ESPECTROFOTOMETRÍA

Química Biológica: ESPECTROFOTOMETRÍA
Integrantes: Vargas, Vanesa Alejandra
Choqui, Edith Karen Rut
Chaime, Micaela Yesica
CUESTIONARIO
1- ¿Qué es el espectro electromagnético? Realice la representación esquemática del espectro

electromagnético.
El espectro electromagnético es el conjunto de ondas electromagnéticas ordenadas en función de su
energía. De mayor a menor energía (o de menor a mayor longitud de onda) tenemos:
Rayos gamma, Rayos X, Ultravioleta, Visible, Infrarrojo, Ondas de radio y Microondas.
2- Definir que es la Espectrofotometría y en qué se basa

Es una técnica analítica que permite determinar la concentración de un compuesto en solución.
Se basa en que las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para hacer este tipo de medidas se emplea un
espectrofotómetro, en el que se puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma
3- Definir Transmitancia, Absorbancia, coeficiente de extinción molar (ℇ) y coeficiente de extinción especifico
(e). Hacer las deducciones correspondientes.
TRANSMITANCIA (T): es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha
atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en
tanto por ciento: % T = It/Io x 100
ABSORBANCIA (A): es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz
absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/
Io
COEFICIENTE DE EXTINCION MOLAR (Ꜫ): es la extinción o absorción de una solución uno molar de un
centímetro de espesor de capa. A = ε·c·l
COEFICIENTE DE EXTINCION ESPECIFICO (e): en numerosos productos naturales no se conoce con certeza el
peso molecular, por lo que la concentración se expresa en g / l.
4- ¿Qué expresión matemática relaciona la transmitancia y la absorbancia?
5- Enunciar la ley de Lambert y la ley de Beer, hacer la deducción integral correspondiente para cada una.
Ley de Lambert: “Cuando un haz de luz monocromática pasa a través de una solución de concentración
constante, la intensidad de luz transmitida disminuye exponencialmente a medida que aumenta
aritméticamente el espesor de la capa absorbente”
Ley de Beer: “Cuando un haz de luz monocromática atraviesa una solución, la intensidad de luz transmitida
disminuye exponencialmente a medida que aumenta aritméticamente la concentración de la solución,
manteniéndose el espesor constante”
6- Enuncie y explique la ley de Lambert-Beer. ¿Cuáles son las limitaciones de la ley de Lambert-Beer?
“La fracción de luz incidente que es absorbida por una solución, depende del espesor de la muestra, de la
concentración de la misma, de la longitud de onda del rayo y de la naturaleza química del compuesto
absorbente. La absorción se realiza de acuerdo con una ley exponencial y otra lineal.”
La ley tiende a no ser válida para concentraciones muy elevadas, especialmente si el material dispersa
mucho la luz.
7- Calcular los distintos valores de ε de la solución de Co(NO3)2 cuyas concentraciones y absorbancias figuran
en la guía.
𝚫𝐃𝐎 𝜟𝑫𝑶 𝟏
ℇ= ×
C DO ΔC ΔDO 𝚫𝐂 𝜟𝑪 𝒍
(eq-1 x cm-1 x l)
0,025 0,080 0,025 0,080 3,2 1,116 x𝟏𝟎−𝟑
0,050 0,180 0,025 0,100 4 1,395 x𝟏𝟎−𝟑
0,100 0,360 0,050 0,180 3,6 1,255 x𝟏𝟎−𝟑
0,174 0,590 0,074 0,230 3,108 1,084 x𝟏𝟎−𝟑
0,200 0,650 0,020 0,060 2,303 8,049𝒙𝟏𝟎−𝟒
promedio 1,131x𝟏𝟎−𝟑
8- ¿Qué es un espectro de absorción? Completar la siguiente tabla y realizar con ella el espectro de absorción
para el Co(NO3)2 (0.1N=0.05M)
Espectro de absorción: Espectro que presenta una secuencia de frecuencias, en un intervalo relativamente
ancho, correspondientes a los fotones absorbidos por una sustancia, generalmente representando el
coeficiente de absorción en función de la frecuencia o longitud de onda.
λ T% A
400 88,5 0,050
420 82,0 0,082
440 67,0 0,175
460 49,0 0,310
480 38,0 0,420
490 36,0 0,442
500 31,0 0,510
510 28,0 0,550
520 28,0 0,550
530 31,8 0,500
540 39,0 0,402
550 52,0 0,283
560 64,5 0,190
570 74,0 0,130
580 83,0 0,080
600 87,0 0,061
620 87,8 0,059
640 91,5 0,040
660 92,0 0,038
680 93,2 0,030
700 95,0 0,025
9- En un eje de coordenadas de absorbancias en función de la concentración, calcular la pendiente media y a

