INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

INGENIERÍA EN SISTEMAS AMBIENTALES

LABORATORIO DE QUÍMICA ORGÁNICA

PRÁCTICA 4: Polaridad y Cromatografía

GRUPO: 3AV1

EQUIPO 2

INTEGRANTES:

● BARRERA SALAZAR LOURDES MARIANA

● CASTAÑEDA CATARINO EDWIN LEONARDO
● ONOFRE DIAZ NORMA ANDREA
● SALAS CASTILLO NAYDELIN ALICIA
 OBJETIVOS

General:
Separar una mezcla de colorantes sintéticos por cromatografía en las
modalidades de fase reversa y fase normal, aplicando los principios de
polaridad de los compuestos orgánicos.

Particulares:

Conocer la técnica de cromatografía en capa fina, ccf, sus características y

los factores que en ella intervienen.
Calcular valores de Rf de varias sustancias y correlacionar a la selección
adecuada del eluyente y deducir la relación que existe entre la polaridad de
las sustancias que se analizan y la de los eluyentes utilizados.
Aplicar la técnica de ccf como criterio de pureza e identificación de sustancias
por comparación con patrones de las sustancias puras.

ACTIVIDADES PREVIAS
Investigue con anticipación la información necesaria para poder llenar la siguiente
tabla:

Compuesto
Propiedad
Rojo de Metilo Fluoresceína Metanol Agua
Estado físico Sólido (polvo) Polvo(s) Sólido Líquido Líquido
Color Rojo Marrón rojizo Incoloro Incoloro
Peso molecular 269.31 g/mol 332.31 g/mol 32.04 g/mol 18.02
Constante ----- ------ 33 e a 20°C 80 e a 20ºC
dieléctrica
Insoluble. (20 °C) Insoluble Soluble en agua en Totalmente
Solubilidad cualquier proporción. soluble

791 kg/m³ 0.78 g/cm3 0,7918 g/cm³ 1 g /cm³ a 20 °C

Densidad

Estructura
Rombo NFPA

DIAGRAMA DE FLUJO

★ Parte 1 cromatografia de reversa

★ Parte 2 cromatografía en fase normal

 RESULTADOS

CUESTIONARIO

1. Defina los siguientes conceptos: Sea objetivo y breve:

➢ Eluir:Proceso por el cual todos los solutos terminan por abandonar la

columna,es el proceso de extraer un material de otro lavando con un
solvente; como en el lavado de resinas de intercambio iónico cargadas para
eliminar los iones capturados
 ➢ Eluyente:El eluyente puede ser un disolvente único o dos miscibles de
distinta polaridad.Disolvente utilizado en técnicas de cromatografía para
extraer un componente que se quiere separar de otra fase.
➢ Eluato:Cada una de las sustancias que migran a través del lecho de la fase
➢ estacionaria (impulsadas por la fase móvil) dentro de un sistema de
separación cromatográfica.
➢ Adsorción:Es la cromatografía que se basa principalmente en las diferencias
en la afinidad relativa de los compuestos por el sólido utilizado como fase
estacionaria. Las separaciones obtenidas se determinan casi exclusivamente
por interacciones polares,siendo la fase estacionaria más polar que la fase
móvil
➢ Partición:Es una técnica de separación de moléculas que se basa en la
distinta solubilidad entre dos fases inmiscibles,la fase estacionaria se reviste
con una fase solvente,y la mezcla a separar se pasa en la fase móvil
➢ Exclusión:Se basa en la ausencia de interacciones entre el analito y la fase
estacionaria empaquetada en la columna.Es un tipo de cromatografía líquida
en la cual la fase estacionaria es sólida y la fase móvil es líquida.También se
denomina “cromatografía de permeabilidad sobre gel
➢ Intercambio Iónico:Es un método que permite la separación de moléculas
polares basada en sus propiedades de carga eléctrica
➢ Fluido supercrítico:Un fluido supercrítico es una sustancia que se encuentra
en condiciones de presión y temperatura superiores a su punto crítico. El
punto crítico representa la temperatura y la presión más elevadas a las que
una sustancia puede existir como gas y como líquido en equilibrio

2. Investigar los nombres, fórmulas y propiedades de 3 colorantes artificiales

aprobados para su uso en alimentos.

