernst Ruska y Max

Knoll entre 1925 y 1930. Basándose en los estudios de De Broglie de las propiedades
ondulatorias de los electrones, y son capaces de alcanzar hasta 500.000 aumentos.
El microscopio electrónico, se basa sin embargo en una observación realizada en 1873

por el alemán Emst Abbe. Ese año Abbe, enunció la ley que lleva su nombre y que
2
contenía el germen del microscopio electrónico al poner de manifiesto los límites de
la microscopia óptica.
Primer microscopio electrónico se construyó en 1931
Haz de electrones, obteniéndose una resolución normal en los objetos biológicos de 2
nm , unas 100 veces mayor que el anterior microscopio óptico
Microscopia electrónica de transmisión ( TEM)
- Haz de electrones acelerado, que pasa a través de un espécimen muy fino.
- Permite el estudio de la ultraestructura celular, virus, compartimentos
subcelulares, proteínas.
- Resolución 0,2 nm
- Tetraoxido de osmio
- Informa la estructura y la morfología
Microscopia Electrónica de Barrido ( SEM)
El haz de electrones se enfoca formando una línea muy fina que barre el espécimen.
- Se recubre con platino
- Resolución 10 nm
- Pprofundidad de foco de 10mm
- Pproporciona imágenes tridimensionales
- Pproporciona tamaño y forma de la célula
FRACCIONAMIENTO CELULAR Y ULTRACENTRIFUGACION DIFERENCIAL
3
Técnicas de coloración en Biología
Clasificación de colorantes
1. Naturales
2. Artificiales o sintéticos
3. Indiferentes
4
Colorantes ácidos : ion de carga negativa, llamados aniónicos.
Colorantes básicos: ion de carga positiva, llamados catiónicos.
Colorantes neutros: mezcla compleja de acido y neutro.
TIPOS DE TINCION
TINCION HEMATOXILINA – EOSINA
Es utilizada en la técnica ordinara.
Utiliza dos colorantes
HEMATOXILINA: tonos diversos de azul - violeta
EOSINA: teñidos de rosa
Tiñe : Proteínas del citoplasma del e. extracelular( fibras colágenas)
5
TINCIÓN GRAM
Según retenga o no el cristal violeta utilizado en la tinción
Células gran positivas, capa gruesa de peptiglucano con enlaces cruzados de ácido
teicoico.
Células Gram Negativas, capa de peptidoglucano es más delgada.
6
TINCION DE ZIEHL NEELSEN O ÁCIDO RESISTENTE
Mycobacterium tuberculosis
Micobacterias están cubiertas por un material grueso, ceroso.
Resisten la decoloración debido al ácido micólico que se encuentra presente
7
Tinción de cápsula
TINCIÓN DE TINTA CHINA:
Ésta emplea una solución colorante en la cual el cromógeno es ácido, la cual repele a la
célula cargada negativamente, por lo que dicha célula permanece sin teñir contra un
fondo coloreado.
8
TINCIÓN DE ESPORAS
Bacterias esporuladas. Las endosporas representan un estado latente en el ciclo de
crecimiento del microorganismo.
TINCIÓN DE WRIGHT
Tinción policromática.
 desarrollada por el patólogo James Homer Wright en 1902
 El reactivo, está compuesto por eosina y azul de metileno, cuando éste se oxida se
conoce como azur B a una concentración de 0.8 g/L empleando como solvente alcohol
metílico.

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Afortunadamente, años más tarde, gracias a la invención del microscopio óptico, el

El microscopio óptico consta de tres sistemas: mecánico, de iluminación y óptico. El

Quien inventó el microscopio electrónico

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El microscopio electrónico, se basa sin embargo en una observación realizada en 1873

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