LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

MANEJO DE LA AUTOCLAVE Y PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Rodríguez Fernanda
Piaguaje Alexandra
Diaz Angela
Paredes Catalina
Facultad de Ingeniería
Ingeniería Ambiental
Universidad Mariana

RESUMEN

En esta práctica se realizó una preparación para medios de cultivo y el manejo de la autoclave, en donde se
realizó un procedimiento en el que se estudió las colonias identificando, la estructura, forma y color de estas,
el objetivo de realizar todo esto es el de conocer la composición y uso de los medios de cultivo en el laboratorio
y el aprender a usar el autoclave, esto se realizó acabo, en un beaker de 250 ml se agregó AN (Agar Nutritivo)
y se agregó 100 ml de agua destilada, se revolvió bien con la varilla de vidrio para no queden grumos de AN y
se lo puso en la estufa , hasta que salieron burbujas y una espuma amarilla empezó a rebosar, después de
esto se tapó el beaker con papel aluminio, y se lo llevo al autoclave en el cual se la sometía a una alta
temperatura 20°C y después se esperó 10 minutos y se apagó el autoclave y se la deja reposar para que baje
la temperatura, mientras un integrante del grupo realizaba lo del autoclave los demás tomaron 5 muestras
para sembrarlas en una caja de Petri, después sacamos el beaker con AN del autoclave y se depositó en
4 cajas Petri y se llevaron 3 a la incubadora, para realizar un registro diario de martes a viernes. A los dos días
de poner las cajas en la incubara se observó que había hongos y formación de colonias, al tercer día se observó
que dejaron de crecer y mantenían la misma estructura y color.

Palabras Clave: Autoclave, Cultivos, Colonia, Agar Nutritivo, Incubadora.

1. INTRODUCCIÓN inorgánicas. Algunos medios de cultivo incorporan

sustancias con finalidades más concretas, como
Uno de los requisitos previos para trabajar con los factores de crecimiento, colorantes, tampones,
microorganismos es aprender a preparar los agentes solidificantes
medios. Los medios de cultivo son una mezcla de
nutrientes que, en concentraciones adecuadas y Una autoclave es un recipiente metálico de
en condiciones físicas óptimas, permiten el paredes gruesas con cierre hermético que permite
crecimiento de los microorganismos. Estos medios trabajar con vapor de agua a alta presión y alta
son esenciales en el Laboratorio de Microbiología temperatura que sirve para esterilizar
por lo que un control en su fabricación, instrumental (material médico, de laboratorio,
preparación, conservación y uso, asegura la etc.) o alimentos, alcanza la destrucción de todo
exactitud. organismo vivo. Usualmente se utiliza para
esterilizar medios de cultivo y material de vidrio
Los medios de cultivo contienen nutrientes, resistente.
fuentes de energía, factores promotores del
crecimiento, minerales, metales, sales La preparación de medios de cultivo
amortiguadoras y gelificantes (para los medios microbiológicos es el proceso de mezclar
sólidos). nutrientes, agentes amortiguadores y de
equilibrio osmótico e inhibidores o indicadores
Para el cultivo de bacterias heterótrofas todos los selectivos para formar un agar o caldo que apoye
medios contienen como componentes principales: el crecimiento y la diferenciación de
agua, sustancias orgánicas y sustancias microorganismos.
Existen varios tipos de medios de cultivo los cuales Después de hervir, cubrir con papel de aluminio y
se clasifican en: medios de cultivo microbiológico poner en autoclave para esterilizar.
por composición química: que se conforma por
medios sintéticos y medios complejos, medios de Manejo del Autoclave
cultivo microbiológico en función de su Se comprobó el nivel de agua en la cámara de
característica física: que se compone por medios vapor que debe ser de 1 o 2 cm por debajo de la
sólidos y líquidos, medios de cultivo resistencia.
microbiológico según el método de preparación Luego se situó el recipiente de aluminio en la
que es compuesto por medios listos para usar: cámara de esterilización y coloque el disco en el
medios preparados a partir de formulaciones centro.
comerciales deshidratadas, medios preparados a
partir de cada uno de sus componentes, medios a Después se introdujo la mezcla del AN para
voluntad. esterilizarla, posteriormente se inserta la
manguera que conduce a la válvula de salida de
2. MATERIALES Y MÉTODOS vapor y cierre la tapa.
Se ajusta la tapa con una válvula y cerrarla al revés
MATERIALES Y BIOSEGURIDAD para que la tapa quede horizontal.
• Bata Ya teniendo todo listo se enciende la autoclave y
• Guantes se ajusta la temperatura a alta.
• Cofia
• Alcohol Luego se permite que el aire escape para que solo
• Franela quede vapor de agua vapor, para esto se espera a
• Tollas de papel que el manómetro alcance la temperatura y
• Autoclave presión de esterilización termostato.
• Cajas de Petri esterilizadas.
• Medios de cultivo agar nutritivo (AN) y Al final del período de esterilización, apagamos el
agar papa-dextrosa (PDA) dispositivo y esperando que la presión legue a
cero.
• Espátula
Luego con cuidado colocamos 10 ml de agar en 4
• Balanza
cajas de Petri estéril y se homogenizo el medio.
• Beaker
• Estufa o plancha de calentamiento.
• Varilla de vidrio o agitador. 3. RESULTADOS
• Agua destilada. Cuestionario
• Cinta 5.1 Identifique las partes de la autoclave
• Marcador
• Copito esterilizado