Estructura y nombre Estructura y nombre Estructura y nombre

del colorante del colorante del colorante

Nombre:Tartrazina Nombre: Indigotina Nombre: Amaranto

Fórmula: Fórmula: C20H11N2O10S3
C16H9N4Na3O9S2 C16H8N2Na2O8S2

Usos: Usos: Usos:

Está presente en Se utiliza en bebidas, -Colorante de
alimentos de todo tipo: caramelos color violeta, repostería
bebidas, purés, patatas confitería y helados -Colorante de
fritas, repostería, sopas azulados. mermeladas
instantáneas, helados, -Colorante de Bebidas.
caramelos, chicles, ,Dulces de azúcar,
mermeladas yogur, Repostería de
gelatinas chocolate,Jugo de
frutas,Refrescos
carbonatados,Producto
s lácteos

Proporcionar la tonalidad Colorante de Panadería

de color amarillo en
alimentos industrializados

3. Discutir el orden de elución obtenido para los pigmentos en la cromatografía

en columna.
El orden de elución de un compuesto se incrementa al aumentar la polaridad de la
fase móvil o eluyente. El eluyente puede ser un disolvente único o dos miscibles de
distinta polaridad. La elución se produce por el flujo de una fase móvil gaseosa. La
fase móvil en cromatografía de gases es un gas inerte, es decir, no interacciona con
las moléculas de analito, sólo las transporta a través de la fase estacionaria. Los
siguientes disolventes mostrados en orden decreciente de fuerza eluyente son los
más comúnmente empleados:
Hexano < tetraclorometano < cloroformo < diclorometano < acetato de etilo <
acetona < 2-propanol < metanol < agua
Las bandas se van revelando de acuerdo con la polaridad de los pigmentos, las
primeras bandas que se observan corresponden a los más polares, mientras que las
últimas son de los menos polares

4. Discutir el orden de elución obtenido para los pigmentos en la cromatografía

en placa fina.
Una placa de CCF es una lámina de vidrio, metal o plástico recubierta con una capa
delgada de un sólido adsorbente (gel de sílice o alúmina). Se deposita una pequeña
cantidad de la muestra problema en disolución en un punto en la parte inferior de la
placa. Entonces la placa se introduce en una cubeta cromatográfica, de forma que
sólo la parte inferior de la placa queda sumergida en el líquido. Este líquido o
eluyente es la fase móvil y asciende por la placa de CCF por capilaridad. A medida
que el eluyente pasa por el lugar donde está la mancha de la mezcla problema se
establece un equilibrio entre las moléculas de cada uno de los componentes en la
mezcla que son absorbidas y las que se encuentran en disolución. En principio, los
componentes se diferenciarán en solubilidad y en la fuerza de su adsorción, de
forma que unos componentes se desplazarán más que otros. Cuando el eluyente
llega a la parte superior de la placa, ésta se saca de la cubeta, se seca, y los
componentes separados de la mezcla se visualizan.
5. ¿La relación de polaridades fase estacionaria - fase móvil utilizada en la
cromatografía en columna, corresponde al tipo fase normal o fase reversa?
La relación de polaridades fase estacionaria-fase móvil utilizada en la cromatografía
en columna corresponde a ambas fases (normal y reversa) En la fase normal la
relación de polaridades es mediante una fase estacionaria de naturaleza polar y una
fase móvil de naturaleza no polar. En este caso existe una retención del compuesto
polar y la elución del compuesto no polar. La fase normal es usada cuando los
compuestos no son solubles en agua, usado principalmente para la separación de
isómeros.En la fase reversa la relación de polaridades está en la fase estacionaria
no polar y en la fase móvil de naturaleza polar. En ese caso los solutos no polares
serán retenidos y los solutos polares serán eluidos La fase más utilizada es la fase
reversa por tener una fase estacionaria hidrofóbica que se puede aplicar a una gran
gama de moléculas, funcionando bien para un tiempo de retención para la mayoría
de análisis orgánicos
6. ¿Qué colorante eluye primero en la cromatografía fase reversa y por qué?
Eluye primero la fluoresceína debido a que es un compuesto polar y en la
cromatografía en fase reversa o en columna permite separar moléculas en base a
su polaridad