partir de la pendiente calcular ε, considerando un espesor de solución de 1.2 cm.
10- -Dibuje el diagrama de los componentes esenciales de un espectrofotómetro y explique brevemente cada
uno de ellos.
Selector de longitud
Colimado
de onda
r
Fuente de luz Detector
Pantalla digital
Monocromador o medidor
Solución
muestra
FUENTE DE LUZ
Este es uno de los componentes espectrofotómetro pues se encarga de iluminar la muestra química o biológica a
analizar. Debe cumplir diferentes condiciones si quieres un buen funcionamiento; por ejemplo: estabilidad,
direccionalidad, distribución de energía espectral continua y contar con una larga vida.
Un espectrofotómetro puede contar con diferentes fuentes de luz: lámpara de wolframio o tungsteno, lámpara de arco
de xenón y lámpara de deuterio las cuales se utilizan, sobre todo, en laboratorios atómicos.
MANOCROMADOR
Ahora bien, si vamos a hablar de espectrofotómetro componentes no podemos dejar de lado al monocromador, que es
el encargado de aislar las radiaciones de longitud de onda deseadas, por lo cual obtendrás luz monocromática. Este
cuenta con rendijas de entrada y salida, colimadores y el elemento de dispersión.
COLIMADOR
El lente que lleva el haz de luz entrante con cierta longitud de onda hacia un prisma, el cual se encarga de separar todas
las longitudes de onda y que lo re direccionará, de esta manera, hacia la rendija de salida.
COMPARTIMIENTO DE MUESTRA
Como su nombre lo indica es donde se coloca la muestra y se lleva a cabo la interacción R.E.M. con la materia.
DETECTOR
El detector es uno de los componentes de espectrofotómetro encargados de evidenciar una radiación para ser
estudiada posteriormente y saber a qué tipo de respuesta se enfrentará, ya sea fotones o calor.
11- ¿Cuál es el procedimiento a seguir cuando usa un espectrofotómetro o fotocolorímetro?
Manejo del Espectrofotómetro:

 Controlar la correcta conexión del instrumento.
 Verificar la conexión a tierra.
 Encender el instrumento.
 Una vez alcanzada la estabilidad en la escala, llevar a 100 % de Transmitancia con el Blanco (H2O
Destilada).
 Con la solución de Co(NO3)20,05 M, realizar el espectro de absorción procediendo de la siguiente manera:
-Comenzar con 400 nm, llevar a 100 % de Transmitancia con H2O Destilada.
- Colocar la solución problema y medir la Absorbancia y la Transmitancia. Anotar los datos obtenidos.
-Llevar a la longitud de onda de 420 nm, y proceder como en los dos pasos anteriores.
-De la misma forma, hasta 480 nm. A partir de este valor, y hasta 580 nm, los rangos de λ se deben variar de
10 en 10 (nm). Desde 580 nm en adelante, al igual que con valores de λ< 480 nm, el rango de λ se debe
variar de 20 en 20 (nm), hasta un valor de λ de 700 nm. Luz emitida que concentra la luz que dispersa los
diferentes haces de luz Red de difracción o filtro que selecciona una longitud de onda determinada
Universidad Nacional de Jujuy Facultad de ciencias Agrarias Catedra: Química Biológica
 Con los valores obtenidos de D.O. (leído y calculado), Transmitancia, concentración y λ de trabajo
confeccionar la tabla correspondiente.
 A partir de la tabla graficar en un sistema de coordenadas cartesianas ortogonales:
-Absorbancia en función de Longitud de Onda.
-Transmitancia en función de Longitud de Onda
12- Mencione aplicaciones de la espectrofotometría en su carrera

Este equipo es utilizado para la determinación de Calcio, Magnesio, Potasio, Sodio, Hierro, Cobre y Zinc y es
aplicable a diferentes matrices como suelos, tejido foliar, jugo de caña, cenizas, mieles, bagazo y vinazas
entre otros.
Experiencia de laboratorio 3
Reactivos y materiales empleados:

-Nitrato de Cobalto
-Agua destilada
-Tubos de espectrofotometría
-Espectrofotómetro
-Colorímetro
Procedimiento:
1- Se observó que el espectrofotómetro tenga la conexión a tierra.
2-Identificamos las tres perillas
PERILLA 1: Para seleccionar las longitudes de Honda

PERILLA 2: Potenciómetro
PERILLA 3: Fototubo
3-Luego se encendió el instrumento, y con la perilla 3 elegimos el fototubo a emplear, seguido a eso se eligió la
longitud de onda de 520nm en el caso de Calorímetro Espectral se calibra con una aproximación de 510 nm (con la
perilla 1)
4-Una vez calibrado se introdujo el tubo blanco (agua destilada) y con la perilla 2 se lo llevo a 100 % de
Transmitancia, es decir, cero de absorbancia.
5-Sacamos el tubo de agua destilada se lo limpia las paredes de la cubeta e introducimos la solución problema, De
nitrato de cobalto en ¾ de cubeta midiendo de la misma la DO y la T%.
Espectrofotometría Datos
61% de trasmitancia 𝐷𝑂 = Ꜫ. 𝑐. 𝑙
𝐷𝑂
0,21 de Absorbancia 𝑐=
Ꜫ. 𝑙
0,21
𝑐=
5,5886 × 1,2
𝑐 = 0,031 𝑁

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1- ¿Qué es el espectro electromagnético? Realice la representación esquemática del espectro

2- Definir que es la Espectrofotometría y en qué se basa

9- En un eje de coordenadas de absorbancias en función de la concentración, calcular la pendiente media y a

11- ¿Cuál es el procedimiento a seguir cuando usa un espectrofotómetro o fotocolorímetro?

Manejo del Espectrofotómetro:

12- Mencione aplicaciones de la espectrofotometría en su carrera

Reactivos y materiales empleados:

2-Identificamos las tres perillas

PERILLA 1: Para seleccionar las longitudes de Honda

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