En primer lugar, nos informamos a través de las

guías de laboratorio suministradas por el profesor
sobre la teoría y procedimientos de la práctica.

Preparación de medios de cultivo

Se leyeron las especificaciones de cada medio
antes de prepararlo, en nuestro caso del agar
nutritivo (AN) el cual decía que por cada 100 ml se
ponían 2,8 g el cual se pesó la cantidad de
elementos en el agar especificado en el paquete,
después de tener la cantidad exacta se limpió la
espátula y se la seco para disolver agar pesado en
un vaso de precipitados con agua destilada.
Derretir los grumos, mezclar con una varilla de
vidrio y llevar a ebullición.
 calor húmedo es la forma más rápida y fiable de
esterilización.
5.3 ¿Qué otros métodos sirven para esterilizar?
R/
METODOS QUIMICOS
1) GAS DE OXIDO DE ETILENO (ETO):
• Es un agente químico alquilante que mata a los
microorganismos, incluidas las esporas ya que
interfiere en el metabolismo normal de las
proteínas y procesos reproductivos, provocando la
muerte celular.
• Su presentación es líquida, es incoloro y oloroso.
• Es inflamable, explosivo, tóxico por lo que las
emisiones son un riesgo para el paciente y para el
personal que lo manipula.
• Depende de 4 parámetros:
a- Concentración de Gas: se saca el aire de la
cámara y se insufla a presión el gas
b- Temperatura: actúa a 29-63 C
c- Humedad: es fundamental, ya que las esporas
resecadas son resistentes al gas de ETO, por lo que
deben ser hidratadas.
d- Tiempo: varía según la concentración del gas y
la temperatura.
• Esteriliza a baja temperatura y no daña los
materiales termolábiles.
• Hay que conocer la compatibilidad de los
artículos al gas ya que hay algunos acrílicos, lentes
que son afectados por el gas o se inactiva.