7. ¿Qué colorante eluye primero en la cromatografía fase normal y por qué?

El rojo de metilo eluye primero debido a que este compuesto es no polar, migrará sin
oposición por la fase normal.

ANÁLISIS DE RESULTADOS

PARTE I: CROMATOGRAFÍA EN FASE

REVERSA
Los analitos que se arrastran
primero son los hidrofílicos ya que
son los más polares.

En los tubos 1 y 2, se encuentra él componente

más polar.
Y conforme va llegando al 10 es
menos polar
 PARTE II: CROMATOGRAFÍA EN FASE NORMAL

Dividimos la placa cada 0.5 cm para poner las

muestras en cuestión.(En el 1 y 2 colocar la muestra de los
colorantes estándar); en los Números 3, 4 y 5, aplicar tres de
los eluatos obtenidos de la cromatografía en columna,
todos se colocan sobre la línea.

Se analiza el efecto que tiene la concentración en una cromatografía de capa

fina,posteriormente identificar cuando una muestra o un compuesto es puro
es necesario utilizar el principio de polaridad, ya que se puede o no identificar
la pureza en cuanto al número de manchas creadas en la placa.
El rojo de metilo obtuvo 0.5785 debido a que no es polar, los solutos más
polares quedarán más retenidos puesto que se absorben más firmemente a
los centros activos de la fase estacionaria, mientras que los no polares se
eludirán con mayor facilidad por eso él Rf del Eluato es de 0.2015 debido a
que es más polar.

CONCLUSIÓN
En el desarrollo de esta práctica se comprendió que la movilidad de los
componentes de una muestra que se desee separar depende de la afinidad que
tenga con la fase móvil y la polaridad que presente esta última, para que pueda
realizarse una separación cromatográfica adecuada.
Como Ingenieros en Sistemas Ambientales estas técnicas son una gran herramienta
ya que podemos separar compuestos sintéticos de compuestos orgánicos, estos
nos sirven para determinar contaminantes ya sea en un cuerpo de agua, o en una
pequeña muestra representativa de suelo; siendo el primer paso para identificar el
problema en un sitio de estudio. Adaptando las técnicas de cromatografía a nuestras
necesidades como ingenieros.
 REFERENCIAS

- (11 de Octubre de 2020). Obtenido de

https://www.gob.mx/profeco/prensa/informa-profeco-sobre-colorantes-artificial
es-en-los-alimentos?idiom=es
- antropocene. (2 de enero de 2020). Obtenido de antropocene:
https://antropocene.it/es/2020/01/02/indigotina/
- TIPOS DE CROMATOGRAFÍA. (2014).
https://blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-CROMATO
GRAF%C3%8DA.pdf
- Glosario: Dióxido de carbono supercrítico. (s. f.). Green Facts.
Recuperado 29 de septiembre de 2021, de
https://www.greenfacts.org/es/glosario/def/dioxido-carbono-supercritico.
htm
- Separaciones por cromatografía. (s. f.). ULPGC. Recuperado 29 de
septiembre de 2021, de
http://www2.ulpgc.es/hege/almacen/download/39/39360/separaciones_
por_cromatografia_1.pdf
- Eluyente | Real Academia de Ingeniería. (s. f.). Real Academia De
Ingeniería. Recuperado 29 de septiembre de 2021, de
http://diccionario.raing.es/es/lema/eluyente