5.4 ¿Cómo se verificaría que un medio de cultivo

quedo totalmente esterilizado?
R/ La válvula se cierra cuando sólo sale vapor de
agua y, a partir de ese momento, comienza a
elevarse la presión hasta una atmósfera sobre la
presión normal, aumentando como consecuencia
la temperatura hasta 121ºC. Transcurridos 15
minutos, en estas condiciones, el material se ha
esterilizado.
El control de la esterilidad de un lote de medio de
cultivo, puede llevarse a cabo difiriendo su uso por
24 horas desde su preparación, y observando la
5.2 ¿Por qué el vapor saturado a presión mata a
ausencia de crecimiento.
los microorganismos?
R/ El calor húmedo destruye los microorganismos
por coagulación de sus proteínas celulares.
En los procesos de esterilización por calor
húmedo, la temperatura y la presión son fáciles de
controlar, lo que facilita la determinación de si se
ha producido la esterilización. la esterilización por
vapor produce un alto grado de esterilidad y, por
lo tanto, es la forma de esterilización más utilizada
en los hospitales y laboratorios. La autoclave de
Medios de cultivo
Nombre de Suelo de laboratorio
Primer día muestra tomada
N° de día de control 2 día
No se observa ningún cambio ni ninguna Medio de cultivo AN (Agar Nutritivo)
formación de colonias. utilizado
Temperatura 36.6°C
Después de 2 días registrada
Características de Forma: Irregular
Resultados la colonia Color: Blanco
Después de las 42 horas y 30 minutos el 22 de Elevación: Plana
febrero 2023 10:30 am Grafico
Se hizo la primera observación

Nombre de Rostro
muestra
tomada
N° de día de 2 día
control Observaciones Muy numerosas para
Medio de AN (Agar nutritivo) contar.
cultivo utilizado
Temperatura 36.6°C
registrada
Características Forma: Irregulares
de la colonia Color: Blanco con amarillo
Elevación: Plana
Grafico Nombre de Cabello
muestra tomada
N° de día de 2 día
control
Medio de AN (Agar Nutritivo)
cultivo utilizado
Temperatura 36.6°C
registrada
Características Forma: Circular
Observaciones Muy numerosas para contar de la colonia Color: Blanco
Elevación: Plana
Grafico

Observaciones 1 Colonia
Después de 3 días Características de la Forma: Círculos
Nombre de muestra Suelo de laboratorio colonia Color: Amarillo con
tomada blanco
N° de día de control 3 día Elevación: plana
Medio de cultivo AN (Agar nutritivo) Grafico
utilizado
Temperatura 36.6°C
registrada
Características de la Forma: irregular
colonia Color: Blanco
Elevación: Plana Observaciones Muy numerosas para
Grafico contar

Nombre de Manos
muestra tomada
N° de día de control 8 días
Medio de cultivo PDA (Argán de papa y
utilizado dextrosa)
Temperatura 36.6 °c
registrada
Observaciones Muy numerosas para Características de la Forma: Círculos
contar colonia Color: Rosado con
blanco
Nombre de Cabello Elevación: plana
muestra tomada Grafico
N° de día de 2 día
control
Medio de C.C (Cromo kilt)
cultivo utilizado
Temperatura 36.6°C
registrada Observaciones 1 Colonia
Características Forma: Circular
de la colonia Color: Blanco 4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Elevación: Plana
Grafico Se concluyo que en 3 días los cultivos crecieron
hasta el tercer día se evidencio que ya no hubo
ningún crecimiento y se crearon colonias.
Cada tipo de Agar tiene una particular selectividad
que permite el crecimiento de un tipo de
microorganismo especifico.
Observaciones 1 Colonia
Se logro cumplir con el objetivo de poder realizar
exitosamente le crecimiento de los cultivos,
Después de 8 días
llevando así un seguimiento de como era su
Nombre de muestra Uñas
crecimiento y si se presentaban cambios o no.
tomada
N° de día de control 8 días También se pudo realizar un buen manejo de la
Medio de cultivo PDA (Argán de papa y autoclave y el poder identificar sus partes y uso
utilizado dextrosa) paso a paso de esta.
Temperatura 36.6°C
registrada
5. REFERENCIAS

A. (s. f.). METODOS DE ESTERILIZACION. Equipos y

laboratorio de Colombia.
https://www.equiposylaboratorio.com/p
ortal/articulo-ampliado/metodos-de-
esterilizacion
Cervantes-Martínez, J., Orihuela-Equihua, R., &
Rutiaga-Quiñones, J. G. (2017). Acerca del
desarrollo y control de microorganismos
en la fabricación de papel. Conciencia
Tecnológica, (54).
Pineda Cardona, D. A., & Granda Arcila, J. A.
(2018). Diseño y fabricación de autoclave
para dopado de fibra óptica, con
aplicaciones en telecomunicaciones
ópticas y análisis de la línea de visión y
fotónica.
6. Anexos